实验动物替代方法原理与应用(程树军,焦红主编)思维导图
实验动物学 第八章 转基因动物与克隆动物
（二）反转录病毒感染法
将外源基因DNA插入逆转录病 毒载体；
通过辅助细胞包装成病毒颗粒， 感染胚胎；
再将感染的桑椹期胚胎导入子宫。
（三）胚胎干细胞法 （1）获取胚胎干细胞（ES细胞）； （2）将外源基因导入ES细胞； （3）获取囊胚期胚胎； （4）将含有外源基因的ES细胞注入
危动物。
第三节 转基因动物和克隆动物的 生物安全与社会安全
（1）生物安全——大自然正常的生态 平衡被打破。
（2）社会安全——涉及技术、宗教、 伦理等问题。如有人担心，坏人会克 隆出第二个希特勒，造成世界大乱。
新近克隆的8个人类胚胎的早期阶段
韩国科学家和美国《科学》周刊2004年2月12日 宣布克隆出世界上第一批成熟人类胚胎，称这是 克隆技术的又一重大进 展，有助于进一步加快 用干细胞治疗疾病的研 究。专家则警告说，这 一成果表明人类朝克隆出婴儿迈进了一步。
1987年，Martin Evans，Oliver Smithies 和 Mario Capecch 领导的 几个研究小组对胚胎干细胞中特定目 标基因进行失活，培育出了第一只基 因敲除小鼠。这三位科学家因为这项 工作在2001获得了Lasker奖。接下来， 科学家们用同样的技术又培育出了几 千只基因敲除小鼠。
第八章 转基因动物与克隆动物
第九章 转基因动物与克隆动物 第一节 转基因动物 第二节 克隆动物 第三节 转基因动物和克隆
动物的生物安全与社会安全
第九章 掌握内容
1、转基因动物和克隆动物的概念。 2、基因转移的5种方法。 3、动物克隆技术的基本方法。
第一节 转基因动物
一、转基因动物的概念
将特定的外源基因导入动物 受精卵或胚胎，使之稳定整合于 动物的染色体基因组并能遗传给 后代的一类动物。
《实验动物学概论》PPT课件
4.实验动物微生物学与寄生虫学(Laboratory animal microbiology and parasitology) 是研究实验动物的微生物、寄生虫分类学、与 人类的相互关系和对科学试验的干扰作用，探讨与 实验动物疾病作斗争的措施，实行对实验动物微生 物与寄生虫的质量监控，以达到控制和消灭实验动 物疾病的科学。
小型动物------马、牛， 单一T细胞缺陷------T、B细胞联合免疫缺陷 （SCID小鼠及T、B、NK 细胞三联免缺陷小鼠） 自发突变先天性免疫缺陷-----后天获得性免疫缺陷
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（2）具人类疾病模型特征的动物品系培育 自发性高血压（SHR）大鼠，癫痫大鼠、 白内障小鼠、糖尿病小鼠等
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存在的问题
地域发展不平衡，部门或系统之间的差距明显 沿海城市快 于中西部地区，经济发达城市高于不发达地区；长三角地区 由于其独特的地理位置和强大的经济支撑，已成为国内实验 动物发展最快的地区；从行业来看，卫生、教育、科技、制 药系统实验动物的使用量占全国的70%以上，实验设施的整 体水平也高于其他行业；
（3）主要用于科学实验精选ppt
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实验动物的来源
Wild animal
调查、捕获、人工繁殖等
Economical animal 选择、培育、纯化等 Exhibiting animal
LA
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什么是实验动物化？
野生动物或经济动物经过初期的表型分析和 筛选，对具有科学实验价值的动物，经过严格的驯 养、微生物净化、遗传及饲养环境等因素的控制， 按实验要求进行培育，使之达到实验动物的标准。 我们把这种将野生动物或家畜驯化 （Domestication）、培育（breeding）成实验 动物的过程，叫做实验动物化（Laboratory Animalization）。
《实验动物与管理教学课件》转基因动物-PPT精选文档
4、“超级鼠”
1982年，Palmiter和Brinster用此方法把大鼠的生长激素 基因导入小鼠受精卵，获得了成年体重是对照组小鼠2倍的 “超级鼠”，首先证明外源基因可在受体中表达，并且表达 产物具有生物活性。
5、转基因家畜的产生
转基因家兔、绵羊和猪(Hammer等，1985)、牛(Bondioli 等，1988)和山羊(Ebert等，1991)等相继出世。
永恒的多莉
已经成为标本的多莉 将永远被人们记住！
2019年2月22日，英国“Nature”刊登了爱 丁堡罗斯林研究所维尔穆特的研究成果， 即“多莉”羊的克隆成功，从此震惊了世 界。 2019.2.14日苏格兰向外界宣布：多莉因早衰 并患有肺炎，被迫实施了安乐死。由于早 衰问题，人们怀疑“多莉是穿着羔羊服装 的老羊” 。
用显微注射方法制备转基因动物，操作技术性
很强，即使是受过严格训练的专业人员操作，
发育成转基因动物的受精卵也只占注射卵的 5 ％。因此人们往往来用增大微注射受精卵的 数目的办法来弥补这一缺陷。
优点： 外源DNA大小基本不受限制（1-50kb）；导入过 程直观； 整合率高 缺点： 设备昂贵、环节较多 对操作人员有较高的技术要求 低效率（尤其是大家畜） 对卵子伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性 转基因沉默
转基因动物技术的发展简史回顾
1、第一例嵌合体小鼠
1974年最早把猿猴病毒40(SV40)注入小鼠囊胚腔中（如图），得 到部分组织中含有SV40DNA的嵌合体小鼠。但无任何表型改变。 2、第一个转基因小鼠系 1976年建立了世界上第一个转基因小鼠系，这些小鼠基因组中 插人了莫氏白血病病毒基因。他们是运用反转录病毒与小鼠卵裂 球共培养把外源DNA插入到小鼠的基因组中。 3、第一例显微注射法产生转基因小鼠 1980年，Gordn等把SV40DNA显微注射到小鼠受精卵的原核 中，获得了两只转基因小鼠，创建了显微注射转基因方法。
《实验动物学(十三五)》读书笔记模板
一 动物实验前人员的安全教育 二 动物实验中的个人安全防护 三 意外损伤的防护
一 常见的人畜共患病 二 人畜共患病的防护
第一节动物实验的基 本操作
第二节实验动物的麻 醉技术和安死术
第三节解剖与取材
第四节新技术、新方 法在动物实验中的应 用
一 抓取与固定 二 动物标记 三 给药方法 四 采血方法 五 尿液及其他体液采集
一 生物学特性 二 在生物医学研究中的应用 三 饲养管理要点
一 生物学特性 二 在生物医学研究中的应用 三 常用品种品系 四 饲养管理要点
一 生物学特性 二 在生物医学研究中的应用 三 常用品种 四 饲养管理要点
一 生物学特性 二 在生物医学研究中的应用 三 常用品种 四 饲养管理要点
一 生物学特性 二 在生物医学研究中的应用 三 常用品种 四 饲养管理要点
一 自发性糖尿病动物模型 二 自发性高血压动物模型 三 自发性肥胖症动物模型 四 自发性快速老化动物模型 五 自发性银屑病动物模型 六 自发性肿瘤动物模型
一 心血管系统疾病动物模型 二 消化系统疾病动物模型 三 呼吸系统疾病动物模型 四 泌尿系统疾病动物模型 五 生殖系统疾病动物模型 六 血液系统疾病动物模型 七 内分泌疾病动物模型 八 神经系统疾病动物模型 九 代谢系统疾病动物模型
【临床医学论文】高等医学院校替换外科实验动物建议思考
【临床医学论文】高等医学院校替换外科实验动物建议思考外科动物实验课程是一门重要的医学课程，是学生了解外科及英相关配套操作的门户，但在国外的医学课程中，却很少使用动物进行相关的演示及培训工作，同样起到了较好的教学效果。
随着医学的进步以及医学教育的深化改革，现有的外科动物实验课程需要进一步优化和调整，该课程的临床指向性需要进一步体现，基于实验动物的使用缺陷以及对动物的关爱，如何寻找实验动物的替代品，是我们而临的一大问题。
目前，现有的模具材料和仿真技术可以完成实验动物的替换，但是需要我们医学院校的教师以及教育政策的制定者们转变思路，开拓创新，大胆尝试一种既能减少动物使用，又能提髙教学教冇质量的新途径。
教冇；外科动物实验课程：实验动物：动物关怀：替换：模具；教学改革外科动物实验课程是外科学科的一个分支和培养环节，是提高学生外科技能和外科无菌意识的一种方法和方式，为进入临床实习打下良好的基础。
课程开展过程中，全国医学院校每年要提供不讣英数的兔及犬等实验动物，但是在教学过程中，由于学生的操作生疏以及动物管理问题等，一部分动物资源是处于浪费状态。
按照动物伦理学、动物保护法的要求和动物保护组织的意见［2］，甚至是学生的抵触［2］,国外诸多院校长期以来是不使用或很少使用动物进行外科相关技能培训。
根据多年的外科教学经验，认为在当代的医学环境下，寻找实验动物替代品应该逐渐提上医学教学改革的日程。
结合本人在英国学习的一些见闻，谈一谈在此方而的建议和体会。
1外科动物实验课程的任务及思考外科动物实验课程也称之为实验动物外科，是医学生接触外科操作的窗口和桥梁，内容包括了用手术期的基本操作如无菌术等，以及外科基本操作，如切开、缝合、打结、器官切除，消化道重建等内容。
医学生在经过理论知识学习后，即将进入临床实习阶段。
而在接触外科实际操作之前，医学生必须对外科基本概念和基本操作有相当的认识和掌握。
因此，实验动物外科手术教学就成为医学生临床前期教学中不可忽视的重要环修。
动物实验的基本技术和方法ppt课件
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六、实验动物的给药方法
• 经口给药法 • 注射法 • 其它途径给药方法 1. 呼吸道给药 2. 皮肤给药 3. 脊髓腔内给药 4. 脑内给药 5. 直肠内给药 6. 关节腔内给药
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• 经口给药 1. 拌入饲料、饮水中自由摄取
优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入量不等 2. 灌胃 优点：能准确定量 缺点：给动物造成一定的痛苦，需 熟练掌握技术
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大小鼠灌胃注意点
1. 用灌胃针。
2. 从嘴角处插入，到达咽部后 改变灌胃针的方向，使其与 食管的走向一致，然后顺利 插入。
3. 成年大鼠由于体型较大，不 易保定。办法：
1）一人保定，一人灌胃
2）操作者抓取后，将大鼠尾部按 在自己的胸部，达到固定尾 部的目的，然后灌胃。
灌胃量：小鼠0.2-0.4ml/10克，
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按体重分层随机区组分组
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三、动物编号常用的标记方法
适用需要个体识别的实验 1. 染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠
、大鼠、豚鼠、兔等。 黄色：常用3~5%苦味酸溶液 红色：常用0.5%中性红溶液 咖啡色: 2%硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液
优点：简单、易识别 缺点：长期易退色；不能编大号码。
停止吸入后很快苏醒
• 缺点：
需要一定的仪器设备，
注意自身防护。
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大小鼠麻醉法
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（2）注射麻醉法 注射麻醉法是使用非挥发性麻醉药进行全麻
的方法。在动物实验中比较常用。 常用麻醉药： 戊巴比妥钠 硫喷妥钠 氯氨酮 乌拉坦 大动物：静脉注射或肌肉注射 啮齿类动物：腹腔注射
动物实验的新替代方案
毒物学动物实验的新替代方案改变实验方法，减轻实验动物所受的苦，是人道；要得到更严谨的测试结果，保障人类的安全，更是技术。
作者高柏（Alan M. Goldberg）、哈东（Thomas Hartung）翻译黄荣棋70 科学人2006.031999 年间，有好几个月，一只210公分高、耳朵下垂、大眼哀伤的毛茸茸兔子，都尾随在美国总统候选人高尔的助选行列之后。
高尔的「罪一项计画；针对美国每年制造或进口超过450公吨的2800 种化学品，进行最起码的安全性测试，并将测试结果放在一个公开的网站上。
行」是：他在副总统任内，制定了一项化学毒性测试计不过，这只巨兔的确凸显了一个事实：在目前，每年因画，可能使近百万只动物受苦或死亡。
不过对大部份的例行性毒性测试而牺牲的动物，已有数百万只；而未来的旁观者而言，这项毒性测试计画还嫌晚了呢。
计画，还会让这个数字急剧增加。
EPA拟定了一张优先清更早的两年前，一个现在称为捍卫环境（Environmental 单，上头列出大约八万种化学品，必须取得其基本的安全D e f e n s e）的团体就已经指出，10万种常用的化学品当资料；他们还有一项雄心勃勃的幼童健康法案（Children’中，可能只有1 / 4具备足够的安全资料；而美国环保署s Health Initiative），想要检视一些细微难测的现象，像是（EPA）与现在称为美国化学协会（American Chemistry 胎儿长期接触某种化学品的效应。
另外，EPA也致力於探Council）的商业团体也同意这项说法。
高尔将环保激进人讨铅、汞与类似毒物所引起的神经毒性，将如何影响生殖士、主管机构以及制造厂商三方面人马集聚一堂，拟定了与发育。
而在大西洋的对岸，欧盟的「化学品注册、评估 科学人71 与核准」计画（REACH），将针对欧洲每年制造或交易一全性所进行的研发与测试，正随著动物实验替代方法的研公吨以上的三万种化学品，评估其安全性。
体外重建人体皮肤模型刺激试验的验证
２３ 重 建皮 肤模型 特 征 的分析 ． 重 建 皮 肤 模 型 的特 征 分析 重 点应 放 在 组 织 形
到 的 目标 值 ，也 即 当评 估 使 用 参 考 物质 最 小 清 单
时 ， 实 验 方 法 应 满足 的标 准 。
态 、脂 质 组 成 和 屏 障 功 能 等 方 面 。 ２３１ 形 态特征 分析 ．． 除常 规组 织学 技术 外 ，还可 以采 用分 子生物 学技 术或 免疫组化 技 术分析 细胞 分
３１ 实验 方 法 的科 学 原理和 局 限性 ． 皮 肤刺激 的发生 是 由于刺 激物质 破坏皮 肤角质 Ｊ 拜障进入 表 皮层 ，并 且对 底 层细 胞 产 生细 胞 毒性 ，
而细胞 培养 与组织 重建 技术 的发展 使得 体外 制备 的 皮肤替 代模 型具有 与体 内相 似 的组织 结构和 屏 障功 能【。这样 就可 以在 体外 进 行皮 肤刺 激 性 的测试 和 其它 相 关研 究 。而 且与 单 层细 胞 不 同 ，３ 皮 肤模 Ｄ
脂 类 进行 半 定 量分 析 是 一项 有 效 简 便 的方 法 。
围 为 ４８ｈ ８７ｈ。Ｅ Ｉ ＫＩ Ｍ模 型 用 Ｓ Ｓ作 用 ． ～． Ｐ Ｓ Ｎ丁 Ｌ
１ ， 均 Ｉ ５为 ２３ ／ ， 受范围 为 １ ／ ～ ８ 平 ｈ Ｃ ０ ． ｍｇｍｌ接 ２ ．ｍｇ ０ ｍｌ
性 ，关 键 步 骤 描述 和 质 量 控 制 ，这 些 内容 可 以确
保新 方法 所基于 的原 理和 预期 目的相 一致 。 要素 二 是参考 化 学物清 单 ，用于 评价 实验 方法 的准确 性和
可 靠性 。要 素三 是 可靠 性和 预测 能 力（ 确性 ） 准 应达
特 定 毒 理 学 终 点 的测 试 ， 如 应 用 于 皮 肤 光 毒 性 、 皮肤 刺 激性或 皮肤 吸收 时应满 足对 己知化 学物质 正