罗氏肿瘤分子诊断技术最新进展 2014
罗氏分子诊断解决方案
罗氏分子诊断解决方案
《罗氏分子诊断解决方案：革新医疗科技，助力健康管理》
罗氏分子诊断解决方案是一种基于最新科技革新的医疗技术，旨在帮助医生更准确地诊断疾病，为患者提供更好的治疗方案。
与传统的诊断方法相比，罗氏分子诊断解决方案具有更高的准确性和敏感性，能够在短时间内提供更多的信息，为医生和患者做出更好的治疗决策。
罗氏分子诊断解决方案主要应用于个体化医疗、肿瘤治疗、感染性疾病诊断等方面。
通过分子诊断技术，可以对个体患者的病理生理状态进行更深入的分析，为个性化治疗提供有力支持。
在肿瘤治疗方面，罗氏分子诊断解决方案可以帮助医生更好地了解肿瘤的分子特征，为患者制定更具针对性的治疗方案。
在感染性疾病诊断方面，罗氏分子诊断解决方案能够更快速地鉴定病原体，提高治疗的效果和速度。
不仅如此，罗氏分子诊断解决方案还可以帮助医疗机构更好地管理健康数据，提高效率和治疗质量。
通过密码保护和云端存储，医疗机构可以更安全地存储和管理患者的健康信息，为医生提供更全面的患者健康档案，帮助医生更好地了解患者的病情和治疗过程。
总的来说，罗氏分子诊断解决方案是一种革新的医疗科技，它不仅可以提高医疗诊断的准确性和敏感性，还可以帮助医生更好地了解患者的病情，为患者提供更好的治疗方案。
随着科技
的不断进步和应用，相信罗氏分子诊断解决方案将在未来的医疗领域发挥越来越重要的作用。
分子诊断技术的最新进展
分子诊断技术的最新进展分子诊断技术是当今医学领域中最为热门的研究方向，也是未来医疗发展的一个重要方向。
该技术可以通过检测和分析体内的分子物质，为疾病的早期诊断和治疗提供了可能。
在最近的几年里，分子诊断技术得到了快速发展，不断涌现出新的技术和方法，为我们开启了新的窗口。
本文将以该领域的最新进展为主题，并从多个角度介绍它的研究方向及未来趋势。
一、NGS技术+全基因组测序随着NGS技术的不断成熟，全基因组测序在分子诊断领域得到了广泛的应用。
在疾病的诊断和治疗中，全基因组测序可以快速而准确地确定患者的基因组序列，为分子诊断提供了更为精确的参考。
当前，在全基因组测序领域最为注目的是单细胞测序技术，它可以实现对单个细胞的基因组测序。
可用于检测早期肿瘤的突变，还可用于个体化医学，为不同患者提供不同的治疗方案。
二、CRISPR-Cas9CRISPR-Cas9技术是当前最具热门的基因编辑技术之一，是一种基于RNA的程序化核酸切割工具。
该技术可以快速而准确地定位并切割DNA序列，从而在基因水平上实现对疾病的治疗。
该技术可以用于修复有缺陷的基因，防止遗传疾病的传播，甚至在对抗癌症等方面具有潜力。
目前，CRISPR-Cas9技术正在经历着从实验室研究到临床试验的转变。
值得一提的是，文献报道了利用该技术可以将异常细胞的基因修正为正常细胞，从而制造一种自我改善的生物体。
三、芯片技术芯片技术是一种将分子生物学、电子技术和计算机技术相结合的技术，其主要功能是将分子物质固定在特制的微型管壁上，以实现分子的快速检测和分析。
芯片技术可以通过微型反应腔的灵活设计，将多个生物分子相互干扰的反应隔离开，以更加精确地检测和分析生物分子的性质。
四、蛋白质组学技术除了基因组学技术外，蛋白质组学技术也是目前研究最为活跃的分子诊断技术之一。
该技术以质谱为核心，通过检测和分析蛋白质的性质，从而探索其在疾病诊断和治疗中的应用。
可用于分离蛋白质，鉴定其分子量和特定的质量分子以获得蛋白质的序列信息，从而获得更多关于蛋白质功能和性质的研究。
精准医学环境下的肺癌分子病理诊断及检测
2
Minuti G, et al. Expert Opin Biol Ther. 2013;13:1401-12
原发性肺癌诊疗规范推荐
对于晚期NSCLC、腺癌或者含腺癌成分的其他类型肺癌，应 在诊断的同时常规进行表皮生长因子（EGFR）和间变性淋巴 瘤激酶（ALK）等基因突变检测
病理诊断内容包括：肿瘤部位、组织学亚型、累及范围（支气管、胸
4
中国肺癌患者中已经发现的驱动基因及比率
Pan Y,et al. Lung Cancer. 2014 May;84(2):121-6. 上海肿瘤医院，1139例肺腺癌样本
5
Driver genes in Adenocarcinoma (China) Guangdong Lung Cancer Institute
精准医学环境下的肺癌分子病理 诊断及检测
肺癌的分子分型与靶向治疗的地位
Adenocarcinoma
Squamous cell carcinoma
• ALK: Crizotinib, Ceritinib, Alectinib, AP26113, PF-06463922 • EGFR: Gefitinib, Erlotinib, Afatinib, Dacomitinib, AZD9291, CO-
膜、脉管、神经、伴随病变类型、肺内播散灶、淋巴结转移情况等）、切缘 及必要的特殊染色、免疫组化结果或分子检测结果。包含的信息应满足临床 分期的需要，并给出pTNM分期。
合格的肺癌诊断需标注基因变异状态： 右肺上叶腺癌TheyNameM（骨）-IV期 ALK阳性或EGFR突 变阳性
3
NCCN指南对于EGFR/ALK检测人群的推荐
1686 • ROS1: Crizotinib • RET: Cabozantinib • MET: Crizotinib • BRAF: Dabrafenib • HER2: Dacomitinib, Afatinib • KRAS: Selumetinib
罗氏免疫新项目及特有项目介绍
Pro-GRP
anti-CCP
PCT
anti-TSHR anti-TPO anti-TG
TG Calcitonin
IgE AFP
IGF-1 hCG+β Ferritin
IL-6 hGH
CEA
C-Peptide Insulin Cortisol ACTH
fPSA
PSA
hs TG
fβhCG hCG STAT
Digitoxin
激素类
ACTH
Cortisol C-peptide DHEA-S
Estradiol
Free β-HCG FSH
HCG+B Insulin
LH PAPP-A Progesterone Prolactin SHBG Testosterone
hGH
甲状腺疾病 骨标志物 贫血/其它
T3
Total-PINP Ferritin
罗氏电化学发光检测新项目及特有项目
项目名称
临床应用
杭州收费标准
产 PAPP-A妊娠相关血浆蛋 唐氏综合征的早期产前 收费申请中
前 白A
筛查，提前到孕早期10
筛
～14周即能监测,检出
查 f-βHCG 游离绒毛膜促 率82~87%明显高于中期 40元
性腺激素
(67~69%)
先 sFlt-1 可溶性fms样酪 罗氏是目前唯一的全自 收费申请中
2014.Q2 2014.Q1
预计2015.Q2上市
IM Assay Update
2012年开始陆续上市产品
Panel 骨标志物 生长激素
Product Name
Content
Estimated Launch date of China
分子诊断技术在肿瘤诊断中的应用
分子诊断技术在肿瘤诊断中的应用肿瘤是一种严重威胁人类健康的疾病。
传统的肿瘤诊断方法往往不能满足准确诊断的需求，而分子诊断技术的出现为肿瘤诊断带来了新的希望。
分子诊断技术以分子水平的变化作为依据，可提供更准确和精细化的肿瘤诊断信息。
本文将从肿瘤分子标志物的检测、分子诊断技术的种类及其应用、分子诊断技术在肿瘤治疗中的作用等方面进行论述。
一、肿瘤分子标志物的检测肿瘤分子标志物是指在肿瘤发生、发展过程中产生的某些特定分子，它们可以反映肿瘤的存在、类型、严重程度以及预后等信息。
肿瘤分子标志物的检测是分子诊断技术的基础，常用的方法包括PCR、免疫组化、流式细胞术等。
以肿瘤标志物CEA为例，利用PCR技术可以在患者血液中检测到CEA的特定序列，进而判断其是否患有结直肠癌等相关肿瘤。
二、分子诊断技术的种类及其应用1. 基因组学技术基因组学技术在肿瘤分子诊断中发挥着重要作用。
通过测序技术可以对肿瘤细胞的基因组进行测定，从而发现潜在的致病基因和突变。
此外，基因芯片技术也被广泛用于肿瘤分子诊断中。
通过芯片上的探针可以同时检测成千上万个基因的表达水平，进一步了解肿瘤的生物学特征和发展机制。
2. 蛋白质组学技术蛋白质组学技术可以对肿瘤细胞中的蛋白质进行分析和鉴定，从而寻找肿瘤标志物。
质谱技术是蛋白质组学的核心技术之一，通过质谱仪的分析可以鉴定出肿瘤细胞中表达异常的蛋白质，进而用于肿瘤的诊断和预后评估。
3. 微小RNA技术微小RNA（miRNA）是一类长度约为22nt的小分子RNA，在肿瘤发生和发展过程中起着重要的调控作用。
利用高通量测序技术可以对肿瘤细胞中的miRNA进行筛查和鉴定，从而找到与肿瘤相关的潜在标志物。
此外，还可以通过检测患者血液中的循环miRNA水平来判断肿瘤的存在和预后情况。
三、分子诊断技术在肿瘤治疗中的作用分子诊断技术不仅可以提供肿瘤的准确诊断信息，还可以指导肿瘤治疗的选择和评估治疗效果。
例如，通过检测肿瘤细胞中的某些基因突变，可以确定是否适合采用靶向治疗方法。
1063期-1：【科普】全球体外诊断（IVD）市场（58~63）
1063期-1：【科普】全球体外诊断（IVD）市场（58~63）第八章：分子检测概述分子诊断在临床医学方面正在成为一个占主导地位的平台并且代表诊断市场一个增长最快的部分。
它的出现完全是从研究走到临床试验。
现在仪器自动化很多的样品制备和分析步骤,这些在过去都是劳动密集型的。
新的测试正在启动。
许多分子测试都是CE标志和FDA准入的，还有很多正在发展之中。
分子技术在临床医学的应用已在世界各地得到了广泛的关注。
他们已经在诊断系统留下了印记,并将在接下来的5年里继续这样做。
在过去的几年里活动的数量是不错的，显示行业正在向测试,技术和能够支持基于分子的病人护理的基础设施工具方向发展,尽管仍有足够多的障碍和挑战需要克服。
分子诊断市场的主要增长动力,是持续发现的证明临床实用性的遗传标记,越来越多的采用基于遗传的诊断测试,和报销的扩张计划,包括更多的诊断测试的批准。
最具吸引力的增长领域是组织学分析的分子测试,女性健康,传染性疾病、器官移植测试和肿瘤。
在技术方面这个市场的一个主要的驱动力是技术进步带来的新测试和技术。
虽然PCR是一种标准技术用于进行扩增反应,该方法却非常复杂,由于需要多次热循环和冷却,在这个过程中,它会消耗更多的能量。
作为替代PCR的方法,等温核酸扩增避免了重复变性的需要，及在等温条件下放大反应的发生时冷却。
这极大地改善了进行分子诊断的微流控芯片的设计。
大多数的微流体装置采用等温核酸扩增方法是在研发阶段。
预计增加的小型化的核酸诊断将促进市场的发展。
等温的关键供应商是Eiken,Becton,Dickson and Co.bioMerieux s.a.Novartis International AG, and Quidel Corp。
分子诊断行业也经历了一个快速转向增加样本分析的自动化的过程和在单一的小型设备上集成的样本分析。
小型化提供了减少样品体积的机会,使最终用户能够自动化和分析样本。
医疗保健服务的重大变化预示着一个诊断测试新时代需求的开始。
分子生物在药学领域的龙头企业
分子生物在药学领域的龙头企业【分子生物在药学领域的龙头企业】一、介绍分子生物学是指研究生物体内分子结构与功能的一门学科，它在药学领域扮演着重要的角色。
随着科技的不断进步和人们对健康的关注不断增强，分子生物学在药学领域的应用越来越广泛。
在这个领域中，有一些公司成为了龙头企业，他们在分子生物学的研究和应用方面具有重要地位。
二、公司介绍1. 诺华(Novartis)诺华是一家总部位于瑞士的跨国制药公司，成立于1996年，通过其多元化的产品组合满足了全球患者的需求。
在分子生物领域，诺华致力于研究和开发各种新药，涉及肿瘤、心血管、呼吸道、免疫学和传染病等多个领域。
他们不断投入资金和资源，希望能够通过分子生物学的技术创新来帮助患者战胜疾病。
2. 罗氏集团(Roche)罗氏集团是一家总部位于瑞士的全球性制药和诊断公司，成立于1896年，拥有丰富的研发经验和技术实力。
在分子生物领域，罗氏集团始终站在行业的前沿，不断投入资金和人才，积极开展分子诊断、基因组学和蛋白质组学等方面的研究。
他们的产品涵盖肿瘤、免疫疾病、传染病和中枢神经系统疾病等多个疾病领域，为临床医生和患者提供了全方位的解决方案。
3. 辉瑞(Pfizer)辉瑞是一家总部位于美国的全球性制药公司，成立于1849年，拥有悠久的历史和丰富的产品线。
在分子生物领域，辉瑞一直致力于基因工程和生物制药方面的研究，以期在癌症、免疫疾病、疼痛等领域为患者提供更好的治疗方案。
他们的研发实力和创新能力备受行业认可，成为了分子生物在药学领域的领军企业之一。
三、个人观点和理解分子生物在药学领域的发展日新月异，能够不断为患者提供更有效的治疗方案和更高品质的生活。
作为龙头企业，诺华、罗氏集团和辉瑞不仅在研发实力和产品创新方面拥有显著优势，同时也对行业的发展起到了重要的推动作用。
我相信随着分子生物学的不断进步和技术的不断突破，这些公司将继续发挥着重要的作用，为药学领域的发展贡献自己的力量。
最新精品医学研究汇报-分子检测技术在病理诊断中的应用
核酸分析技术
核酸 基于形态
不基于形态
DNA FISH / DISH / CISH PCR / qPCR / dPCR / 测序 / NGS / aCGH
RNA RNAscope
RT-PCR / 芯片 / NanoString
5
基因突变检测
1
11/13/2016
基因突变检测的关键步骤
切片：4-5um
• 预测EGFR TKI等分子靶向药疗效（肺癌） • 预测EGFR单抗（爱必妥）靶向药疗效（结直肠癌） • 评估预后，以及良恶性的鉴别诊断（甲状腺癌） • 预测靶向药Vemurafenib疗效（恶性黑色素瘤）
癌治疗前（病理诊断的同时）
所有国内外肿瘤相关诊疗指南 • 中国晚期原发性肺癌诊治专家共识(2016版) • 结直肠癌诊疗规范（2015年版） • 中国黑色素瘤诊治指南（2010年版）
诊断、预后评估、疗效预测
3
Virchows Arch (2013) 462:27–37
癌基因组的主要改变
点突变
甘氨酸
精 半胱
丝
天冬 丙
Val 缬
拷贝数改变 扩增
缺失
异位
TS, tumor suppressor CML, chronic myelogenous leukemia
Macconaill LE, Garraway LA. Clinical implications of the cancer genome. Journal of Clinical Oncology, 28(35), 5219-5228 (2010).
• 疑难病例, 为明确明确GIST的诊断 • 术前拟用分子靶向治疗 • 所有初次诊断的复发和转移性GIST，拟行分子靶向治疗 • 原发可切除GIST手术后，中至高度复发风险，拟行伊马替尼辅助治疗 • 鉴别NFl型GIST、完全性或不完全性Carney’s三联征、家族性GIST以及儿童GIST • 鉴别同时性和异时性多原发GIST • 继发性耐药需要重新检测
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
各基因突变检测方法比较
参数
测序
qPCR
一代测序 ~20%
已知和未知突变 类型
二代测序 5%~10%（TBD）
已知和未知突变 类型
ARMS 1%~5%
已知突变类型/ 最多41种突变
灵敏度
突变类型覆盖
检测时间
数据分析 检测无效率
~3天
复杂 高
2天~3天
复杂 低
<2 小时
简单/有些可直 接出报告 低
cobas EGFR Mutation Test. CE-IVD Package Insert. Roche Molecular Systems, Inc., USA. 2011. 《癌症进展》2012 年1 月第10 卷第1 期
第二代测序
焦磷酸测序
优势 相比一代灵敏度高，特异性高
测序读长长 能得到具体突变类型 不足 测序仪价格昂贵
试剂耗材复杂 检测时间长（ 2天~3天） Roche 454 GS FLX / Junior
ABI 5500 Genetic Analyzer
罗氏cobas EGFR使用ARMS方法检测突变
等位基因特异扩增，荧光探针检测
cobas BRAF突变检测
主要用途与临床价值
主要用途 • 福尔马林固定、石蜡包埋人黑色素瘤组织 DNA BRAF V600突变检测
临床价值 • 帮助选择适合威罗菲尼片治疗的黑色素瘤患 者
实时荧光定量PCR仪发展简史
罗氏不断打破记录将创新的PCR技术推向市场
cobas z 480上市
LC480 II 上市 LC480 上市 罗氏推出COBAS Amplicor PCR诊断行业金标准
结果解读
第一代测序
直接测序法，Sanger测序
优势
技术成熟成本低 未知突变序列 单向反应的读序能力较长
不足 工作量大，时间长（3天） 实验复杂 灵敏度低，特别对于片段化的DNA 3500 毛细管电泳基因分析仪 3130 基因分析仪
无效率高
“我想在将来，直接测序法是金标准的说法 要改变了。” - 吴一龙教授，CSCO主席
EURTAC临床研究
cobas检测更加准确、快速、可靠
• 无效率方面，cobas EGFR检测比sanger测序法更低（8.8% VS 15.6%）
• cobas EGFR检测与焦磷酸测序的相关性很高（96.3%）
• cobas EGFR检测24h内出结果，但sanger测序法3天后才出结果
Mok 等人, ASCO 2013
艾德 :Adx KRAS
-
鉴别EGFR抑制剂治疗无效 的晚期结直肠癌患者
检测12，13，61密码子
12D 12V 12C 12密码子 12A 12S 12R
-
12F 13D
13C 13R 13密码子 13S 13A 13V 13I
<0.1% 18.40%
0.50% 0.30% 0.10% 0.10% 0.10% 0.10%
cobas EGFR突变检测 用途与临床价值
主要用途 • NSCLC肿瘤组织DNA中EGFR基因的外显子18–21中突 变的定性检测和41种突变位点的识别 临床价值 • 晚期NSCLC患者如存在EGFR突变，则对抗 EGFR的 TKI（特罗凯 ，易瑞沙 ）治疗疗效好
在Tarceva研究中经过临床验证
* in CTONG 0806
第二代测序
焦磷酸测序
1. 特异的测序引物和单链DNA模板结 合, 加入一种dNTP 2. DNA 聚合酶的作用下，单个 dNTP与 模板的下一个碱基配对，同时释放出 一个分子的焦磷酸(PPi)
焦磷酸测序（第二代测序）
3. 在ATP硫酸化酶的作用下，PPi和APS 结合形成ATP 4. 在荧光素酶的催化下，生成的ATP 又可以和荧光素结合形成氧化荧光素 ，同时产生可见光，被CCD捕捉 5. Apyrase降解剩余的dNTP和残留的少量 ATP 6. 加入另一种dNTP重复2-5步骤
肿瘤分子诊断技术新进展
肿瘤的个体化治疗
肿瘤突变检测方法 罗氏肿瘤分子诊断解决方案
肿瘤的个体化医疗（PHC）
A tailored approach to improve treatment outcomes
伴随诊断的目的
• 能帮助指导医生鉴别肿瘤患者特质，使用 合适的药物进行治疗
NSCLC: 从病理分型到分子分型的演变
没有发现外显子19， 21，18点突变
特罗凯和易瑞沙是一种EGFR酪氨酸酶抑制剂(TKIs)，是为肺癌患者延长生存期的 靶向治疗药物
肿瘤的个体化治疗
肿瘤突变检测方法 罗氏肿瘤分子诊断解决方案
肿瘤分子病理检测
关注的方面：方法平台的建立以及实验室质量控制
仪器与结果解读
检测平台 分析与报道
Ins Ins Ins Ins Ins
6240
Del Del
Del Del Del Del Del
12387
Del Del
Del Del Del Del Del
13550
L858R L858R
6224
6252
6225
6210
12386
6241
12429
G719C
6253
12370
26038
13552
罗氏分子系统 发明实时定量PCR仪 Kary Mullis 罗氏获得全球 PCR专利权 发明PCR技术
1985
1991
1993
1995
1998
2005 2009 2011
罗氏分子诊断产品cobas® z 480扩展应用
肿瘤突变检测 KRAS：鉴别EGFR抑制剂治疗无效的晚期结直肠癌患者 EGFR：帮助NSCLC患者选择合适的治疗 BRAF：帮助晚期黑色素瘤患者选择合适的治疗 开放式PCR平台：结果可靠，快速高效，智能灵活
NSCLC不再是一个疾病，而是一组疾病，需要分类诊断治疗
NSCLC
EGFR突变具有种族差异
TKI是上帝赐与东方人的礼物！
EGFR突变高发人群：东亚人群、女性、腺癌、不抽烟者
全球人群 ,% 东亚人群 ,%
全部 不吸烟者
腺癌 女性
19 54
42 46
30 60
49 58
中国NSCLC患者中EGFR突变率约40%！ - 更多人会从TKI治疗中获益 - 临床对EGFR检测的需求大
61H** 61L
61密码子 61R 61K 61E 61P
0.50% 0.10%
0.10% 0.10% <0.1% <0.1%
**两个 61H 突变（CAG和 CAC）
1COSMIC database (v65), accessed June 2013; 2cobas® KRAS Mutation Test. CE-IVD PI 2013; 3therascreen® KRAS PCR Kit CE-IVD Handbook 2012
肿瘤的个体化治疗
肿瘤突变检测方法 罗氏肿瘤分子诊断解决方案
荧光PCR法检测EGFR突变的位点 最多覆盖41种突变类型
外显子18
G719A G719S
6239
外显子19 外显子19 外显子19
Del Del
Del Del Del Del Del
6223
外显子20 外显子21
T790M S768I
12376
12382
13556
12385
13428
12369
12422
12416
12378
12384
6220
18427
12377
6255
13551
23571
13558
Del
Del
12383
Del
Del
12367
Del
12403
12678
12419
Del
Del
6218
Del
12728
激活性突变(TKI敏感性)： 19缺失，21点突变，18点突变 耐药性突变(TKI耐药性)： 外显子20突变
cobas 4800全自动核酸提纯及荧光 PCR分析系统
cobas z 480
HPV ： 一份样本，一次检测，3种结果
宫颈癌筛查，风险分层管理
CT/NG： CT/NG的筛查和诊断
标本类型包含分泌物、尿液
未来产品： EGFR Blood, PDL1……
cobas x 480 cobas z 480
Mok 等人, ASCO 2013
荧光PCR法检测KRAS突变的位点 最多覆盖21种突变类型
Mutation Freq 34.30% 22.70% 8.90% 6.20% 6.20% 1.30%
Roche:cobas KRAS
Qiagen:theras 源奇 :爱必源 creen KRAS KRAS RGQ
方法
众多方法 – 优点 /缺点
样本
试剂
多种试剂, 质量不一
样本制备时质量和 数量的不确定性 - 肿瘤百分比 - 突变百分比 - 抑制剂
实验室
操作步估
DNA 抽提及质控
EGFR突变检测
ARMS
测序法
其它方法
检测报告
第一代测序
直接测序法，Sanger测序
6254
EURTAC临床研究
使用cobas EGFR检测筛选突变的患者
2012 ASCO（芝加哥 ）大会上，罗氏报告了EURTAC临床研究中入组的患者使用 cobas EGFR检测后的临床结局情况 。
• 采用cobas EGFR检测确认存在突变的患者，与将化疗作为一线治疗的人群相比， 使用特罗凯治疗的人群平均生存期明显延长. (9.7个月 VS 5.4个月 中位数)