经典色谱法液相课件
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液相色谱法ppt课件
二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相——固定
相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树 脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异 进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶
分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性
吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化
21
第四节 液—固色谱法
镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。 碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧和吡咯衍生物等。
各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。
5
第一节 概 述
等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可 能的。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般 有利于色谱分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质 在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而 在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易， 而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺 乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应 用中，这两种色谱技术是互相补充的。
所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用 了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可 达4.9107Pa）;谱（每米塔板数可达几 万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流
1
第一节 概 述
出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或现代液相色谱法。
相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树 脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异 进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶
分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性
吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化
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第四节 液—固色谱法
镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。 碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧和吡咯衍生物等。
各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。
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第一节 概 述
等，作为分析时选择余地大；而气相色谱并不可 能的。
③ 液相色谱通常在室温下操作，较低的温度，一般 有利于色谱分离条件的选择。 （3）由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质 在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而 在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 （4）液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易， 而且回收是定量的，适合于大量制备。但液相色谱尚缺 乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应 用中，这两种色谱技术是互相补充的。
所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用 了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可 达4.9107Pa）;谱（每米塔板数可达几 万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流
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第一节 概 述
出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或现代液相色谱法。
经典液相色谱法 ppt课件
和薄层色谱。
ppt课件
3
1.2 吸附色谱法的依据
吸附过程的两个规律： 1）吸附过程是可逆的，存在着吸附 平衡,存在一个吸附平衡常数 解附的动态
K=Cs/Cm
2）吸附剂对不同物质的吸附行为有差异
ppt课件 4
吸附机理
流动相通过固定相时，吸附剂表面的活性中心吸附流
动相分子，当组分分子进入柱子时，会赶走流动相分 子而占据吸附剂的活性中心位，即组分被吸附；反之， 溶剂分子也可把溶质分子赶走，即解吸。
SO3H CH CH2 CH
SO 3H CH2 CH
SO3H CH2 CH
SO3H CH2 CH
SO3H
SO3H
SO3H
ppt课件
SO3H
SO3H
50
交换反应： R-SO3-H+ + Na+ + ClR-SO3- Na+ + H+ + Cl-
ppt课件
51
1.2 阴离子交换树脂
根据可交换的离子的不同
低交联度树脂－网状结构疏松，网眼大，具有较好的渗 透性，但存在着易变形和耐压差等缺点。
ppt课件 53
根据分离对象选择树脂交联度：
分离小分子物质（氨基酸） ——选择8%树脂为宜
分离分子量较大的物质（多肽）
——选择2－4%树脂为宜
保留：极性越小的组分保留越强
ppt课件
40
3. 载体
作用：负载固定液 要求：化学惰性，粒度小而均匀，纯净，与固定液间
有较大的分子间作用力。
常用载体：硅胶 、硅藻土 、纤维素
ppt课件
41
4. 固定液相与流动液相
《液相色谱分析法》课件
液相色谱分析法
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
,
汇报人：
目录
01 添 加 目 录 项 标 题 03 液 相 色 谱 分 析 法 的
技术原理
05 液 相 色 谱 分 析 法 的 优缺点
02 液 相 色 谱 分 析 法 的 概述
04 液 相 色 谱 分 析 法 的 应用实例
06
液相色谱分析法的 发展趋势和未来展
望
Part One
单击添加章节标题
数据处理：对检测到的信号 进行处理，得到样品的色谱 图和定量结果
结果分析：根据色谱图和定 量结果，对样品进行分析和 鉴定
Part Four
液相色谱分析法的 应用实例
在药物分析中的应用
药物稳定性研究：研究药物 在储存过程中的稳定性
药物成分分析：分析药物中 的有效成分、杂质等
药物质量控制：控制药物的 质量，确保药物的安全性和
液相色谱分析法的研究热点和前沿技术
超高效液相色谱技术：提高分离效率，降 低检测限
生物样品分析：应用于生物医药、食品安 全等领域
质谱联用技术：提高检测灵敏度和准确性
环境样品分析：应用于环境监测、污染治 理等领域
微流控芯片技术：实现样品的微型化和快 速分析
智能化、自动化技术：提高分析效率，降 低人工操作误差
添加标题
核磁共振检测器：利用核磁共振原理，检测样品中的核磁共振信号，用于结构分析和定量分析
液相色谱分析法的操作流程
样品制备：将样品进行适当 的处理，如稀释、过滤等
样品注入：将样品注入到色 谱柱中
色谱分离：样品在色谱柱 中分离，根据不同组分的 性质和亲和力进行分离
检测器检测：样品经过检 测器时，检测器对样品进 行检测，得到相应的信号பைடு நூலகம்
经典色谱法液相演示文稿
【肝脏解剖】
➢ 显微结构 肝小叶是肝的结构和功能单位 • 肝小叶中央是中央静脉，单层肝细胞以该
静脉为中心呈放射状排列，肝细胞索之间 为肝窦。一端与肝动脉和门静脉的小分支 相通，另一端和中央静脉连接。 • 几个肝小叶之间是结缔组织组成的汇管区， 其中有肝动脉、门静脉的小分支和毛细胆 管。
【肝脏解剖】
阿米巴性肝脓肿
➢ 病因：阿米巴原虫从结肠溃疡侵入门静脉所属 分支而进入肝内。
➢ 临床表现：发热、腹痛、恶心、呕吐、食欲不 振 肝肿大
➢ 诊断： • 有阿米巴病史； • 新鲜粪便可找到阿米巴滋养体； • 乙状结肠镜检发现结肠有慢性溃疡，取材涂片
能找到阿米巴滋养体； • 肝穿刺抽出综褐色脓液； • 抗阿米巴治疗有效。
护理措施
➢ 注意高热的护理
➢ 引流管护理 • 妥善固定 • 取半卧位 • 严格无菌，每日用盐水冲洗并观察引流液的色、
质、量。每日更换引流袋（瓶）。当脓腔引流液 小于10ml时，可拔管。 • 为防二重感染，阿米巴性肝脓肿应采用闭式引流 。 ➢ 病情观察：生命体征、腹部体征 ➢ 加强营养支持 ➢ 根据情况止痛
分细菌性肝脓肿和阿米巴性肝脓肿
细菌性肝脓肿
【病因】 化脓菌引起的肝内化脓性感染。大多由大肠杆菌、 金黄色葡萄球菌或厌氧菌引起多发性脓肿。
➢ 胆道系统的上行感染 最常见的病因，脓肿以肝左 外叶多见。
➢ 肝动脉 ➢ 门静脉：化脓性阑尾炎、痔核感染化脓性盆腔炎
。 ➢ 淋巴系统 ➢ 其它：肝脏开放性损伤、隐源性感染
经典色谱法液相演示文稿
学习要点
❖细菌性、阿米巴性肝脓肿的感染途径、临 床表现、治疗原则和护理措施
❖原发性肝癌的病理、临床表现、辅助检查、 治疗原则和病人整体护理
《液相色谱技术》课件
通过液相色谱技术，可以检测环境中的有毒有害物质，如农药、酚类等，为环境治理和保护提供科学依据。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应，有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法（HPLC）
HPLC是液相色谱技术中的一种，具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展，HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进，提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化：随着机器人技术和自动化控制技术的发展，液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效，能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能，大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求，准备好适量的流动相，并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器，保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准，确保检测结果的准确性。
遇到问题时，应先检查电源、管线连接等基本情况，再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分，并将其转化为电信号，便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据，进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数，开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器，设定进样量，启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常，准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战：液相色谱技术对于样品的要求较高，需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等，但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题，新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展，以提高样品处理的效率和效果。
生态毒理学研究
液相色谱技术可以用于研究环境污染物对生物体的毒理学效应，有助于了解环境污染对生态系统的危害。
液相色谱技术的未来发展与挑战
高效液相色谱法（HPLC）
HPLC是液相色谱技术中的一种，具有高分离效能、高灵敏度、高选择性等优点，被广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。随着技术的不断发展，HPLC的分离柱、检测器等关键部件也在不断改进，提高了分离效果和检测灵敏度。
智能化与自动化：随着机器人技术和自动化控制技术的发展，液相色谱技术的操作将更加智能化和自动化。未来的液相色谱仪将更加便捷、高效，能够实现自动化进样、自动优化分离条件等功能，大大提高分析效率。
感谢观看
THANKS
流动相的准备与更换
根据实验要求，准备好适量的流动相，并定期更换以保证实验结果的准确性。
定期清洗进样器、色谱柱和检测器，保持仪器表面清洁。
日常保养
定期校准
常见故障排除
对仪器进行定期校准，确保检测结果的准确性。
遇到问题时，应先检查电源、管线连接等基本情况，再根据仪器手册排查故障。
03
02
01
液相色谱技术的实验设计
色谱柱
检测色谱柱流出的组分，并将其转化为电信号，便于记录和检测。
检测器
用于采集、处理、分析和存储色谱数据。
数据处理系统
数据处理与分析
采集色谱数据，进行峰识别、定量和合适的流速、检测波长等参数，开始色谱分离。
进样
将样品注入进样器，设定进样量，启动进样程序。
准备工作
检查仪器是否正常，准备好流动相、色谱柱和样品。
样品前处理的挑战：液相色谱技术对于样品的要求较高，需要进行适当的前处理以去除杂质、提高分离效果。目前常用的样品前处理方法包括沉淀、萃取、吸附等，但这些方法操作繁琐、耗时长且效果不稳定。为解决这一问题，新型的样品前处理技术如固相萃取、免疫吸附等正在不断发展，以提高样品处理的效率和效果。
9第九章经典液相色谱法65页PPT
点滴实验法
平面色谱法
规律：
①酸性组分-加入一定比例的酸，可防止斑点拖尾 ②碱性物质-氧化铝为吸附剂，中性溶剂为展开剂
硅胶为吸附剂，碱性展开剂；碱性较弱的生物 碱可使用中性展开剂
42
平面色谱法
3）操作技术 • 选择 • 制板 • 点样 • 展开 • 检视 • 分析
43
平面色谱法
• 选择 (1)选板：玻璃板、塑料膜、金属铝箔
参照物 -另外加入的某一物质的纯品 -试样混合物中的某一组分 Rf VS. Rst -取值范围不同: Rf值小于1，Rst值不一定小于1
37
平面色谱法
分离度(Rs)
两相邻斑点中心间距离与两斑点平均宽度（直径）的比值
RS
2l(2l1) 2d W1W2 W1W2
l2、l1-原点至两斑点中心的距离 d-两斑点中心间的距离 W1、W2-两斑点的宽度
16
液相色谱的固定相和流动相
1. 化合物的极性及其判断规律
常见化合物按其极性由小到大顺序为：
烷烃＜烯烃＜醚硝基化合物＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛 类＜硫醇＜胺类＜酰胺类＜醇类＜酚类＜羧酸类
依据规律：
（1）基本母核相同—基团极性越强，整个分子极性越强 （2）分子中双键越多，吸附能力越强
共轭双键越多，吸附能力也越强 （3）基团的空间排列—能形成分子内氢键吸附能力较弱
33
平面色谱法
• 在给定条件下，Rf值为常数，其值在0～1之间 • Rf=0
表示化合物在薄层上不随溶剂扩散移动，仍在原点位置
• Rf=1
表示溶质不进入固定相，即表示溶质和溶剂同步移动
• 一般要求Rf值0.2～ 0.8之间，最佳范围0.3～0.5
34
平面色谱法
平面色谱法
规律：
①酸性组分-加入一定比例的酸，可防止斑点拖尾 ②碱性物质-氧化铝为吸附剂，中性溶剂为展开剂
硅胶为吸附剂，碱性展开剂；碱性较弱的生物 碱可使用中性展开剂
42
平面色谱法
3）操作技术 • 选择 • 制板 • 点样 • 展开 • 检视 • 分析
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平面色谱法
• 选择 (1)选板：玻璃板、塑料膜、金属铝箔
参照物 -另外加入的某一物质的纯品 -试样混合物中的某一组分 Rf VS. Rst -取值范围不同: Rf值小于1，Rst值不一定小于1
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平面色谱法
分离度(Rs)
两相邻斑点中心间距离与两斑点平均宽度（直径）的比值
RS
2l(2l1) 2d W1W2 W1W2
l2、l1-原点至两斑点中心的距离 d-两斑点中心间的距离 W1、W2-两斑点的宽度
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液相色谱的固定相和流动相
1. 化合物的极性及其判断规律
常见化合物按其极性由小到大顺序为：
烷烃＜烯烃＜醚硝基化合物＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛 类＜硫醇＜胺类＜酰胺类＜醇类＜酚类＜羧酸类
依据规律：
（1）基本母核相同—基团极性越强，整个分子极性越强 （2）分子中双键越多，吸附能力越强
共轭双键越多，吸附能力也越强 （3）基团的空间排列—能形成分子内氢键吸附能力较弱
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平面色谱法
• 在给定条件下，Rf值为常数，其值在0～1之间 • Rf=0
表示化合物在薄层上不随溶剂扩散移动，仍在原点位置
• Rf=1
表示溶质不进入固定相，即表示溶质和溶剂同步移动
• 一般要求Rf值0.2～ 0.8之间，最佳范围0.3～0.5
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平面色谱法
色谱概论和经典液相色谱法PPT课件
04
液Байду номын сангаас色谱法的实验技术
实验前的准备
仪器准备
试剂准备
实验设计
安全措施
确保液相色谱仪、检测器、 泵、进样器等设备处于良好 工作状态，并进行必要的校
准和维护。
根据实验需求，准备适量的 流动相、固定相、样品等，
确保试剂的质量和纯度。
根据研究目的和目标化合物 性质，设计合理的色谱条件， 包括流动相组成、流速、柱
结合免疫分析的高特异性和液相色谱的高分离性能，实现对生
物样品中目标分子的快速、准确分析。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
定性分析
根据色谱图和检测器信号， 结合已知化合物的保留值或 光谱数据，对未知化合物进 行定性分析。
定量分析
通过外标法、内标法或标准 加入法等方法，依据色谱图 中的峰面积或峰高，对目标 化合物进行定量分析。
分离效果评估
根据分离后的色谱图，评估 色谱柱的分离效果、柱效等 指标，为实验条件的优化提 供依据。
快速分析
通过改进色谱柱和检测器技术，缩短分析时间和 提高检测速度，提高分析效率。
微型化
发展微型化色谱柱和微型化检测器，降低样品消 耗和试剂消耗，实现绿色环保分析。
超高效液相色谱法的研究进展
高灵敏度检测
利用新型检测器技术，提高检测灵敏度和选择性，实现对低浓度 样品的有效分析。
宽分离范围
发展多模式超高效液相色谱技术，实现宽分离范围和高分离效率的 分离分析。
在食品分析中的应用
食品添加剂分析
液相色谱法用于检测食品 中添加剂的种类和含量， 确保食品添加剂的安全使 用。
营养成分分析
通过液相色谱法对食品中 的营养成分进行分析，了 解食品的营养价值，指导 消费者合理选择食品。
经典色谱法液相共57页
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
经典色谱法液相
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
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4、应用：离子型化合物 中药生物碱提取物
学习交流PPT
17
应用实例
（一）样品预处理 高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸的含量
准确称取……加正己烷……索氏提取 10h……加样于硅胶柱上(硅胶12g，硅胶柱为 由10x250mm的玻璃柱，湿法装柱)。先用约 50ml石油醚洗涤，再用石油醚—乙醚—甲酸 (89：11：1) 洗脱，收集……
酸性成分：硅胶
碱性成分：氧化铝
黄酮类：聚酰胺
用量： 化学分离：30倍
除杂：10倍
学习交流PPT
10
3、流动相的选择
“相似相溶”原则 ：分离极性大的物质应选用极 性大的溶剂作流动相，分离极性小的物质应选用极
性小的溶剂作流动相，
流动相极性： 烷烃< 苯< 乙醚< 氯仿< 酯 <酮 <醇 <水 常用：不同配比的甲醇-水或甲醇
学习交流PPT
20
第3节 平面色谱法
操作形式:平面 流动相：展开剂 操作：点样、展开 驱动力:毛细管力
学习交流PPT
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平面色谱法
按固定相类型分类： 硅胶、氧化铝 →薄层色谱法 滤纸 →纸色谱法 聚酰胺薄膜
特点：设备简单，分析速度快 应用：中药的定性鉴别
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22
平面色谱法
1、原点、溶剂前沿、展距
—分析化学. 2002，30（8）：901
学习交流PPT
18
应用实例
（二）化学分离
藏药湿生扁蕾的化学成分研究Ⅰ
中国中药杂志
2004，29（11）：1055
学习交流PPT
19
小结
经典液相柱色谱的主要用途： 色谱分析前样品预处理、化学分离 熟悉各种柱的使用 掌握常用吸附剂的性质 掌握色谱条件的选择 掌握洗脱规律
2、性能
①交联度：交联剂（如二乙烯苯）的用量 阳离子交换树脂交联度以8％， 阴离子交换树脂交联度以4％左右为宜。 ②交换容量
理论交换容量：每克干树脂含有可交换基团的数目 实际交换容量：每克干树脂真正参加交换的基团数目 用酸碱滴定法测定，单位以mmol/g表示。树脂的交换容量 一般为1～10mmol/g。
柱体：色谱柱、注射器 方法：干装法、湿装法
2、上样
3、洗脱
学习交流PPT
13
第2节 离子交换柱色谱法
1、离子交换树脂：
树脂：母体骨架是苯乙烯和二乙烯苯聚合而成 的球形网状结构的高分子聚合物
-SO3H、-COOH -N(CH3)3+、-NH2
阳离子交换树脂 阴离子交换树脂
钠型 氯型
学习交流PPT
14
6
硅胶、氧化铝的含水量与活性关系
硅胶含水量% 0 5 15 25 38
活度级 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
氧化铝含水量% 0 3 6 10 15
活度测定法：Brockmamn法
学习交流PPT
7
3、聚酰胺
[ ] O
CH 2
CH 2CCFra bibliotek 2CH 2
CH 2
N
n
H
商品名：锦纶、尼龙-6
不溶于水和有机溶剂，易溶于浓无机酸
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2、性能
③再生
交换
RSO3-H+ + Na+ + Cl- 再生 RSO3-Na+ + H+ + Cl-
交换
RCH2N(CH3)3+OH- + Na+ +Cl- 再生
CH2N(CH3)3+Cl-+
NaOH
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16
3、分离机理：选择系数不同 离子价数越高，原子序数越大，水合离子 半径越小和离子交换树脂的亲和力越大， 即选择系数越大
常用：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭、大孔树脂
学习交流PPT
4
1. 硅胶（SiO2·H2O）中等极性吸附剂
吸附机制： 表面的硅醇基，与物质形成氢键 失活：水与硅醇基结合使其失去活性 活化：105-110℃加热30min
适用范围：微酸性（pH=4~5），
适于酸性和中性物质 粒度：100-200目
学习交流PPT
分离机制：主要是氢键吸附 适用对象：黄酮类、鞣质、醌
氢键能力↑强 组分越后出柱
粒度：20~100目
学习交流PPT
8
（三）色谱条件的选择：
依据被测组分、吸附剂和流动相的性质
1. 被测组分性质（极性大小）： 烷烃＜烯烃＜醚<硝基化合物<二甲胺＜酯＜酮＜
醛<胺＜酰胺＜醇＜酚＜羧酸
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2. 吸附剂的选择： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂
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3. 相对比移值Rs
Rs
Rf（组） 原点到组分斑点质量中心的距离 L1 Rf（参） 原点到参考物斑点质量中心的距离 L2
5
2. 氧化铝
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 如：生物碱 中性氧化铝 pH 7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 如：生物碱、挥发油、萜类、甾体及在酸碱中不稳定的苷 类、酯、内酯等化合物 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 如：酸性色素、氨基酸、对酸稳定的中性物质
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（一）分离原理
各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心， 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附 能力差异而实现分离
固定相为固体吸附剂，属吸附色谱
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3
（二）、吸附剂
对吸附剂的要求： （1）具有较大的表面积和一定的吸附能力 （2）颗粒要有一定的细度(d=75-150μm， 即 100-200目)，且粒度均匀 （3）与洗脱剂及样品不起反应
2、比移值（Rf）
1
l R f l0
l0
Rf
1 k
l
分离的前提： k不同 可用范围：0.2-0.8 最佳范围：0.3-0.5
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讨论
1、Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层 板和展开剂的性质有关
2、色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色 谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为
亲脂性成分用氯仿、乙酸乙酯
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4. 三者关系图示：
组分 吸附剂 极性 活性小 非(弱)极性 活性大
流动相 极性
非极性或弱极性
物质的极性与双键、极性基团、分子内氢键有关
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（四）、操作方法
1、色谱柱的制备 要求：填装均匀、紧密，不能有气泡。 装柱时柱要垂直，表面平整。 固定相的用量适宜。
第10章 经典液相色谱法
液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。
▪ 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀
下输送流动相
柱效较低
分析周期长
▪ 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀
下输送流动相
柱效较高
分析周期短
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1
第1节 液-固吸附柱色谱
（一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）色谱条件的选择
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应用实例
（一）样品预处理 高效液相色谱法测定银杏外种皮中银杏酸的含量
准确称取……加正己烷……索氏提取 10h……加样于硅胶柱上(硅胶12g，硅胶柱为 由10x250mm的玻璃柱，湿法装柱)。先用约 50ml石油醚洗涤，再用石油醚—乙醚—甲酸 (89：11：1) 洗脱，收集……
酸性成分：硅胶
碱性成分：氧化铝
黄酮类：聚酰胺
用量： 化学分离：30倍
除杂：10倍
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3、流动相的选择
“相似相溶”原则 ：分离极性大的物质应选用极 性大的溶剂作流动相，分离极性小的物质应选用极
性小的溶剂作流动相，
流动相极性： 烷烃< 苯< 乙醚< 氯仿< 酯 <酮 <醇 <水 常用：不同配比的甲醇-水或甲醇
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第3节 平面色谱法
操作形式:平面 流动相：展开剂 操作：点样、展开 驱动力:毛细管力
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平面色谱法
按固定相类型分类： 硅胶、氧化铝 →薄层色谱法 滤纸 →纸色谱法 聚酰胺薄膜
特点：设备简单，分析速度快 应用：中药的定性鉴别
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平面色谱法
1、原点、溶剂前沿、展距
—分析化学. 2002，30（8）：901
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应用实例
（二）化学分离
藏药湿生扁蕾的化学成分研究Ⅰ
中国中药杂志
2004，29（11）：1055
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小结
经典液相柱色谱的主要用途： 色谱分析前样品预处理、化学分离 熟悉各种柱的使用 掌握常用吸附剂的性质 掌握色谱条件的选择 掌握洗脱规律
2、性能
①交联度：交联剂（如二乙烯苯）的用量 阳离子交换树脂交联度以8％， 阴离子交换树脂交联度以4％左右为宜。 ②交换容量
理论交换容量：每克干树脂含有可交换基团的数目 实际交换容量：每克干树脂真正参加交换的基团数目 用酸碱滴定法测定，单位以mmol/g表示。树脂的交换容量 一般为1～10mmol/g。
柱体：色谱柱、注射器 方法：干装法、湿装法
2、上样
3、洗脱
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第2节 离子交换柱色谱法
1、离子交换树脂：
树脂：母体骨架是苯乙烯和二乙烯苯聚合而成 的球形网状结构的高分子聚合物
-SO3H、-COOH -N(CH3)3+、-NH2
阳离子交换树脂 阴离子交换树脂
钠型 氯型
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6
硅胶、氧化铝的含水量与活性关系
硅胶含水量% 0 5 15 25 38
活度级 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
氧化铝含水量% 0 3 6 10 15
活度测定法：Brockmamn法
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3、聚酰胺
[ ] O
CH 2
CH 2CCFra bibliotek 2CH 2
CH 2
N
n
H
商品名：锦纶、尼龙-6
不溶于水和有机溶剂，易溶于浓无机酸
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2、性能
③再生
交换
RSO3-H+ + Na+ + Cl- 再生 RSO3-Na+ + H+ + Cl-
交换
RCH2N(CH3)3+OH- + Na+ +Cl- 再生
CH2N(CH3)3+Cl-+
NaOH
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3、分离机理：选择系数不同 离子价数越高，原子序数越大，水合离子 半径越小和离子交换树脂的亲和力越大， 即选择系数越大
常用：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭、大孔树脂
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1. 硅胶（SiO2·H2O）中等极性吸附剂
吸附机制： 表面的硅醇基，与物质形成氢键 失活：水与硅醇基结合使其失去活性 活化：105-110℃加热30min
适用范围：微酸性（pH=4~5），
适于酸性和中性物质 粒度：100-200目
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分离机制：主要是氢键吸附 适用对象：黄酮类、鞣质、醌
氢键能力↑强 组分越后出柱
粒度：20~100目
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（三）色谱条件的选择：
依据被测组分、吸附剂和流动相的性质
1. 被测组分性质（极性大小）： 烷烃＜烯烃＜醚<硝基化合物<二甲胺＜酯＜酮＜
醛<胺＜酰胺＜醇＜酚＜羧酸
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2. 吸附剂的选择： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂
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3. 相对比移值Rs
Rs
Rf（组） 原点到组分斑点质量中心的距离 L1 Rf（参） 原点到参考物斑点质量中心的距离 L2
5
2. 氧化铝
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 如：生物碱 中性氧化铝 pH 7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 如：生物碱、挥发油、萜类、甾体及在酸碱中不稳定的苷 类、酯、内酯等化合物 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 如：酸性色素、氨基酸、对酸稳定的中性物质
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（一）分离原理
各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心， 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附 能力差异而实现分离
固定相为固体吸附剂，属吸附色谱
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（二）、吸附剂
对吸附剂的要求： （1）具有较大的表面积和一定的吸附能力 （2）颗粒要有一定的细度(d=75-150μm， 即 100-200目)，且粒度均匀 （3）与洗脱剂及样品不起反应
2、比移值（Rf）
1
l R f l0
l0
Rf
1 k
l
分离的前提： k不同 可用范围：0.2-0.8 最佳范围：0.3-0.5
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讨论
1、Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层 板和展开剂的性质有关
2、色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色 谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为
亲脂性成分用氯仿、乙酸乙酯
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4. 三者关系图示：
组分 吸附剂 极性 活性小 非(弱)极性 活性大
流动相 极性
非极性或弱极性
物质的极性与双键、极性基团、分子内氢键有关
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（四）、操作方法
1、色谱柱的制备 要求：填装均匀、紧密，不能有气泡。 装柱时柱要垂直，表面平整。 固定相的用量适宜。
第10章 经典液相色谱法
液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。
▪ 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀
下输送流动相
柱效较低
分析周期长
▪ 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀
下输送流动相
柱效较高
分析周期短
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第1节 液-固吸附柱色谱
（一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）色谱条件的选择
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