痰液标本细菌学检验(一)
各种标本的正确采集
标本采集注意事项
（1）血标本必须隔绝空气。血标本中若 进入空气将产生误差。因此采血的注射 器使用前应检查有无漏气，针头必须连 接紧密，标本采集后立即封闭针头斜面。 （2）及时送验。标本采集后应立即送验， 如要等待测定，应将标本置于4℃冰箱内 保存不得超过1小时，以免影响检验结果。
遵照医嘱
认真核对 正确采集
及时送检
各种标本采集法
一、痰标本的采集
（一）痰常规标本
1、目的 ： 收集痰标本作涂片，检查痰液中的细 菌、寄生虫卵和癌细胞等。
2、用物 ： 一次性痰杯。 3、操作方法 ：嘱病人晨起用清水漱口清洁口腔，
然后深呼吸几次，在深吸气后用力咳出气管深处 的痰液于痰杯，如查癌细胞，瓶内应放10％甲醛 溶液或95％酒精溶液固定后送验。
如为昏迷患者，婴幼儿或无力咳嗽者，可用吸 引器吸痰，但吸引管及集痰器均需要无菌。
咽拭子培养标本采集法
1、目的 ：从咽部和扁桃体取分泌物做细菌 培养或病毒分离，以协助诊断。
2、用物 ： 无菌咽拭子培养管，无菌生理盐 水，压舌板。
3、操作方法 ：备齐用物，贴好标签，向病 人说明目的及配合方法，以取得合作。将拭 子取出蘸无菌生理盐水（必要时以压舌板轻 压舌部），嘱病人发“啊”音，以轻快的动 作，迅速擦拭两侧腭弓及咽、扁桃体的分泌 物后，将拭子插入试管中塞紧，并立即送验。 取真菌培养标本，须在口腔溃疡面上采取分 泌物
血液标本采集
（一）目的
根据检验目的的不同，动脉血标本主要作血液 气体分析；静脉血标本又分为：
1、全血标本 测定血液中某些物质的含量（血 沉、血常规、凝血机制检测等。）
痰标本的细菌学检查
痰标本的细菌学检查随着医疗技术的更新和医疗事业的不断发展，临床上采纳了很多介入性诊疗措施，以致于抗菌药物广泛应用、耐药菌株不断增多、细菌的耐药机制越发复杂和机体免疫功能下降引发感染逐渐增多，也正因此临床对于细菌学检查提出了更多、更迫切的要求。
细菌学检查所面临的最主要的问题是提供临床结果的可靠性和准确性，影响细菌检验结果可靠性的因素有很多，比如采取标本的时机、方法，标本的保存和运送方式以及分离培养方法、鉴定手段等等，临床中很多医生仅仅重视细菌标本的鉴定和培养方法，却忽略了标本的质量和采集方法。
其中痰标本的问题是最严重的，痰也是下呼吸道分泌物，在大多数情况下，采集痰标本的方式是自然咳痰，因此很容易受到上呼吸道分泌物的干扰，所以如何能够确定改为提高痰标本的治疗改为质量是十分重要的，这个问题也已经受到了国内外广大微生物工作者的重视，所以本篇文章就对痰标本的细菌学检查这一问题进行深入的探讨。
一、痰标本的现状以及存在的问题首先是痰标本的采取，目前大多数医院都对患者采取自然咳痰的方式采集清晨的第一口痰，患者在留痰前需要使用清水漱口，而且需要漱口三次，然后将痰液用力的咳出。
虽然有很多医院能够严格按照标准执行，但还有部分医院尚未按照要求去做。
其次是痰标本的运送，细菌学检查痰标本需要在留取痰标本之后立即将其送往细菌时，但是据相关数据显示，到目前位置仅有一小部分医院能够做到，绝大多数医院并没有在标本留取之后立刻送检。
尤其是对于住院的患者，医院的做法往往是将所有患者的标本集齐之后再由相关人员送往细菌室，以致于患者的标本从留取到送检之间耽搁了两至三个小时，如果痰标本在送到细菌室之后并未立进行接种或者是涂片，而是再耽搁一段时间的话，则会造成该观察的内容没有观察到，而且应该培养出来的细菌也并未培养出来。
随之而来的问题就是涂片染色显微镜检查，到目前为止，仍然有很多医院在培养痰标本之前并未进行涂片染色显微镜检查，不包括特殊检查，比如痰涂片找抗酸杆菌。
痰液标本细菌学检验的注意事项
痰液标本细菌学检验的注意事项痰液标本细菌学检验是一种常用的临床检查方法，主要用于分离和鉴定痰液中的细菌，以帮助诊断和治疗呼吸系统感染和其他相关疾病。
随着医学技术的不断发展和进步，痰液标本细菌学检验的应用范围和检测方法也在不断更新和完善。
然而，由于痰液标本细菌学检验存在一些技术难点和操作问题，容易出现误判和漏诊等情况，给临床诊疗带来一定的挑战和困难。
采集痰液标本前的准备工作是痰液标本细菌学检验中非常重要的一个环节。
如果准备工作不充分，将会影响痰液标本的质量和可靠性，甚至导致检测结果的误判和漏诊。
因此，在采集痰液标本前，应做好以下准备工作：①确认患者是否适宜进行痰液标本检测。
痰液标本检测主要适用于呼吸系统感染和其他相关疾病的诊断和治疗。
在进行痰液标本检测前，应仔细询问患者的病史，了解其病情和病程，以确认是否适宜进行该项检测。
②患者的呼吸系统状态要充分准备。
采集痰液标本时，需要患者能够充分清除呼吸道内的分泌物，以便采集到干净的痰液。
因此，患者应在采集痰液标本前充分排空呼吸道，建议在晨起后进行采集，因为此时痰液较为浓稠，容易采集到足够的样本。
③患者是否接受抗生素治疗。
抗生素治疗可能会影响痰液中细菌的生长和检测结果。
因此，需要了解患者是否接受抗生素治疗，并在采集痰液标本前停止使用抗生素一段时间，以避免影响检测结果。
④采集器材的准备。
在采集痰液标本时，需要准备相应的器材，如痰杯、痰杯盖、手套、口罩等。
要求器材干净、无菌、无异味，以避免交叉感染。
⑤给患者充分解释并获得其同意。
在采集痰液标本前，需要给患者充分解释采集的目的、方法、注意事项等信息，并获得其明确的同意。
同时，要给予患者必要的配合和安抚，以避免出现不必要的痛苦和不适。
采集痰液标本的方法主要有两种：咳痰和吸痰。
咳痰是患者主动咳出痰液，一般要求患者咳嗽力度足够，并在容器内采集痰液。
吸痰则是通过吸氧管或者吸痰管吸出痰液，需要专业人员进行操作，注意不要把口腔中的唾液混入痰液中，以免影响检测结果。
痰标本在细菌学检验中的应用分析
痰标本在细菌学检验中的应用分析摘要目的：探讨痰标本在细菌学检验中的应用价值。
方法：选择送检于检验科的300例痰标本，分别接种培养于不同的培养基上。
结果：1例标本在923tbl液体培养基浑浊，有细菌生长，在7h9l 半固体蔗糖培养基中有油煎蛋样的菌落出现，而在罗氏培养基、923tbb和7119b培养基中没有菌落生长。
结论：用高渗半固体培养基可以从临床痰标本中分离出结核分枝杆菌l型菌株，表明痰标本在细菌学检验中仍有一定的价值。
关键词痰标本细菌学检验在感染疾病的病原菌中，细菌l型是细菌细胞壁部分缺损或完全丧失而造成的，细菌胞壁的缺失可以是自发的，也可以是人工诱导的，但人工诱导的频率远比自发为高。
痰标本在琼脂培养基上，菌落呈“油煎蛋”样式[1]。
本实验旨在筛查临床痰标本中结核分枝杆菌l型细菌的存在情况，论述了痰标本在细菌学检验中的应用效果，为进一步研究结核分枝杆菌l型细菌的形成提供思路，现报告如下。
资料与方法实验对象：2009年6月～2012年5月送检于检验科的300例痰标本。
培养基配制：罗氏培养基的配制：基础液，谷氨酸钠1.8g、磷酸二氢钾1.2g，枸橼酸镁0.3g，葡萄糖0.3g，硫酸镁0.1g，丙三醇6ml、蒸馏水300ml。
上述溶液加热充分溶解，加入土豆粉6g，摇匀加热5分钟。
冷却到40～50℃时，加入500ml全卵液，加入已经高压灭菌的2%孔雀绿10ml，摇，静置后进行分装。
呈斜面放置于干燥箱85℃，1.5小时。
冷却后，培养基斜面颜色鲜艳，表面光滑无气泡，4℃保存。
痰标本的细菌培养：取痰标本，以1：3的比例加入消化液，漩涡振荡，3000转/分，离心15分钟，加入适量pbs重悬沉淀，取300ml分别接种于middlebrook mgit 7h9液体、7h9l、7h9b半同体培养基、923tbb和923tbl液体培养基中，37℃静置培养。
消化液的配制：4%naoh 50ml，2.9%枸橼酸钠50ml，n-乙酰-l-半胱氨酸0.5g当天配制，24小时内使用。
痰液标本细菌学检验若干问题的探讨
１ １ 标 本 ． １ １ １ 各 年 龄 段 “ 康 人群 ” ． ． 健 口咽 部分 物拭 子 ３ ２洌 。 ２
吸道 分 泌 物 中“ 常 菌群 ” 同 程 度 的 污 ． 以 准 确 识 别 “ 正 不 难 感
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一
１ ２ １ 半 定 量 培养 “ ２级 法 ” 分 区划 线 接 种 血 琼 脂 、 克 力 。。 １ 巧 琼 脂 和 Ｔ Ｃ沙 保 罗 琼 脂 各 １ 。巧 克 力平 扳 于 烛 缸 内 放 置 ． Ｔ 个
其 他 平 板 于普 通 孵 箱 内放 置 ， ５℃孵 育 ４ 。 察 菌 落 形 态 ， ３ ８ ｈ
实 验探 索 和 认 真 观 察得 商讨 ．认 真选 取 病 理 成 分 ” 为 适 用 。一 般 细 菌培 养 ， “ 较 宜
同 时选 用 血 平 极 和巧 克 力 平 饭 。细 菌 培 养 和 直 接 涂 片 革 兰 染 色 镜 检 宜 同 时进 行 。 倡 导 常 规 化 半定 量 培 养 方 式 ， 试 用 “ ２级 法 ” １ 。对 于“ 自然 咯 痰 ” 采 集 的 杯 本 ． 感 染 菌 的 实 验 室 判 定 ， 当 依 据 临 床 痰 液 标 本 细 菌学 检 验 结 果 和 法 其 应 当 地各 年龄 段 “ 康 人群 ” １ 部 分 泌 物 的 细 菌 半 定 量 调 查 结 果 的 相 互 比较 ： 果 “ 常 菌 群 ” 健 Ｆ咽 － 如 正 的数 量 大 于 七述 渊查
・
８ ・ ３７
分 别 挑 取 各 种 菌 落并 于第 一 区 混 合 涂 片 ， 兰 染 色 ， 镜 检 查 。 革 油
痰液细菌学检验的标准化操作程序
痰液细菌学检验的标准化操作程序1前言众所周知，传统习惯程序的痰标本细菌学检验其临床符合率并不高,其原因是多方面的。
除了痰标本采集不规范导致的不合格标本带来的培养结果与病人感染不相符外，还因为微生物和人体的相关性本身就具有复杂性：源自细菌的致病与条件致病的辨证性，如致病菌可能为正常携带，而细菌在肺通气功能异常病人的下呼吸道的可以发生单纯定植或感染，要证明培养结果与感染的相关性是医学微生物学所面临的难题，这也使得一直以来在对于痰培养的标准化进展十分缓慢，以至在各版《全国临床检验操作规程》上也未提出相应详细可行的令全国同行公认的统一规范的标准化操作程序（SOP）和完整的痰液培养的质量控制办法。
习惯程序的痰标本细菌学检验的缓慢也很不适应临床诊断治疗的迫切性。
故而，建立规范而快速的痰液细菌学检验的SOP对于提高呼吸系统感染病的诊治水平和控制抗生素的滥用等问题均有重要的作用痰培养阳性率普遍教低，临床符合率差的关键因素是痰标本采集不规范，不合格痰标本将直接导致病原菌被分离的机会降低，大量正常菌群也会抑制病原菌的生长或干扰病原菌的检出，降低了临床符合率；再有就是操作程序的不规范，不重视直接涂片，检验过程控制的不严密也是导致临床符合率低的重要原因。
我们通过SOP的临床应用情况的分析，痰培养阳性率和临床符合率均可能被提高，并且细菌分布统计结果显示本文与国外文献所报道的情况基本一致。
对于直接涂片的意义，在于判断标本中微生物有无、类型、染色特性、形态特征，标本的污染情况，还可对痰标本中可能的病原菌初步诊断(依据人体被病原菌感染后的炎性渗出包裹和白细胞吞噬反应)，判断是否存在复数菌感染，动态观察处于治疗过程中不同时期所送检的标本中病原菌情况的变化（如同种病原菌数量的增减，机体的免疫反应，菌群的交替）。
甚至可以推断临床治疗疗效和病人病情的变化和转归，医院内感染的发生等，具有重要意义。
为了满足高质量需求，对首代分离培养基应该进行严格的质量控制。
痰液细菌培养实验报告(3篇)
第1篇实验目的：通过痰液细菌培养实验，检测痰液中是否存在病原菌，为临床诊断和治疗提供依据。
实验材料：1. 标本：痰液2. 试剂：营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板、革兰氏染色液、细菌鉴定试剂等3. 仪器：恒温培养箱、显微镜、无菌操作台等实验方法：1. 标本采集：按照无菌操作要求，收集患者的痰液标本。
2. 标本处理：将痰液标本用无菌生理盐水稀释，取适量加入营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板，涂布均匀。
3. 培养与观察：将涂布好的平板放入恒温培养箱中，37℃培养24-48小时，观察细菌生长情况。
4. 细菌鉴定：根据细菌形态、染色性、培养特性等，对分离出的细菌进行鉴定。
5. 药敏试验：采用纸片扩散法，对分离出的细菌进行药敏试验。
实验结果：1. 细菌生长情况：在营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板上，观察到明显的细菌生长。
2. 细菌鉴定结果：根据细菌形态、染色性、培养特性等，鉴定出以下细菌：- 肺炎链球菌：革兰氏阳性球菌，呈双球菌排列，对青霉素、头孢菌素等敏感。
- 流感嗜血杆菌：革兰氏阴性杆菌，呈链状排列，对氨苄西林、头孢菌素等敏感。
- 铜绿假单胞菌：革兰氏阴性杆菌，呈短链状排列，对庆大霉素、头孢他啶等敏感。
3. 药敏试验结果：肺炎链球菌对青霉素、头孢菌素等敏感；流感嗜血杆菌对氨苄西林、头孢菌素等敏感；铜绿假单胞菌对庆大霉素、头孢他啶等敏感。
实验结论：根据痰液细菌培养结果，患者痰液中存在肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等病原菌。
根据药敏试验结果，建议临床使用青霉素、头孢菌素、庆大霉素等抗生素进行治疗。
实验讨论：1. 痰液细菌培养是一种常用的细菌学检测方法，可以有效地检测痰液中是否存在病原菌，为临床诊断和治疗提供依据。
2. 在本实验中，肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等病原菌的检出，可能与患者呼吸系统感染有关。
3. 药敏试验结果对于指导临床合理使用抗生素具有重要意义。
细菌学检验中痰培养的检测方法及临床意义
细菌学检验中痰培养的检测方法及临床意义摘要】目的：探讨细菌学检测中痰培养的方法及临床意义。
方法：选取2015年3月—2016年10月收治的呼吸感染患者36例痰直接涂片和常规培养方法及临床意义进行分析。
结果：呼吸感染患者36例痰标本检出菌株数31株，病原菌分离阳性率86.11%。
结论：按照正确、标准的操作方式采集标本可提高痰标本中病原菌的阳性检出率，临床检验痰标本主要是采用病原菌进行检查，而使用其方法进行检查结果有较高的效果，但检查结果也受很多因素的影响以实现诊断治疗的效果。
【关键词】细菌学检验；痰培养；检测方法；临床意义【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）05-0088-01培养的目的在于从临床标本中分离出致病真菌，获得纯培养。
当咳嗽、咯痰、痰量增多、痰带脓或脓血，或痰有恶臭，常提示支气管和肺部感染，需要进行病原学检验和药敏试验以指导病因学治疗。
通常做需氧培养，根据需要可做厌氧培养、真菌培养或结核分枝杆菌培养[1]。
厌氧培养通常需要吸引支气管深部的分泌物，隔绝空气并避免口腔和咽喉的正常菌群污染。
1.资料与方法1.1 一般资料选取2015年3月—2016年10月收治的呼吸感染患者36例，其中男21例，女15例，年龄30～80岁，平均年龄55.2±3.5岁。
1.2 标本采取取早晨第一口气管深部痰。
嘱患者除去义齿，用清水(温开白水)漱口数次，以减少口腔正常菌群污染，然后咯出气管深部的痰置入无菌有盖痰盒内，避免混入口腔和鼻咽腔分泌物，在2小时内送检。
流感嗜血杆菌易死亡，应保温并在半小时内送检。
标本容器外不得被痰液污染，因可造成对标本转送和实验室人员的危害。
不合格的标本在说明原因后可以拒收。
对少痰或痰液不易咯出者，可用5%～10% NaCl溶液雾化吸入20～30分钟诱导排痰；经口腔咯出或支气管镜吸引的分泌物，通常有上呼吸道正常菌群污染，不适用于嗜肺军团菌的培养，因污染菌大量快速繁殖可抑制军团菌生长[2]。
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痰液标本细菌学检验（一）
关键词：细胞库菌株培养中心 atcc 北京标准物质网
一、检验程序
痰及呼吸道标本的细菌学检验程序见图34—1。
二、检验方法
(一)显微镜检查
1．一般细菌涂片检查挑取标本中脓性或带血部分涂片进行革兰染色镜检，描述观察到的细菌的染色性、形态及排列等特征，可发出初步报告。
2．结核分枝杆菌涂片检查挑取标本干酪样或脓性部分做抗酸染色和金胺“O”荧光染色，前者用油镜，后者用荧光显微镜检查。
具体操作详见第十五章分枝杆菌属检验。
3．放线菌及诺卡菌涂片检查将痰液用生理盐水反复洗涤数次，挑取黄色颗粒(硫黄颗粒)或不透明着色斑点，置玻片上并覆以盖玻片，轻压后置高倍镜下观察。
如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆呈放线状排列时揭去盖玻片，待干后做革兰染色及抗酸染色镜检。
4．下呼吸道其他标本检查支气管肺泡灌洗液等直接取自下呼吸道的标本，不易受上呼吸道杂菌的污染，涂片检菌的意义较大。
可取离心沉淀物进行革兰染色与抗酸染色检查。
(二)培养和鉴定
1．痰培养标本的前处理于痰标本中加入一定量无菌生理盐水，剧烈振荡5～10秒后，将沉淀于管底的脓痰小片取出，置于另一试管中，同法再处理2次，可洗去痰中的正常菌群。
然后向洗涤过的痰液中加入等量pH 7. 6的1％胰酶溶液，放置35℃环境90分钟，使痰液均质化后备用。
2．培养基与培养环境
(1)血琼脂平板：适用于分离多种细菌，需氧环境，可分离β-溶血性链球菌，葡萄球菌；置于5％CO
环境培养，分离肺炎链球菌和β-溶血性链球菌。
根
2
据血琼脂平板生长的菌落特征及镜检形态，得出初步结果，再按各类细菌特性做进一步鉴定。
环境培养，常用于分离嗜血杆菌和脑膜
(2)巧克力色琼脂平板：置于5％CO
2
炎奈瑟菌等有特殊营养需求的细菌。
(3)中国蓝琼脂平板／麦康凯平板：需氧环境培养，常用于分离肠杆菌科细菌。
(4)TTC-沙保弱培养基：需氧环境培养，用于分离白假丝酵母菌及其他酵母菌、诺卡菌、放线菌以及烟曲霉菌等。
(5)厌氧血平板：厌氧环境培养，用于培养厌氧菌。
环境培养，改良罗氏培养基、
(6)结核分枝杆菌培养基：需氧或5％～10％CO
2
米氏7H10培养基或其他合适的培养基，用于培养结核分枝杆菌。
(7)军团菌专用培养基：置于2．5％～5. 0％CO
环境培养，药用炭酵母琼
2
脂(CYE)培养基、F-G琼脂，用于培养军团菌。
3．标本的培养
(1)普通细菌培养：将处理后的痰标本接种于血琼脂平板、中国蓝琼脂平板
环境／麦康凯平板、巧克力色琼脂平板上，分别放入普通环境和5％～10％CO
2
中，35℃培养18～24小时，观察菌落特征，并涂片进行革兰染色，根据菌体的形态特点做进一步鉴定。
有条件或必耍时进行厌氧培养。
具体操作详见第十七章厌氧性细菌检验。
(2)结核分枝杆菌培养：将处理后的痰标本接种于改良罗氏培养基或米氏
环境中培养。
根据初步生长出菌落时间和7H10培养基，置35℃、5％～10％CO
2
是否产生色素等特点，加以判定。
(3)标本的菌落计数培养：液体标本，如保护性支气管肺泡灌洗吸出液(PBAL)、气管穿刺抽吸液(TTA)、保护性标本刷洗液(PSB)标本或定量稀释均质化处理的痰标本，可做菌落计数培养。
常用的改良Gould法是一种半定量的方法，先将平皿分为A、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等4个区，阻3mm接种环取一满环液化痰液(或定量采集的PBAL、TTA、PSB)接种于血琼脂平板或巧克力色琼脂平板，先在A区画线20~40条，然后在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区分别画线4条。
在做Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分区画线前，接种环均须经烧灼灭菌。
接种后的
培养基置35℃培养1 8～20小时，然后分别计数各区某一特征的菌落数，查阅表34—3即得出每毫升痰液中某一特征菌落细菌的对应数量。
一般认为痰液标本中，某种细菌浓度达到≥107CFU／ml，可视为病原菌；<104，可视为污染菌；若介于105～106CFU／ml两者之间时，要连续分离培养两次阻上，仍为105～106CFU／ml时，亦认为是病原菌。
例如：一份痰标本，经均质化处理过程已经进行了1：16倍稀释，按上述菌落计数方法操作，培养24小时后，某一特征最优势菌落Ⅰ区生长5个(相当于90个)，查表对应于10000行，计算(×103)得菌落数≥107CFU/ml，由此可以判断该特征菌落为病原菌。
提倡做菌落计数培养有两方面原因，其一，有的标本中细菌数量可能较少，需通过茼落计数判断是否足以引起化脓性感染；其二，有的标本污染正常菌群的可能性较大，需通过菌落计数判断哪一种菌落是引起化脓性感染的病原菌。
痰标本细菌菌落计数培养还没有列入统一规范，供做参考。