微生物学检验(第3版)2012肺炎克雷伯与痰液标本检查
痰液标本细菌学检验的注意事项
痰液标本细菌学检验的注意事项痰液标本细菌学检验是一种常用的临床检查方法，主要用于分离和鉴定痰液中的细菌，以帮助诊断和治疗呼吸系统感染和其他相关疾病。
随着医学技术的不断发展和进步，痰液标本细菌学检验的应用范围和检测方法也在不断更新和完善。
然而，由于痰液标本细菌学检验存在一些技术难点和操作问题，容易出现误判和漏诊等情况，给临床诊疗带来一定的挑战和困难。
采集痰液标本前的准备工作是痰液标本细菌学检验中非常重要的一个环节。
如果准备工作不充分，将会影响痰液标本的质量和可靠性，甚至导致检测结果的误判和漏诊。
因此，在采集痰液标本前，应做好以下准备工作：①确认患者是否适宜进行痰液标本检测。
痰液标本检测主要适用于呼吸系统感染和其他相关疾病的诊断和治疗。
在进行痰液标本检测前，应仔细询问患者的病史，了解其病情和病程，以确认是否适宜进行该项检测。
②患者的呼吸系统状态要充分准备。
采集痰液标本时，需要患者能够充分清除呼吸道内的分泌物，以便采集到干净的痰液。
因此，患者应在采集痰液标本前充分排空呼吸道，建议在晨起后进行采集，因为此时痰液较为浓稠，容易采集到足够的样本。
③患者是否接受抗生素治疗。
抗生素治疗可能会影响痰液中细菌的生长和检测结果。
因此，需要了解患者是否接受抗生素治疗，并在采集痰液标本前停止使用抗生素一段时间，以避免影响检测结果。
④采集器材的准备。
在采集痰液标本时，需要准备相应的器材，如痰杯、痰杯盖、手套、口罩等。
要求器材干净、无菌、无异味，以避免交叉感染。
⑤给患者充分解释并获得其同意。
在采集痰液标本前，需要给患者充分解释采集的目的、方法、注意事项等信息，并获得其明确的同意。
同时，要给予患者必要的配合和安抚，以避免出现不必要的痛苦和不适。
采集痰液标本的方法主要有两种：咳痰和吸痰。
咳痰是患者主动咳出痰液，一般要求患者咳嗽力度足够，并在容器内采集痰液。
吸痰则是通过吸氧管或者吸痰管吸出痰液，需要专业人员进行操作，注意不要把口腔中的唾液混入痰液中，以免影响检测结果。
痰液(呼吸道)标本细菌学检验
二、所致疾病
1、侵袭性疾病 主要引起化脓性炎症，是葡 萄球菌引起的最常见感染。
（1）局部感染：如毛囊炎、蜂窝组织炎、伤口 化脓等皮肤及软组织感染，多由金黄色葡萄球菌 引起。病灶特点是浓汁黄而黏稠，化脓灶多局限 ，与周围组织界限明显。还可引起气管炎、肺炎 、脓胸、中耳炎等内脏器官感染。
药物敏感试验
药敏报告为敏感（S）： 表示用常规剂量治疗可获得临床疗效。
药敏报告是中介度（I）： 表示加大剂量或药物浓缩部位可有疗效。
药敏报告耐药（R）： 表示该药无疗效。
抗生素敏感试验
药敏结果 ≠ 临床疗效： 敏感——有效 耐药——无效 敏感——无效（假敏感） 耐药——有效（假耐药）
临床医师正确评价药敏试验结果的同时，必须参考病人机体 状况、临床治疗效果以及药动学、药物毒副作用和药物价格 以及本地区本医院等细菌耐药监测数据合理选用药物。
痰液（呼吸道）标本 细菌学检验
概述
痰是气管、支气管和肺泡分泌物的混合物。 健康人痰量很少，当下呼吸道粘膜和肺泡受刺
激时痰量会增加。在病理状态下，不仅痰量增 多，其性质也会发生变化。
痰培养
根据需要对患者的痰液进行需氧菌及厌氧菌培 养、真菌培养、涂片查结核杆菌等，用于呼吸 道感染的病因诊断；
目前痰培养是下呼吸道病原学诊断最常用方法。
三种葡萄球菌的主要性状
性状 色素 溶血作用 分解甘露醇 SPA 血浆凝固酶 耐热核酸酶 新生霉素敏感试验 致病性
金黄色葡萄球菌 金黄色 + + + + + S 强
表皮葡萄球菌 白色 S 弱
腐生葡萄球菌 白色或柠檬色 R 无
痰标本中肺炎克雷伯菌耐药基因的检测及耐药分析的开题报告
痰标本中肺炎克雷伯菌耐药基因的检测及耐药分析的开题报告1. 研究背景和研究目的肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）是临床上常见的病原菌，可引起各种感染，尤其是呼吸道感染和泌尿道感染。
近年来，由于抗生素的广泛应用和不当使用，肺炎克雷伯菌的耐药性问题越来越突出。
其中，青霉素、氨基糖苷类、氟喹诺酮及多种β-内酰胺酶都为其主要耐药机制。
本研究的目的是通过检测痰标本中肺炎克雷伯菌的耐药基因，分析其耐药性情况，为临床治疗提供重要参考，从而有效地预防和控制肺炎克雷伯菌的增多及其耐药性。
2. 研究方法2.1 痰标本的采集和处理痰标本将由临床实验室负责采集和处理，按照标准操作流程进行，确保标本的质量和完整性。
处理过程包括细胞分离、离心、重复洗涤等步骤，最终得到纯化的菌液。
2.2 氯仿提取基因组DNA纯化的菌液将进行氯仿提取基因组DNA，提取过程包括裂解菌细胞、酶解蛋白质、氯仿提取、乙醇沉淀、洗涤和溶解等步骤。
最终得到基因组DNA，用以后续PCR扩增及耐药基因检测。
2.3 聚合酶链反应（PCR）扩增PCR扩增过程包括反应体系的制备、PCR反应的温度和时间的控制以及扩增产物的检测等步骤。
扩增产物将通过1%琼脂糖凝胶电泳进行分析，检测所需耐药基因的扩增情况。
2.4 耐药基因测序和分析耐药基因扩增的PCR产物将进行Sanger测序，并通过基因数据库的比对和分析，确定所检测到的耐药基因类型和数量。
同时，将对肺炎克雷伯菌的耐药性进行综合评估，对其耐药性机制进行深入探讨。
3. 预期研究成果和意义研究预期将确定痰标本中常见的肺炎克雷伯菌的耐药基因类型和分布情况，了解其耐药性机制及其与药物使用的相关性，为临床治疗提供基础数据和参考依据，为临床治疗提供更优质的服务。
本研究的意义在于探明肺炎克雷伯菌的耐药性特点及其机制，为临床用药提供指导，并为耐药性的预测和控制提供科学依据，促进临床治疗的规范化和最优化。
痰液标本细菌学检验(一)
痰液标本细菌学检验（一）关键词：细胞库菌株培养中心 atcc 北京标准物质网一、检验程序痰及呼吸道标本的细菌学检验程序见图34—1。
二、检验方法(一)显微镜检查1．一般细菌涂片检查挑取标本中脓性或带血部分涂片进行革兰染色镜检，描述观察到的细菌的染色性、形态及排列等特征，可发出初步报告。
2．结核分枝杆菌涂片检查挑取标本干酪样或脓性部分做抗酸染色和金胺“O”荧光染色，前者用油镜，后者用荧光显微镜检查。
具体操作详见第十五章分枝杆菌属检验。
3．放线菌及诺卡菌涂片检查将痰液用生理盐水反复洗涤数次，挑取黄色颗粒(硫黄颗粒)或不透明着色斑点，置玻片上并覆以盖玻片，轻压后置高倍镜下观察。
如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆呈放线状排列时揭去盖玻片，待干后做革兰染色及抗酸染色镜检。
4．下呼吸道其他标本检查支气管肺泡灌洗液等直接取自下呼吸道的标本，不易受上呼吸道杂菌的污染，涂片检菌的意义较大。
可取离心沉淀物进行革兰染色与抗酸染色检查。
(二)培养和鉴定1．痰培养标本的前处理于痰标本中加入一定量无菌生理盐水，剧烈振荡5～10秒后，将沉淀于管底的脓痰小片取出，置于另一试管中，同法再处理2次，可洗去痰中的正常菌群。
然后向洗涤过的痰液中加入等量pH 7. 6的1％胰酶溶液，放置35℃环境90分钟，使痰液均质化后备用。
2．培养基与培养环境(1)血琼脂平板：适用于分离多种细菌，需氧环境，可分离β-溶血性链球菌，葡萄球菌；置于5％CO环境培养，分离肺炎链球菌和β-溶血性链球菌。
根2据血琼脂平板生长的菌落特征及镜检形态，得出初步结果，再按各类细菌特性做进一步鉴定。
环境培养，常用于分离嗜血杆菌和脑膜(2)巧克力色琼脂平板：置于5％CO2炎奈瑟菌等有特殊营养需求的细菌。
(3)中国蓝琼脂平板／麦康凯平板：需氧环境培养，常用于分离肠杆菌科细菌。
(4)TTC-沙保弱培养基：需氧环境培养，用于分离白假丝酵母菌及其他酵母菌、诺卡菌、放线菌以及烟曲霉菌等。
痰标本细菌学检验
痰标本细菌学检验
细菌室
一、项目申请：
1、普通细菌培养：对于病房患者选择项目名称为“病房痰培养”，对于门急诊患者选择“门诊痰培养”。
如果临床怀疑奴卡菌等特殊病原体，需要在打印出的条码上注明目的病原菌，以便实验室延长培养时间和选择适当培养方法。
2、真菌培养：选择项目名称为“真菌培养”，标本种类选择“痰”。
3、不适于培养的病原菌：厌氧菌、军团菌、衣原体、支原体等，如果有疑问请与细菌室联系询问（电话2485）。
分枝杆菌培养为我院外送检验项目。
二、标本采集：
1、采集时间：尽量在抗生素使用前，以清晨留取的标本为更佳。
2、容器要求：螺旋口无菌塑料瓶。
3、采集方法：标本采集前应充分清洁患者口腔，如：漱口、刷牙等，有假牙的病人应取下假牙。
嘱附病人深咳，将痰液直接留到无菌瓶内。
容器瓶口旋紧勿泄漏。
4、将条码贴于标本瓶上，扫描记录采集时间。
三、送检要求：
1、标本采集后应及时（2小时内）送检。
标本若冷藏保存可能会影响对温度敏感细菌的检出。
2一天送检一次即可，不需同一天内连续送检多次，多余的送检标本视为不合格。
如遇特殊情况需多次送检时，请事先与细菌室联系。
3、常规送检时间为每周一至周五8点至16点30分，节假日顺延。
在常规时间以外如有送检要求，请事先与细菌室联系说明送检原因，经确认后再送检。
四、检验流程：
五、报告发放：
1、阴性报告：普通细菌培养2-3天，真菌培养1周，特殊病原菌延长相应时间。
2、阳性报告：4天，如遇细菌生长缓慢等特殊情况则延迟发放。
痰液标本细菌学检验若干问题
痰液标本细菌学检验若干问题目的：通过对痰液标本细菌学检验问题的研究，建立规范的痰液标本细菌学的检验技术。
方法：取本院检验科细菌室在2011年1月—2014年12月采集的标本10012例，痰液标本为5799例，认真观察和探索痰液标本的细菌学检验的全过程。
结果：一般的细菌培养，适合同时应用巧克力平板和血平板。
提倡试用“12级法”，应用常规化的半定量的培养方式。
直接涂片和细菌培养革兰氏染色镜检适合同时进行。
实验室判定“自然咳痰”的方法采集标本的感染菌，应该按照当地不同年龄段的“健康人群”的口咽部的分泌物的细菌的半定量的调查结果和临床痰液的标本的细菌学检查的结果进行比较而定。
适用“认真对病理成分的选取”，对痰液标本的“前处理”问题还值得进一步探讨。
结论：应该规定医务人员要当面监督和指导痰液标本的取送，这样有利于保证痰液标本的质量；涂片—培养同时并举、“12级法”的半定量法、正确选择病原菌对临床检验有重要意义。
标签：痰液标本；细菌学检验；若干问题痰液标本在涂片的检查与细菌的培养的总标本中占50%以上[1]。
在健康的人群中，下呼吸道是无菌的，但上呼吸道具有正常菌群的生长，所以，在收集痰液标本使用自然咯痰法时，很容易受到上消化道中分泌物中的正常菌群的污染，“感染菌”的准确识别就受到影响。
[2]另外，痰液的标本有“非均质性”的特点，使细菌成分分布比较不均匀，所以导致涂片、培养的检查重复性比较差。
所以对痰液标本的检验是临床检验科工作中的一个难点和重点。
为了增强细菌的培养与涂片检查的结果的准确性和有效性，逐步实现操作的规范化、科学化和标准化，本文在这方面做了一写探讨和总结，报道如下。
1 材料和方法1.1材料（1）423例不同年龄段的”健康人群”的口咽部的分泌物拭子。
（2）临床科室送来的自然咯痰法采集的痰液。
1.2 微生物细菌学的检验直接涂片法“7级法”和半定量的培养“12级法”同时进行微生物细菌学的检验。
1.3 统计学的分析方法采用SPSS16.0软件系统对数据进行分析，计量资料间采用t检验，计数资料间采用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
痰液(呼吸道)标本细菌学检验
三种葡萄球菌的主要性状
性状 色素 溶血作用 分解甘露醇 SPA 血浆凝固酶 耐热核酸酶 新生霉素敏感试验 致病性
金黄色葡萄球菌 金黄色 + + + + + S 强
表皮葡萄球菌 白色 S 弱
腐生葡萄球菌 白色或柠檬色 R 无
生物学特性
抵抗力 葡萄球菌是无芽孢的细菌中抵抗力最强的。耐
干燥、耐热，耐盐性强，能在10%-15%NaCl的 培养基中生长，可用于筛选菌种。
症状； 2、咯血：包括泡沫血痰、痰中带血等； 3、呼吸困难：呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛； 4、发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或
CRP明显增高； 5、胸部影像学检查提示有前采集； 专用的痰培养杯，避免正常菌群污染； 严格无菌操作； 以晨痰最好，主要有自然咳痰法、支气管镜采
（5）毒性休克综合征毒素-1：是由噬菌体I群 金黄色葡萄球菌产生的一类蛋白质，可引起毒性 休克综合征。
二、所致疾病
1、侵袭性疾病 主要引起化脓性炎症，是葡 萄球菌引起的最常见感染。
（1）局部感染：如毛囊炎、蜂窝组织炎、伤口 化脓等皮肤及软组织感染，多由金黄色葡萄球菌 引起。病灶特点是浓汁黄而黏稠，化脓灶多局限 ，与周围组织界限明显。还可引起气管炎、肺炎 、脓胸、中耳炎等内脏器官感染。
鼻咽部常见菌群： 链球菌（甲型或乙型）、绿脓杆菌、大肠杆菌、 葡萄球菌、肺炎球菌、流感杆菌等。
下呼吸道则在机体免疫功能的作用下自始至终 保持基本无菌状态。
PS：下呼吸道包括气管、支气管及肺泡。
痰培养结果
20世纪50年代以肺炎链球菌为主； 80年代后以革兰氏阴性杆菌为主：
如鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、 肺炎克雷伯杆菌、阴沟肠杆菌等。
微生物学检验(第3版)临床微生物标本的检验
30
Company name
三、尿液标本
无菌采集中段尿 如考虑厌氧菌感染， 采取膀胱穿刺法采集 标本。
排尿困难者考虑导尿 采集标本。
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Company name
尿液标本的采集
1、一般原则 通常应采集早晨起床后第 一次尿液送检。原则上应选择在抗菌药物 应用之前采集尿液； 2、沙门氏菌感染 一般在病后2周左右采 集尿液培养； 3、钩端螺旋体感染 一般在病后2周左右 采集尿液培养；
13
Company name
标本的拒收原则
无标签 送检延误 重新采集。 送检容器不当或渗漏 检者，要求重新采集。 不接收，告知送 不检测，并与送检的医生和护 不接收，提醒送检者，要求
士联系。
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Company name
标本的拒收原则
标本不符合要求 不接收，联系送检者， 指出不符合要求之处，要求重新采集符合 试验要求的标本.
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Company name
选择培养基
血平板，巧克力平板，中国兰平板，罗氏 培养基，
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Company name
49
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Company name
4、无菌操作
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Company name
（二）、临床标本及时送检
①所有的标本都必须立即送往实验室，最好在 2h内,保存时间不应超过24h.
②最佳的临床标本送检首先取决于所获取标本 的量.量少的标本应在采集后15-30min内送检. ③对环境敏感的微生物如志贺菌、奈瑟氏菌和 流感嗜血杆菌（对低温敏感）应立即处理，禁 止冷藏脊髓液和生殖道、眼部、内耳道标本。
G+杆菌 G-球菌 G-杆菌
真菌 厌氧菌
21
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培养前处理
巧克力平板 普通培养 35℃、18~24h 中国蓝平板 普通培养 35℃、18~24h
初步报告
菌落形态和涂片染色 生化反应、血清学鉴定 报告
17
痰液标本检验操作流程
1、肉眼观察：下呼吸道标本为痰液，选 取脓血性的痰液用于细菌学检验。异常恶 臭的脓性痰，常见于肺脓疡患者，而且可 能与厌氧菌有关。痰液中有颗粒状、菌块 和干酪样物质可能与放线菌病和曲霉菌感 染有关。
1
葡萄糖 赖 氨 酸 鸟 氨 酸
2
氨 基 酸 对 照
琥珀 硫 化 氢 靛 基 质
3
乳 糖 卫 茅 醇 紫 色 黄 色 苯 丙 氨 酸 无 色 绿 色
4
尿 素 枸 橼 酸 盐 淡 绿 蓝 色
产酸 原来 颜色 阳性 颜色 产气 产气
产气 琥珀 琥珀 紫色
无 无色 色 红 色
紫 色 黄 色
无 色 红 色
紫色 黄色 黑色
18
痰液标本检验操作流程
2、涂片检查：挑选痰液中脓、血性部分涂 片，干燥固定后，进行革兰染色镜检。 如发现形态典型、有特殊结构，初步可以 确定所属菌属或种的细菌，可直接报告。 如查见革兰阳性葡萄状排列的球菌，可报 告“痰液涂片查见革兰阳性球菌，形似葡萄 状”；
19
痰液标本检验操作流程
如查见革兰阳性双球菌、矛头状、有明显 荚膜时，可报告“痰液涂片查见革兰阳性双 球菌，形似肺炎球菌”。
如不能直接确定菌属或种的细菌，可报告 “痰液涂片查见革兰×性×菌”。如果痰片 中均为鳞状上皮细胞，则应视为不合格标本。
20
痰液标本检验操作流程
3、分离培养： 1）痰液标本的前处理 A. 均质化法：加入等量的PH 7.6 的1% 胰 酶溶液，放置35℃、90 min使痰液均质化；
21
痰液标本检验操作流程
45℃左右的10%氯化钠水溶液，使痰容易排出。
对于幼儿，可轻轻压迫胸骨上部气管，使其咳 嗽而取之。
13
标本的采集
（2）气管镜采集法：用气管镜在肺部内病灶处直 接吸取标本，或用气管刷采取标本。 （3）气管或环甲膜穿刺法：主要用于厌氧菌培养。
14
痰液标本常见的分离菌
正常菌群
革兰阳性细菌 α和γ链球菌、微球菌、 表皮葡萄球菌、四联球 菌、白喉以外的棒状杆 菌、乳杆菌 化脓性链球菌、金黄色 葡萄球菌、白喉棒状杆 菌、结核分枝杆菌、白 色念珠菌 革兰阴性细菌 除脑膜炎和淋病奈瑟 菌外的其他奈瑟菌、 其他嗜血杆菌
5、其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载 玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非 发酵菌生化编码表等。
10
标本的采集
1. 鼻咽拭子
采集时，患者用清水漱口，对光而坐，头向 上仰张大口，用压舌板轻压舌根，取无菌鼻咽拭子 绕过悬雍垂，在鼻咽腔、悬雍垂后侧反复涂抹数次 小心取出，避免接触口腔部其他组织。
2．咽拭子
27
具体实验操作
第一天的主要操作：
一、痰液标本 分区画线接种到血平板、中国蓝平板 二、提供的菌落
1、进行涂片G染色观察细菌形态； 2、触酶试验、氧化酶试验； 3、接种于半固体、克式双糖培养基；
4、接种到各种肠杆菌科生化鉴定培养基中；
三、放入35℃恒温培养箱进行培养
28
肠杆菌科细菌生化鉴定编码表
紫 色 黄 色
无 色 红 色
紫色 黄色 黑色
标记为红色的加石腊油
具体实验操作
第二天的主要操作：
5.
根据以上的鉴定，报告出鉴定结果
35
2）取经过前处理的痰液标本分别接种血平 板、巧克力平板和中国蓝平板。巧克力平板 置5%—10% CO2 环境培养，其他平板于普通 环境35℃孵育18—24h 。根据菌落形态，细 菌染色观察，进一步进行鉴定。
23
特殊菌的培养
1.结核分枝杆菌培养：无菌吸管加前处理标本2-3 滴于罗-琴培养基35℃孵育至8周，每周观察一次； 2.嗜肺军团菌培养：取气管分泌物接种于活性炭酵 母琼脂(CYE)或费-高(F-G)平板，35℃、2.5%CO2培 养，每天用肉眼观察，直至第14天； 3.百日咳鲍特菌的培养：将标本直接接种在鲍-金 培养基上，置有盖的玻璃缸（缸内加少量的水，并 在水中加少许硫酸铜，防止细菌及霉菌生长）中， 35℃ 孵育3—5天。
33
肠杆菌科细菌生化鉴定编码表
1
葡萄糖 赖 氨 酸 鸟 氨 酸
2
氨 基 酸 对 照
琥珀 硫 化 氢 靛 基 质
3
乳 糖 卫 茅 醇 紫 色 黄 色 苯 丙 氨 酸 无 色 绿 色
4
尿 素 枸 橼 酸 盐 淡 绿 蓝 色
产酸 原来 颜色 阳性 颜色 产气 产气
产气 琥珀 琥珀 紫色
无 无色 色 红 色
上呼吸道 常见致 病菌
下呼吸道 常见致 病菌
脑膜炎奈瑟菌、流感 嗜血杆菌、百日咳鲍 特菌、肺炎克雷伯菌、 大肠埃希菌、铜绿假 单胞菌 化脓性链球菌 、金黄色 脑膜炎奈瑟菌、流感 葡萄球菌、肺炎链球菌、 嗜血杆菌、肺炎克雷 白喉棒状杆菌、结核分 伯菌、大肠埃希菌、 枝杆菌、厌氧菌、放线 铜绿假单胞菌、产气 菌、奴卡菌 肠杆菌、嗜肺军团菌
痰液和呼吸道标本的微生物检查及
肺炎克雷伯菌培养鉴定
临床微生物与免疫学教研室
1
肺炎克雷伯菌革兰染色
肺炎克雷伯菌荚膜染色
肺炎克雷伯菌的菌落特征（血琼脂平板）
肺炎克雷伯菌的菌落特征（MAC）
肺炎克雷伯菌粘丝试验
肺炎克雷伯菌KIA（A A＋＋ ）、MIU（－－＋）
目的要求
掌握呼吸道标本的细菌学检验和报告方法
15
检验程序
鼻咽拭子 直接涂片染色检 查 革兰染色 异染颗粒 常规培养 血平板 巧克力平板 中国蓝平板 白喉棒状杆菌培养 血清斜面培养基 鸡蛋培养基 菌落形态、涂片染色 初步报告 亚碲酸钾血平板纯培养 菌落形态、涂片染色 生化反应、血清学鉴定 百日咳杆菌培养 鲍-金培养基
初步报告
16
检验程序
痰液标本 肉眼观察 涂片染色观察 血平板 普通培养 35℃、18~24h
26
注意事项
1.上呼吸道标本要及时送检，防止干燥。 采集时尽量避免正常菌群的污染。 2.痰液标本最好采取晨痰。 3.上呼吸道有大量的正常菌群，正常情况 下这些细菌并不致病，但在机体抵抗力下 降或某些因素作用下，可以侵入下呼吸道 致病。特别是在抗生素作用下或在大量正 常菌群掩盖下，致病菌难以检出。
24
特殊菌的培养
4. 白喉棒状杆菌培养：将标本接种于血清斜面或 鸡蛋培养基，35℃ 孵育8-10h观察； 5.流感嗜血杆菌培养：将标本接种于血平板和巧克 力平板，并在平板中央接种一直线金黄色葡萄球菌 （或四角点种），35℃、5%-10% CO2环境孵育1824h。 6.脑膜炎奈瑟菌培养：将鼻烟拭子接种于已保温在 350C的卵黄双抗平板上，35℃、5%-10% CO2环境孵 育18—24h。
B. 洗涤法：取无菌平皿4个，加入无菌生 理盐水20ml ，将痰液标本放入第1个平皿中， 用接种环用力震摇，将脓痰分散为小块悬浮 于盐水内，将小块脓痰取出依次放入第2、3、 4个平皿中重复以上操作。最后在第4个平皿 收集脓痰小块，接种于平皿。同时接种未经 洗涤的痰液标本，作为对照。
22
痰液标本检验操作流程
标记为红色的加石腊油
具体实验操作
第二天的主要操作：
1.
取出标本分离培养的血平板、中国蓝平 板观察平板上的菌落形态、颜色；
30
具体实验操作
第二天的主要操作：
2.
观察半固体培养基
31
具体实验操作
第二天的主要操作：
3.
观察克式双糖培养基
32
具体实验操作
第二天的主要操作：
4.
观察生化反应，查表鉴定
将拭子用无菌生理盐水湿润，用压舌板轻压舌 根，暴露整个口咽部。先用拭子轻擦扁桃体表面后 弃去，再取1支湿润的拭子轻压扁桃体，擦取挤压 出的分泌物，或擦取伪膜等病变部位。
11
12
标本的采集
3. 痰液标本
（1）自然咳痰法：受检者用清水溯口数次后， 用力咳嗽自气管深部将痰咳出吐至无菌容器中。 对痰量少或无痰等咳痰困难者，可雾化吸入
25
结果报告
1.如发现可疑致病菌落，则进行涂片染色观察、 生化反应及血清学鉴定得出报告“检出x x细菌， 并报告该菌在培养基中的大慨比例”； 2.如无致病菌落生长，则继续培养至48h，平板 上均为咽部正常菌群生长，无可疑致病菌落生长， 则报告“正常菌群生长”； 3.如虽在平板上未发现特定的致病菌，但某种常 居菌比正常情况明显增多或近似纯培养，考虑可 能菌群失调或菌群交替症，也可进行鉴定后报告 “x x菌纯培养”或“x x菌生长旺盛”。
掌握肺炎克雷伯菌的培养特征、主要微生 物特性及鉴定方法。 了解呼吸道标本的采集方法。
ห้องสมุดไป่ตู้
8
器材和试剂
1、标本：痰液标本 2、菌种：肺炎克雷伯菌 3、培养基：血平板、中国蓝平板、克氏 双糖斜面培养基、半固体培养基、微量生 化管等。
9
器材和试剂
4、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革 兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂。