实验新人必读(六)：外泌体实验研究的正确打开姿势!
实验新人必读（六）：外泌体实验研究的正确打开姿势！
导语最近，外泌体在科研界以迅雷不及掩耳之势火了起来，国自然中标量那是翻着倍的蹭蹭往上涨。
然而目前外泌体的研究仍处于初级阶段，首要原因就在于该领域里还木有统一的、简单可行且纯度很高的分离方法，其次对其他囊泡与外泌体的区别仍不能做出清楚的判断。
外泌体的藏身之处正所谓高手在民间，欲一睹高人风采，就必先找到高人隐身之处。
通常外泌体藏身于细胞上清、血液、尿液、脑脊液和其他体液。
血液血液离心后有两种形式：血清和血浆，但不少小伙伴对它们傻傻分不清楚。
前者是不经抗凝处理的血液会自动在一系列凝血因子的作用下发生凝集，离心后的上层液体；后者是经抗凝剂处理后，离心出去血细胞所得液体。
两者虽然一母同胞，但显然血浆比血清更有内涵，其包含一些纤维蛋白原以及大量的外泌体，因而血浆也更受广大研究者的青睐。
Tips:1）血样抗凝剂花样繁多，科研汪们一不小心就会跌的鼻青脸肿。
肝素除了会抑制PCR外，还可与外泌体结合阻止细胞摄取外泌体；双嘧达莫（CTAD）则会阻止血小板的激活并抑制其释放外泌体；EDTA可能会干扰PCR反应（尽管其程度小于肝素），但是还是优于其他选择。
2）抽血时动作要轻柔迅速，并记录准确的抽血时间。
因为
外泌体在抽血后30分钟内是稳定的，时间过长血小板会因种种物理因素而被激活并释放外泌体，导致外泌体数量增加。
尿液尿液中的外泌体性质稳定且RNA含量高于尿液中的细胞内的RNA。
而收集尿液时，应该尽量选择受试者的“新鲜”尿液，并注意避免细菌污染。
受试者的亲属（性别相同、年龄相仿）可作为对照。
同时也要注意对饮食的控制。
脑脊液脑脊液中的外泌体含量虽然较其他体液如血液少，但可作为神经系统疾病的潜在生物标志物。
采集脑脊液时避免受到血液污染，一般由于健康对照脑脊液获取困难，往往以其他神经异常的患者为对照。
外泌体的通缉之法既然已经找到了外泌体的藏身之处，接下来就是请高手出山了。
正常情况下外泌体是有侠义之风的，默默无闻的传递信号分子，以激活下游信号通路，帮助其他细胞各司其职。
比如树突状细胞源性的外泌体则能够引起机体有效的抗肿瘤免疫应答。
然而一旦细胞变坏了，其分泌的外泌体也就成了恐怖份子，像肿瘤细胞分泌的外泌体小哥就作恶多端，在机体中掀起了一片腥风血雨，引得科研界中的各路人马纷纷亮出自家法宝对其进行缉拿通缉。
秘笈一：超速离心法此秘笈普遍被科研者所接受，通常与蔗糖密度梯度结合，使相对低密度的外泌体漂浮起来。
然而，此法比较耗时耗力，一般需要8-30h，一次仅能处理6个样品，且产率较低，不适用于如血浆和血清等粘性生物液
体。
然而却可以获得高纯度的外泌体，并且这种方法在过去10年里已经被很多实验室成功应用于外泌体的分离。
秘笈二：按照尺寸大小分离外泌体BiooScientific的ExoMir 试剂盒通过两步超滤法就成功分离纯化外泌体。
第一个微型过滤器基本上能去除所有细胞、血小板和细胞碎片，第二个微型过滤器可用正压力来获取所有直径大于30nm的囊泡。
该方法以HPLC（高效液相层析）为基础的方法有可能获得高纯度的外泌体，但是这个过程需要专用设备。
秘笈三：外泌体沉淀聚乙二醇（PEGs）通常被用于病毒和其他小颗粒的沉淀。
基于此，System Biosciences 提供的ExoQuick试剂在被加入体液中后，离心即可沉淀外泌体。
同时，Life Technologies也开发了五种Total Exosome Isolation试剂，能使低溶解度的成分（如外泌体）析出，然后通过低速离心收集外泌体。
秘笈四：基于亲和力获得外泌体外泌体相关抗原的抗体（如抗CD63、CD9、Alix、CD81、CD82、annexin、EpCAM和Rab5抗体）可以用作分离外泌体的特异性标记，用包被此类物质的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，可达到外泌体吸附分离的目的。
该方法可保证外泌体形态的完整性，且特异性高、操作简单，但非中性pH和非生理性盐浓度会影响外泌体生物活性，不利于下一步实验，且不适合大量样本。
秘笈五：qEV法该方法是利用Size Exclusion
Chromatography(SEC)的原理对外泌体进行分离纯化的分离柱，在不损伤外泌体活性的情况下，有效去除样品中杂质蛋白和脂类。
如此可获得高纯度的外泌体，且快速简单，成本低廉。
适合于细胞上清、血液、尿液等体液的外泌体分离。
一般建议与qNano测量法联合使用，qNano可利用“可控电阻脉冲传感技术”对外泌体的浓度和尺寸进行快速准确的测量，因此qEV+qNano被视为快速准确的分离和测定外泌体的最佳解决方案。
外泌体的分析研究既然已经捕获了“做坏事”的外泌体，就该拷问它所携带的货物中哪些是与某种疾病息息相关的。
一般而言，外泌体里含有蛋白质和非编码RNA。
因而，其分析研究可分为以下几类。
首先要外泌体进行鉴定，通常研究者可用透射电镜观察外泌体的结构（通常为茶托型或一侧凹陷的半球型），再结合免疫标记就可清楚的分析特定指标在外泌体表达的部位。
为了让大家对外泌体有着一个更直观的感受，先奉上一个经典的外泌体电镜图，由图中可看到很多略小于100nm的具有清晰膜的茶托样结构，小图中则显示附在膜结构表面的免疫胶体金。
对外泌体验明正身之后，就可以在蛋白水平和核酸水平对其进行深入分析。
1.蛋白水平的分析
（1）SDS-PAGE：通过SDS-PAGE电泳可以分析得到的外泌体中蛋白的含量及种类。
（2）Western-Blot：通过Western-Blot可以检测外泌体中特定的蛋白表达情况。
（3）2-DE等蛋白组学分析：可以了解外泌体中不同蛋白的表达、数量情况
2.基因水平的分析
（1）Real-Time PCR：通过PCR可以分析需要研究的指标的表达量。
（2）转录组分析：通过测序或者芯片，分析Exosome不同基因的转录水平。
（3）miRNA ：通过测序或者芯片，检测与Exosome相关的miRNA的表达情况，研究特定的miRNA。
（4）lncRNA分析：通过测序或者芯片，检测与Exosome 相关的lncRNA的表达情况，研究特定的lncRNA与Exosome共同调控某种疾病的关系。
Tips:
1）由于外泌体内含有大量小片段RNA，测序时会测到许多非miRNA的小片段RNA，造成有效数据不足。
一般建议使用芯片的方法检测外泌体miRNA。
2）lncRNA表达丰度较低，在外泌体中丰度更低，对于低丰度基因，芯片测准确性远远大于测序。
所以建议使用基因芯片的方法检测外泌体lncRNA。
3）为了获取漂亮的测序或芯片结果，外泌体的含量是关
键。
不同样本提取外泌体得率不同，根据经验：3ml以上的血浆血清可得到约30-50ng的RNA；30ml以上细胞上清可得到约70-100ng以上的RNA；其他类型的体液与其性质有关，建议都以30mL以上。
外泌体研究方案的正确打开方式
外泌体研究方案的正确打开方式啥是外泌体？外泌体（Exosome）是一种由活细胞分泌的圆形（dish）或杯状（cup）脂质双分子层膜微小囊泡，直径约30-100nm，可由各种类型的细胞分泌，广泛存在于血液、尿液、唾液、滑膜液、乳汁、脑脊液、眼泪、腹水、羊水等各种体液以及细胞培养上清中。
外泌体是一种活性复合体，包含复杂的蛋白质，核酸和脂质。
最常见的外泌体蛋白组成包括膜转运和融合相关蛋白、多囊泡胞内体产生相关蛋白，（Alix, TSG101等）、分子伴侣（HSP70,HSP90）、整合素和四跨膜蛋白超家族（CD63,CD9,CD81, CD82等），这些成分反映了其生物起源。
外泌体还富含胆固醇、鞘脂、神经酰胺、糖脂GM3和含长饱和脂肪酰基的甘油磷脂链。
外泌体的起源外泌体的前身含有一个秘密武器，叫泛素化蛋白，被ESCRT（转运必需内体分选复合物）识别，形成内腔囊泡（ILVs），进一步形成膜性囊泡（MVBs），其中一部分会被降解为溶酶体，当MVBs与细胞膜发生融合后这些小囊泡可被释放到细胞外空间，称为外泌体。
外泌体生物功能2013年，美国科学家James E. Rothman, Randy W. Schekman 和德国科学家Thomas C. Sudhof因细胞囊泡运输的调节机制而荣获当年诺贝尔生理学或医学奖。
研究表明：外泌体有携带与运输功能，随着体液循环到达全身各个部位，通过与受体细胞的质膜保持稳定结合或经由内吞途径被内化，释放出外泌体中的内容物。
外泌体与靶细胞融合后，靶细胞的生物学特性可以在基因水平（外泌体RNA）转录水平（外泌体miRNA）或在蛋白水平发生改变，从而实现细胞间通信。
这些相互作用可能导致有益（如增强免疫状态）或有害（如扩散发病）的结果。
外泌体分离纯化方法外泌体鉴定方法NTA鉴定纳米颗粒跟踪分析（Nanopraticle Tracking Analysis, NTA）技术可以对10-2000nm范围内的纳米颗粒进行快速实时动态检测，测量参数包括颗粒粒径、散射光强、浓度等，可对外泌体进行粒径大小及数量进行统计并做出初步质量评估。
外泌体（Exosome）知识与检测方法
外泌体（Exosome）知识与检测方法一、 Exosome 简介最近几年，一种叫做Exosome的小囊泡正受到大家广泛的关注。
Exosome是直径约为30-150nm，密度在1.13-1.21g/m1的小囊泡。
Exosome天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液和母乳，外泌体(Exosome)是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体)的膜性囊泡。
Exosome在30年前被人们所发现。
早期的研究认为，exosome 执行蛋白运输功能，特异靶定受体细胞，交换蛋白和脂类或引发下游信号事件。
直到2007年，研究人员发现exosome也运输核酸，参与细胞间通讯。
总之，其蛋白、RNA和脂肪成分特异，且携带了一些重要的信号分子，有望在多种疾病的早期诊断中发挥作用，这使得exosome的市场也在快速扩展，并成为热门的研究对象。
不同组织细胞来源exosome由于携带的蛋白质不同，而能够发挥不同的生物学功能。
例如，肿瘤细胞分泌的exosome能够介导血管再生肿瘤细胞增殖及免疫逃逸；而树突状细胞源性exosome则能够引起机体有效的抗肿瘤免疫应答。
目前研究发现，Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质rRNA和microRNA，并且exosome能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能，故exosome有望成为一种新型给药途径及基因治疗载体。
Exosome携带蛋白质包括源细胞非特异性和源细胞特异性两类蛋白分子。
前者可能与exosome的生物发生和生物学作用有关，主要包括：细胞溶质蛋白、参与细胞内信号转导的蛋白、各种代谢酶、热休克蛋白和四跨膜蛋白；另一类是特殊蛋白质，这类蛋白质只存在于某种特殊的细胞分泌的exosome，而这些特定细胞源的exosome与其生物学功能有着密切联系，例如分子来源的Exosome上含有MHCII类分子。
二， Exosome 提取Exosome是由活细胞分泌的，它是一种亚细胞成分，组要成分是磷脂双分子和携带的膜性分子，其界定依据形态学和生物化学及提取方式不同细胞源的exosome是不同的，这些不同的理化性质有利于exosome的提取。
外泌体纳米流式检测法实验步骤
外泌体纳米流式检测法实验步骤嘿，咱今儿就来聊聊外泌体纳米流式检测法的实验步骤哈！
你想想，这外泌体就像是一个个小宝贝，咱得小心翼翼地把它们找出来，测清楚。
那怎么找呢？这就好比咱要在一堆沙子里找出那些特别的小珍珠一样。
首先啊，咱得准备好样本，这就像是给小珍珠们搭好了舞台。
样本可得处理得妥妥当当的，不能有啥马虎。
然后呢，就是标记啦！这就好像给小珍珠们贴上标签，让咱能一下子就认出它们来。
这标记可得选对了，不然可就找不到咱要的那些小宝贝啦。
接下来，就是流式检测这一关键步骤咯！这就像是给小珍珠们过安检一样，一个一个地看过去，把它们的各种信息都给弄清楚。
你说这是不是很神奇呀？
在检测的时候，咱可得瞪大眼睛，仔细瞧着，不能放过任何一个细节。
这就跟警察抓小偷似的，得把每个线索都抓住。
检测完了，那数据可得好好分析分析。
这就像咱把找到的小珍珠分类整理，看看哪些是特别珍贵的，哪些是比较普通的。
哎呀，你说这外泌体纳米流式检测法是不是挺有意思的呀？就这么
一步步地，把那些小小的外泌体给弄清楚了。
这可不是随便谁都能做
好的哟，得有耐心，还得细心。
你想想，如果不仔细，那不是把重要的小珍珠给弄丢啦？那可不行！咱得像爱护宝贝一样对待这个实验。
总之呢，外泌体纳米流式检测法的实验步骤就像是一场有趣的冒险，每一步都充满了挑战和惊喜。
咱得好好去探索，去发现，才能真正掌
握这个厉害的技术呀！你准备好了吗？和我一起去探索这个奇妙的外
泌体世界吧！。
收藏外泌体鉴定外泌体示踪方法，你都知道吗？
收藏外泌体鉴定外泌体示踪方法，你都知道吗？（一）外泌体鉴定方法外泌体内容物 (芯片、测序、质谱、WB、QPCR、流式等方法)Gutierrez-Vazquez, C., et al.ImmunolRev, 2013. 251(1): p. 125-42.蛋白组分：细胞骨架蛋白、信号转导相关蛋白、代谢酶类、抗原结合提呈相关蛋白典型的Exosomes标记蛋白有：四跨膜蛋白超家族，如CD9、CD63、CD81等；细胞质蛋白，如肌动蛋白(actin)、钙磷脂结合蛋白(annexins)；参与生物功能的分子，如凋亡转接基因2互作蛋白X(ALIX)、肿瘤易感基因101蛋白(TSG101)、热休克蛋白(HSP70、HSP90)；整合素等。
Exosomes还含有细胞类型特异的标记蛋白，这种蛋白分子由分泌Exosomes的细胞所决定；核酸组分：Exosomes内还能够包裹mRNA、miRNA、lncRNA、mtDNA、circRNA，并转移至其它细胞中发挥生物学作用，Exosomes所包裹的内容物也是细胞类型特异的。
1、蛋白质-WB鉴定Journalof Extracellular Vesicles 2015, 4: 27032、蛋白质- ELISA鉴定Journalof Histochemistry & Cytochemistry 2015, Vol. 63(3) 181-1893、蛋白质-流式细胞术鉴定doi:10.1038/nature223414、蛋白质-质谱鉴定Methods in Molecular Biology,vol. 15455、RNA-RNA提取Molecular Immunology 50(2012) 278–2866、RNA-测序鉴定PLoSOne. 2016; 11(1): e0146353.7、纳米颗粒跟踪分析：纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle TrackingAnalysis ，NTA）是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。
外泌体要怎么来研究？
外泌体要怎么来研究？外泌体是不是很火？其实外泌体之前我也给大家讲过哦，只是估计你们没好好看而已。
其实外泌体可以理解为细胞排泄出来的代谢产物，后来才发现，有点作用的。
外泌体研究到底复不复杂呢？其实不复杂。
早在2014年的时候，J Extracell Vesicles上就发表了一篇外泌体研究指南：不要觉得这个指南过期了哈，其实一直到现在都还是有价值的，这篇蚊帐提到了大致两点：1）外泌体的研究，首先要证明外泌体存在2）要证明外泌体的功能证明外泌体存在，就需要用电镜和蛋白marker双重证明，当然他们也举了点蛋白Marker的栗子：那功能呢，就需要使得外泌体被荧光标记后，被吞入靶细胞的证明，然后验证靶细胞的变化。
其实就这么简单，我们可以举个外泌体蚊帐的栗子，下面这篇蚊帐发表在Cellular Physiology and Biochemistry（和OT一样被踢去前还有五分多，当然，不要在意这些细节，因为这篇蚊帐发的时候还是有IF的）上：这主要做的是乳腺癌外泌体里包含的一个miRNA的功能作用，首先他们证明了有外泌体的存在，电镜&蛋白Marker（外泌体存在√）：接着说明了一下这个miRNA在乳腺癌中高表达（所以才会被分泌出去对别的细胞产生影响），而正常乳腺细胞中低表达：接着他们给miRNA做了Fam荧光标记，然后分离出了外泌体，这时候外泌体有荧光了。
然后将分离出来的外泌体和正常乳腺细胞一起培养，发现外泌体和miRNA被吞了进去（外泌体被吞√），然后正常乳腺细胞的增殖啊、耐药啊等等功能都变了（外泌体功能√）：最后用最直接的miRNA功能研究（也就是对靶基因的蛋白翻译）做了个验证：全文完……其实我们不难发现，外泌体的研究指南里，已经给我们阐明了最基本的外泌体研究的关键步骤。
步骤和思路都不难，难的是实验实在是有点小难度，别说分离了，还带荧光去让靶细胞胞吞，估计只有做这些实验的人才能感同身受吧，好了，今天就先策到这里吧，想要看看。
外泌体的鉴定宝典
外泌体的鉴定宝典上一期为大家介绍了外泌体常用的提取方法（点击进入查看），今天继续为大家介绍外泌体的鉴定。
外泌体参与神经疾病和癌症等很多种疾病的病理过程，同时在正常的生理过程中也发挥着介导细胞间通讯的重要功能。
细胞外囊泡在临床医学中也有十分光明的应用前景，由于它们含有丰富的生物标志物，可用于监测疾病进展，治疗反应等，同时由于外泌体具有携带递送生物分子的功能，具有成为临床药物递送载体的潜力。
外泌体的功能研究第一步，即进行外泌体的鉴定。
鉴定外泌体首先需要通过WB来鉴定外泌体的标志蛋白是否存在于样品中，通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征以及直径，对其进行区分鉴定。
1WB验证：检测外泌体标志蛋白的表达情况外泌体形成于早期胞内体，在内吞体转运复合体（ESCRT）及一些相关蛋白的调控下，早期胞内体发生内出芽形成多个腔内小囊泡，构成多胞体（MVB），MVB 最后在GTPase家族中的RAB酶调解下与细胞膜融合向外界释放囊泡。
wode外泌体膜上富含参与外泌体运输的四跨膜蛋白家族（CD63、CD81和CD9)）、热休克蛋白家族（(HSP60、HSP70、HSPA5、CCT2和HSP90)以及一些细胞特异性的蛋白包括A33（结肠上皮细胞来源）、MHC-II(抗原提呈细胞来源)、CD86(抗原提呈细胞来源)以及乳凝集素（不成熟的树突状细胞）。
其中CD63、CD9、CD81以及TSG101、HSP70、ALIX等，是最常用到的细胞外囊泡标志物。
这些标志物蛋白其实主要是涉及到了囊泡的形成和分泌过程，他们产生于细胞中，定位于胞内的膜结构附近，如四旋蛋白（CD9，CD63和CD81），直接参与了细胞外囊泡内容物的分选；TSG101是ESCRT复合体相关的蛋白，而ESCRT复合体是膜形成和断裂的驱动器。
ALIX直接涉及到了膜泡在形成过程中切割脱离质膜形成独立膜结构的过程。
可选实验操作步骤：（1）超离后获得外泌体，加入PBS重悬或者加入蛋白裂解液（若外泌体量小，加入裂解液后可省略离心取上清步骤）。
外泌体操作流程及注意事项
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外泌体研究ppt课件
现
随后，许多研究均发现外泌
与 体可通过携带蛋白质及核酸等成 分在细胞间传递信息并发挥功能。
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4
外
泌
研 究
体 的 发
现
与
研究生科研汇报
.
5
研究生科研汇报
外
细 胞 内 由 多 囊 泡 胞 内 体 (multivesicular bodies, MVBs)向外出芽形成, 通过MVBs与细
总
结
外泌体作为具有生物学功能的小囊泡内容物丰富、稳 定性高，具有一定的组织特异性，是近年肿瘤研究领域关 注的热点。
充分认识并利用外泌体的特点优势，筛选并发现新型 标志物，有望克服肿瘤异质性等难题，在肿瘤早期诊断、 治疗、监测与预后评价等方面将具有重要的临床意义。
外泌体有望作为一种药物载体，在肿瘤治疗方面可能 具有巨大的开发潜能。
特
表面标记蛋白主要有 Alix，TSG101，CD63，CD9，CD81和 HSP70。主要含有以下几种
物质：MHC I 类和/或 II 类分子、热休克蛋白（hsp）、四跨膜蛋白、整合素、细胞骨架
征 蛋白以及一些生物酶类。
被认为是细胞间分子交换和信息传递的生物纳米颗粒。
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研究生科研汇报
外
人体中大约有1014个外泌体，近乎于平均每个细胞产生
与
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研究生科研汇报
外
外泌体却并没有因为初次被发现而被引起重视，反而被误认 为是细胞处理胞内垃圾的一种囊泡外泌形式，用于装载和运送细
泌
胞在成熟过程中所产生的诸如质膜受体一类的废弃物。 1996年, Raposo等人发现
外泌体正规操作方法
外泌体正规操作方法
外泌体（Extracellular Vesicles，EVs）是一类具有膜包裹的细胞外体，可以通过分泌进入细胞外液。
以下是外泌体的正规操作方法：
1. 细胞培养和外泌体收集：
- 选择适合外泌体比较丰富的细胞系，如癌细胞系等。
- 使用含有足够营养物质的培养基进行培养，在细胞生长到80-90%的密度时进行收集外泌体。
2. 细胞外泌体的分离和富集：
- 低速离心：对细胞上清和培养基进行低速离心，将细胞碎片和大颗粒物质沉淀。
- 高速离心：将低速离心上清进行高速离心，以沉淀分离出外泌体。
- 滤膜过滤：可以使用0.2至0.8微米的滤膜，通过滤膜将外泌体分离出来。
3. 外泌体的纯化和浓缩：
- 过滤：使用0.2至0.45微米的滤膜，将外泌体悬液过滤以去除细胞碎片和大颗粒物质，得到纯化的外泌体。
- 超速离心：将外泌体悬液进行超速离心，将外泌体沉淀。
- 液氮冷冻：将外泌体悬液进行液氮冻结保存，以便后续分析或实验操作。
4. 外泌体的鉴定和表征：
- 电镜观察：使用透射电子显微镜观察外泌体形态和结构。
- 免疫学鉴定：使用外泌体表面标记物的抗体进行免疫学检测，如CD63、CD81等。
- 蛋白质分析：使用质谱分析等方法对外泌体中的蛋白质进行分析。
需要注意的是，在操作过程中应避免外泌体的污染和损伤，同时应遵循生物安全操作规范。
外泌体鉴定安全操作及保养规程
外泌体鉴定安全操作及保养规程外泌体（Extracellular Vesicles, EVs）是一种通过分泌方式由细胞释放到体外的膜包囊泡，是一种重要的细胞间通讯与信息传递方式。
在生物医学领域，外泌体的应用前景非常广阔，包括药物递送、诊断与治疗等方面。
在外泌体应用研究中，安全操作和保养极为重要，能够有效防止样品受到污染和损伤，确保实验结果的可靠性。
一、外泌体基本结构和分类外泌体是一种通过细胞分泌方式形成的可透过细胞膜的小膜包囊，主要由膜脂与一些膜蛋白、核酸、糖脂和其他生物分子组成。
通过外泌体，细胞能够向周围环境释放生物分子，同时也能够吸收周围细胞的外泌体。
根据其来源及特征，外泌体可分为三类：1.外泌体（exosomes）：直径约30-100 nm，是细胞内由内质网形成的膜包囊，含有细胞膜蛋白、编码和非编码RNA、糖脂等多种分子，广泛存在于人体内的各种细胞中，是研究应用最为广泛的外泌体类型之一。
2.微囊泡（microvesicles）：直径约100-1000 nm，是由细胞膜向外翻转形成的膜包囊，含有细胞膜、表面蛋白等多种分子，通常来源于某些特殊类型的细胞如血小板、植物细胞等。
3.神经突触囊泡（synaptic vesicles）：直径约30-50 nm，主要存在于神经系统中，是细胞释放化学信号物质的包囊，含有神经递质、膜蛋白、核酸等多种分子。
二、外泌体鉴定的常用技术外泌体鉴定常用的技术主要有电子显微镜（EM）、动态光散射（DLS）、纳米粒子追踪分析（NTA）等。
其中，EM技术需要特殊训练的技术专家进行操作，并且需要较高的成本和较长的实验周期，适用于一些对外泌体质量有高要求的场合。
DLS和NTA则是比较简便、快速的手段，能够给出外泌体的直径、多法术散射指数等参考参数。
在外泌体鉴定过程中，需要注意以下几点：1.操作前需准备好所有所需设备和试剂，并检查是否齐全、没有过期、没有损坏。
2.样品的制备需要注意避免细胞破裂、污染等影响结果的因素，需遵循相应的标准操作规程。