痰液标本细菌学检验(一)---文本资料
痰标本的细菌学检查
痰标本的细菌学检查随着医疗技术的更新和医疗事业的不断发展，临床上采纳了很多介入性诊疗措施，以致于抗菌药物广泛应用、耐药菌株不断增多、细菌的耐药机制越发复杂和机体免疫功能下降引发感染逐渐增多，也正因此临床对于细菌学检查提出了更多、更迫切的要求。
细菌学检查所面临的最主要的问题是提供临床结果的可靠性和准确性，影响细菌检验结果可靠性的因素有很多，比如采取标本的时机、方法，标本的保存和运送方式以及分离培养方法、鉴定手段等等，临床中很多医生仅仅重视细菌标本的鉴定和培养方法，却忽略了标本的质量和采集方法。
其中痰标本的问题是最严重的，痰也是下呼吸道分泌物，在大多数情况下，采集痰标本的方式是自然咳痰，因此很容易受到上呼吸道分泌物的干扰，所以如何能够确定改为提高痰标本的治疗改为质量是十分重要的，这个问题也已经受到了国内外广大微生物工作者的重视，所以本篇文章就对痰标本的细菌学检查这一问题进行深入的探讨。
一、痰标本的现状以及存在的问题首先是痰标本的采取，目前大多数医院都对患者采取自然咳痰的方式采集清晨的第一口痰，患者在留痰前需要使用清水漱口，而且需要漱口三次，然后将痰液用力的咳出。
虽然有很多医院能够严格按照标准执行，但还有部分医院尚未按照要求去做。
其次是痰标本的运送，细菌学检查痰标本需要在留取痰标本之后立即将其送往细菌时，但是据相关数据显示，到目前位置仅有一小部分医院能够做到，绝大多数医院并没有在标本留取之后立刻送检。
尤其是对于住院的患者，医院的做法往往是将所有患者的标本集齐之后再由相关人员送往细菌室，以致于患者的标本从留取到送检之间耽搁了两至三个小时，如果痰标本在送到细菌室之后并未立进行接种或者是涂片，而是再耽搁一段时间的话，则会造成该观察的内容没有观察到，而且应该培养出来的细菌也并未培养出来。
随之而来的问题就是涂片染色显微镜检查，到目前为止，仍然有很多医院在培养痰标本之前并未进行涂片染色显微镜检查，不包括特殊检查，比如痰涂片找抗酸杆菌。
痰液标本细菌学检验的注意事项
痰液标本细菌学检验的注意事项痰液标本细菌学检验是一种常用的临床检查方法，主要用于分离和鉴定痰液中的细菌，以帮助诊断和治疗呼吸系统感染和其他相关疾病。
随着医学技术的不断发展和进步，痰液标本细菌学检验的应用范围和检测方法也在不断更新和完善。
然而，由于痰液标本细菌学检验存在一些技术难点和操作问题，容易出现误判和漏诊等情况，给临床诊疗带来一定的挑战和困难。
采集痰液标本前的准备工作是痰液标本细菌学检验中非常重要的一个环节。
如果准备工作不充分，将会影响痰液标本的质量和可靠性，甚至导致检测结果的误判和漏诊。
因此，在采集痰液标本前，应做好以下准备工作：①确认患者是否适宜进行痰液标本检测。
痰液标本检测主要适用于呼吸系统感染和其他相关疾病的诊断和治疗。
在进行痰液标本检测前，应仔细询问患者的病史，了解其病情和病程，以确认是否适宜进行该项检测。
②患者的呼吸系统状态要充分准备。
采集痰液标本时，需要患者能够充分清除呼吸道内的分泌物，以便采集到干净的痰液。
因此，患者应在采集痰液标本前充分排空呼吸道，建议在晨起后进行采集，因为此时痰液较为浓稠，容易采集到足够的样本。
③患者是否接受抗生素治疗。
抗生素治疗可能会影响痰液中细菌的生长和检测结果。
因此，需要了解患者是否接受抗生素治疗，并在采集痰液标本前停止使用抗生素一段时间，以避免影响检测结果。
④采集器材的准备。
在采集痰液标本时，需要准备相应的器材，如痰杯、痰杯盖、手套、口罩等。
要求器材干净、无菌、无异味，以避免交叉感染。
⑤给患者充分解释并获得其同意。
在采集痰液标本前，需要给患者充分解释采集的目的、方法、注意事项等信息，并获得其明确的同意。
同时，要给予患者必要的配合和安抚，以避免出现不必要的痛苦和不适。
采集痰液标本的方法主要有两种：咳痰和吸痰。
咳痰是患者主动咳出痰液，一般要求患者咳嗽力度足够，并在容器内采集痰液。
吸痰则是通过吸氧管或者吸痰管吸出痰液，需要专业人员进行操作，注意不要把口腔中的唾液混入痰液中，以免影响检测结果。
痰液细菌培养实验报告(3篇)
第1篇实验目的：通过痰液细菌培养实验，检测痰液中是否存在病原菌，为临床诊断和治疗提供依据。
实验材料：1. 标本：痰液2. 试剂：营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板、革兰氏染色液、细菌鉴定试剂等3. 仪器：恒温培养箱、显微镜、无菌操作台等实验方法：1. 标本采集：按照无菌操作要求，收集患者的痰液标本。
2. 标本处理：将痰液标本用无菌生理盐水稀释，取适量加入营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板，涂布均匀。
3. 培养与观察：将涂布好的平板放入恒温培养箱中，37℃培养24-48小时，观察细菌生长情况。
4. 细菌鉴定：根据细菌形态、染色性、培养特性等，对分离出的细菌进行鉴定。
5. 药敏试验：采用纸片扩散法，对分离出的细菌进行药敏试验。
实验结果：1. 细菌生长情况：在营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板上，观察到明显的细菌生长。
2. 细菌鉴定结果：根据细菌形态、染色性、培养特性等，鉴定出以下细菌：- 肺炎链球菌：革兰氏阳性球菌，呈双球菌排列，对青霉素、头孢菌素等敏感。
- 流感嗜血杆菌：革兰氏阴性杆菌，呈链状排列，对氨苄西林、头孢菌素等敏感。
- 铜绿假单胞菌：革兰氏阴性杆菌，呈短链状排列，对庆大霉素、头孢他啶等敏感。
3. 药敏试验结果：肺炎链球菌对青霉素、头孢菌素等敏感；流感嗜血杆菌对氨苄西林、头孢菌素等敏感；铜绿假单胞菌对庆大霉素、头孢他啶等敏感。
实验结论：根据痰液细菌培养结果，患者痰液中存在肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等病原菌。
根据药敏试验结果，建议临床使用青霉素、头孢菌素、庆大霉素等抗生素进行治疗。
实验讨论：1. 痰液细菌培养是一种常用的细菌学检测方法，可以有效地检测痰液中是否存在病原菌，为临床诊断和治疗提供依据。
2. 在本实验中，肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等病原菌的检出，可能与患者呼吸系统感染有关。
3. 药敏试验结果对于指导临床合理使用抗生素具有重要意义。
痰液(呼吸道)标本细菌学检验
三种葡萄球菌的主要性状
性状 色素 溶血作用 分解甘露醇 SPA 血浆凝固酶 耐热核酸酶 新生霉素敏感试验 致病性
金黄色葡萄球菌 金黄色 + + + + + S 强
表皮葡萄球菌 白色 S 弱
腐生葡萄球菌 白色或柠檬色 R 无
生物学特性
抵抗力 葡萄球菌是无芽孢的细菌中抵抗力最强的。耐
干燥、耐热，耐盐性强，能在10%-15%NaCl的 培养基中生长，可用于筛选菌种。
症状； 2、咯血：包括泡沫血痰、痰中带血等； 3、呼吸困难：呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛； 4、发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或
CRP明显增高； 5、胸部影像学检查提示有前采集； 专用的痰培养杯，避免正常菌群污染； 严格无菌操作； 以晨痰最好，主要有自然咳痰法、支气管镜采
（5）毒性休克综合征毒素-1：是由噬菌体I群 金黄色葡萄球菌产生的一类蛋白质，可引起毒性 休克综合征。
二、所致疾病
1、侵袭性疾病 主要引起化脓性炎症，是葡 萄球菌引起的最常见感染。
（1）局部感染：如毛囊炎、蜂窝组织炎、伤口 化脓等皮肤及软组织感染，多由金黄色葡萄球菌 引起。病灶特点是浓汁黄而黏稠，化脓灶多局限 ，与周围组织界限明显。还可引起气管炎、肺炎 、脓胸、中耳炎等内脏器官感染。
鼻咽部常见菌群： 链球菌（甲型或乙型）、绿脓杆菌、大肠杆菌、 葡萄球菌、肺炎球菌、流感杆菌等。
下呼吸道则在机体免疫功能的作用下自始至终 保持基本无菌状态。
PS：下呼吸道包括气管、支气管及肺泡。
痰培养结果
20世纪50年代以肺炎链球菌为主； 80年代后以革兰氏阴性杆菌为主：
如鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、 肺炎克雷伯杆菌、阴沟肠杆菌等。
痰液细菌学检查
痰液细菌学检验痰涂片镜检：选择痰标本中脓细胞成团块状分布，集中而不稠密，且周围无鳞状上皮细胞或无大量成团状分布的细菌球的区域为读片区，认真收寻视野中脓细胞聚集处的脓细胞胞浆中有无吞噬的细菌及细菌的染色排列特征.接种培养：血平板、巧克力平板、麦康凯/沙氏平板培养观察：一、G+菌：BA生长、Choc不生长、MecK不生长1、G+c菌：①葡萄球菌：淡黄色/白色，中等大小，较凸，规则圆形，β/γ溶血，较湿润，除金黄色葡萄球菌外，一般不具有临床意义；②微球菌：黄色/白色/橙色，中等大小，较凸，规则圆形，不溶血，较干燥，不易乳化较葡萄球菌生长缓慢，该菌一般无临床意义；③链球菌：白色/灰白色、凸起小菌落，β溶血为溶血型链球菌；灰白隆起中心扁平或凹陷，1.0-1.5mm大小的宽大а溶血为肺炎链球菌，该菌是最常见的肺部感染病原菌，在社区获得性感染中有重要的地位；细如针尖，白色凸起а溶血的为草绿色链球菌，自然咯痰标本中的草绿色链球菌一般不具有临床意义；④肠球菌：灰白，低凸，2.0mm左右之а溶血菌落，较湿润，但一般不具有临床意义；⑤口腔球菌：白色凸起较大菌落，不溶血，黏着，接种针挑之则整个菌落挑起，琼脂上不留痕迹。
该菌偶尔可引起肺部的严重感染，一般好发生于COPD病人和肺气肿病人；⑥孪生球菌：白色、凸起细小菌落，β溶血，生长慢48h仅0.2~0.4mm，在含羊血的MH琼脂上不生长。
该菌是上呼吸道的正常菌群组成之一，一般不导致肺部感染；2、G+ b—依靠溶血特征，菌落形态、菌落大小、菌体形态区分：①棒状杆菌：白色1.0-1.5mm左右大小，较干燥，不溶血/狭窄β溶血的为白喉或一般棒状杆菌；小而湿润，灰白/无色，半透明的为J-K棒状杆菌；灰白细小，β溶血的可能为假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌；除白喉杆菌外，假结核、化脓放线菌、溶血分泌杆菌是罕见的咽喉部病源菌，棒状杆菌一般不导致肺部感染；②乳杆菌：细小，白色凸起а溶血菌落，有特殊的酸臭味，口腔正常菌群，无临床意义；③芽孢杆菌：灰白大菌落，表面粗糙如毛玻璃状、蜡状、边缘不规则，不同种类菌落形态差异巨大，宽大β溶血。
痰标本细菌学检验
痰标本细菌学检验
细菌室
一、项目申请：
1、普通细菌培养：对于病房患者选择项目名称为“病房痰培养”，对于门急诊患者选择“门诊痰培养”。
如果临床怀疑奴卡菌等特殊病原体，需要在打印出的条码上注明目的病原菌，以便实验室延长培养时间和选择适当培养方法。
2、真菌培养：选择项目名称为“真菌培养”，标本种类选择“痰”。
3、不适于培养的病原菌：厌氧菌、军团菌、衣原体、支原体等，如果有疑问请与细菌室联系询问（电话2485）。
分枝杆菌培养为我院外送检验项目。
二、标本采集：
1、采集时间：尽量在抗生素使用前，以清晨留取的标本为更佳。
2、容器要求：螺旋口无菌塑料瓶。
3、采集方法：标本采集前应充分清洁患者口腔，如：漱口、刷牙等，有假牙的病人应取下假牙。
嘱附病人深咳，将痰液直接留到无菌瓶内。
容器瓶口旋紧勿泄漏。
4、将条码贴于标本瓶上，扫描记录采集时间。
三、送检要求：
1、标本采集后应及时（2小时内）送检。
标本若冷藏保存可能会影响对温度敏感细菌的检出。
2一天送检一次即可，不需同一天内连续送检多次，多余的送检标本视为不合格。
如遇特殊情况需多次送检时，请事先与细菌室联系。
3、常规送检时间为每周一至周五8点至16点30分，节假日顺延。
在常规时间以外如有送检要求，请事先与细菌室联系说明送检原因，经确认后再送检。
四、检验流程：
五、报告发放：
1、阴性报告：普通细菌培养2-3天，真菌培养1周，特殊病原菌延长相应时间。
2、阳性报告：4天，如遇细菌生长缓慢等特殊情况则延迟发放。
痰液标本细菌学检验(一)
痰液标本细菌学检验（一）关键词：细胞库菌株培养中心 atcc 北京标准物质网一、检验程序痰及呼吸道标本的细菌学检验程序见图34—1。
二、检验方法(一)显微镜检查1．一般细菌涂片检查挑取标本中脓性或带血部分涂片进行革兰染色镜检，描述观察到的细菌的染色性、形态及排列等特征，可发出初步报告。
2．结核分枝杆菌涂片检查挑取标本干酪样或脓性部分做抗酸染色和金胺“O”荧光染色，前者用油镜，后者用荧光显微镜检查。
具体操作详见第十五章分枝杆菌属检验。
3．放线菌及诺卡菌涂片检查将痰液用生理盐水反复洗涤数次，挑取黄色颗粒(硫黄颗粒)或不透明着色斑点，置玻片上并覆以盖玻片，轻压后置高倍镜下观察。
如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆呈放线状排列时揭去盖玻片，待干后做革兰染色及抗酸染色镜检。
4．下呼吸道其他标本检查支气管肺泡灌洗液等直接取自下呼吸道的标本，不易受上呼吸道杂菌的污染，涂片检菌的意义较大。
可取离心沉淀物进行革兰染色与抗酸染色检查。
(二)培养和鉴定1．痰培养标本的前处理于痰标本中加入一定量无菌生理盐水，剧烈振荡5～10秒后，将沉淀于管底的脓痰小片取出，置于另一试管中，同法再处理2次，可洗去痰中的正常菌群。
然后向洗涤过的痰液中加入等量pH 7. 6的1％胰酶溶液，放置35℃环境90分钟，使痰液均质化后备用。
2．培养基与培养环境(1)血琼脂平板：适用于分离多种细菌，需氧环境，可分离β-溶血性链球环境培养，分离肺炎链球菌和β-溶血性链球菌。
根菌，葡萄球菌；置于5％CO2据血琼脂平板生长的菌落特征及镜检形态，得出初步结果，再按各类细菌特性做进一步鉴定。
环境培养，常用于分离嗜血杆菌和脑膜(2)巧克力色琼脂平板：置于5％CO2炎奈瑟菌等有特殊营养需求的细菌。
(3)中国蓝琼脂平板／麦康凯平板：需氧环境培养，常用于分离肠杆菌科细菌。
(4)TTC-沙保弱培养基：需氧环境培养，用于分离白假丝酵母菌及其他酵母菌、诺卡菌、放线菌以及烟曲霉菌等。
痰液检查医学讲义
痰液颜色
常见病因
黄色
肺炎、肺脓肿、支气管扩张、肺结核、慢性支气 管炎
黄绿色
铜绿假单胞菌感染
红色、棕红色 呼吸道出血
痰中带鲜红血 肺癌、肺结核、支气管扩张等
铁锈色痰 肺炎球菌肺炎（大叶性肺炎）、肺梗死
粉红色泡沫痰 急性肺水肿、肺淤血
烂桃样灰黄色 肺吸虫病
棕褐色
阿米巴肺脓疡、慢性充血性心力衰竭
灰色、灰黑色 大量吸入煤炭粉尘或烟雾：矿工、锅炉工或长期 吸烟者
（2）染色标本显微镜检查 脱落细胞检查：常用瑞特染色或巴氏染色检查癌
细胞，找到癌细胞有助于肺癌的诊断。
细菌检查：一般细菌检查常用革兰染色，痰中可 见到的致病菌种类很多，如肺炎球菌、葡萄球菌 、肺炎杆菌、链球菌等。但确诊须经细菌培养和 鉴定。抗酸染色阳性见于结核病。
（1）颜色
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痰液检查医 学
主要内容
一、痰液标本的采集 二、痰液物理学检查 三、痰液显微镜检查
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思考与训练
一、痰液标本的采集
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留取痰液标本的具体要求： （1）一般应取清晨第一口痰。 （2）细菌培养需用无菌容器留取，抗酸杆菌应留24小时
痰液。
（3）细胞学检查尽可能留取含血的痰液。 （4）检查24小时痰量应将痰咯于无色广口瓶中，加少许
肺脓肿等。 血性：支气管扩张、肺结核、肺癌。
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思考与训练
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（1～4题共用备选答案） A．脓臭痰 B．草绿色痰 C．黄色脓痰 D．灰黑色痰 E．红棕色胶冻状痰
1．肺炎杆菌感染时病人的痰液常为 2．金黄色葡萄球菌病人的痰液常为 3．铜绿假单胞菌感染时病人的痰液常为 4．厌氧菌感染的痰液常为
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痰液标本细菌学检验（一）
关键词：细胞库菌株培养中心 atcc 北京标准物质网
一、检验程序
痰及呼吸道标本的细菌学检验程序见图34—1。
二、检验方法
(一)显微镜检查
1．一般细菌涂片检查挑取标本中脓性或带血部分涂片进行革兰染色镜检，描述观察到的细菌的染色性、形态及排列等特征，可发出初步报告。
2．结核分枝杆菌涂片检查挑取标本干酪样或脓性部分做抗酸染色和金胺“O”荧光染色，前者用油镜，后者用荧光显微镜检查。
具体操作详见第十五章分枝杆菌属检验。
3．放线菌及诺卡菌涂片检查将痰液用生理盐水反复洗涤数次，挑取黄色颗粒(硫黄颗粒)或不透明着色斑点，置玻片上并覆以盖玻片，轻压后置高倍镜下观察。
如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆呈放线状排列时揭去盖玻片，待干后做革兰染色及抗酸染色镜检。
4．下呼吸道其他标本检查支气管肺泡灌洗液等直接取自下呼吸道的标本，不易受上呼吸道杂菌的污染，涂片检菌的意义较大。
可取离心沉淀物进行革兰染色与抗酸染色检查。
(二)培养和鉴定
1．痰培养标本的前处理于痰标本中加入一定量无菌生理盐水，剧烈振荡5～10秒后，将沉淀于管底的脓痰小片取出，置于另一试管中，同法再处理2次，可洗去痰中的正常菌群。
然后向洗涤过的痰液中加入等量pH 7. 6的1％胰酶溶液，放置35℃环境90分钟，使痰液均质化后备用。
2．培养基与培养环境
(1)血琼脂平板：适用于分离多种细菌，需氧环境，可分离β-溶血性链球菌，葡萄球菌；置于5％CO
环境培养，分离肺炎链球菌和β-溶血性链球菌。
根
2
据血琼脂平板生长的菌落特征及镜检形态，得出初步结果，再按各类细菌特性做进一步鉴定。
(2)巧克力色琼脂平板：置于5％CO
环境培养，常用于分离嗜血杆菌和脑膜
2
炎奈瑟菌等有特殊营养需求的细菌。
(3)中国蓝琼脂平板／麦康凯平板：需氧环境培养，常用于分离肠杆菌科细菌。
(4)TTC-沙保弱培养基：需氧环境培养，用于分离白假丝酵母菌及其他酵母菌、诺卡菌、放线菌以及烟曲霉菌等。
(5)厌氧血平板：厌氧环境培养，用于培养厌氧菌。
(6)结核分枝杆菌培养基：需氧或5％～10％CO
环境培养，改良罗氏培养基、
2
米氏7H10培养基或其他合适的培养基，用于培养结核分枝杆菌。
环境培养，药用炭酵母琼
(7)军团菌专用培养基：置于2．5％～5. 0％CO
2
脂(CYE)培养基、F-G琼脂，用于培养军团菌。
3．标本的培养
(1)普通细菌培养：将处理后的痰标本接种于血琼脂平板、中国蓝琼脂平板／麦康凯平板、巧克力色琼脂平板上，分别放入普通环境和5％～10％CO
环境
2
中，35℃培养18～24小时，观察菌落特征，并涂片进行革兰染色，根据菌体的形态特点做进一步鉴定。
有条件或必耍时进行厌氧培养。
具体操作详见第十七章厌氧性细菌检验。
(2)结核分枝杆菌培养：将处理后的痰标本接种于改良罗氏培养基或米氏
7H10培养基，置35℃、5％～10％CO
环境中培养。
根据初步生长出菌落时间和
2
是否产生色素等特点，加以判定。
(3)标本的菌落计数培养：液体标本，如保护性支气管肺泡灌洗吸出液(PBAL)、气管穿刺抽吸液(TTA)、保护性标本刷洗液(PSB)标本或定量稀释均质化处理的痰标本，可做菌落计数培养。
常用的改良Gould法是一种半定量的方法，先将平皿分为A、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等4个区，阻3mm接种环取一满环液化痰液(或定量采集的PBAL、TTA、PSB)接种于血琼脂平板或巧克力色琼脂平板，先在A区画线20~40条，然后在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ区分别画线4条。
在做Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分区画线前，接种环均须经烧灼灭菌。
接种后的培养基置35℃培养1 8～20小时，然后分别计数各区某一特征的菌落数，查阅表34—3即得出每毫升痰液中某一特征菌落细菌的对应数量。
一般认为痰液标本中，某种细菌浓度达到≥107CFU／ml，可视为病原菌；<104，可视为污染菌；若介于105～106CFU／ml两者之间时，要连续分离培养两次阻上，仍为105～106CFU／ml时，亦认为是病原菌。
例如：一份痰标本，经均质化处理过程已经进行了1：16倍稀释，按上述菌落计数方法操作，培养24小时后，某一特征最优势菌落Ⅰ区生长5个(相当于90个)，查表对应于10000行，计算(×103)得菌落数≥107CFU/ml，由此可以判
断该特征菌落为病原菌。
提倡做菌落计数培养有两方面原因，其一，有的标本中细菌数量可能较少，需通过茼落计数判断是否足以引起化脓性感染；其二，有的标本污染正常菌群的可能性较大，需通过菌落计数判断哪一种菌落是引起化脓性感染的病原菌。
痰标本细菌菌落计数培养还没有列入统一规范，供做参考。