离体蛙心灌流

一、实验目的：

学习斯氏离体蛙心灌流法；了解心肌的生理特征；观察Na+、K+、Ca+、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（Ach）等对离体心脏活动的影响。

二、实验原理：

将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。血钾浓度过高时（高于7.9mmol/L）,心脏兴奋性、自律性、传导性及收缩性都下降，表现为收缩力减弱、心动过缓和传导阻滞，严重时心脏可停搏于舒张期，血钙浓度升高时，心脏收缩力增强，过高可使心室停搏于收缩期。血钙浓度降低，心肌收缩力减弱，血中钠离子浓度的轻微变化，对心肌影响不明显，只有发生明显变化时，才会影响心肌的生理特性。肾上腺素可以使心率加快、传导加快及心肌收缩力加强，乙酰胆碱则肾上腺素的作用相反。

三、实验仪器：

青蛙、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针型露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧

杯）、纱布、棉线、橡皮泥、任氏液。蛙心套管（斯氏套管或八木式套管）、套管夹、氯化钠溶液、氯化钙溶液、氯化钾溶液、肾上腺素、乙酰胆碱、肝素。

四、实验步骤：

1、斯氏蛙心插管法：

（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，

使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(1.5～2 cm)，即可进行实验。

（2）将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉 (不可夹得过多，以免因夹破心室而漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑轮与张力传感器相连（如右图）。注意：勿使灌流液滴到传感器上。调节显示器上心脏收缩曲线的幅度适中。

2、实验观察

(1)记录正常心搏曲线

(2)改用0．65％NaCI溶液灌流，并作好加药标记，观察心搏变化。待曲线氏插管装置出现明显变化时，立即吸去套管中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复正常。注意：换液时切勿碰套管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一致(以下同)。观察可得，NaCI溶液会阻遏心脏搏动。

(3)向套管内加2～6滴5％NaCI(较细的套管需少加)溶液，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管中的灌流液，并做好冲洗标※记，迅速用新鲜任氏液清洗2～3次，待心搏恢复正常。

(4)同法向套管内加入1～3滴2％CaCI：溶液，观察并记录心搏曲线的变化。当出现明显变化时，立即更换任氏液，待心搏恢复正常(如果恢复迟缓，可多次冲洗)。

(5)向套管中加1—2滴1％KCl溶液，记录心搏曲线的变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液，待心搏恢复正常。

(6)同法记录套管中加入l～2滴的肾上腺素溶液(1：10 000)后心搏曲线的变化。

(7)同法记录套管中加入1—2滴乙酰胆碱溶液(1：10 000)后心搏曲线的变化。

五、实验结果：

由计算机采集系统所测定的相应曲线如下：

正常蛙心图像

加入钠离子之后的蛙心图像

加钙离子之后的蛙心图像

加钾离子之后的蛙心图像

加肾上腺素之后的蛙心图像

加乙酰胆碱之后的蛙心图像

六、注意事项：

1. 制备蛙心标本时，勿伤及静脉窦。

2 .上述各实验项目，一旦出现作用应立即用正常任氏液换洗，

以免心肌受损，而且必须待心搏恢复正常后方能进行下一步实验。

3. 复习心肌生物电的产生机制及各种离子对心脏活动的影响。

4. 尽量选用健壮、体大的雄性蟾蜍，手术过程中注意保护心脏，

避免损伤。

5. 实验中及时用任氏液冲洗心脏，待曲线恢复平稳后再进行下

一步操作。

6. 每次更换任氏液都必须保持灌流液液面高度恒定，以免因灌

流量变化而影响结果。

7. 严格控制每次药品加入量，先加一滴，效果不明显再加一滴。

8. 滴加药品和换取正常任氏液，须及时标记，以便观察分析。

9. 吸滴瓶中的任氏液和吸蛙心套管内溶液的吸管应区分专用，不可混淆使用，以免影响实验结果。

七．实验感想

这次实验比较简单，我们较快的完成了实验。我们清晰的观察了蛙心脏离体跳动，以及加不同刺激的变化。