淋巴瘤基因克隆性重排检测课件
淋巴瘤查房PPT课件
温。
2019/10/29
Page 17
潜在并发症：血栓
1，指导进食低盐低脂低糖高蛋白高维生素饮食，多饮水， 保持大便通畅。
2，指导患者在病情允许的情况下适当下床活动，避免久站 久坐，注意患肢保暖，防止外伤。
3，认真倾听患者的诉说，了解患者的需要，尽可能向患者 讲解DVT发生、治疗措施、预后，使患者对DVT的治疗过 程有所了解，树立战胜疾病的信心，配合治疗。
2，建议患者尽量避免食用生硬带刺的食物，并且饭后温水 漱口，防止口腔黏膜损伤。
3，指导患者卧床休息，如外出检查，散步等尽量要有医护 人员陪同搀扶，防止摔伤。
4，浴室厕所等尽量使用防滑垫，并指导患者家属陪同，同 时告知患者穿防滑鞋，防止跌倒损伤。
5，认真观察病情，并教会患者学会自我病情的监测，如发 现身体皮肤有出血点瘀斑等应告知医护人员及时正确的处 理。
体温过高：与淋巴瘤持续发热有关。 活动无耐力：与淋巴瘤发热、化疗或放疗有关。 有损伤的危险：出血，与血小板低下有关。 潜在并发症：血栓。与恶性肿瘤导致血液凝血因子活性增
高有关。
2019/10/29
Page 12
营养失调：低于机体需要量
1,向病人讲解进食的重要性，鼓励病人自主进食。 2,病情允许的情况下指导病人家属提供营养均衡全面的高蛋
体重减轻约10 余斤。目前精神尚可，食欲可，睡眠一般，大小便正常。
2019/10/29
Page 4
既往史
否认肝炎、结核、疟疾病史，否认高血压、心脏病史，否 认糖尿病、脑血管疾病、精神疾病史，否认手术、外伤、 输血史，否认食物、药物过敏史，预防接种史随社会。
t细胞淋巴瘤tcrγ基因重排特征的分析及检测方法优化
Ｔ细胞淋巴瘤ＴＣＲＴ基Ｎ重排特征分析及检测方法的优化摘要研究背景与目的淋巴瘤在组织和细胞形态学方面与高度反应增生性淋巴组织的鉴别诊断十分困难，容易造成误诊。
淋巴瘤病理诊断是临床病理工作的难题之一。
目前国内主要依靠以形态学为主、免疫组化为辅的诊断手段。
随着分子生物学的发展，从基因水平研究和分析诊断疾病的技术不断出现并且日趋成熟，为淋巴瘤诊断提供了有效工具。
淋巴瘤是由单克隆淋巴细胞增生所致，而反应增生性淋巴组织则来自于多克隆淋巴细胞，这是二者的重要区别。
编码免疫球蛋白（Ｉｇ）或Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）的基因经过重排以后，不同克隆之间的重排基因互不相同，因此，基因重排对淋巴瘤的诊断具有特异性价值。
以ＰＣＲ技术为基础的方法以其简便、高效、廉价及适用面广而在淋巴瘤基因重排研究方面越来越受重视。
但不同研究文献中所采用的引物、ＰＣＲ条件、ＰＣＲ产物检测方法等都不尽相同，结果也有差异。
因此，难以找到适于常规临床病理诊断之用的标准程序。
Ｊｕｒｋａｔ细胞是Ｔ细胞淋巴瘤基因重排研究中常用的阳性对照细胞，但有关Ｊｕｒｋａｔ细胞基因重排的详细情况也未见报道。
假基因是Ｉｇ和ＴＣＲ胚系ＤＮＡ中常见的基因，有关假基因参与重排的情况以及在设计引物方面是否应将假基因包括在内也未见有关研究报道。
本实验以ＴＣＲ基因重排为研究对象，通过优化引物选择、ＰＣＲ条件及ＰＣＲ产物的检测方法等，分析Ｔ细胞淋巴瘤基因重排检测的最佳方法。
同时，分析ＴＣＲ基因重排的特点，为进一步研究ＴＣＲ基因重排提供理论和技术支持。
方法１以ＴＣＲｙ基因重排为研究对象，选用通用引物ＴＶＧ、ＶｖＩ及ＴＣＲ７家族特异性引物为工具。
用正交设计实验优化ⅥＩ引物的ＰＣＲ条件。
另选一对ＴＣＲ［ｊ通用引物作为ＴＣＲｙ引物的补充和比较。
２利用ＰＣＲ和测序研究Ｊｕｒｋａｔ细胞基因重排情况，分析ＴＣＲ基因重排的基本特点。
３ＰＣＲ产物检测方法①利用ＴＣＲ通用引物检测淋巴瘤克隆性基因重排阳性率，分别用琼脂糖电泳和ＳＳＣＰ分析ＰＣＲ产物；②将ＰＣＲ产物分别进行直接测序和克隆后测序，分析ＴＣＲ基因重排的特点及探索测序方法在基因重排检测中的应用；⑧分析ＰＣＲ产物中ＤＮＡ的克隆数与ＳＳＣＰ中条带数目的关系。
淋巴瘤基因克隆性重排检测
血液 肿瘤
细胞遗传学（Cytogenetics）
• 荧光原位杂交（FISH）
辅助诊断
预后分析 指导用药 MRD检测
Focus On Molecular Diagnosis | Leading Precision Medicine
分子检测-淋巴瘤
Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.
全面覆盖WHO、NCCN、中国指 南和专家共识中涉及的相关基因 遵循临床常规诊断流程，同其它诊 断技术协同使用
无创ctDNA检测
对于获取组织困难的情况，支持采 用外周血ctDNA检测
全方位解读基因变异 相关靶向药物信息
全面覆盖淋巴瘤相关已经上市和正 在临床试验的靶向药物
低频检测分析技术
Ampliseq HD技术有效降低高测 序深度下的背景信号噪音，实现低 至0.1%的检出限
分子检测 检测基因
方法
IG/TCR 基因重排
IGH，IGK， • GEL (PAGE) IGL，TRB， • ABI (CE) TRD，TRG • NGS
• GEL (PAGE)
IGHV超突变
IGH
• ABI (CE)
• NGS
基因突变
EZH2, DNMT3A, IDH2…
• Sanger • NGS
专注分子诊断 | 引领精准医学
注意事项
检测到克隆性重排未必一定发生恶性病变 某些良性增生也可呈克隆性重排，如CD8+T细胞淋巴增生性病变、良性单克隆性丙种球蛋白病、皮肤 淋巴瘤样丘疹病、免疫缺陷患者严重的EB病毒感染等；
检测不到克隆性重排也不能排除恶性病变 某些明确恶性病变的免疫缺陷患者中偶尔检测不到克隆性重排，NK/T细胞淋巴瘤中IG和TCR基因呈胚 系结构，即也无克隆性重排。
2024版CSCO淋巴瘤诊疗指南解读PPT课件
基因突变检测与预后评估
基因突变检测有助于 精确诊断淋巴瘤亚型 ，指导个体化治疗。
基因突变检测可预测 患者对特定治疗方案 的敏感性和耐药性。
某些基因突变与淋巴 瘤的预后密切相关， 如TP53、MYC等基 因的突变。
新型标志物发现及其临床意义
新型标志物的发现为淋巴瘤的 早期诊断、预后评估和靶向治 疗提供了新思路。
疼痛管理
对于淋巴瘤患者可能出现的疼痛症状，进行 有效的疼痛管理。
营养支持
根据患者的营养状况，提供个性化的营养支 持方案。
并发症预防与处理
积极预防并处理化疗、放疗等治疗过程中可 能出现的并发症。
05
药物治疗进展及耐药问题解决 方案
化疗药物使用注意事项
化疗药物的分类与选择
根据淋巴瘤的病理类型、分期和患者身体状况，选择合适的化疗药 物。
对于有高危因素的人群，应定期进行体检和筛查，以便早期发现和治疗淋巴瘤。
临床表现及诊断方法
淋巴瘤的临床表现多种多样，包括无痛性淋巴结肿大、肝脾肿大、发热 、盗汗、消瘦和瘙痒等全身症状。
诊断方法主要包括病理学检查、影像学检查、血液学检查和分子生物学 检查等。其中，病理学检查是确诊淋巴瘤的金标准，包括淋巴结活检、 穿刺活检和骨髓活检等。
以及它们的作用机制和疗效。
靶向药物的临床应用与前景
02
探讨靶向药物在淋巴瘤治疗中的临床应用情况，以及未来的发
展方向和前景。
靶向药物的耐药性及解决方案
03
分析靶向药物产生耐药性的原因，并提出相应的解决方案。
免疫治疗在淋巴瘤中应用前景
免疫治疗的原理与种类
介绍免疫治疗的原理，以及针对淋巴瘤的免 疫治疗种类，如CAR-T细胞疗法、PD-1抑 制剂等。
临床病理学：肿瘤病理的分子检测
ORR (%)
71.2 vs 47.3 84.6 vs 37.5 62.1 vs 32.2 73.7 vs 30.7
83 vs 36 58 vs 15 61 vs 22 66.9 vs 23.0
PFS (月)
9.8 vs 6.4 8.4 vs 6.7 9.6 vs 6.6 10.8 vs 5.4 13.1 vs 4.6 9.7 vs 5.2 11.1 vs 6.9 11.0 vs 5.6
ROS1 、 RET基因重排
ROS1重排见于2%肺肿瘤；少吸（<10包、年）/不吸 烟患者；年轻患者；腺癌。临床对克唑替尼敏感。 对EGFR TKIs不敏感。 RET基因融合见于1.3%肺癌，腺癌。
临床检测方法：FISH，RT-PCR
HER2在乳腺癌中…
HER2在乳腺癌中…
HER2扩增与肿瘤发生有关。肿瘤体积大 ,无病生存期 短 ,对CMF等方案耐药, 对蒽环类药物比较敏感,50% 患者为ER或PR阳性。
检测：定量PCR或测序。
ALK基因重排在NSCLC中…
发生率： 3-7% 临床特点： 少吸（<10包、年）/不吸烟
年轻患者 腺泡或印戒细胞癌
融合特点： 主要与EML4存在 至少9种融合方式，其他IFGALK, KIF5B-ALK 与其他癌基因变异不共存
靶向药物：克唑替尼
临床检测方法：FISH，增强免疫组化，RT-PCR
EXON
Genet Med 2009:11(1):21–34
胃肠道间质瘤与格列卫
c-kit/PDGFRA突变类型预测伊马替尼疗效，其中c-kit外显子11突变疗效最佳 PDGFRA D842V突变者对伊马替尼原发耐药。 检测方法：DNA测序
基因重排
用IgH、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变(精)
用IgH、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变【摘要】目的探讨IgH 、TCR基因重排技术检测疑难淋巴组织增生性病变的意义。
方法采用IgH、TCR β、TCR γ基因重排标志检测，36例经常规HE、免疫组化不能诊断的疑难淋巴组织增生性病变，并进行克隆性分析。
结果29例淋巴组织增生性病变呈克隆阳性，其中IgH、TCR双重排阳性者为13例，IgH单一阳性8例，TCR单阳性为8例。
克隆阳性病例与免疫组化结果一致的为24/29例，7例阴性者，4例为反应性增生，2例经随诊为猫抓病淋巴结炎，1例为不典型增生。
结论 IgH、TCR基因重排技术对于疑难淋巴组织增生性病变的诊断和鉴别诊断有较大的意义。
【关键词】淋巴瘤基因重排;诊断Detecting Problematic Proliferative Lesions of Lymph Tissue by IgH and TCR Gene Rearrangement TechniqueZHONG Mei, LV Ya li, LI Bing, ZHAO PoDepartment of Pathology, Chinese PLA General Hospital, Beijing 100853, ChinaAbstract：Objective To investigate the significance in diagnosis of problematic proliferative lesions of lymph tissue by IgH, TCR gene rearrangement technique.Methods Thirty six cases of proliferative lesions of lymph tissue with diagnostic difficulty by routine HE and immunohistochemistry, were analyzed in detail by PCR based IgH, TCR gene rearrangement technique to further determine the diagnosis. 20 cases of previously diagnosed lymphoma and 10 reactive lymphadenitis were used as a positive control and negative control, respectively.Results All control samples of lymphoma were positive for clonal rearrangement. 29/36(80.6%)cases of problematic lesion showed positive for clonal proliferation in which those positive for both IgH and TCR were 13/29(44.8%), for single,IgH 8/29(27.6%)or TCR 8/29(27.6%), respectively; and those positivity associated with immunohistochemistry were 24/29(82.8%). In seven cases negative for clonal rearrangement, 4 were reactive proliferation，2 Cat scratch lymphadenitis and 1 atypical proliferation.Conclusion It is significantly useful to solve the problems in differentiating diagnosis of elusive proliferative lesions of lymph tissue, by IgH, TCR gene rearrangement analysis.Key words：Lymphoma; Gene rearrangement; Diagnosis0 引言本研究应用IgH、TCR β、TCR γ基因重排技术对36例疑难淋巴组织增生性病变进行分析，以探讨实际工作中解决疑难问题的可能性及意义。
2024年淋巴瘤课件-(带目录)
淋巴瘤课件-(带目录)淋巴瘤课件一、引言淋巴瘤，一种起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，近年来在我国发病率逐年上升。
淋巴瘤的发病机制复杂，涉及遗传、环境、免疫等多个方面。
本课件旨在对淋巴瘤的病因、病理、临床表现、诊断和治疗等方面进行详细阐述，以提高大家对淋巴瘤的认识和防范意识。
二、淋巴瘤的病因与发病机制1.遗传因素：家族性淋巴瘤的发病率较高，遗传因素在淋巴瘤的发生中具有重要作用。
部分基因突变与淋巴瘤的发病密切相关，如BCL2、BCL6、C-MYC等基因。
2.环境因素：长期接触有害物质，如农药、染发剂、放射性物质等，可增加淋巴瘤的发病风险。
3.免疫因素：免疫系统异常是淋巴瘤发病的关键因素。
例如，HIV感染、器官移植后免疫抑制剂的使用等，均会增加淋巴瘤的发病风险。
4.感染因素：某些病原体感染，如EB病毒、幽门螺杆菌等，与特定类型的淋巴瘤发病有关。
三、淋巴瘤的病理分类1.霍奇金淋巴瘤：以Reed-Sternberg细胞为特征，约占所有淋巴瘤的10%。
可分为结节性淋巴细胞为主型和经典型两大类。
四、淋巴瘤的临床表现淋巴瘤的临床表现多样，主要表现为无痛性淋巴结肿大、发热、盗汗、体重下降等。
根据受累部位的不同，还可出现相应的症状和体征。
1.淋巴结肿大：无痛性、质地较硬，活动度差，可触及或不可触及。
2.肝脾肿大：部分患者伴有肝脾肿大，可导致腹胀、腹痛等症状。
3.结外侵犯：淋巴瘤可侵犯结外器官，如胃肠道、皮肤、骨骼等，出现相应症状。
4.全身症状：发热、盗汗、体重下降等。
五、淋巴瘤的诊断与鉴别诊断1.影像学检查：如CT、MRI等，可了解淋巴瘤受累范围及侵犯程度。
2.淋巴结活检：是确诊淋巴瘤的关键，包括细针穿刺活检和手术切除活检。
3.免疫组化：有助于明确淋巴瘤的病理类型和细胞来源。
4.骨髓穿刺：了解骨髓是否受累，评估病情严重程度。
5.鉴别诊断：需与淋巴结炎、淋巴结结核、恶性组织细胞病等疾病相鉴别。
六、淋巴瘤的治疗淋巴瘤的治疗原则为个体化、综合治疗。
淋巴瘤基因克隆性重排检测
专注分子诊断 | 引领精准医学
谢谢大家！
专注分子诊断 | 引领精准医学
IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
专注分子诊断 | 引领精准医学
IGHV SHM的检测
结合 Leader 和 FR1 区域的引物在 5’端连接有通用的测序片段，这种设计，配合 JH 反向测序引物，能 够实现 PCR 扩增产物的双向测序。目前，欧洲慢性淋巴细胞性白血病研究机构（European Research Initiative on CLL，ERIC）的指南即使用双向测序判断 IGH V区体细胞超突变（Somatic Hypermutation， SHM）状态。
专注分子诊断 | 引领精准医学
基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司
基于PCR检测技术，简便、快 速、成本较低，所需DNA量少， 对DNA质量要求不高。灵敏度 高于10%，需配制胶，安全清 洁性较差。
基于PCR-毛细管电泳检测技术， 敏感性高，检测周期较长，结 果更加直观可靠
目前市场最被接受的检测方法。 灵敏度无法满足MRD要求，难 以定量和得到序列。
目前市场最被接受的检测方法。 灵敏度无法满足MRD要求，难 以定量和得到序列。
IGH, IGK, IGL, TRB ,TRD, TRG（BIOMED-2方案，唯一授权） IGHV（依据ERIC指南）
新兴技术，更高灵敏度（10-6），更 高分辨率，更高的通量，更广泛的 应用。但成本高，仪器贵，操作复 杂，时间长。
1-5年
9.2-18.9年
OS
3.2-10年
17.9-25.8年
预后
不良
良好
PFS：无进展生存期（Progression free survival） OS：总生存期（Overall survival）
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
血液 肿瘤
细胞遗传学
（Cytogenetics） • 荧光原位杂交（FISH）
辅助诊断 预后分析 指导用药 MRD检测
分子检测-淋巴瘤
Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.
从Biomed-2到Invivoscribe-唯一授权
Invivoscribe 公 司 的 IdentiCloneTM 系 列 产 品 是 基 于 PCR 的 克 隆 性 检 测 产 品 ， 是 BIOMED-2唯一授权的商品化试剂， 获 得 CE 认 证 ， 以 其 高 度 的 灵 敏 性 和特异性，成为可疑淋巴组织增生 性疾病克隆性分析的“金标准”。
淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点
1
BIOMED -2唯一授 权的商品
化试剂
2
全面涵盖各 种T\B细胞 重排类型
3
超过400例的临 床样本验证，反 应体系稳定，结
果可靠
4
可疑淋巴组 织增生性疾 病克隆性分 析的“金标
Hale Waihona Puke 准”5最丰富的 阳性对照
淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子
Ig和TCR--单一基因重排，即恶性淋巴细
IdentiCloneTM 系 列 产 品 具 有 精心优化的标准化试剂组成，具有 最丰富的阳性对照，涵盖各种T\B 细胞重排类型，经过了超过400例 的临床样本验证，按照临床产品的 标准进行质检和质控，反应体系稳
Biomed-2研究项目
Biomed-2研究项目（IGH为例）
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
胞
B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig)
T-Cell Receptor (TCR)
蛋白
Ig重链 Ig轻链 Ig轻链
基因
IGH IGK IGL
染色体定 位
14q32 2p12 22q11
蛋白
TCRα TCRβ TCRγ TCRδ
基因 染色体定 位
TRA 14q11 TRB 7q32 TRG 7p15
▪ 多克隆性：扩增产物电泳呈弥散涂抹状(smear)或阶梯状(高斯分布）
送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为多样性。表明组织中不存 在单克隆性增生的细胞群。
▪ 无扩增产物：PCR扩增后电泳未见产物 送ma检rke组Pr 织M中H2的O S细1 胞S1，S2抗S原2 受体基因无重排（NK，非淋巴细胞）或DNA质量
（IGH, IGK,）（IGL）（T量R和B得,T到R序D,列）。（ TRG） BIOMED-2方案，唯一授权）
IGHV（依据ERIC指南）
新兴技术，更高灵敏度 （10-6），更高分辨率， 更高的通量，更广泛的应 用。但成本高，仪器贵， 操作复杂，时间长。
IGH, IGK, TRB , TRG IGHV
淋巴瘤基因克隆性重排和 IGHV体细胞超突变检测
血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案MICM综合分子检测(旌准方案)
形态学
（Morphology）
免疫学
（Immunology） • 免疫组化（IHC）
• 流式细胞术（FCM）
分子生物学
（Molecular）
• 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)
• 毛细管凝胶电泳(CE) • 荧光实时定量
500过bp差- 。
400bp-
300bp250bp-
200bp175bp-
150bp-
IGH B(250-295bp)
Products are heterodulex-treated followed by PAGE on 6% gel
淋巴瘤应用基因重排检测进行辅助/鉴别诊断的方案
注意事项
▪ 检测到克隆性重排未必一定发生恶性病变 某些良性增生也可呈克隆性重排，如CD8+T细胞淋巴增生性病变、良性单 克隆性丙种球蛋白病、皮肤淋巴瘤样丘疹病、免疫缺陷患者严重的EB病毒 感染等；
TRD 14q11.2
多样性与克隆性
正常淋巴细胞成熟过程/良性多病克变隆性
多种形式的基因重排
恶性淋巴瘤发生的过程 单克隆性 突出单一形式的基因重排
IGH, TRB & TRD: V, D, and J IGK, IGL, and TRG: V and J regions
淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义
瘤细胞清除效果（NGS）
基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公 司
基于PCR检测技术，
基于PCR-毛细管电泳
简便、快速、成本较
检测技术，敏感性高，
低，所需DNA量少，
检测周期较长，结果更
对DNA质量要求不高。 加直观可靠
灵敏度高于10%，需 配制胶，安全清洁性 较差。
目前市场最被接受的检 测方法。灵敏度无法满 足MRD要求，难以定
分子检测
检测基 因
方法
IG/TCR 基因重排
IGH， IGK， IGL， TRB， TRD， TRG
• GEL (PAGE)
• ABI (CE) • NGS
IGHV超 突变
• GEL
IGH
(PAGE) • ABI (CE)
• NGS
EZH2,
基因突变
DNMT3 A,
• •
Sanger NGS
IDH2…
Biomed-2研究项目（IGH为例）
van Dongen, J. J. M., et al. (2003). Leukemia 17: 2257.
结果分析
▪ （单）克隆性：扩增产物电泳在预期大小范围内一或双条带（峰） 送检组织中，淋巴细胞抗原受体基因的重排方式为单一性。表明组织中存在 单克隆性增生的细胞群。
5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性， 需要进一步的手段区分。 利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手 段的重要补充。
▪ 鉴别诊断：明确是淋巴组织反应性还是淋巴细胞恶性增殖 ▪ 辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤 ▪ 亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖 ▪ 区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤 ▪ 微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法） ▪ 细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿