第九章弧菌属螺杆菌属和弯曲菌属
第九章弧菌属、螺杆菌属与弯曲菌属第一节霍乱弧菌弧菌属（Vibrio）细菌是一类菌体成弧形的短小革兰阴性菌。
在自然界广泛分布，尤以水中含量最多。
根据国际通用分类方法，可将弧菌属分为56个种，其中至少12个种可感染人类，又以霍乱弧菌感染最为严重。
霍乱我国法定甲类传染性疾病，霍乱弧菌（Vibrio cholerae）是其病原体。
迄今为止，全球已发生7次大流行，前6次由古典生物型引起。
最后一次由El-Tor生物型引起。
一、生物学性状（一）形态与染色从患者体内新分离出的细菌形态典型，呈弧形或逗点状，大小约（0.5~0.8）μm×(1.5~3) μm。
多次传代培养后，细菌多呈杆状。
G-。
菌体无芽胞、有菌毛，个别菌株有荚膜，菌体一端有着生单鞭毛（图9-1）。
悬滴法观察液体样本时可见呈穿梭样或流星状运动菌体。
图9-1霍乱弧菌（二）培养特性霍乱弧菌兼性厌氧，无严格营养要求，但在含氧条件下生长更好。
对温度要求不高，18~37℃均可生长，因此可在野外环境下长期生存。
该菌耐碱不耐酸，在pH9左右的碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上生长良好，而其他细菌不易生长，故多以碱性蛋白胨水富集增菌提高初次分离效率。
霍乱弧菌与其他致病性弧菌的区别在于其可以无盐环境中生长。
触酶（过氧化氢酶）阳性，氧化酶阳性，产酸不产气。
可代谢多种糖类，如葡萄糖、蔗糖和甘露醇，不利用阿拉伯糖；可还原硝酸盐，吲哚反应阳性。
碱性琼脂平板培养后可形成圆形、透明或半透明的无色扁平菌落。
在TCBS （thiosulfate-citrate-bile-sucrose）培养基上菌落呈黄色，培养基呈暗绿色。
（三）抗原构造与分型霍乱弧菌有两种抗原：O抗原（菌体抗原）和H（靶毛抗原）抗原。
O抗原耐热，有155个血清群，其中O1群、O139群可引起霍乱，但两者无抗原交叉性，其余血清群可引起人类肠胃炎等疾病。
H抗原不抗热的，无特异性。
根据菌体抗原因子不同，O1群又可分为3个血清型：小川型（A抗原因子）、稻叶型（B抗原因子）、和彦岛型（C抗原因子）。
根据表型差异，O1群霍乱弧菌血清型还可分为2个生物型：古典生物型（classical biotype）和El Tor生物型（EL Tor biotype）。
古典生物型多粘菌素敏感，不溶解羊红细胞，不凝集鸡红细胞，可被第Ⅳ群噬菌体裂解。
El Tor生物型多粘菌素不敏感，溶解羊红细胞，凝集鸡红细胞，不被第Ⅳ群噬菌体裂解。
（四）抵抗力霍乱弧菌对热敏感，煮沸2分钟或60℃加热10 分钟可致死；O1群El Tor 生物型和其他非O1群霍乱弧菌在自然界中的生存力比O1群古典型强，在淡水水中可存活1~3周或更长。
霍乱弧菌对一般消毒剂敏感，0.5ppm氯15分钟即可致死，故以1:4比例加漂白粉处理病人排泄物或呕吐物1小时，可达消毒目的。
不耐酸，在胃酸中仅存活4分钟。
二、致病性与免疫性（一）致病物质霍乱弧菌的致病物质涉及染色体上多个基因，可分为两大类，一是由ToxR 蛋白调控的ctxA、ctxB、zot、cep、ace、tcp等基因；二是不受 ToxR蛋白调控的毒力因子基因hly A和 hap。
1．霍乱肠毒素(cholera toxin)：是致泻毒素中最为强烈的毒素。
该毒素由一个A亚基（cholera toxin A，分子量为27.2kDa）和5个相同的 B亚基 (每个亚单位分子量为l l.7kDa) 组成。
该蛋白热不稳定，A亚基和B亚基分别由前噬菌体携带的结构基因ctxA 和ctxB 编码。
霍乱弧菌O1群古典生物型染色体上广泛散布着CTX单元（2个拷贝ctx为一组）； O1群El Tor 生物型染色体上 CTX单元为多拷贝随机分布。
霍乱肠毒素的致病机理是：B亚基与小肠黏膜上皮细胞的GMI神经节苷脂受体特异性结合，从而介导A亚基进入细胞，经蛋白酶作用裂解为A1和A2两条多肽，A1作为腺苷二磷酸核糖基转移酶可使NAD（辅酶I）上的腺苷二磷酸核糖转移至G蛋白上，激活腺苷酸活化酶，使细胞内ATP转化为cAMP，cAMP水平升高，使细胞主动分泌Na+、K+、Cl-、HCO3-等离子和水，最终导致患者出现严重的腹泻和呕吐（图9-2）。
另外，由 zot编码的紧密连接毒素能破坏小肠黏膜细胞间的紧密连接，增加黏膜的渗透性； cep编码的副霍乱肠毒素可增加肠液的分泌。
图9-2 霍乱肠毒素致病示意图2．鞭毛、菌毛及其他毒力因子：鞭毛有助于霍乱弧菌穿过肠黏膜表面黏液层到达肠壁上皮细胞。
细菌菌毛有助于细菌定居于小肠。
与此相关的基因有acf (accessory colonization factor)和fcp A(toxin coregulated pilus A)。
acf编码黏附素，tcp A编码菌毛蛋白中分子量约为20kDa的亚单位。
若tcp失活，该菌则失去定居功能和致泻能力。
3．其他毒力因子：其他毒力因子还有溶血-溶细胞蛋白，由hly A(hemolytic-cytolytic A)基因编码; 血凝素/蛋白酶，由hap (hemagglutimin/protease)基因编码。
除了上述致病物质和相关基因外，O139群还存在多糖荚膜和特殊 LPS毒性决定簇，可抵抗血清中的杀菌物质，使细菌黏附于小肠黏膜。
(二)所致疾病霍乱弧菌所引起的最常见疾病是霍乱，一种烈性肠道传染病，人类是霍乱弧菌的唯一易感者。
除患者外和无症状感染者均是重要传染源。
误食污染的水源或食物是霍乱弧菌最主要的传播途径，不常见人人之间直接传播。
正常生理状态下，需要摄入进人108以上霍乱弧菌方能致病，但当胃酸含量或pH较高时时，感染剂量会大幅降低。
霍乱弧菌突破胃酸到达小肠后，可黏附于肠黏膜表面并迅速繁殖，菌体不侵入小肠上皮细胞和肠腺，但繁殖过程中产生毒素类可致病。
人类感染O1群霍乱弧菌后，症状轻重不一，即可无症状，也可轻型腹泻，严重者为致死性腹泻。
在O1群中，古典生物型所致疾病较为严重。
常见病发流程为：感染细菌后2~3天突然出现剧烈腹泻和呕吐，典型特征是米泔水样腹泻物。
由此导致患者大量失水（每小时失水量可高达1L）和电解质丧失，导致代谢性酸中毒、低容量性休克、低碱血症、心律不齐和肾衰竭，若不及时治疗，死亡率高达60%。
及时补充液体和电解质可有效降低死亡率。
O139群霍乱弧菌感染更为严重，可致患者严重脱水，死亡率比O1类群高。
病愈后部分患者仍可于胆囊中带菌2周左右，个别 El Tor型病例带菌时间较长，从数月到数年不等。
(三)免疫性O1群霍乱弧菌感染愈后，机体可获得牢固免疫力，少见再次感染。
发病数月后，患者血液和肠腔中可检出保护性抗肠毒素抗体（针对霍乱毒素B亚基）及抗菌抗体（针对O抗原），其中肠道局部黏膜免疫是霍乱保护性免疫的基础。
肠腔中的sIgA可凝集黏膜表面的霍乱弧菌，使其失去运动能力；与菌毛结合可阻止霍乱弧菌黏附至肠黏膜；与霍乱肠毒素B亚基结合可阻断肠毒素与小肠上皮细胞受体的结合。
O139群感染后的免疫应答与 O1群基本一致，但 O1群霍乱弧菌脂多糖与O139群存在显著差异，并且O1群无荚膜多糖抗原，因此两者无显著交叉免疫作用。
O139群的保护性免疫主要以针对脂多糖和荚膜多糖的抗菌免疫为主，以抗毒素免疫为辅。
三、微生物学检查法霍乱是烈性传染病，因此首例患者的病原学诊断应快速、准确，及时出具疫情报告并报告相关主管部门。
发病早期，应尽量在使用抗菌药之前采集样本。
（一）标本的采集因霍乱以腹泻和呕吐为主，患者呕吐物、粪便、肛拭子等常作为样本；由于霍乱弧菌耐碱不耐酸及不耐干燥，为避免运输途中粪便发酵产酸灭活病菌，应及时将标本放入 Cary-Blair保存液中并及时培养。
因甘油对弧菌有毒性，故而甘油盐水缓冲液不适合用于弧菌的运输。
流行病学调査时还需及时采用水样。
（二）镜检显微镜下发现革兰染色阴性弧菌（红色）；悬滴法观察时，细菌呈穿梭样运动。
在悬液中加1滴不含防腐剂的霍乱弧菌多价诊断血清，可见呈快速流行样运动的弧菌停止运动并发生凝集。
（三）分离培养标本先接种至碱性蛋白胨水（pH8.8），37℃孵育6~8小时候增菌后直接镜检，转至TCBS选择性培养基（硫代硫酸盐-枸橼盐酸-胆盐-蔗糖培养基），37℃，空气条件下培养20 h，观察有无黄色菌落（霍乱弧菌因分解蔗糖产酸）。
挑选可疑黄色菌落进行生化反应及与O1群和O139多价和单价血清作玻片凝集反应。
常用的分离培养基还有碱性平板、4号琼脂、血平板、庆大霉素琼脂和牛磺胆酸亚碲酸盐明胶琼脂（TTGA培养基）等。
四、防治原则环境卫生是霍乱弧菌传染的重要因素。
改善生活环境，加强水源管理；养成良好生活习惯；不生食水产品等是预防霍乱弧菌感染及流行的重要措施。
我国早期通过肌肉注射O1群霍乱死菌苗预防霍乱的流行，虽可增强人群的特异性免疫力，但抗体持续时间较短，3~6个月后失效。
目前，霍乱疫苗预防以肠道局部免疫为主，使用方式也从肌肉注射转至口服疫苗，常用口服疫苗有B亚基-全菌灭活口服疫苗、基因工程减毒活菌苗、基因工程疫苗等，灭活口服疫苗和减毒活菌苗的有效保护率和保护时间正在评估中。
O139群因发病较晚，目前尚无预防性疫苗。
霍乱会造患者机体电解质和水份大量流失，及时补充液体和电解质是预防低血容量性休克和酸中毒的关键；辅助使用抗菌药可减少外毒素的产生，加速细菌的清除。
常用抗菌药有四环素、多西环素、呋喃唑酮、氯霉素和复方SMZ-TMP等。
第二节幽门螺杆菌1979年，澳大利亚珀斯皇家医院研究人员Warren意外地发现无数细菌紧黏着胃上皮。
1982年4月，澳大利亚学者巴里·马歇尔（Barry J. Marshall）和罗宾·沃仑（J. Robin Warren）从人胃粘膜组织中分离出幽门螺杆菌(Helicobacter pylori ,Hp)。
此后又根据RNA序列、细胞脂肪酸谱、生长特征及其他分类特征，于1989年正式划分出螺杆菌属(Helicobacter)，随后又从雪豹胃内分离到H.mustelae，从平顶猴胃内分离出H.nemi strinae，从猫胃内分离到H.felis。
除胃内有螺杆菌外，在人和其他哺乳动物及鸟类的肠肝内也有螺杆菌存在。
目前，螺杆菌属共包含23个种。
幽门螺杆菌是螺杆菌属的代表种，目前研究表明与胃窦炎、十二指肠溃疡、胃溃疡，胃腺癌和胃粘膜相关B细胞淋巴瘤（MALT)的发生关系密切。
为表彰两人发现了幽门螺杆菌以及在胃炎和胃溃疡等疾病中的作用，马歇尔和沃仑分享了2005年诺贝尔生理学或医学奖。
一、生物学性状（一）形态与染色幽门螺杆菌菌体长约2~4μm，宽约0.5~1.0μm，末端钝圆，螺旋形弯曲，常成S形或海鸥状，含1~2个微小弯曲。
G-（图9-3）。
菌体端生多鞭毛。
染色体呈环状，约2/3基因可通过gene bank获取功能基因，进而推测生物学功能，约1/4基因为螺杆菌特有基因，约1/5基因功能未知。
第9章 弧菌属
–检疫传染病，是指鼠疫、霍乱、黄热病以及国务院 确定和公布的其他传染病。
–监测传染病，由国务院卫生行政部门确定和公布。
History and spread of epidemic cholera
• Cholera has smoldered in an endemic fashion on the Indian subcontinent for centuries.
– First, the ratio of cases to carriers is much less than in cholera due to classic biotypes (1: 30-100 for El Tor vs. 1: 2 - 4 for "classic" biotypes).
• There are references to deaths due to dehydrating diarrhea dating back to Hippocrates and Sanskrit writings.
• The mode of transmission of cholera by water was proven in 1849 by John Snow, a London physician.
第九章 弧菌属
(Vibrio)
第一节 霍乱弧菌 第二节 副溶血性弧菌
• 弧菌属（Vibrio）细菌是一大群菌体短小，弯 曲成弧形、一端有单鞭毛的革兰阴性菌，运 动极活泼。
• 分布广泛，多存在于水中。 • 对人有致病性主要为霍乱弧菌(V. cholerae)
和副溶血弧菌(V. parahaemolyticus )。
• O antigens do distinguish strains of V. cholerae into 139 known serogroups.
弯曲菌与螺杆菌
检验程序
标本采集
经胃镜用活检钳于近幽门部、胃窦部或病变邻近处取材，最好采取多位点样品
应立即行床边接种或放入20%葡萄糖运送液0.5ml内，4℃中保存不超过5h
受检者术前应停服铋剂或抗菌药物一周
（二）微生物检验
（三）标本直接检查
1. 直接显微镜检查 涂片或悬滴观察 将活检组织研碎，涂片或悬滴，置相差或暗视野显微镜下可见HP形态典型、运动活泼 直接涂片染色镜检 将活检粘膜组织在玻片上涂抹后，经革兰染色或单染色后镜检，如发现典型形态的HP即可诊断 组织切片染色镜检 组织块经福马林固定、切片经W-S银染色、姬姆萨染色、HE染色和荧光染色等染色后镜检HP，以W-S银染效果最好 免疫组化 用免疫组化法可检出胃粘膜组织切片中的完整HP及破碎的菌体或抗原成分 间接免疫荧光法（IIF）
螺杆菌属（Helicobacter）：细菌有20余种， 有9个种可从人体分离到
能引起人类疾病菌种 幽门螺杆菌(H. pylori)、 H. fennelliae和H. cinaedi。
幽门螺杆菌与萎缩性胃炎，胃、十二指肠溃疡和胃癌等疾病相关
其他螺杆菌也可感染胃粘膜，但少见。
第二节 螺杆菌属
诺贝尔生理学和医学奖
1983年Marshall和Warren首先用微需氧技术从慢性胃炎、消化性溃疡患者的胃粘膜分离出弯曲状的细菌，并证明该细菌感染胃部会导致胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡，获得了2005年诺贝尔生理学和医学奖
1
最初因形态、分离培养方法与弯曲菌属细菌相似，又仅从胃标本中分离到，被称作胃弯曲菌样细菌
2
由于此菌在胃窦部多见，且形态、培养及某些生化特性与弯曲菌属相似，DNA G+Gmol%也在弯曲菌属范围内，故命名为幽门弯曲菌(campylobacter pylori)
弧菌属弯曲菌属幽门螺杆菌
致病物质
1．霍乱肠毒素: 激活GS，使细胞内 cAMP水平升高，主动 分泌Na+、K+、HCO3— 和水，导致严重的腹小肠粘膜上皮细胞GM1神 经节苷脂受体结合，介导A 亚单位进入细胞
霍乱病人
霍乱患者
免 疫 性
感染霍乱弧菌后，机体可获得牢固免疫力 SIgA起主要作用
O1群的免疫对O139无保护作用
微生物学检查法
病人粪便，肛拭 水样便 （流行病学调查）
分离培养
碱性蛋白胨水增菌
标本
选择培养基为TCBS 玻片凝集反应
直接镜检
涂片见G-性弧菌，鱼群状排列
悬滴法观察细菌呈穿梭样运动
防治原则
在含血液、血清或心脑浸液琼脂培养基，需要
3～5天或更长时间培养，形成细小、无色透明 菌落
生物学特性
在胃粘膜粘液层中常呈鱼群样排列，传 代培养可变为杆状或球型。 微需氧菌，营养要求高，需血液或血清 菌落：细小、针尖、半透明 脲酶、氧化酶、过氧化氢酶丰富
致病性
是慢性活动性胃炎、十二指肠溃疡的重 要致病菌 与胃腺癌、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤发 生有关
传播：消化道 临床表现：腹痛，腹泻，血便或果酱样 便；头痛等；病程5～8d，自愈
诊断与防治
粪便标本涂片、镜检 PCR 主要是注意饮水和食品卫生
幽门螺杆菌属 Helicobacter
螺旋形、S型 一端有2～6根鞭毛
运动活泼，呈鱼群样排列
微需氧 对营养要求高，生长缓慢
碱性琼脂平板上生长良好
抗原构造与分型
根据O抗原不同
现已有155个血清群
其中O1群、O139群引起霍乱
弧菌和弯曲菌PPT课件
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二、致病性和免疫性
1．致病物质 （1） 鞭毛、菌毛、粘液素酶
（2） 霍乱肠毒素（cholera enterotoxin） 霍乱肠毒素本质是蛋白质，不耐热。对蛋
白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。 该毒素属外毒素，具有很强的抗原性。
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23
1个A亚单 毒性
霍位
单位
乱
肠
毒
素 5个B亚单 结合
位（4～6） 单位
－
＋
＋ ９０％以上为阳性；－ ９０％以上为阴性；ｄ １０－８９％阳性
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（五）变异性：
形态变异
弧型→直杆状→ 多形
霍
乱 菌落变异
弧 菌 的
溶血性变异 （ El Tor型）
变 异 毒力变异
性
S ←→R←→L 溶血性 ←→非溶血性
传代
强毒株←→ 弱毒株 ←→无毒株
血清型别变异 小川型←→ 稻叶型
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• 常用的选择培养基为硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖 琼脂平板（TCBS），霍乱弧菌在其中可形成较大的菌 落，因发酵蔗糖产酸而使菌落呈黄色。
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（三）生化反应
• 两个生物型的霍乱弧菌都能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、 麦芽糖，产酸不产气。迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。
• 噬菌体分型： 对噬菌体的敏感性进行分 型，其中较为实用的是第Ⅳ组和第Ⅴ组 噬菌体。
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霍乱弧菌两个生物型的鉴别
性状
古典型
E1 Tor 型
溶血（1%绵羊红细胞）
－
d
血凝（2.5%鸡红细胞）
弯曲菌属和螺杆菌属PPT课件
21
broth culture of H. pylori ATCC 43504 (A)， atypical
a plate culture of H. pylori ATCC 43579 (B),classic
弯曲菌属和螺杆菌属 （Campylobacter and Helicobacter）
1
•分类
新伯杰分类：薄壁菌门，群2（需氧/微需氧，有动 力，螺型/类弧形革兰阴性细菌）
弯曲杆菌属（Campylobacter） 空肠弯曲菌（C . jejuni）
三个亚种：C. jejuni subsp. jejuni (major human
pathogen)
C. fetus subsp. venerealis (Infrequent
septicemia)
螺杆菌菌属（Helicobacter）
幽门螺杆菌（H . pylori）
H. cinaedi and H. fennelliae
3
16SrRNA分型： Campylobacter,Helicobacter,Wolinella, Arcobacter and Flexispira 属于一个完全不同于一 般革兰阴性杆菌的系统发生群
传统分型：
•重要性：
C. jejuni:
弯曲菌病;
格林-巴力综合症（Guillain-Barre syndrome,GBS）
C. fetus ssp. fetus:
H. pylori:
4
弯曲菌属（Campylobacter）
•生长特性：
培养基：
肠道标本（主要分离C. jejuni ssp.）
15
which can be S, seagull or spiral shaped.
微肠杆菌科弧菌螺旋菌属PPT课件
成为条件致病菌，引起肠道外感染 有一些血清型大肠埃希菌具有致病性 作为水源、食物粪便污染的指标
一、生物学性状
❖ G-菌 ❖ 多有周鞭毛，
普通菌毛、性菌毛 ❖ 致病性与菌毛有关
培养特性与生化反应
❖ 营养要求不高，普通平板，灰白色、圆形、光滑、 中等大小的菌落；液体培养呈浑浊生长
涂片染色镜检
（选择培养基）分离培养
生化鉴定
*尿路感染需计数细菌总数，
＞10万/mL
卫生学指标
在环境和食品卫生学上，常被用作粪便污染的 检测指标
大肠菌群数
我国的卫生标准： ≤ 3个大肠菌群/1L饮水 ≤ 5个大肠菌群/100ml瓶装汽水、果汁
--
25
防治
❖ 治疗：早期纠正体液平衡，抗生素治疗 ❖ 预防：防止粪便污染
非致病菌(大肠）
+
红色大菌落(分解乳糖)
致病菌 (伤寒、痢疾） -
无色透明小菌落(不分解乳糖)
乳糖发酵试验： 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌
--
7
--
8
抗原结构复杂
❖ Ｏ抗原： 耐热性菌体抗原；细胞壁脂多糖，稳定， 属特异性，刺激机体产生IgM抗体
❖ Ｈ抗原：鞭毛蛋白，不耐热，失去后运动消失， 刺激机体产生IgG抗体
染，食入污染的食物和水，主要有五种类型
--
17
❖ 肠道感染
1）肠产毒型大肠杆菌（ETEC） 2）肠致病型大肠杆菌（EPEC） 3）肠侵袭型大肠杆菌（EIEC） 4）肠出血型大肠杆菌（EHEC） 5）肠聚集型大肠杆菌（EAEC）
--
18
五种引起胃肠炎的大肠埃希菌
弧菌属螺杆菌属
霍乱肠毒素的作用机理
2.所致疾病
霍 乱 烈性肠道传染病，为我国的甲类法定传染病
传染源 病人、无ห้องสมุดไป่ตู้状感染者
传播途径 主要是通过污染的水源或食物经口摄入
临床表现 上吐下泻 剧烈腹泻和呕吐（米泔水样腹泻物）， 大量水分和电解质丧失 ，低容量性休 克及心力不齐和肾衰竭（死亡率高达60%）
“米泔水样”粪便
无盐培养基中不生长，氯化钠含量超 过8%不能生长。 神奈川现象：致病性副溶血性弧菌在Wagatsuma 琼脂平板上多出现β溶血。
副溶血性弧菌：临床意义
致病物质：菌毛（黏附作用）、溶血素。 传播方式：食入烹饪不当（不耐热、不耐酸）
的海产品或腌制品，可导致食物中毒。 临床表现：可从自限性腹泻至霍乱样腹泻。
别名
O抗原成份
稻叶型
A、C
小川型
A、B
彦岛型
A、B、C
O1群霍乱弧菌：生物型
古典生物型和EI Tor生物型。 相同性：两种生物型的霍乱弧菌在许多生物
学特性、临床表现和流行特点等方 面基本相同。 区别性：表现在某些生物学性状方面的差异。
霍乱弧菌的生物型
初筛试验（P270)
霍乱红试验；粘丝试验；O／ 敏感试验
鉴别试验
特征 鸡红细胞凝集
古典生物 型
—
V-P 试验
—
多粘菌素 B 敏感试验
+
Ⅳ组噬菌体裂解
+
Ⅴ组噬菌体裂解
—
El-Tor 生物型 + + — — +
抗原构造与分型（根据O抗原不同，现已有155个血清
群）
霍乱弧菌
O1血清分群 生物学分型 血清学分型
非O1群（ O139群） 小川型
弯曲菌属与螺杆菌属
3、检验方法
直接镜检 分离培养 鉴定
微生物学检测
菌种鉴定
• 42℃（空、大）和25℃（胎儿）生长 • 马尿酸钠水解试验： 空肠弯曲菌(+)
• 醋酸吲哚水解试验 空肠弯曲菌(+)
胎儿弯曲菌 (-)
• 萘啶酸、头孢噻吩敏感试验：
萘啶酸
头孢噻吩
空肠弯曲
+
-
胎儿弯曲菌 -
+
弯曲菌属温度生长试验
菌种 空肠弯曲菌 大肠弯曲菌 胎儿弯曲菌
可能的致病物质：
• 细胞毒素，包括细胞致死性肿胀毒素，志贺样毒素和溶血 毒素等。
• 肠毒素 • 内毒素
致病部位及表现：
• 感染部位通常在空肠、回肠粘摸上皮细胞，也可致结肠感 染。主要以其鞭毛和特异性外膜蛋白与空、回肠上皮细胞 结合、生长繁殖、产生毒素致病。
• 腹泻大多为水样便，小部分为脓血黏液便。
（1）粪便或肛拭标本：直接接种改良 Campy- BAP选择平板、 Skirrow氏培养 基。
血、脑脊液标本：布氏肉汤增菌后转种分
离培养基（布氏平板）。
（2）培养温度： 37℃ 、42℃
（3）微需氧条件
•
厌氧罐
•
气袋法
•
双平板法
•
蜡烛缸法
微生物学检测
3、检验方法
直接镜检 分离培养 鉴定
菌属鉴定
• 菌落生长特征 • 菌体形态特点（染色性、动力） • 氧化酶阳性、触酶阳性 • 硝酸盐还原试验阳性 • 脲酶阴性
螺杆菌属
（Helicobacter）
第三节 弯 曲 菌 属 Campylobacter
弯曲菌属可引起人和动物的腹泻胃肠炎和 肠道外感染等疾病。
弧菌属
弧菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属、弯曲菌属、螺杆菌属●共性：G-直或微弯杆菌，氧化酶+,分属不同科。
●第一节弧菌属●定义：一群菌体短小、弯曲成弧形或直杆状G-菌，端单H，运动迅速；兼性厌氧，葡F，多需2~3%盐；氧+；●弧菌科: 弧菌属、异单胞菌属（气、邻单胞菌、发光杆菌属、利斯顿菌属、许旺菌属......弧菌属霍乱、副霍乱：O-1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌胃肠炎：非O-1群霍乱弧菌食物中毒：副溶血性弧菌胃肠炎、伤口感染菌血症：其他弧菌：拟态弧菌、河弧菌、溶藻弧菌、霍利斯弧菌、创伤弧菌、麦契尼可夫弧菌、......等）鉴别要点●弧菌：氧化酶+（区别于肠菌科）葡F（区别于假单胞菌和其他非发酵菌）霍乱弧菌临床意义一、致霍乱——烈性肠道传染病依O抗原（至少）分155个血清型O1群：生物型分古典生物型（霍乱）、ElTor生物型（副霍乱）血清型分小川型（AB）稻叶型（AC）彦岛型（ABC）O139（1992年分离）遗传及毒力基因与O1群似。
发病机制：过程：1、不洁饮食，粪-口途径传播胃酸易感2、菌毛（定植于肠粘膜上皮细胞）3、霍乱毒素（CT，属肠毒素）4、细胞分泌水、电解质；肠腔内水、钠潴留5、剧烈吐泻（“米泔水”样粪便）6、继而体液丢失、缺水、水电解质紊乱、休克、死亡微生物检查：（一）标本的采集和运送——早期用药前，肛拭或棉拭粘取患者或疑似患者大便、呕吐物以及外环境样品；采得的标本应立即接种于培养基（床边接种，置于灭菌带棉塞试管或碱性胨水中），尽早送检;较远则应放卡-布运送培养基（旧时为“文─腊氏”保存液内1:2),严密不易碎容器,室温专人送检。
需增菌的标本一般要在18小时内完成。
检验程序：步骤：见标本（呕吐物，米泔水样粪便）分别进行1、直接革兰染色Gˉ弧菌，运动活跃；2、分离培养碱性胨水、凝集反应；3、PCR肠毒各培养上的生长特征：●碱性胨水（APW，PH8.5）: （增菌液）迅速,6～9h（El：2~3h）,大量生长, 薄菌膜;●碱性琼脂: 中等大圆齐透或半无色或带青砖色如水滴状；●TCBS: 大、黄(蔗+）、轻凸;●双─洗: 大、圆、扁、齐、透或半；●亚─洗：中心呈浅灰褐色；●SS：不长;●血琼脂：古典——草绿色环；ElTor——透明溶血环生化特性：cb+明胶+“漏斗状”生长,霍乱红反应+,LOA++-,U-C+ONPG+葡乳麦甘蔗阿+-+++-，DNA酶+，0%~6%盐+羊RBC溶血、鸡RBC凝集、V-P、多B敏感、IV组Ф裂解、V组Ф裂解古典生物型/ El-Tor生物型：---++-/D++--+废弃物处理：1．污染饮用水须严格消毒处理；2．污水需经消毒处理后才能排放；3．被污染食物就地封存，消毒处理；4．粪便消毒处理达到无害化；5．污染物品须严格消毒或焚烧；6．病人尸体由治疗病人的医疗单位负责消毒处理，处理后应当立即火化。
螺杆菌属与弯曲菌属
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一、螺杆菌属
（三）微生物学检查
检查方法
镜检
分离培养与鉴定
快速诊断试验
尿素酶试验
一、螺杆菌属
（四）防治原则
目前尚无有效的预防措施，以尿素酶 和热休克蛋白作为抗原开发幽门螺杆 菌的疫苗正在研制中。
二、弯曲菌属
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空肠弯曲菌
1.G－菌，细长呈S状、螺旋形 或海鸥展翅状排列。
2.致病物质为霍乱样肠毒素等。 3.主要引起婴儿急性肠炎（通
一、螺杆菌属
（二）致病性与免疫性
01 致病物质
鞭毛与尿素酶 黏附素 脂多糖 毒素（空泡毒素VacA、细胞
毒素相关CagA）
幽门螺杆菌致病
一、螺杆菌属
（二）致病性与免疫性
02 所致疾病
人是唯一肯定传染源。 功能性消化不良、慢性胃炎、 消化性溃疡、胃癌、胃淋巴瘤、 胃肠道外疾病。 IgA和IgG→感染或疾病的标志
01 形态与染色
幽 门 螺 杆 菌 为 革 兰 阴 性 菌 ， 大 小 为 (2 ～ 4)μm×(0.5～1.0)μm，呈弧形或S形或海鸥状， 一端或两端有多根鞭毛，运动活泼。
幽门螺杆菌 （电镜彩色照片）
一、螺杆菌属
（一） 生物学性状
02 培养特性与生化反应
营养要求高 、需要一定湿度 细小、针尖状、半透明菌落 不分解糖，氧快速尿素酶（+）
课程目标
2.熟悉
幽门螺杆菌及 空肠弯曲菌的 致病性。
1.掌握
幽门螺杆菌的生物学 特点。
3.了解
空肠弯曲菌的生物学特点 ，螺杆菌属与弯曲菌属的 检查及预防方法。
一、螺杆菌属
螺杆菌属为革兰阴性螺形杆菌，有20余种，代表种是幽门螺杆菌，是慢性胃炎的主要病原体 ，与消化性溃疡和胃癌的发生关系密切。