DTT水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究_赵美琳
“大豆胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制”
“大豆胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的
研制”
佚名
【期刊名称】《中国农业大学学报》
【年(卷),期】2003(8)3
【总页数】1页(P68-68)
【关键词】大豆;胰蛋白酶;抑制因子;单克隆抗体;制备技术;检测试剂盒;畜类;禽类;饲料;豆粕
【正文语种】中文
【中图分类】S816.42
【相关文献】
1.卡那霉素单克隆抗体制备以及化学发光免疫检测试剂盒的研制 [J], 万宇平;彭庆军;于海浪;郑迎春;贾芳芳;冯月君
2.大豆胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备及其检测试剂盒的研制 [J], 李德发
3.氯霉素单克隆抗体制备以及化学发光检测试剂盒的研制 [J], 吴小胜;焦强;万宇平;王兆芹;王琳琛;丛倩千;朱亮亮;何方洋
4.大豆Kunitz胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 王耀;李燕虹;曹金博;孙亚宁;邢云瑞;陈秀金;邓瑞广;胡骁飞
5.大豆Bowman-Birk胰蛋白酶抑制因子单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 王耀;李燕虹;吴佳蓓;邢云瑞;曹金博;陈秀金;李兆周;邓瑞广;胡骁飞
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大豆中的胰蛋白酶抑制剂及其提取方法解读
大豆中的胰蛋白酶抑制剂及其提取方法解读大豆中的胰蛋白酶抑制剂是一种重要的生物活性物质，它能够抑制胰蛋白酶的活性，从而保护大豆不受胰蛋白酶的分解。
这种抑制剂在食品、医药等领域都有广泛的应用。
为了提取大豆中的胰蛋白酶抑制剂，可以采用以下步骤：1. 制备大豆胰蛋白酶抑制剂初级上清液：将干大豆加水浸泡过夜后磨碎并充分混匀成浆液，然后搅拌后加溶液用3层以上的纱布过滤，得到滤液和豆渣。
接着以2-5:1.5的比例添加柠檬酸钠和磷酸三钠，直至滤液ph值达到4.5～6.0，对添加柠檬酸钠和磷酸三钠后的滤液进行浸提并水浴，水浴后离心去除杂蛋白，得到初级上清液。
2. 制备大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物：将初级上清液加热，并在上清液中添加硫酸铵，直至硫酸铵浓度30%，搅拌后得到次级搅拌液。
将次级搅拌液用滤纸过滤去脂，并将滤液静置过夜，即可得到粗提上清液。
在粗提上清液中加入硫酸铵，直至硫酸铵浓度50%，搅拌沉淀后得到大豆胰蛋白酶抑制剂粗提物。
以上步骤完成后，就可以提取到大豆中的胰蛋白酶抑制剂。
这种抑制剂的应用可以保护大豆不受胰蛋白酶的分解，同时也可以应用到食品、医药等领域中。
在提取过程中，需要严格控制各个步骤中的条件和操作，以保证提取的质量和效率。
除了作为食品和医药领域的原料，大豆胰蛋白酶抑制剂还可以用于研究胰蛋白酶的活性及其作用机制。
通过进一步纯化大豆胰蛋白酶抑制剂，可以获得更高纯度的抑制剂，从而更好地了解其结构和功能。
此外，大豆胰蛋白酶抑制剂的研究还可以与人工智能技术相结合，开发出更加智能化的方法来提取和纯化这种抑制剂。
例如，可以利用人工智能算法预测大豆胰蛋白酶抑制剂的活性，优化提取和纯化过程，提高抑制剂的产量和质量。
此外，大豆胰蛋白酶抑制剂的活性研究还可以与营养学、生理学等领域相结合，研究其在人体内的生理作用和营养价值。
例如，可以研究大豆胰蛋白酶抑制剂对人体肠道健康的影响，以及其在预防和治疗某些疾病方面的应用。
同时，大豆胰蛋白酶抑制剂的研究还可以与农业领域相结合，开发出更加环保和高效的农业生产方式。
不同还原剂对大豆胰蛋白酶抑制剂的钝化研究
Ａｂｓｔｒ ａｃｔ：Ｔｈｅ ａ ｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｐ ａ ｐ ｅ ｒ ｗａ ｓ ｔｏ ｓ ｔｕｄ ｙ ｔｈｅ ｉｎａ ｃ ｔｉｖａ ｔｉｏｎ ｏｆ ＳＴＩ ｂ ｙ ｄ ｉｔｈｉｏｔｈｒｅ ｉｔｏｌ （ＤＴＴ）， Ｎａ ２ＳＯ３ ａ ｎｄ Ｃｙｓ ． Ａｆｔｅ ｒ ｉｎｃ ｕｂ ａ ｔｉｏｎ ａ ｔ ８０℃ ， ｐ Ｈ ７．５， ＳＴＩ ｗａ ｓ ｍｅ ａ ｓ ｕｒｅ ｄ ｂ ｙ ａ ｎ ｉｍｐ ｒｏｖｅ ｄ ＢＡＰＮＡ ｍｅ ｔｈｏｄ ． Ｔｈｅ ｃ ｈａ ｎｇ ｅ ｓ ｏｆ ＳＴＩ ｗｅ ｒｅ ｄ ｅ ｔｅ ｒｍｉｎｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ｉｚｅ ｅ ｘｃ ｌｕｓ ｉｏｎ ｃ ｈｒｏｍａ ｔｏｇ ｒａ ｐ ｈｙ （ＳＥＣ） ａ ｎｄ ＳＤＳ － ＰＡＧＥ， ｒｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔｉｖｅ ｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅ ｓ ｕｌｔｓ ｒｅ ｖｅ ａ ｌｅ ｄ ｔｈａ ｔ ＳＴＩ ｗａ ｓ ｉｎａ ｃ ｔｉｖａ ｔｅ ｄ ｂ ｙ ｒｅ ｄ ｕｃ ｉｎｇ ａ ｇ ｅ ｎｔｓ ， ａ ｎｄ ｔｈｅ ｉｎｈｉｂ ｉｔｉｏｎ ｅ ｆｆｅ ｃ ｔｉｖｅ ｎｅ ｓ ｓ ｗａ ｓ ａ ｓ ｆｏｌｌｏｗｓ ： ＤＴＴ＞Ｎａ ２ＳＯ３ ＞Ｃｙｓ ， ｗｈｉｃ ｈ ｗａ ｓ ａ ｌｓ ｏ ｐ ｒｏｖｅ ｄ ｂ ｙ ＳＤＳ － ＰＡＧＥ． Ｂｙ ＳＥＣ ｗｅ ｃ ｏｕｌｄ ｋｎｏｗ ｔｈａ ｔ ｔｈｅ ｄ ｉｓ ｕｌｆｉｄ ｅ ｂ ｏｎｄ ｓ ｏｆ ＳＴＩ ｗｅ ｒｅ ｂ ｒｏｋｅ ｎ， ａ ｎｄ ｔｈｅ ｓ ｔｒｕｃ ｔｕｒｅ ｏｆ ＳＴＩ ｗａ ｓ ｃ ｈａ ｎｇ ｅ ｄ ， ａ ｎｄ ｓ ｏｍｅ ｎｅ ｗ ｃ ｏｍｐ ｏｕｎｄ ｓ ｗｅ ｒｅ ｐ ｒｏｄ ｕｃ ｅ ｄ ． Ｔｈｅ ｒｅ ｆｏｒｅ ， ｔｈｅ ｓ ｔａ ｂ ｉｌｉｔｙ ｏｆ ＳＴＩ ｉｓ ｃ ｌｏｓ ｅ ｌｙ ｒｅ ｌａ ｔｅ ｄ ｔｏ ｄ ｉｓ ｕｌｆｉｄ ｅ ｂ ｏｎｄ ｓ ．
大豆制品中胰蛋白酶抑制剂失活方法的研究进展
大豆制品中胰蛋白酶抑制剂失活方法的研究进展陈婉【摘要】大豆胰蛋白酶抑制剂是大豆中主要的抗营养因子，降低了大豆制品的营养质量和食用安全性，在大豆制品加工过程中必须使其失活。
介绍了通过热处理、微波技术、压力处理、超声波处理、高压脉冲电场、化学还原、酚类化合物络合、酶法水解、微生物发酵及亲和色谱分离等钝化大豆胰蛋白酶抑制剂的方法。
%As the main antinutriton factor in soybean, soybean trypsin inhibitor decreases the nutritional value and edible security of the soybean products. Soybean trypsin inhibitor must be inactivated during the processing of the soybean products. In this review, the methods that inactivated the soybean trypsin inhibitor, including heat treatment, microwave technique, pressure treatment, ultrasonic treatment, high intensity pulsed electric field, chemical reduction, phenol complexation, enzyme hydrolysis, microbe fermentation and affinity chromatography, were introduced.【期刊名称】《漳州职业技术学院学报》【年(卷),期】2013(000)002【总页数】6页(P24-29)【关键词】大豆;胰蛋白酶抑制剂;失活【作者】陈婉【作者单位】福建中检华日食品安全检测有限公司，福建福州 350002【正文语种】中文【中图分类】Q5031 大豆胰蛋白酶抑制剂大豆（Glycine max (L.)Merr.）蛋白含量丰富，多年的研究发现大豆具有降低血浆胆固醇含量及预防癌症、糖尿病和肥胖症等疾病等保健功能，是人类日常饮食和动物饲料的优质植物蛋白来源。
豆制品中胰蛋白酶抑制剂的研究
·食品科技·豆制品中胰蛋白酶抑制剂的研究杨丽杰吴非霍贵成孙占海（东北农业大学）【摘要】对豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了调查，发现水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白、水豆腐、干豆腐中胰蛋白酶抑制剂活性均被钝化了以上；对腐乳、豆酱中胰蛋白酶抑制剂活性进行检测，结果未检出。
无糖豆粉、豆粉、豆浆以及内酯豆腐中胰蛋白酶抑制剂钝化率低于。
比较了种热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果，得到巴氏杀菌可钝化胰蛋白酶抑制剂；高压杀菌可钝化，超高温灭菌可钝化。
【关键词】豆制品；胰蛋白酶抑制剂；热处理中图分类号：文献标识码：文章编号：（）大豆营养价值高，是人和动物的主要蛋白质来源，但其中含有胰蛋白酶抑制剂，有碍营养素的吸收，导致食用后身体不适或豆制食品感官上的缺陷，严重时会造成人或动物的死亡。
豆制品中胰蛋白酶抑制剂的存在还没有引起人们足够的重视。
目前失活胰蛋白酶抑制剂主要采用热处理，为达到彻底钝化而采用的过度加热可使大豆中的蛋白质溶解度降低，营养物质遭到破坏。
而且，胰蛋白酶抑制剂比较耐热，热处理的效果也很有限。
本研究对市场上多种豆制品中胰蛋白酶抑制剂活性进行了测定调查，比较了常用热处理方式对胰蛋白酶抑制剂的钝化效果，有利于人们对豆制品安全性的认识，为更彻底地失活胰蛋白酶抑制剂提供依据。
材料与方法材料与设备腐乳、干豆腐、内酯豆腐、豆浆、水豆腐、豆酱、豆粉为市售；无糖豆粉、水解蛋白、乳用蛋白、组织蛋白为大豆蛋白食品公司提供；生豆粉为实验室自备；所用化学试剂为分析纯或生化试剂。
牛胰蛋白酶、、均由美国公司生产。
仪器设备：振荡培养箱（上海医用仪表厂）、离心机（北京医用离心机厂）、型凯氏定氮仪（北京宜兴科教仪器研究所）、多功能恒温水浴锅型（沈阳市医疗器械厂）、紫外可见分光光度计型（日本岛津公司）、高压灭菌器（上海医用核子仪器厂）。
试验方法豆制品中常规营养成分测定d水分含量测定：常压干燥法。
i粗蛋白测定：微量凯式定氮法。
酶法检测大豆蛋白酶抑制因子的实验探讨
酶法检测大豆蛋白酶抑制因子的实验探讨程志斌【期刊名称】《畜禽业》【年(卷),期】2004(000)009【摘要】大豆蛋白酶抑制因子是大豆的主要抗营养因子，约占大豆蛋白质的6％。
生大豆抗营养作用的40％是由蛋白酶抑制因子引起的。
大豆蛋白酶抑制因子能抑制畜禽肠道内胰腺分泌的蛋白水解酶，如胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶等的活性，引起生长停滞、胰腺增生和肥大等。
这种作用在幼年畜禽上尤为明显，减少了其饲养价值，限制了大豆和豆粕作为主要蛋白饲料的使用价值。
因此，实际生产中，获取不同品种的大豆及其加工副产物中胰蛋白酶抑制因子的活性范围，以确定大豆和豆粕在饲料中的使用量，急需简便、快速、准确的胰蛋白酶抑制因子活性测定方法。
【总页数】3页(P59-61)【作者】程志斌【作者单位】中国农业大学农业部饲料工业中心,北京,100094【正文语种】中文【中图分类】S816.32【相关文献】1.酶法钝化大豆中胰蛋白酶抑制因子的研究 [J], 安红波;张华;王艳红;孙倩2.血清基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1在结直肠癌中检测的意义 [J], 邓伟康3.单侧输尿管梗阻大鼠肾脏组织基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶2和金属蛋白酶组织抑制因子2的表达及益气活血法的影响 [J], 刘娜;刘丽;曾晓蓓;景朋;杨连雪;杨琳;刘文军4.载脂蛋白 E 拟肽对实验性变态反应性脑脊髓炎小鼠基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1表达的影响 [J], 韦俊杰;郑明华;杨程程;韦云飞;李家鑫;陶敏;唐玉兰5.主动脉瘤患者围术期基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶抑制因子、白细胞介素检测及临床意义 [J], 冯涛;王宗社;舒端朝;张顺军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法[发明专利]
![一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1c1212e290c69ec3d4bb7592.png)
专利名称：一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法专利类型：发明专利
发明人：陈群,吴菁
申请号：CN200810162973.X
申请日：20081211
公开号：CN101759801A
公开日：
20100630
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种新型大豆胰蛋白酶抑制剂的分离纯化方法。
利用大豆胰蛋白酶抑制剂可抑制胰蛋白酶的专一性，将胰蛋白酶固定化，分离纯化大豆乳清废水中大豆乳清蛋白获得高纯度的大豆胰蛋白酶抑制剂。
该方法操作简便、费用低并获得了高纯度的产品。
该大豆蛋白酶抑制剂具有强抗癌活性且毒性小，它有望成为一种抗癌、治疗糖尿病的新药用于临床，并且对环境保护和治疗癌症均有十分积极的意义。
申请人：湖州来色生物基因工程有限公司,吴菁
地址：313100 浙江省德清县武康镇长虹街333号
国籍：CN
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以大豆胰蛋白酶抑制因子为研究对象
实验流程
交联壳聚糖床的制备 环氧氯丙烷对交联壳聚糖床的活化 胰蛋白酶的固定化 SBTI粗品的制备 天然胰蛋白酶酶活鉴定 固定化胰蛋白酶酶活鉴定 SBTI的亲和分离 纯化产品效果的SDS-PAGE鉴定
Scheme 1
Crosslinking of chitosan by glutaraldehyde
SBTI属于丝氨酸蛋白酶抑制因子，包括 Kunitz trypsin inhibitor(KTI)和Bowman-Birk trypsin inhibitor(BBTI)两类，前者 Mr~20kDa,后者Mr~8-10kDa
我们从大豆研磨液中分离出来的BBTI是一 种强力的胰凝乳蛋白酶抑制剂，纯化的 BBTI经研究表明，BBTI还具有杀菌活性， 抑制HIV-1的反转录活性。此外，在 Sprgue-Dawley鼠中发现，它还能有效抑制 乙酰基亚硝基脲引起的神经系统瘤.
Affinity chromatography of SBTI by trypsin-immobilised chitosan beads (0.2mol L−1 borax/borate (pH 7.8) as equilibrium and washing buffer, HCl/H2O solution as eluent, pH gradient elution at flow rate of 30mL h−1, 7.5mL per tube).
Effect of pH on SBTI adsorption by free and immobilised trypsin.
Effect of temperature on SBTI adsorption by free and immobilised trypsin.
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大豆蛋白是人类最主要的植物蛋白质来源，但豆类植物在提供丰富营养的蛋白质资源的同时，又广泛存在着各类营养限制性因子，其中STI 就是其中之一。
一些学者研究发现STI 是导致大豆利用率下降的最根本的原因，它限制了人体和动物对豆类蛋白质的吸收和利用，STI 分子内含有跨链的二硫键，使得STI 结构稳定，耐热耐酸。
许多植物STI 的一个分子可以同时结合两分子的蛋白酶，这就造成了蛋白酶失去与蛋白质底物结合的机会，因此我们必须通过特定的方法除去或克服STI 所带来的不利影响，才能充分利用豆类蛋白质资源。
本文主要选择DTT 对STI 的水解作用，采用分光光度法、SDS-PAGE 和GPC 色谱法相结合，对STI 的水解程度进行分析研究。
1实验材料与方法1.1实验材料1.1.1主要试剂DTT 溶液、TGase 溶液、Tris-Hcl 缓冲液(50moI/L ，pH7.5)、大豆胰蛋白酶抑制剂溶液（5000BAEE/mL ）、BAPNA 溶液（0.4mg/mL ）、胰蛋白酶溶液（5,000BAEE/mL ）、30%(v/v)冰醋酸溶液、电泳试剂等1.1.2主要仪器电子分析天平、电子恒温水浴锅、PHS-25型酸度计、78-1型电磁搅拌器、752分光光度计、DY-III 型电泳仪、Waters 高效液相色谱仪、凝胶成像系统等。
1.2实验方法1.2.1DTT 对STI 的水解DTT 对STI 的水解步骤如图l 所示。
图1DTT 水解STI 的方法对照样为0.25ml 大豆胰蛋白酶抑制剂加入1mL 的TGase(1U/mL)，然后50℃水浴恒温8h 后，100℃灭酶5min,反应液4℃储藏以备后用。
1.2.2采用分光光度法测定STI 水解程度实验方法如图2所示。
图2测定DTT 对STI 的水解步骤对照样为不经处理的STI 原溶液，其余操作相同。
用空白样做参比，分别取样液及对照样溶液，通过比较处理的STI 与不经处理的STI 原液反应的样品在410nm 的吸光值，就可由残留的胰蛋白酶活性间接检测出DTT 及TGase 对STI 的水解程度。
另外，用0.lmL 胰蛋白酶溶液加上0.31mLTris-Hcl 缓冲液，混匀后与2mLBAPNA 溶液于75℃水浴反应15min ，然后加入0.lmL30%冰醋酸中止反应，在410nm 下比色，测定胰蛋白酶的活力(A 410表示)。
当STI 完全水解时，胰蛋白酶表现出最高活力，这时反应液的吸光值最大；当STI 未被水解时，胰蛋白酶表现出最低活力，这时反应液的吸光值最小；当STI 部分钝化时，反应液的吸光值介于他们之间。
因此，可用下式表示STI 钝化的相对活力大小:STI 的相对失活（%）=（样液的A 410值－对照样的A 410值）／胰蛋白酶活力（A 410值）1.2.3SDS-PAGE 分析将STI 与反应液进行SDS-PAGE 分析，电泳胶按表l 所四川职业技术学院学报2010年8月Journal of Sichuan Vocational and Technical College Aug ．2010第2０卷第3期vol．2０No．3收稿日期：２０１０—０６—０８作者简介：赵美琳（１９６８—），女，漯河职业技术学院食品工程系，副教授。
主要研究方向：食品生物技术。
DTT 水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究赵美琳，张素霞（漯河职业技术学院，河南漯河462002）摘要；大豆胰蛋白酶抑制剂(STI)可以抑制一些来源于动物或植物的蛋白酶的活力，使之降低水解蛋白质的效力，降低蛋白质的利用率。
本文主要选取二巯基苏糖醇（DTT ）采用分光光度法、SDS-PAGE 和GPC 色谱法相结合测定DTT 对大豆胰蛋白酶抑制剂的水解程度进行研究。
关键词；DTT ；水解；大豆胰蛋白酶抑制剂中图分类号:Ｑ５５６．３文献标识码:A文章编号:1672-2094(2010)03-0120-03·１２０·列配制。
表1电泳胶试剂表电泳样品分别为STI标样、DTT与STI反应液、DTT结合TGase与STI的反应液及TGase与STI的反应液。
标样STI的浓度和水解反应中STI的浓度一样，反应液加入等体积的样品缓冲液，电泳时电流先取10mA，待样品完全进入分离胶后，改为20mA，电泳时间为6h。
电泳结束后，凝胶用ρ(考马斯兰R-250)=2.5g/L染色，然后用标准低甲醇脱色液脱色，最后拍照保存。
1.2.4GPC分析1.2.4.1GPC操作条件色谱柱：Protein--Pak TM60(7.8×300mm Column WA-TO85250);流动相：50mMTris-HCl的缓冲液(pH7.5);流速：0.6mL／min；柱温：20℃；进样量：10μL。
1.2.4.2GPC样品预处理将样品溶液与流动相溶液以l：1比例混合，用离心机以8000r／min离心20min后，取10μL注入色谱仪，进行GPC 分析。
2实验结果及分析2.1分光光度法测定STI水解的结果测定实验结果见表2。
表2BAPNA测定实验结果从表中可以看出，DTT单独处理和DTT与TGase酶结合处理均可不同程度的钝化STI，由于DTT的加入，与STI 发生氧化还原反应，使得STI分子内部的二硫键被打断，但DTT并不能完全钝化大豆胰蛋白酶抑制剂，其原因可能是因为DTT并未把STI中的二硫键完全打开。
但DTT和TGase酶结合处理时，TGase可以进一步聚合残存的还原态的STI,因此使STI失活程度更高些，使胰蛋白酶活力残存较高，能够与底物BAPNA生成较多的能在410nm处显色的物质，而热处理及TGase酶单独处理作用对STI钝化作用较小，使胰蛋白酶活力几乎失活，很少与底物BAPNA反应生成在410nm处显色的物质。
2.2SDS-PAGE分析电泳结果见图3。
图3DTT水解大豆胰蛋白酶抑制剂的电泳照片从电泳图带III和IV可以看出，热处理和TGase酶处理STI水解效果不大。
带I和带II中残留STI部位特别是带I 明显减少，说明STI被水解，得出DTT单独处理及DTT和TGase共同处理均可钝化STI活性。
从带I和带II中还可看出，STI经这两种方法处理后均有大分子聚合物生成，并且带I生物聚合物含量大大增加，由于DTT处理后仍有一部分还原态STI残留，当加入TGase后，进一步聚合残存的还原态STI，因此聚合物含量增加。
这就证明：DTT能使STI的分子结构发生改变，从而对STI具有一定的水解作用，其结果与比色法得出的结果相一致。
2.3GPC分析GPC分析结果见图4。
I:由TGase处理的STI II:热处理STI III:由DTT处理的STI IV:由DTT和TGase处理的STI溶液图4DTT水解大豆胰蛋白酶抑制剂的凝胶渗透色谱图从图4中可以看出，STI经DTT处理后，其活性被水解钝化,对应的STI位置及其峰值面积(曲线III峰B)也有一定程度的降低，而DTT和TGase酶结合处理的STI，对应的STI位置峰值及峰面积(曲线IV峰B)均最大程度的降低，这就得出这两种处理方法均可使STI活性降低。
STI经DTT 处理后残留部分还原态STI(曲线III中峰C)和部分高分子量的聚合物(曲线III中峰A)，且此时的残余还原态SIT峰值较高，而生成的聚合物峰值较低，而当加入TGsea酶处理后，ＤＴＴ水解大豆胰蛋白酶抑制剂的研究赵美琳，张素霞·１２１·四川职业技术学院学报2010年8月Journal of Sichuan Vocational and Technical College Aug ．2010第2０卷第3期vol．2０No．3大分子聚合物含量大大增加(曲线IV 中峰A)，而小分子量物质含量大大降低。
该结果也很好的说明了TGase 也可催化还原态STI 小分子量物质发生聚合反应，产生大量高分子聚合物。
由曲线I 、II ，得出热处理及TGase 酶处理STI 均对其作用不大，对应的STI 位置峰值和峰面积基本保持不变，STI 活性被很好保留，因此氧化态STI 不能被TGsea 催化聚合。
这一结果与比色法及电泳法得出的结果也相一致。
3结论STI 对大豆蛋白营养价值的不利影响，需要探索胰蛋白酶抑制剂的灭活方法，本研究主要选用DTT 水解STI ，同时利用DTT 和TGase 酶结合、单独利用TGase 酶以及进行热处理STI 的方法进行对比试验，来测定STI 的水解程度，通过研究DTT 可以使STI 水解，而单独利用TGase 和热处理效果不明显，但若DTT 和TGase 结合处理STI ，其水解程度更好。
由此在食品加工过程中，为了提高大豆蛋白的营养价值，可以采用DTT 结合TGase 处理其原料的方法来提高食品中的蛋白质的营养价值。
参考文献：［１］高越峰，朱祯，肖桂芳等．大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用［Ｊ］．植物学报，１９９８，４０（５）：４０５—４１１．［２］李安智，傅翠真主编．中国食用豆类营养品质鉴定与评价［Ｍ］．北京：中国农业科技出版社，１９３８，２．［３］［印度］Ｓ．Ｋ．阿罗拉主编．豆类的化学和生物化学［Ｍ］．高健译．北京：科学出版社，１９８７，２．［４］游金明，李德发．大豆抗营养因子研究进展［Ｊ］．饲料与畜牧，２００６，（０９）：４０—４３［５］杨晓泉等．花生２Ｓ蛋白的提取分离及部分性质研究［Ｊ］．华南理工大学学报，１９９２，６（４）：１－５．［６］范宝庆．硫酸亚铁钝化大豆胰蛋白酶抑制剂的研究［Ｊ］．广东化工，２００９，６（３６）：３２－３４．［７］郭尧君．蛋白质电泳实验技术［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９９．［８］陈中，杨晓泉，彭志英．枯草杆菌蛋白酶水解大豆胰蛋白抑制剂的研究［Ｊ］．华南理工大学学报（自然科学版），２００１，２９（６）：２３－２６．［９］成跃祖．凝胶渗透色谱法的进展及其应用［Ｍ］．北京：中国石化出版社，１９９３．［１０］ＡｎｄｅｒｓｏｎＲＬ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔｅａｍｉｎｇｏｎｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｃｉｎｓａｎｄｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ［Ｊ］．Ａｍ．ＯｉｌＣｈｅｍ．Ｓｏｃ，１９９２，６９：１１７０－１１７６．责任编辑:张隆辉④当构件为三力平衡汇交情况时，视求解方便与否，对光滑铰链约束、固定铰链支座，约束反力方向可判定出实际方向，也可用两个正交方向未知量表示，两种方法只能任选其一。
（3）物体重力是否标注：若图中未画重力，且题目中未给定重力大小，按没有重力处理；若题目中写明为轻质杆，也按没有重力处理。
3结束语在约束反力作图时，应该先分析约束的类型和数量，然后根据具体约束类型，运用该类型约束反力判定的原则加以确定，切忌想当然的乱标方向，所定方向应有正确而充分的理论依据。