多糖结构的分析
多糖的功能

多糖的功能多糖是一类具有较高分子量的复杂有机化合物,由许多单糖分子通过糖苷键连接而成。
多糖在生物体内发挥着重要的功能,具有多样性和多功能性,广泛存在于植物、动物和微生物中。
本文将从多糖的结构、分类和功能等方面进行探讨。
一、多糖的结构多糖由若干个单糖分子通过糖苷键连接而成,单糖是多糖的基本单元。
常见的单糖有葡萄糖、果糖、半乳糖等。
多糖的结构可以是线性的,也可以是分支的。
不同的单糖组合方式和连接方式决定了多糖的结构和性质。
二、多糖的分类根据多糖的组成和结构特点,可以将多糖分为多种不同的类别。
常见的多糖分类包括淀粉、纤维素、糖类、胶质等。
淀粉是植物中储存能量的多糖,在人体消化后可以提供葡萄糖供能。
纤维素是植物细胞壁的主要成分,对于人体的消化吸收起到重要作用。
糖类是一类具有特殊功能的多糖,如乳糖在人体内可以被乳糖酶分解为葡萄糖和半乳糖。
胶质是一类具有胶状特性的多糖,广泛应用于食品工业和医药领域。
1. 能量供应:多糖是生物体内重要的能量来源,如淀粉在植物中储存能量,在人体内消化后可以被转化为葡萄糖提供能量。
2. 结构支持:纤维素是植物细胞壁的主要成分,赋予植物细胞结构支持和稳定性。
在人体内,纤维素可以增加食物的体积,促进肠道蠕动,对消化道健康有益。
3. 生物识别:多糖在生物体内扮演着重要的生物识别和信号传递的角色。
例如,血型抗原就是一种特定的多糖结构,可以被人体免疫系统识别。
4. 免疫调节:多糖可以影响机体的免疫系统,调节免疫功能。
一些多糖具有免疫增强和抗肿瘤作用,被广泛应用于药物和保健品领域。
5. 胶凝性:胶质是一类具有胶状特性的多糖,具有优良的胶凝性和黏附性。
胶质广泛应用于食品工业、医药领域和生物工程领域。
6. 水合性:多糖具有较强的水合性,可以吸附和保持水分。
在食品工业中,多糖可以用作增稠剂和保湿剂。
多糖具有多样性和多功能性。
它们不仅是生物体内重要的能量来源,还能提供结构支持、参与生物识别和免疫调节等功能。
多糖的结构分析方法包括

多糖的结构分析方法包括多糖的结构分析方法是确定多糖化合物的组成和连接方式的关键工具。
一般而言,多糖的结构分析可分为化学方法和生物方法两大类。
下面将对这些方法进行详细阐述。
一、化学方法:1. 水解分析法:多糖可通过水解反应将其分解为单糖组成部分。
常用的水解剂有酸、碱及酶等。
水解之后,通过测定生成的单糖或小分子产物的性质,如比旋光度、红外光谱等,可以了解多糖的结构。
2. 艳蓝法:多糖与一些特定的染料反应,形成稳定的染色复合物,从而测定多糖的含量。
例如,通过酚-硫酸法,可以用磺酸依托品氧化苄功酸钠抗络常数来定量多糖。
3. 光谱法:红外光谱、紫外光谱、核磁共振等技术可用于多糖的结构分析。
红外光谱可用来分析反映多糖内部结构的原理基团,紫外光谱用于分析多糖的存在和测定多糖的含量,核磁共振用于确定多糖的空间结构。
4. 色谱法:气相色谱、液相色谱和凝胶渗透色谱等方法可用于多糖的分离和定性。
例如,利用薄层色谱法,可分离多糖混合物,并通过染色剂的显色来判断多糖的组成。
二、生物方法:1. 酶降解法:通过加入特定酶,如淀粉酶、纤维素酶、葡萄糖酸酶等,可对多糖进行降解。
通过观察降解过程中生成的产物,可以了解多糖的结构。
此外,酶处理还可用于多糖的修饰。
2. 糖基转移酶法:多糖通过与糖基转移酶反应,可实现特定糖基的转移。
通过测定生成的产物,可以推测多糖的结构。
3. 色谱法:包括气相色谱、高效液相色谱等。
例如,通过细胞外多糖水解产生的单糖组成通过气相色谱或液相色谱分析,可以了解多糖的结构。
4. 核磁共振波谱法:包括质子核磁共振、碳13核磁共振等。
通过测量样品在强磁场下的核磁共振信号,可以获得丰富的结构信息。
此外,还有一些其他方法如质谱分析、电泳分析等都可用于多糖的结构分析。
总之,多糖的结构分析需要利用多种方法互相印证,综合分析,才能获得准确的结构信息。
以上介绍的方法只是常用的几种,请根据研究的具体需要选择合适的方法进行分析。
多糖的结构

多糖的结构一、多糖的概念多糖是由许多单糖分子通过糖苷键连接而成的大分子化合物。
它们是生物体内重要的能量来源,也是构成细胞壁、细胞膜和组织结构的重要成分。
多糖可以分为两类,即多糖和寡糖,其中多糖由许多单糖分子组成,而寡糖则由较少的单糖分子组成。
二、多糖的结构多糖的结构非常多样,可以是直链状、分枝状或环状。
这些结构的差异主要取决于单糖分子之间的连接方式和连接位置。
1. 直链状多糖直链状多糖是指单糖分子通过糖苷键直接连接在一起,形成一条直线。
这种结构通常具有较高的溶解度和可溶性,因为这种结构可以使水分子更容易与多糖分子相互作用。
直链状多糖在生物体内起着能量储存和结构支持的作用。
2. 分枝状多糖分枝状多糖是指单糖分子通过糖苷键连接成主链,同时还有其他单糖分子通过糖苷键连接在主链上,形成分支结构。
这种结构使得多糖的空间结构更加复杂,增加了多糖的稳定性和生物活性。
分枝状多糖在生物体内具有重要的生物功能,例如细胞识别、细胞黏附和信号传导等。
3. 环状多糖环状多糖是指单糖分子通过糖苷键形成一个或多个环状结构。
这种结构使得多糖分子更加紧密和稳定。
环状多糖在生物体内广泛存在,例如淀粉和纤维素等。
它们在植物细胞壁中起着结构支持的作用。
三、多糖的功能多糖在生物体内具有多种功能,包括能量储存、结构支持、细胞识别、细胞黏附和信号传导等。
1. 能量储存多糖是生物体内重要的能量来源。
例如,淀粉是植物细胞中的能量储存物质,动物体内的糖原也是通过多糖形式储存的能量。
2. 结构支持多糖可以构成细胞壁、细胞膜和组织结构的重要成分,起到支持和保护细胞的作用。
例如,纤维素是植物细胞壁的主要组成部分,赋予植物细胞结构稳定性。
3. 细胞识别多糖具有特异的生物学活性,可以与细胞膜上的受体结合,以实现细胞间的相互识别。
这对于细胞的正常功能和生物体的正常发育至关重要。
4. 细胞黏附多糖可以通过与细胞表面的特定受体结合,促进细胞的黏附和聚集。
这对于细胞间的相互作用和组织形成至关重要。
多糖结构分析

多糖结构研究方法多糖及其复合物是来自于高等动、植物细胞膜和微生物细胞壁中的天然大分子物质之一,自然界含量丰富,与人类生活紧密相关,对维持生命活动起至关重要的作用。
多糖和核酸、蛋白质、脂类构成了最基本的4类生命物质。
由于多糖的生物活性与多糖的结构关系密切,因此清楚认识多糖的结构是进行多糖研究和利用的基础。
多糖结构比蛋白质和核酸的结构更加复杂,可以说是自然界中最复杂的生物大分子。
从化学观点来看,多糖结构解析最大的难点就在于其结构的复杂性。
糖的结构分类可沿用蛋白质和核酸的分类方法,即多糖的结构也可分为一级、二级、三级和四级结构。
与蛋白质或核酸大分子相比,糖链的一级结构“含义”要十分丰富。
测定糖链的一级结构,要解决以下几个问题:(1)相对分子质量;(2)糖链的糖基组成,各种单糖组成的摩尔比;(3)有无糖醛酸及具体的糖醛酸类型和比例;(4)各单糖残基的D-或L.构型,毗喃环或呋喃环形式;(5)各个单糖残基之间的连接顺序;(6)每个糖苷键所取的a-或B.异头异构形式;(7)每个糖残基上羟基被取代情况:(8)糖链和非糖部分连接情况;(9)主链和支链连接位点:(10)糖残基可能连接硫酸酯基、乙酰基、磷酸基、甲基的类型等。
多糖的二级结构是指多糖主链间以氢键为主要次级键而形成的有规则的构象,与分子主链的构象有关,不涉及侧链的空间排布;多糖的三级结构和四级结构是指以二级结构为基础,由于糖单位之间的非共价相互作用,导致二级结构在有序的空间里产生的有规则的构象四。
多糖结构的分析手段很多。
不仅有仪器分析法,如红外、核磁共振、质谱等,还有化学方法,如完全酸水解、部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化反应等,以及生物学方法,如特异性糖苷酶酶切、免疫学方法等。
1质谱(MS)由于MS法在糖链结构分析中具有快速灵敏,样品用量少、结构信息直观的特点而得到越来越广泛的应用。
近年来各种软电离技术的诞生,如快原子轰击质谱(FAB—MS),电喷雾质谱(ESI—MS),基质辅助激光解析离子化质谱(MALDI-MS)等,使得糖结构分析的研究取得了日新月异的发展。
多糖高级结构研究方法

1. 红外光谱法(IR)红外光谱在多糖的结构分析上的应用主要是确定糖苷键的构型以及常规官能团。
如:多糖化合物在890cm- 1处吸收是β-吡喃糖苷键特征峰,而820 cm- 1和850cm- 1则是α-吡喃糖苷键特征峰。
2.核磁共振法( NMR)主要用于确定多糖结构中糖苷键的构型以及重复结构中单糖的数目。
3. 原子力显微镜(AFM)该技术是在扫描隧道显微镜( STM )基础上发展起来的一种新颖的物质结构分析方法。
其用很尖的探针扫描待测样品表面, 探针附在一根可活动的微悬臂的底端上, 当探针与样品接触时, 产生的微小作用力引起微悬臂的偏转, 通过光电检测系统对微悬臂的偏转进行检测和放大, 信号经过转换可得到样品的三维立体图像。
如:该技术研究了香菇多糖在不同浓度NaOH 溶液下构型和构象的转变。
4. X- 射线衍射法(XRD)X - 射线衍射法可得到晶体的晶胞参数和晶格常数, 再加上立体化学方面的信息,包括键角、键长、构型角和计算机模拟, 就可以准确的确定多糖的构型。
5. 圆二色谱( CD)从CD 可以知道绝对构型、构象等信息, 是研究多糖的三维结构的有效办法。
中性多糖因缺少一般紫外区可提供信息的结构, 难以直接得到由CD 谱提供的结构信息,通常可进行衍生化或者将多糖与刚果红络合后测定。
6. 快原子轰击质谱( FAB - M S)FAB- MS适合于分析极性大、难挥发、热不稳定的样品。
在快原子轰击过程中, 样品通过正离子方式增加一个质子或阳离子, 或通过负离子方式失去一个质子产生准分子离子作为谱图的主要信号, 并给出反映连接顺序等信息的碎片。
因此FAB- MS可用来测定寡糖链的分子量。
通过FAB- MS形成[M - H ] - 离子是确定寡糖中单糖组成的一种方便的方法。
7. 气质联用(GC - M S)气相色谱与质谱联用可以得到有关单糖残基类型、链的连接方式、糖的序列和糖环形式、聚合度等多种结构信息。
多糖化学结构鉴定方案总结

经过分级纯化的多糖在测定结构前须检查其纯度及测定分子量。
检查纯度最常用的判断方法:(1)用G C 、HPLC测定组成多糖的单糖的摩尔比是否恒定。
用不同的柱型测定结果更为可靠。
(2)电泳只出现一条带。
如可用聚丙烯酰胺凝胶电泳、乙酸纤维素薄膜电泳及玻璃纤维纸电泳。
对于中性多糖可采用高压电泳,以硼酸盐为缓冲液,可增大其迁移速度。
(3)凝胶柱层析图呈现对称的单峰。
若有“拖尾”现象,说明其均一性不够好。
阴离子交换层析纯化用DEAE一纤维素52(2.6x100cm)柱层析,0.lmol/LNaCl洗脱,流速6ml/h,按2ml一管分部收集,苯酚一硫酸法逐管检测,绘制收集体积与糖含量之间的关系曲线。
看是否有单一对称峰。
按照Ye等报道,采用DEAE一52一纤维素交换柱层析法(2.6x30cm)对鲍氏层孔菌菌丝体粗多糖进行初步分离。
DEAE一纤维素凝胶预处理:称取DEAE一52一纤维素凝胶干粉,加入约10倍体积质量比(ml/g)的0.5mol/LNa0H溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至pH值近中性;再用相同体积的0.5mol/LHCI溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至pH值近中性;最后用相同体积的0.5mol/lNaOH溶液再浸泡30分钟,用大量去离子水反复浸洗至pH值中性。
处理完毕后,进行湿法装柱,用去离子水0.5mol/LNaCl溶液,去离子水依次分别平衡(流速1.0ml/min)2一3个柱体积备用.糖样100mg溶于5ml的去离子水中,离心除去不溶物,上样于DEAE一52一纤维素阴离子层析柱(2.6x30cm,Cl-1型),分别采用去离子水0.1和0.3mol/LNaCI溶液进行分段梯度洗脱,流速1.0ml/min,自动收集器分部收集(10ml/管),每梯度20管。
用硫酸一苯酚法跟踪检测各管多糖含量(490nm处吸收值),以收集的管数为横坐标。
吸光值(490nm)为纵坐标绘制DEAE 一52一纤维素色谱柱洗脱曲线。
多糖结构解析的方法

多糖结构解析的方法多糖化合物的结构解析是糖化学和生物化学领域的中心问题之一、因为多糖的结构决定着它们的功能和生物活性。
多糖结构解析的方法可以分为物理方法和化学方法。
一、物理方法:1.光谱学方法:光谱学方法是多糖结构解析中常用的一种方法。
包括紫外光谱、红外光谱、荧光光谱和核磁共振等方法。
(1)紫外光谱:多糖在紫外光谱上表现出特有的吸收峰,可以确定它们的环状结构。
(2)红外光谱:红外光谱是解析多糖结构的重要手段,通过测定多糖分子中的官能团振动频率和强度,可以得到多糖分子的化学结构和键合特性。
(3)荧光光谱:荧光光谱可用于表征多糖的发光行为和其与其他生物分子的结合情况,从而推测其结构和功能。
(4)核磁共振:核磁共振是解析多糖结构的重要手段之一,通过测定多糖中氢、碳、氮等元素的核磁共振信号,可以确定多糖的类型和键合方式。
2.比色法:比色法是通过观察多糖与一些特殊试剂产生的颜色变化来判断多糖的结构。
比如,酚硫酸法可以用于检测多糖的含量和环状结构。
3.色谱法:色谱法是多糖结构解析的重要方法之一、包括薄层色谱、柱层析、气相色谱和高效液相色谱等方法。
通过对多糖的分离和分析,可以得到多糖的组成和分子量信息。
二、化学方法:1.普通化学方法:多糖的碳水化合物性质决定了其一些基本反应,比如酸水解、酶降解、氧化还原等反应。
利用这些反应可以推测多糖的结构。
2.酶法:酶法是多糖结构解析的重要方法之一、不同酶对多糖的酶解反应具有特异性,通过观察酶解产物,可以推测多糖链的连接方式和单糖的种类。
3.质谱法:质谱法是近年来发展起来的一种多糖结构解析方法,主要有质谱分析和质谱成像两种方法。
通过质谱技术可以得到多糖的精确分子量和分子结构,尤其适用于大分子多糖的分析。
综上所述,多糖结构解析的方法多种多样,可以从不同的角度揭示多糖的化学成分和结构特征。
尽管目前多糖结构解析仍然是一个具有挑战性的问题,但随着新技术的发展,相信将能更加准确和全面地揭示多糖的结构和功能。
多糖的组成和结构

多糖的组成和结构多糖是一种复杂的碳水化合物,由许多简单糖分子组成。
1、它们通常由葡萄糖、果糖、半乳糖等单糖分子通过糖基连接而成。
多糖的分子结构可以包括同一种单糖重复组成的同质多糖,或者不同种类的单糖交替组成的异质多糖。
2、一些常见的多糖包括淀粉、纤维素和糖原,它们在植物和动物的细胞中起着重要的能量储存和结构支持的作用。
多糖的结构中还可能包含其他的化学基团,例如酯基、硫酸基、醛基等。
这些基团的存在可以赋予多糖特殊的性质和功能。
3、多糖的分子量较大,通常由数百到数百万个单糖分子组成。
它们可以呈线性结构,也可以具有分支和交联结构,这取决于单糖的连接方式和数量。
4、多糖在生物体内具有多种重要功能,包括能量储存(如淀粉和糖原)、结构支持(如纤维素和壳聚糖)、免疫识别(如血型抗原)、细胞间通讯(如肝素和葡聚糖)等。
它们不仅存在于植物和动物体内,还广泛分布于微生物、真菌和海洋生物等不同的生物界中。
5、多糖由单糖分子通过糖基连接而成,可以具有复杂的结构和多样的功能,对于生物体的正常运作至关重要。
多糖的相关知识如下:1、多糖分类:多糖可以根据单糖的类型和连接方式进行分类。
常见的多糖类型包括单糖多糖、双糖多糖、混合多糖和变性多糖等。
结构与功能:多糖的结构多样,可以是线性、分支、交联等形式。
不同的多糖具有不同的功能,如能量储存、结构支持、免疫识别、细胞信号传导等。
2、食物中的多糖:食物中常见的多糖包括淀粉、纤维素和胶质等。
淀粉是植物中常见的多糖,是动物和人类的重要能量来源。
纤维素是植物细胞壁的主要组成部分,对消化系统有益,有助于正常排便。
胶质是一种物质,可在水中吸水膨胀形成胶状物。
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多糖结构分析
多糖在生物学上的重要意义,尤其是在医药学上的重要意义决定了多糖研究的迅速发展,多糖构效关系的研究已成为多糖研究的热点。
但由于多糖结构的复杂性和多样性,其结构测定远远落后于蛋白质和核酸,本实验选择天然多糖(半乳葡萄甘露聚糖)作为实验材料,对其一级结构做初步的分析。
多糖一级结构的分析包括:纯度鉴定,分子量测定,单糖组成测定和糖链的序列测定。
糖链的序列测定包括:单糖残基在糖链中的次序,单糖残基间连键的位置,链的分支情况等诸多方面。
【实验目的】
1.了解多糖结构分析的内容及方法。
2.了解多糖一级结构分析的基本原理。
3.掌握多糖一级结构分析的基本方法。
一、糖含量测定
【实验原理】
苯酚—硫酸试剂与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应,己糖在490nm 处有最大吸收,吸收值与糖含量呈线性关系。
【实验材料】
1. 实验器材
721型分光光度计。
2. 实验试剂
(1)98%的浓硫酸。
(2)80%苯酚:80g苯酚加20ml水使之溶解,可置冰箱中避光长期贮存。
(3)6%苯酚:临用前用80%苯酚配制。
(4)标准葡萄糖溶液(0.1 mg/ml):取100mg葡萄糖,用蒸馏水溶解,定容至1L。
(5)多糖样品:半乳葡萄甘露聚糖溶液(0.1 mg/ml)。
【实验操作】
1. 制作标准曲线:
取9支干燥试管,按下表操作
横坐标为多糖微克数,纵坐标为光密度值,绘制标准曲线。
2. 样品含量测定:
取样品液1.0ml,按上述步骤操作,测光密度。
3.计算:
糖含量(%)=C /(C0× V)×100%
C: 由标准曲线查得的糖微克数
C0:样品溶液的浓度(0.1 mg/ml)
V:测定时用的样品溶液体积(1.0ml)
二、单糖组成分析
【实验原理】
多糖在浓硫酸中保温一定时间可完全水解为单糖,通过纸层析分离,特定试剂显色后与已知糖的标准混合物作对比,可以鉴定多糖水解产物中单糖的组成。
【实验材料】
1. 实验器材
水解管;滤纸;玻璃毛细管;层析缸;喷雾器。
2. 实验试剂
⑴标准糖溶液: 称取一定量的半乳糖、葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖,用蒸馏水溶解,得标准糖混合溶液(每种糖的点样量为20微克~30微克)。
⑵展层剂:正丁醇:乙酸:水=4:l:5 (上层)。
⑶显色剂:苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液(邻苯二甲酸1.6g溶于水饱和的正丁醇100 ml,加苯胺0.93g(相当于0.9 ml)。
⑷BaCO3;1mol/L硫酸。
【实验操作】
l.完全酸水解:
称取20 mg多糖样品,加入1mol/L H2S04 2ml;封管,l00℃水解8小时,然后加入BaC03中和,定量滤纸过滤,滤液留作分析。
2.纸层析:
将层析滤纸剪成7cm×40cm的纸条,距层析滤纸一端2cm处画一横线作为点样线,在点样线上画两个点分别作为标准糖溶液和多糖水解液的点样位置。
用玻璃毛细管点样,斑点尽可能小,而且每点一滴,待点样点干燥后,在同一位置再点第二滴。
然后将滤纸条悬挂于层析缸中进行层析,展层时间约为36小时。
3.显色:
将滤纸取出,自然干燥,喷上苯胺-邻苯二甲酸-正丁醇饱和水溶液,100℃条件下15分钟即可显色。
标准单糖混合物色斑在滤纸上由下而上的顺序是:半乳糖-葡萄糖-甘露糖-阿拉伯糖。
与标准单糖混合物色斑比较,即可判断多糖样品的单糖组成。
三、糖链的序列测定
(一)高碘酸氧化
【实验原理】
高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处,生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。
反应定量地进行,每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。
通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量,可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。
【实验材料】
1. 实验器材
紫外分光光度计。
2. 实验试剂
(1)溴甲酚蓝指示剂:0.1克溴甲酚蓝溶于250ml蒸馏水中(含1.43毫升0.1mol/L氢氧化
钠)。
(2)30mmol/L高碘酸钠溶液。
(3)乙二醇。
(4)0.01mol/L氢氧化钠溶液。
【实验操作】
1. 制作标准曲线:
取6支干燥试管,按下表操作
2. 样品测定
称取多糖样品25mg,用少量水溶解,加入30mmol/L高碘酸钠溶液,定容至25ml,置于暗处,室温下进行反应,于0,6,12,24,36,48…小时间隔取样0.1 ml,蒸馏水稀释250倍后,使用紫外分光光度计在223nm处测定光密度。
至光密度值达一稳定值时,加乙二醇破坏过量的高碘酸以终止反应。
由此光密度值根据标准曲线计算出高碘酸的消耗量。
取2ml 上述反应溶液,测定甲酸的生成量。
剩余部分进行Smith降解。
3. 甲酸测定:
取2ml上述反应溶液,加一滴溴甲酚蓝作指示剂,用0.01mol/L氢氧化钠溶液滴定甲酸的释放量。
【注意事项】
为避免发生超氧化,反应溶液的pH值应控制在3~5,而且一定要在低温、避光处进行。
(二)Smith降解
【实验原理】
Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物,然后进行适度的酸水解,用纸层析鉴定水解产物,由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。
以葡聚糖为例,其反应式如下图:
以1→2位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸,并且无甲酸释放;Smith降解后产生甘油。
以1→4位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸,并且无甲酸释放;Smith降解后产生赤藓醇。
以1→3位键和的糖基不被高碘酸氧化;Smith降解后仍为原来糖。
以1→6位键和的糖基或非还原末端基(1→)经高碘酸氧化,消耗二分子高碘酸,同时释放一分子甲酸;Smith降解后产生甘油。
本实验通过纸层析检测终产物中的甘油、赤藓醇和糖。
【实验材料】
0.1mol/L醋酸。
2mol/L硫酸。
硼氢化钾。
纸层析试剂及器材:除显色剂外,同实验二。
硝酸银显色剂:
A: 16%硝酸银水溶液: 丙酮为1:9(V/V)。
B: 1%NaOH乙醇溶液(W/V)。
C: 6mol/L氢氧化铵。
【实验操作】
1. 还原和水解
高碘酸氧化后经乙二醇处理的溶液对流水透析48小时,蒸馏水透析24小时,于40℃以下减压浓缩至10ml左右,加入70mg硼氢化钾于室温、暗处搅拌18小时~24小时以还原多糖醛。
用0.1 mol/L醋酸中和至pH6~7,对流水透析48小时,蒸馏水透析24小时,减压蒸干,加1 mol/L硫酸2ml,封管,100℃水解8小时,用碳酸钡粉末中和,定量滤纸过滤,滤液减压浓缩后,通过纸层析方法检测。
2. 纸层析
操作详见实验2(单糖组成分析)。
展层后,将滤纸取出,自然干燥,喷上试剂A,自然干燥,将滤纸浸入试剂B中,待斑点显出后,再浸入试剂C中以洗去滤纸上的氧化银,然后用水冲洗1小时左右,风干。
以正丁醇:乙酸:水=4:l:5为展层剂时,甘油的R f为:0.48,赤藓醇的R f为:0.35。