实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
分子生物学基本操作
琼脂糖凝胶电泳 和凝胶成像实验步骤
一、琼脂糖凝胶电泳
凝胶电泳是分离和纯化DNA片段最常用的技术。 根据制备凝胶的材料:
琼脂糖电泳 凝胶 电泳
聚丙烯酰胺电泳
琼脂糖的孔径大，可以分离长度为100bp至60kb的核酸片断； 聚丙烯酰胺凝胶的孔径小，可分离小片断（5-50bp）的核酸。
1、实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成 具有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂 糖的浓度。
0.1-10 ul Sterilized Micro-filter Tips
加样-使用合适的枪与枪头
比如加含有甘油的试剂，酶等最好用clear Tips Fra bibliotek 不会有残留；
如果甘油含量高，或特别浓稠的试剂最好用Clear, Non-Beveled Tips（或将一般枪头去尖头）；
与RNA操作有关的枪头最好为Sterilized Micro-filter Tips，或者至少为用DEPC水处理的枪头；
加样酶（冰上）时，应注意体积准确，及 外壁不带，内壁吹打干净，注意用枪头从 反应体系的管底吸上，反复吹打
多通道枪
混匀----所有试剂在使用前都要充分混匀; 多数
分子操作在加样后、反应前都要充分混匀
一、枪混匀
二、旋涡混匀器
0.2ml管,0.5ml管15% 体积以下
分子生物学实验室内部质量控制制度
分子生物学实验室内部质量控制制度分子生物学实验室是一个进行生物分子研究与实验的场所，准确和可靠的实验结果对于研究的进展至关重要。
为了保证实验室内部的质量控制，制定和实施一套科学的质量管理制度是必要的。
以下是一个分子生物学实验室内部质量控制制度的框架，以确保实验结果的准确性和可重复性。
一、实验室设备和仪器的维护保养：1.实验室设备和仪器的选择应基于性能和质量，并由负责人和技术团队共同决策。
2.实验室设备和仪器的定期维护和校准应提前安排，确保其始终处于运行良好的状态。
3.实验室设备和仪器的使用前，需要进行验证和验证的记录，确保其准确性和可靠性。
二、试剂和材料的管理：1.负责人和技术团队在选择试剂和材料时应遵循严格的供应商选择标准，并确保试剂和材料的原始质量。
2.试剂和材料的储存应根据其特点和要求进行，并定期检查过期日期和质量。
三、实验室操作规程：1.实验室应制定并执行实验室操作规程，包括实验前的准备、实验的步骤和操作、实验后的数据整理和记录等。
2.严格遵守实验室操作规程，确保实验的可控性和规范性。
3.实验操作应遵循操作规程，并且实验记录应详细、准确地记录实验过程和结果。
四、实验数据管理：1.实验数据应详细记录，并由技术人员进行校对和复核。
2.实验数据的存储和管理应遵循数据保密和可追溯性的原则，确保实验数据的完整性和准确性。
五、实验结果的分析和解释：1.实验结果的统计分析和解释应由专业技术人员进行，确保结果的准确性和可靠性。
2.实验结果的正常范围和偏差应根据实验室内部验证和外部比对确定。
3.实验结果的报告应根据内部标准和要求完成，并由负责人进行审查和核实。
六、实验室的持续改进和质量审计：1.实验室应建立质量管理小组，并定期召开会议进行质量管理的评估和改进。
2.实验室应进行定期的内部质量审计，并根据审计结果制定相应的纠正措施和改进计划。
以上是一个分子生物学实验室内部质量控制制度的框架，旨在保证实验结果的准确性和可重复性。
pcr 操作中最应该注意的事项
pcr 操作中最应该注意的事项PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种常用的分子生物学技术，用于扩增DNA片段。
在进行PCR操作时，有一些非常重要的事项需要特别注意，以确保实验的准确性和可靠性。
以下是在PCR操作中最应该注意的事项：1. 实验室操作规范：在进行PCR操作之前，需要做好实验室操作规范的准备工作，包括戴好实验手套、穿好实验服、清洁操作台面等。
避免在实验室中进食、饮水或使用手机等。
2. 检查实验仪器和试剂：在开始PCR实验之前，需要确保PCR仪器的正常运转和试剂的完整性。
检查PCR仪器的温控系统、离心机的转速、试剂的保质期等，确保实验条件的准确性。
3. 建立阳性和阴性对照：在每次PCR实验中，都要包括阳性对照和阴性对照，以验证实验的准确性。
阳性对照应包括已知的阳性样品，而阴性对照则应该是未添加DNA模板的反应混合物。
4. 采用单独的PCR实验室：为了避免PCR实验中的污染，最好在专门的PCR实验室中进行实验，避免与其他实验室中的DNA样品混合。
5. 严格控制实验条件：在PCR实验中，需要严格控制实验条件，包括温度、时间、试剂比例等。
确保PCR反应体系的均匀混合、温度梯度的准确性和反应时间的精确控制。
6. 避免污染：PCR实验非常容易受到外源DNA的污染，因此需要避免在实验室中的DNA样品和PCR产物的交叉污染。
实验中应该使用滤器枪头、一次性试剂盒等措施，避免污染的发生。
7. 定期维护PCR仪器：PCR仪器的维护对实验的准确性非常重要。
定期清洁PCR仪器的加热盖、检查温度控制系统的准确性、更换磁力搅拌器的磁子等，确保PCR仪器的正常运转。
8. 标记实验样品：在进行PCR实验时，需要对实验样品进行正确的标记，包括样品的编号、实验日期、PCR程序名称等。
避免实验样品的混淆和实验结果的不准确。
9. 注意PCR产物的保存和处理：PCR产物的保存和处理对实验结果的可靠性有着重要的影响。
分子生物学与细胞生物学实验
蛋白质分离与纯化
目的：从混合物中分离出目标蛋白质
原理：利用蛋白质的化学性质和生物学特性进行分离
操作步骤：样品制备、缓冲液选择、沉淀、洗涤、再溶解、纯化
注意事项：避免蛋白质变性、保持蛋白质活性、防止污染
生物信息学分析
实验目的：分析生物信息，了解生物分子的结构和功能
实验结果：获得生物分子的结构和功能信息，为后续研究提供依据
实验方法：包括显微镜观察、基因克隆、蛋白质分析等
细胞生物学：研究细胞结构和功能的科学
实验基本原理
分子生物学与细胞生物学实验的基本原理主要包括细胞生物学、分子生物学、遗传学和生物化学等领域的知识。
实验过程中，需要遵循一定的实验操作规程和实验伦理原则，以保证实验结果的准确性和可靠性。
实验过程中，需要掌握各种实验技术和方法，如细胞培养、基因编辑、蛋白质纯化等。
实验步骤：样本处理、数据收集、数据分析、结果解读
实验材料：生物样本、实验试剂、仪器设备
实验数据分析与解读
4
实验数据收集与整理
实验数据的来源：实验操作、观察记录、仪器测量等
实验数据的类型：定性数据、定量数据、图像数据等
实验数据的整理：数据清洗、数据整合、数据转换等
实验数据的存储：电子表格、数据库、云存储等
分子生物学与细胞生物学实验
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目录
01
添加目录项标题
02
实验基础知识
03
实验操作流程
04
实验数据分析与解读
05
实验注意事项与安全防范
06
实验案例分析
添加目录项标题
1
实验基础知识
2
分子生物学与细胞生物学概述
分子生物学实验的注意事项
分子生物学实验的注意事项分子生物学实验是研究生物体分子结构、功能和相互作用的重要手段。
在进行分子生物学实验时，需要注意一些重要事项，以确保实验的准确性和可靠性。
本文将从实验前的准备工作、实验操作的注意事项以及实验后的数据分析等方面进行探讨。
一、实验前的准备工作在进行分子生物学实验之前，实验者需要进行充分的准备工作。
首先，要仔细阅读实验方案和相关文献，了解实验的目的、原理和步骤。
其次，要准备好所需的试剂和仪器设备，并检查其完整性和有效性。
同时，要保证实验环境的清洁和卫生，防止外源性污染对实验结果的影响。
二、实验操作的注意事项在进行分子生物学实验的操作过程中，需要注意以下几点。
首先，要严格控制实验条件的一致性，包括温度、湿度、光照等因素。
这样可以减小实验误差，提高实验的可重复性。
其次，要注意实验操作的精确性和细致性。
例如，在取样、称量试剂和配制溶液时要准确无误，避免因操作不当而引入误差。
此外，要注意实验操作的卫生和安全，佩戴实验服、手套和口罩，避免对实验者和环境造成伤害。
三、实验后的数据分析在分子生物学实验完成后，需要对实验结果进行准确的数据分析。
首先，要对实验数据进行统计和整理，计算平均值、标准差等统计指标，以评估实验结果的可靠性和显著性。
其次，要进行数据的图形化展示，使用适当的图表和图像来直观地表达实验结果。
此外，要进行结果的比较和解释，结合相关文献和理论知识，分析实验结果的意义和可能的机制。
四、实验中的常见问题及解决方法在进行分子生物学实验时，常常会遇到一些问题。
例如，实验结果不稳定、试剂污染、实验操作失误等。
针对这些问题，可以采取一些解决方法。
首先，可以优化实验条件，调整温度、pH值等因素，以提高实验结果的稳定性。
其次，可以进行试剂的质量控制，使用高纯度的试剂，并进行必要的质检。
此外，要加强实验操作的培训和规范，提高实验者的操作技巧和经验。
总结起来，分子生物学实验是一项复杂而精细的工作，需要实验者具备扎实的理论基础和严谨的实验态度。
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项一、酶与载体的分装酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl或20 μl；连接酶（solutionΙ）按5 μl分装；dNTP（10 mM）分装成50 μl；无菌水分装成1 ml；注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。
（2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。
（3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误他人使用。
（4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。
（5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。
每人负责六个月。
其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。
由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。
二、常见抗生素及IPTG的配置以氨苄青霉素为例：1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。
2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。
3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。
4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。
注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。
5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管0.5 ml。
在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。
6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。
注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。
表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度名称储存浓度工作浓度氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/mlIPTG 1 M 0.05-0.6 mM三、分子生物学实验中各种试剂与溶液的配制分子生物学实验中各种试剂与溶液的配制参见《分子克隆》。
分子生物学实验室安全操作规范
分子生物学实验室安全操作规范分子生物学实验室是进行生物大分子制备和分析常用技术、蛋白质与核酸的提取与分离、PCR技术、分子杂交与印迹技术、分子克隆技术、外源基因转移技术、蛋白质表达技术、分子标记技术、分子改造技术、测序及人工合成技术、基因组学技术、蛋白质组学技术、生物芯片技术、生物信息学技术、RNA研究技术和电泳检测等的场所，所有进入实验室的工作人员均应遵守必要的操作规范，现在就让未名雷蒙特带您来了解一下:1. 配制有毒挥发性溶液必须在通风橱内进行。
2. 使用实验室仪器设备要严格遵守操作规程，认真填写仪器设备使用记录。
使用精密贵重仪器设备，必须预约，并由专门负责的工作人员上机操作。
3. 实验室产生的工作废液及有毒有害物质，应在安全负责人的指导下妥善处理。
4. 在进行凝胶成像时，必须用保鲜膜把胶包好或用保鲜膜将胶和透照台隔开，确保不污染成像系统。
5. 实验过程中必须穿着工作服。
进行有毒、有害、有刺激性物质或有腐蚀性物质操作时，应戴好防护手套。
6. 由于实验过程中使用溴化乙锭(EB)、丙烯酰胺等有害物质，所有与此有关的操作必须带手套，在特定区域内完成，严禁将接触过此类物质的手套或其他杂物带出工作区。
7. 实验人员未经许可，不得随意动用专用实验的物品。
不得私自配制实验室各房门、抽屉、柜子钥匙，不得私自在实验室内安装其它设备。
8. 爱护仪器设备，节约实验材料，仪器设备如有损坏，要及时报告登记。
如发生意外事故，应立即采取必要措施，并及时报告实验室负责人、值班人员和报警。
9. 实验完毕后做好整理工作，关闭电源、水源、气源和门窗。
10. 工作结束后，清理使用过的台面及区域, 保持整洁。
实验室要保持安静、卫生，严禁在室内吸烟、饮食，严禁随地吐痰、大声喧哗。
分子生物学实验的使用注意事项
分子生物学实验的使用注意事项引言：分子生物学实验是研究生物体内分子结构、功能和相互作用的重要手段。
然而，由于其涉及到微小而复杂的生物分子，实验过程中需要注意一系列的细节和技巧，以确保实验结果的可靠性和准确性。
本文将从实验前的准备工作、实验操作、实验设备和实验数据分析等方面，探讨分子生物学实验的使用注意事项。
一、实验前的准备工作1. 实验室环境准备：分子生物学实验需要在无菌、干净的环境中进行，因此实验室应保持整洁，工作台面、仪器设备和试剂容器等都要经过消毒处理。
2. 试剂准备：选择高纯度的试剂，确保其质量稳定。
同时，注意试剂的储存条件和有效期限，避免使用过期试剂或储存不当的试剂。
3. 实验方案设计：在进行实验前，要制定详细的实验方案，包括实验步骤、所需试剂和设备、实验时间等。
合理的实验方案可以提高实验效率和准确性。
二、实验操作1. 个人卫生和实验操作规范：在进行分子生物学实验前，必须进行充分的个人卫生，洗手并穿戴实验服、手套和口罩等防护用品。
此外，遵守实验室的操作规范，如不吃东西、不随意触摸面部等。
2. 操作技巧：分子生物学实验中，常涉及到微量试剂的操作，因此需要掌握准确的体积计量技巧和移液技巧。
同时，注意避免试剂的污染和交叉污染，避免误操作导致实验结果的不准确。
3. 温度控制：在一些分子生物学实验中，需要对试剂和样品进行温度控制，如PCR反应、酶切反应等。
因此，要掌握好温度控制设备的使用方法，并严格按照实验方案中的要求进行操作。
三、实验设备1. 仪器设备的校准和维护：实验仪器设备的准确性和稳定性对实验结果至关重要。
因此，在进行实验前，要对仪器设备进行校准，并定期进行维护保养，确保其正常运行。
2. 试剂储存和保存：分子生物学实验中使用的试剂需要储存和保存在适当的条件下，如低温、避光、密封等。
同时，要注意试剂的有效期限，避免使用过期试剂影响实验结果。
四、实验数据分析1. 数据记录和整理：在进行实验过程中，要及时记录实验操作和观察结果，并进行详细的数据整理。
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实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项
一、酶与载体的分装
酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl或20 μl；
连接酶（solutionΙ）按5 μl分装；
dNTP（10 mM）分装成50 μl；
无菌水分装成1 ml；
注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。
（2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。
（3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误她人使用。
（4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。
（5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。
每人负责六个月。
其它试剂则由第一位使用新包装的同学分装。
由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。
二、常见抗生素及IPTG的配置
以氨苄青霉素为例：
1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭
菌。
2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。
3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。
4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。
注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。
5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管0.5 ml。
在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。
6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。
注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。
表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度
名称储存浓度工作浓度
氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml
卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml
氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml
链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml
四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/ml
IPTG 1 M 0.05-0.6 mM
三、分子生物学实验中各种试剂与溶液的配制
分子生物学实验中各种试剂与溶液的配制参见《分子克隆》。
四、总DNA的提取
具体步骤参考试剂盒说明书。
注意：革兰氏阳性菌DNA提取时需要加溶菌酶。
五、基因扩增
1．引物与合成：设计引物序列，发至生工公司进行合成（）。
2．引物配制：合成后的引物先离心至管底，然后按说明书用无菌水稀释至10-50μM，分装至无菌EP管中，做好标记（一定要标记浓度！）后，于-20度保存备用。
3． PCR反应体系配制：将所需各组分在冰浴中化开后，进行PCR反应体系配制。
反应体系及反应参数按不同聚合酶的说明书进行，以transgen 的easyTaq酶扩增1kb基因序列为例，100 μl反应体系为：10×buffer 10 µl，dNTP (10 mM) 2 µl,引物各 2 µl（10-50μM），模板 1 µl（根据浓度加减体积），Taq酶 1 µl，ddH2O 82 µl（注意：加入顺序为：水，buffer，dNTP，引物，模板，酶）。
涡旋混匀，分装至四-五管，瞬时离心。
注意：若反应时间较长在反应混合液的上层加10-20 µl 的矿物油防止样品在PCR的过程中蒸发。
4．将管放入PCR仪中，在PCR仪上设置好PCR反应参数，例如：94 ℃ 5 min，94 ℃ 40 sec，Tm 55℃ 1 min， 72 ℃
2 min，72 ℃ 10 min，16 ℃ 1 h,一般设30个循环。
待温
度降至16 ℃后停止PCR仪，尽快取出样品，不允许过夜。