多糖结构分析
多糖的结构分析方法包括
多糖的结构分析方法包括多糖的结构分析方法是确定多糖化合物的组成和连接方式的关键工具。
一般而言，多糖的结构分析可分为化学方法和生物方法两大类。
下面将对这些方法进行详细阐述。
一、化学方法：1. 水解分析法：多糖可通过水解反应将其分解为单糖组成部分。
常用的水解剂有酸、碱及酶等。
水解之后，通过测定生成的单糖或小分子产物的性质，如比旋光度、红外光谱等，可以了解多糖的结构。
2. 艳蓝法：多糖与一些特定的染料反应，形成稳定的染色复合物，从而测定多糖的含量。
例如，通过酚-硫酸法，可以用磺酸依托品氧化苄功酸钠抗络常数来定量多糖。
3. 光谱法：红外光谱、紫外光谱、核磁共振等技术可用于多糖的结构分析。
红外光谱可用来分析反映多糖内部结构的原理基团，紫外光谱用于分析多糖的存在和测定多糖的含量，核磁共振用于确定多糖的空间结构。
4. 色谱法：气相色谱、液相色谱和凝胶渗透色谱等方法可用于多糖的分离和定性。
例如，利用薄层色谱法，可分离多糖混合物，并通过染色剂的显色来判断多糖的组成。
二、生物方法：1. 酶降解法：通过加入特定酶，如淀粉酶、纤维素酶、葡萄糖酸酶等，可对多糖进行降解。
通过观察降解过程中生成的产物，可以了解多糖的结构。
此外，酶处理还可用于多糖的修饰。
2. 糖基转移酶法：多糖通过与糖基转移酶反应，可实现特定糖基的转移。
通过测定生成的产物，可以推测多糖的结构。
3. 色谱法：包括气相色谱、高效液相色谱等。
例如，通过细胞外多糖水解产生的单糖组成通过气相色谱或液相色谱分析，可以了解多糖的结构。
4. 核磁共振波谱法：包括质子核磁共振、碳13核磁共振等。
通过测量样品在强磁场下的核磁共振信号，可以获得丰富的结构信息。
此外，还有一些其他方法如质谱分析、电泳分析等都可用于多糖的结构分析。
总之，多糖的结构分析需要利用多种方法互相印证，综合分析，才能获得准确的结构信息。
以上介绍的方法只是常用的几种，请根据研究的具体需要选择合适的方法进行分析。
真菌多糖的化学结构研究
2、主链上糖苷键决定多糖活性
大多抗肿瘤活性的葡聚多糖：(1→3)糖苷键连接。 香菇多糖
3、主链构型决定多糖活性
抗肿瘤活性的多糖：β-(1→3)-D-葡聚糖的主链结构。
[1]孔繁利.碱提糙皮侧耳水溶性多糖WPOP-N1的结构解析及抗肿瘤机制研究[D].吉林大学，2012
4、多糖支链长度对活性的影响
一般支链较短的多糖具有抗肿瘤活性
参考文献
[4] Shao-Ping Nie, Steve W. Cui, Aled O. Phillips, et al. Elucidation of the structure of a bioactive hydrophilic polysaccharide from Cordyceps sinensisby methylation analysis and NMR spectroscopy[J].Carbohydrate Polymers. 2011,84:819– 899.
[5] Himani Bhatia, P.K.Guptab, P.L. Soni. Structure of the oligosaccharides isolated from Prosopis juliflora (Sw.)DC. seed polysaccharide[J]. Carbohydrate Polymers.2014,101:438– 443.
2.2、单糖组成分析
XiuJu Du[2]等采用了 HPAEC-PA对3种桦褐 孔菌子实体多糖进行了 单糖组成分析。
表1 桦褐孔菌多糖的HPAEC-PAD分析
[3] XiuJu Dua, et al. International Journal of Biological Macromolecule.2013,62: 691– 696.
多糖结构分析
多糖结构研究方法多糖及其复合物是来自于高等动、植物细胞膜和微生物细胞壁中的天然大分子物质之一，自然界含量丰富，与人类生活紧密相关，对维持生命活动起至关重要的作用。
多糖和核酸、蛋白质、脂类构成了最基本的4类生命物质。
由于多糖的生物活性与多糖的结构关系密切，因此清楚认识多糖的结构是进行多糖研究和利用的基础。
多糖结构比蛋白质和核酸的结构更加复杂，可以说是自然界中最复杂的生物大分子。
从化学观点来看，多糖结构解析最大的难点就在于其结构的复杂性。
糖的结构分类可沿用蛋白质和核酸的分类方法，即多糖的结构也可分为一级、二级、三级和四级结构。
与蛋白质或核酸大分子相比，糖链的一级结构“含义”要十分丰富。
测定糖链的一级结构，要解决以下几个问题：(1)相对分子质量；(2)糖链的糖基组成，各种单糖组成的摩尔比；(3)有无糖醛酸及具体的糖醛酸类型和比例；(4)各单糖残基的D-或L．构型，毗喃环或呋喃环形式；(5)各个单糖残基之间的连接顺序；(6)每个糖苷键所取的a-或B．异头异构形式；(7)每个糖残基上羟基被取代情况：(8)糖链和非糖部分连接情况；(9)主链和支链连接位点：（10)糖残基可能连接硫酸酯基、乙酰基、磷酸基、甲基的类型等。
多糖的二级结构是指多糖主链间以氢键为主要次级键而形成的有规则的构象，与分子主链的构象有关，不涉及侧链的空间排布；多糖的三级结构和四级结构是指以二级结构为基础，由于糖单位之间的非共价相互作用，导致二级结构在有序的空间里产生的有规则的构象四。
多糖结构的分析手段很多。
不仅有仪器分析法，如红外、核磁共振、质谱等，还有化学方法，如完全酸水解、部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化反应等，以及生物学方法，如特异性糖苷酶酶切、免疫学方法等。
1质谱(MS)由于MS法在糖链结构分析中具有快速灵敏，样品用量少、结构信息直观的特点而得到越来越广泛的应用。
近年来各种软电离技术的诞生，如快原子轰击质谱(FAB—MS)，电喷雾质谱(ESI—MS)，基质辅助激光解析离子化质谱(MALDI-MS)等，使得糖结构分析的研究取得了日新月异的发展。
多糖高级结构研究方法
1. 红外光谱法（IR）红外光谱在多糖的结构分析上的应用主要是确定糖苷键的构型以及常规官能团。
如：多糖化合物在890cm- 1处吸收是β-吡喃糖苷键特征峰，而820 cm- 1和850cm- 1则是α-吡喃糖苷键特征峰。
2.核磁共振法( NMR)主要用于确定多糖结构中糖苷键的构型以及重复结构中单糖的数目。
3. 原子力显微镜（AFM）该技术是在扫描隧道显微镜( STM )基础上发展起来的一种新颖的物质结构分析方法。
其用很尖的探针扫描待测样品表面, 探针附在一根可活动的微悬臂的底端上, 当探针与样品接触时, 产生的微小作用力引起微悬臂的偏转, 通过光电检测系统对微悬臂的偏转进行检测和放大, 信号经过转换可得到样品的三维立体图像。
如：该技术研究了香菇多糖在不同浓度NaOH 溶液下构型和构象的转变。
4. X- 射线衍射法(XRD)X - 射线衍射法可得到晶体的晶胞参数和晶格常数, 再加上立体化学方面的信息，包括键角、键长、构型角和计算机模拟, 就可以准确的确定多糖的构型。
5. 圆二色谱( CD)从CD 可以知道绝对构型、构象等信息, 是研究多糖的三维结构的有效办法。
中性多糖因缺少一般紫外区可提供信息的结构, 难以直接得到由CD 谱提供的结构信息，通常可进行衍生化或者将多糖与刚果红络合后测定。
6. 快原子轰击质谱( FAB - M S)FAB- MS适合于分析极性大、难挥发、热不稳定的样品。
在快原子轰击过程中, 样品通过正离子方式增加一个质子或阳离子, 或通过负离子方式失去一个质子产生准分子离子作为谱图的主要信号, 并给出反映连接顺序等信息的碎片。
因此FAB- MS可用来测定寡糖链的分子量。
通过FAB- MS形成[M - H ] - 离子是确定寡糖中单糖组成的一种方便的方法。
7. 气质联用(GC - M S)气相色谱与质谱联用可以得到有关单糖残基类型、链的连接方式、糖的序列和糖环形式、聚合度等多种结构信息。
多糖化学结构鉴定方案总结
经过分级纯化的多糖在测定结构前须检查其纯度及测定分子量。
检查纯度最常用的判断方法：（1）用G C 、HPLC测定组成多糖的单糖的摩尔比是否恒定。
用不同的柱型测定结果更为可靠。
（2）电泳只出现一条带。
如可用聚丙烯酰胺凝胶电泳、乙酸纤维素薄膜电泳及玻璃纤维纸电泳。
对于中性多糖可采用高压电泳，以硼酸盐为缓冲液，可增大其迁移速度。
（3）凝胶柱层析图呈现对称的单峰。
若有“拖尾”现象，说明其均一性不够好。
阴离子交换层析纯化用DEAE一纤维素52(2.6x100cm)柱层析,0.lmol/LNaCl洗脱,流速6ml/h,按2ml一管分部收集,苯酚一硫酸法逐管检测,绘制收集体积与糖含量之间的关系曲线。
看是否有单一对称峰。
按照Ye等报道,采用DEAE一52一纤维素交换柱层析法(2.6x30cm)对鲍氏层孔菌菌丝体粗多糖进行初步分离。
DEAE一纤维素凝胶预处理:称取DEAE一52一纤维素凝胶干粉,加入约10倍体积质量比(ml/g)的0.5mol/LNa0H溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至pH值近中性;再用相同体积的0.5mol/LHCI溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至pH值近中性;最后用相同体积的0.5mol/lNaOH溶液再浸泡30分钟,用大量去离子水反复浸洗至pH值中性。
处理完毕后,进行湿法装柱,用去离子水0.5mol/LNaCl溶液,去离子水依次分别平衡(流速1.0ml/min)2一3个柱体积备用.糖样100mg溶于5ml的去离子水中,离心除去不溶物,上样于DEAE一52一纤维素阴离子层析柱(2.6x30cm,Cl-1型),分别采用去离子水0.1和0.3mol/LNaCI溶液进行分段梯度洗脱,流速1.0ml/min,自动收集器分部收集(10ml/管),每梯度20管。
用硫酸一苯酚法跟踪检测各管多糖含量(490nm处吸收值),以收集的管数为横坐标。
吸光值(490nm)为纵坐标绘制DEAE 一52一纤维素色谱柱洗脱曲线。
《多糖结构解析》课件
质谱技术
通过电离多糖分子并测量其质量 ，可以获得多糖的分子量和组成 信息。
核磁共振技术
通过测量多糖分子中氢原子或其 他原子周围的磁场，可以解析多 糖的精细结构。
生物技术分析法
凝集素结合法
利用凝集素与多糖的特异 性结合，分离纯化多糖， 并进行结构分析。
抗体技术
利用抗体与多糖的特异性 结合，进行多糖的定性和 定量分析。
THANKS
感谢观看
亲和色谱法
利用多糖分子与配体之间的特 异性亲和力，将多糖分离纯化
出来。
分离纯化过程中的注意事项
注意温度和pH值
在提取和分离纯化过程中，要控制好温度和pH值 ，以保证多糖的稳定性和活性。
避免长时间高温
长时间高温会导致多糖的结构发生变化，影响其 生物活性和稳定性。
注意防止污染
在分离纯化过程中，要避免污染，如微生物、杂 质等，以保证多糖的纯度和质量。
03
多糖的结构解析方法
化学分析法
01
02
03
酸水解
在酸的作用下，将多糖水 解成单糖，然后进行衍生 化反应，通过气相色谱或 液相色谱进行分析。
碱水解
在碱的作用下，使多糖水 解成寡糖和单糖，同样需 要进行衍生化反应，再进 行色谱分析。
酶解
利用特异性酶将多糖水解 成特定结构的片段，再进 行分析。
物理分析法
食品工业
食品添加剂
01
多糖可作为增稠剂、稳定剂、口感改善剂等用于食品加工中，
提高食品品质和稳定性。
功能性食品
02
利用多糖的生理活性，开发具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖等功
能的食品。
食品包装材料
03
多糖可制成可食用的食品包装材料，具有良好的阻隔性能和环
多糖结构解析的方法
多糖结构解析的方法多糖化合物的结构解析是糖化学和生物化学领域的中心问题之一、因为多糖的结构决定着它们的功能和生物活性。
多糖结构解析的方法可以分为物理方法和化学方法。
一、物理方法：1.光谱学方法：光谱学方法是多糖结构解析中常用的一种方法。
包括紫外光谱、红外光谱、荧光光谱和核磁共振等方法。
（1）紫外光谱：多糖在紫外光谱上表现出特有的吸收峰，可以确定它们的环状结构。
（2）红外光谱：红外光谱是解析多糖结构的重要手段，通过测定多糖分子中的官能团振动频率和强度，可以得到多糖分子的化学结构和键合特性。
（3）荧光光谱：荧光光谱可用于表征多糖的发光行为和其与其他生物分子的结合情况，从而推测其结构和功能。
（4）核磁共振：核磁共振是解析多糖结构的重要手段之一，通过测定多糖中氢、碳、氮等元素的核磁共振信号，可以确定多糖的类型和键合方式。
2.比色法：比色法是通过观察多糖与一些特殊试剂产生的颜色变化来判断多糖的结构。
比如，酚硫酸法可以用于检测多糖的含量和环状结构。
3.色谱法：色谱法是多糖结构解析的重要方法之一、包括薄层色谱、柱层析、气相色谱和高效液相色谱等方法。
通过对多糖的分离和分析，可以得到多糖的组成和分子量信息。
二、化学方法：1.普通化学方法：多糖的碳水化合物性质决定了其一些基本反应，比如酸水解、酶降解、氧化还原等反应。
利用这些反应可以推测多糖的结构。
2.酶法：酶法是多糖结构解析的重要方法之一、不同酶对多糖的酶解反应具有特异性，通过观察酶解产物，可以推测多糖链的连接方式和单糖的种类。
3.质谱法：质谱法是近年来发展起来的一种多糖结构解析方法，主要有质谱分析和质谱成像两种方法。
通过质谱技术可以得到多糖的精确分子量和分子结构，尤其适用于大分子多糖的分析。
综上所述，多糖结构解析的方法多种多样，可以从不同的角度揭示多糖的化学成分和结构特征。
尽管目前多糖结构解析仍然是一个具有挑战性的问题，但随着新技术的发展，相信将能更加准确和全面地揭示多糖的结构和功能。
多糖结构构象及生物活性概述
3·2 3·2·2部分酸水解
• 通过部分酸水解的方法将多糖水解成易于分 析的小片段。一般来说， 析的小片段。一般来说，吡喃型糖基比呋喃型糖 基稳定，己糖比戊糖稳定， 基稳定，己糖比戊糖稳定，1-6糖苷键对酸水解相 对稳定，主链的糖基比支链的糖基稳定。因此， 对稳定，主链的糖基比支链的糖基稳定。因此， 通过部分酸水解可以判断糖苷键的断裂次序， 通过部分酸水解可以判断糖苷键的断裂次序，推 断可能的糖苷键类型。 断可能的糖苷键类型。多糖可在温和条件下水解 或者在剧烈条件（高温、较高浓度酸）下水解。 或者在剧烈条件（高温、较高浓度酸）下水解。 在完全水解前，终止水解， 在完全水解前，终止水解，可得到不同的寡糖片 段和可能的多糖主链，然后综合采用单糖测定、 段和可能的多糖主链，然后综合采用单糖测定、 甲基化分析和核磁共振等方法可深入解析多糖结 构。
•
多糖结构的分析手段很多， 多糖结构的分析手段很多，不仅有仪器 分析法，如红外、核磁共振、质谱等， 分析法，如红外、核磁共振、质谱等，还有 化学方法，如部分酸水解、完全酸水解、 化学方法，如部分酸水解、完全酸水解、高 碘酸氧化、 降解、 碘酸氧化、Smith降解、甲基化反应等，以 降解 甲基化反应等， 及生物学方法，如特异性糖苷酶酶切、 及生物学方法，如特异性糖苷酶酶切、免疫 学方法等（见表1） 学方法等（见表 ）
表1 多糖的结构分析方法
3·1 3·1 相对分子质量的测定
• 多糖的相对分子质量可以用量均相对分子质 Mw）、数均相对分子质量（Mn）、 ）、数均相对分子质量 ）、重均相 量（Mw）、数均相对分子质量（Mn）、重均相 对分子质量（Mw）和粘均相对分子质量（Mv） 对分子质量（Mw）和粘均相对分子质量（Mv） 表示。 表示。 目前测定多糖相对分子质量的方法主要有渗 透压法、蒸汽压法、端基法、光散射法、黏度法、 透压法、蒸汽压法、端基法、光散射法、黏度法、 超过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、 超过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、凝胶过滤法 HPGPC（高效凝胶渗透色谱法） 和HPGPC（高效凝胶渗透色谱法）等。HPGPC 测定多糖相对分子质量具有快速、 测定多糖相对分子质量具有快速、高分辨率和重 现性好等优点，在国内外得到广泛使用。 现性好等优点，在国内外得到广泛使用。
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一：多糖中的单糖组分分析一般对多糖进行完全水解，水解条件：封管0.5~3M硫酸或1~6M盐酸，80℃~100℃水解2.5~8h 即可。
或控制水解条件，进行逐步水解，如封管0.025M硫酸，100℃水解15min，30min，45min 等，水解液用碳酸钡或氢氧化钡中和，滤液浓缩后可用纸层析、薄层层析、气相层析或高压液相层析等鉴定。
二：相邻单糖基连接方式分析将甲基化多糖水解得到甲基化的单糖，而此单糖上甲基化之羟基所在的碳原子就是连接键所在。
高碘酸氧化是定量反应，Smith降解是将高碘酸氧化产物进行还原，酸水解或部分水解，从高碘酸的消耗量和不同产物的生成，便可进行糖苷键位置的判断-产物中若有一分子比例的甲酸生成而消耗两分子比例的高碘酸根时，表明多糖的非还原末端或非末端部分有1-6苷键相连的单糖基存在；产物中若有赤藓醇生成，则提示有1-4结合苷键；若有甘油生成，有1-6、1-2结合的苷键或有还原性末端葡萄糖基等；若产物中能检出单糖，如葡萄糖、半乳糖、甘露糖等，则有1-3苷键存在。
结合¹³C-NMR确定连接位置。
三：端基碳苷键构型分析1：酶解实验：不被淀粉酶水解的多糖，无α-苷键，与纤维素酶有作用者，存在β-苷键。
2；IR：α-型差向异构体的C-H键在844±8cm‾¹处有一个吸收峰；β-型的C-H键在891±7cm‾处有一个吸收峰。
但是，海藻糖、阿洛糖和异阿洛糖的α-型和β-型同时存在的情况下，就不能以次来判断。
3：¹H-NMR：端基碳的δ值大于5.00ppm者，糖苷键为α-型，小于5.00ppm者，则为β-型。
4；¹³C-NMR：α-型连接的C₁化学位移在97-101ppm，β-型的在103~105ppm。
对甘露聚糖不能用化学位移判断α-型或β-型。
可用裂分常数决定，一般¹Jｃ-ｈ=170HZ，为α-型，160HZ 者为β-型。
四：不同苷键组成比例及直链或环状结构分析不同糖苷键糖基比例分析可通过测¹³C-NMR光谱相对面积来完成。
可通过连接苷键的C-1相对峰面积的测定确定苷键糖基的比例。
α-（1-4）在直链和环状结构中其C₁与C₄的化学位移值均有差异，与文献值对照便可判断是直链或是环状结构。
在IR中：一般地，吡喃糖苷在1100-1010 cm‾¹间有三个强吸收峰，而呋喃苷在相应区域只有两个峰。
以上摘自盛家荣等多糖的提取、分离及结构分析广西师院学报（自然科学版）1999年12月第16卷第4期一：多糖的纯度检查：1：比旋度法：比旋度相同者为均一组分。
2：超离心法：多糖在离心力场作用下形成单一区带，说明微粒具有相同沉降速度，表明其分子的密度、大小和形状相似。
3：高压电泳法。
4：凝胶过滤法：由于凝胶具有一定大小的孔径，不同形状和大小的多糖分子在凝胶层析柱中移动速度不同，其流出液经示差检测仪检测，如只有一个峰，则表明为均一组分。
5：纸层析法：取多糖水溶液点样于新华中速或慢速滤纸上，在室温下展开，显色，进行纯度检测。
6:冻融法:取多糖溶液经过反复冻融，应无沉淀析出。
7:光谱扫描法:采用紫外光谱在180～640nm波长间扫描，在260nm、280nm处应无核酸和蛋白质的特征吸收峰。
二：多糖的定性检测1 理化性质主要包括溶解性、硫酸-咔唑反应(阳性)、蒽酮-硫酸试剂反应(阳性)、苯酚-硫酸试剂反应(阳性)、斐林试剂反应(还原糖试验)、双缩脲试验(阴性)、碘-碘化钾反应(阴性)、茚三酮反应(阴性)、三氯化铁反应、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)络合反应、比旋光度、特性粘度、电导率及PH值等。
2 红外光谱(IR)分析红外光谱成是糖结构研究重要手段之一。
主要用于不同糖的鉴别、糖苷键及糖构型的确定、糖键上主要取代基的识别等。
常用的是将干燥的多糖用KBr压片法在400～4000cm 区间扫描做红外光谱分析。
3 核磁共振(NMR) 糖的核磁共振波谱主要是¹H、¹³C核磁共振波谱。
多糖在¹HNMR谱图上，大多集中在δ4．0～5．5ppm范围内。
而¹³C NMR主要应用于多糖结构分析，如异头碳的构型问题、多糖残基中取代位置和分枝点的确定、多糖中各残基种类和比例的确定等。
与用于糖类化合物结构研究的经典方法相比，高磁场NMR方法能产生较完全和详细的结构信息，并且可以在有或没有背景知识的情况下获得糖类化合物最完全的结构信息及其在溶液中或固态的行为，同时还可通过计算机把样品的¹H和¹³C NMR谱数据与数据库信息进行比较来确定糖类化合物的结构。
此外，2D-NMR、NOE及¹N、³¹P的NMR数据对糖链一级结构及其溶液构象的分析，也常被利用。
糖类化合物的NMR谱参照标准通常是四甲基硅烷(TMS)，测定的溶剂多是中性或碱性重水(D2O)，但在非质子溶剂如氘代二甲亚砜、氘代吡啶中，可获得分辨率较好的谱图。
三：多糖的定量检测1:直接测定多糖含量:多采用高效毛细管电泳法、高效液相色谱法和酶法等进行多糖含量的测定。
2:利用组成多糖的单糖的性质进行测定其中利用单糖缩合反应而建立的方法最多。
（1）显色剂-酸法：多糖在酸作用下水解、脱水生成糖醛类化合物，与酚类、芳胺类等缩合成有色化合物。
根据所用强酸和显色剂的不同，这类方法主要有9种：2％蒽酮硫酸溶液、硫酸；二苯胺醋酸溶液、盐酸；间苯二酚乙醇溶液、盐酸；地衣酚乙醇溶液、盐酸；80％苯酚水溶液、硫酸；2％a-萘酚乙醇溶液、硫酸；色氨酸、硫酸；3％水合L-半胱氨酸盐酸盐、硫酸；咔唑、硫酸。
也有采用苯酚-硫酸法加酶联免疫测定仪快速测定多糖含量的。
（2）滴定法：取多糖水解液，加入指标剂，滴定经标定过的溶液，根据样品水解液消耗体积，计算其含量。
常用的滴定方法有斐林氏滴定法、间接碘量滴定法、氧化还原滴定法等。
3 :DNS法(3，5二硝基水杨酸比色法) 利用与多糖水解产物还原糖共热后还原成棕红色氨基化合物，于540nm处有特征吸收。
4 重量测定法先用80％的乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰性成分，然后用水提取其中所含的多糖类成分。
5 生化分析法将多糖水解，再用自动生化分析仪测定多糖含量，具有灵敏快速、样品用量少、精密等优点。
6 石墨炉原子吸收光谱法(GFAAS) 如采用阿利新蓝(Alcian Blue)与尿样中氨基多糖(GAG)在PH=5．8的醋酸钠溶液中，发生沉淀反应生成GAG铜复合物。
离心，分离沉淀物，以石墨炉原子吸收光谱法测定沉淀物中铜含量，间接计算GAG含量。
四：多糖的结构分析1 糖的组成分析多糖样品经水解进行单糖的组成分析。
纸层析将多糖溶于水后，点样于层析纸上，经展开显色后，与已知糖的斑点颜色及Rf值进行比较而定性鉴定，或将斑点洗脱下来，用常用的微量分析方法定量测定。
薄层色谱法(TLC) 操作简单、快速、经济、可靠，且可同时鉴别多个样品，独具特色，与扫描技术，配合数码成像和数据处理，还可瞬间形成轮廓图谱，并给出各峰的积分值，加大了信息量，从而提高综合分析能力。
分离糖的TLC有硅胶色谱、纤维素色谱、硅藻土色谱及氧化铝色谱。
由于糖是多羟基化合物，极性强，容易吸附，多采用含有无机盐水溶液制备硅胶薄板，使硅胶薄层吸附能力降低，斑点集中，对分离有所改善。
高效液相色谱法(HPLC) 具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高，易于实现自动化等特点。
中药样品中含有的成分绝大多数均可在高效液相色谱仪上进行分析检测，且它给出的是高分辨率的轮廓图谱，重现性好，操作相对容易，而且是封闭系统色谱，在线操作外界影响小，色谱稳定性好，在线检测设备可选性较大。
因此HPLC在药品的质量控制(如主要成分的定性定量分析、杂质的限量检查和测定、稳定性考察等)、中药的成分研究等方面都是重要的分析手段。
HPLC在多糖类药物中的应用主要在于多糖含量的测定、单糖组成分析及纯度检测。
气相色谱法(GC)具有高效、高选择性、高灵敏度、用量少、分析速度快等优点，是多糖结构分析中最重要的手段之一。
它与质谱联用可以得出有关单糖残基类型、键的连接方法、糖的序列和糖环形式、聚合度等多种结构信息。
GC要求试样具有良好的挥发性和热稳定性，多糖本身不能在高温下直接挥发，因而需要将大分子多糖降解为结构单糖或寡糖，并且将其衍生成具有易挥发、对热稳定的衍生物。
毛细管电泳法(CE)快速、高效和高灵敏度、所需样品少等特点正被广泛应用。
一般多糖经酸或酶水解后进行CE，与标准品对照后计算出各单糖的峰面积进而推算出其单糖组成及其比率。
定性分析主要通过进行多糖的指纹图谱来确定糖组成结构的特征。
定量分析目前只限于多糖中某特定功能团和组成多糖各单糖的定量分析。
2 质谱在多糖结构解析上的应用近年发展了各种软电离技术，如化学电离(I)、场致电离(FI)、场解析电离(FD)、化学解析或称直接化学电离(DCI)、快速原子轰击法(FAB)以及电喷雾电离质谱(ESI—MS)和基质辅助的激光解析质谱(MALDI—MS)，用飞行时间(TOF)检测器来检测。
应用质谱技术如联动扫描、MS／MS方法、不同衍生化处理、同位素标记方法、GC／MS和LC／MS以及各软电离技术的配合使用，质谱法在糖的序列分析和结构鉴定研究中正越来越起着重要作用。
3 X一射线纤维衍射在多糖构型分析中应用X-射线纤维衍射与计算机模拟技术相结合可以从原子水平对多糖分子结构进行分析。
大多数多糖均不能形成单晶，不适用于常规X-射线单晶衍射。
而X-射线衍射的另一方式纤维衍射则在这方面展示了越来越大的应用空间，再加上立体化学方面的信息包括键角、键长、构型角和计算机模拟，就可以准确地确定多糖的构型。
尽管研究多糖的立体构型有多种方法如电子衍射、旋光测定、核磁共振等，但X-射线纤维衍射与计算机模拟技术相结合仍不失为当前确定多糖立体构型最为有力的工具。
4 分子量测定1 渗透压法利用膜渗透压计测定范围在在1万～50万之间的多糖分子量。
采用渗透压法测定分子量，要求样品内不含分子量小至能透过半透膜的物质。
2 蒸气压法利用蒸气压渗透计测定范围在500～10000之间的多糖分子量。
3 端基法其基本原理是测定单位重量样品中所含可测端基之数，计算检样的分子量。
常用的测定多糖还原端基的定量分析方法有3，5二硝基水杨酸比色法、碱性铜盐试剂反应滴定法、多糖转化为氰醇测定法等。
4 光散射法采用光散射分子量测定仪进行分子量测定，其关键在于所要测定的溶剂和溶液的除尘，常用方法是超离心沉降或过滤处理法等。
5 粘度法粘度法分子量测定先是测定样品特性粘度，然后通过换算方程，即经验式η=KMª。