链霉亲和素商品化应用简介

链霉亲和素商品化应用简介
一、链霉亲和素性质
链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。

链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。

链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015L／mol。

在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10～12和Ｃ端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。

链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示，１mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

二、亲和素和链霉亲和素的比较
相同点
1、生物素结合能力：AV：13~15U，SA：14~18U
2、活性中心依赖于色氨酸-懒氨酸：亲和素在氨基酸序列的70-70和110-111
两个位点有色氨酸-懒氨酸，链霉亲和素在氨基酸序列的79-80和120-121两个位点含有色氨酸-懒氨酸。

不同点：
1、分子量：AV=66KD, SA=54KD
2、等电点：AV=10.5, SA=6.0, AV带正电较多，非特异性结合较强。

3、位阻效应：SA的生物素结合位点较AV深，位阻效应较强，长臂生物素更适
合。

4、生物素的结合：AV随机结合，SA协同结合。

5、氨基酸序列：AV含二硫键和10%糖，SA含甘氨酸丙氨酸较多，无糖和二
硫键。

三、链霉亲和素在ELISA中的应用
酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。

根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

生物素－链霉亲和素系统在ELISA中的应用有多种形式，
1、用于间接包被：可以在固相上先预包被链霉亲和素，原用吸附法包被固
相的抗体或抗原与生物素结合，通过链霉亲和素－生物素反应而使生物素化的抗体或抗原间接包被。

这种包被法主要有以下优点：
① 增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。

② 阴性对照、空白对照本底低，检测敏感性高。

③ 用链霉亲和素替代抗体包被微孔，避免了抗体包被微孔时容易发生失活
(或不易保存)。

④ 通过生物素将抗体结合于链霉亲和素包被的酶标板上，可克服传统物理
吸附方法造成的抗原抗体结合能力大量丧失的不足。

⑤ 生物素标记捕获抗体、酶标指示抗体和样品中的抗原三者在均相中形成
复合物后，再通过生物素结合于链霉亲和素包被的酶标板上，由于链霉亲和素和生物素之间亲和力极强，并且具有高度的特异性和稳定性，因而可提高检测灵敏度。

实例：C TnT检测实验中，双抗体夹心ELISA法最低检测值为7.25μg/L，使用链霉亲和素包被法最低检测值达到1.0μg/L，较双抗体夹心ELISA法灵
敏度提高7倍。

2、用于终反应放大：在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体
替代，然后连接亲和素－酶结合物，以放大反应信号。

由于SA的等电点低，表面带的正电荷少，因此它和聚苯乙烯板载体的静电吸附力弱，SA的阴性对照显色明显比AV低，这样在ELISA上应用SA可进一步提高方法的灵敏度。

链霉亲和素对生物素化的抗体是一个主动的吸附过程，生物素化的抗体吸附在链霉亲和素表面，抗体排列整齐，分布均匀，抗体容易保持功能，而被动吸附抗体排列极不规则容易导致大量抗体失去功能，所以将生物素-链霉亲和素免疫反应系统引入竞争法中，可以大大提高酶联免疫的灵敏度和特异性。

实例1: 地高辛的生物素-链霉亲和素免疫法测定实验中，传统方法被动吸附只有约5％的抗体具有功能，生物素-链霉亲和素体系中60％的抗体
具有功能。

实例2：淋球菌抗原测定方法实验中，生物素-链霉亲和素法检测灵敏度为0.625 μg/L，相当于3.5×104/ml淋球菌，而同时进行常规ELISA测定时，
其灵敏度为1.25 μg/L。

四、链霉亲和素相关商品
1、标记化链霉亲和素
用酶或荧光素等修饰链霉亲和素，应用于ELISA放大检测信号，提高检测灵敏度。

产品实例：
① 绿色荧光素（FITC）标记Streptavidin蛋白
产品说明
荧光素标记抗体（FA）是目前广泛用于免疫病理、细胞化学、流氏细胞学、病理学及自身抗体的临床免疫中的特异、灵敏、定性和定位相结合的免疫化学试剂。

荧光素抗体为制备的抗血清，再经过亲和层析纯化的方法制成抗体的IgG成分，并采用直接标记法，将异硫氰酸荧光素共价交联到链霉亲和素分子的氨基基团分子上，经过纯化、蛋白定量、FITC浓度及效价鉴定而制备完成。

应用范围：
1.免疫组织及免疫病理中抗原、抗体检查，如：各肿瘤抗原检查，细胞凋亡检测。

2.用于细胞因子等检查的荧光流式细胞仪测定。

3.用于临床自身免疫病的多种自身抗体荧光检查，如：抗核抗体，抗心肌酶抗体.
4.白细胞分型抗原的免疫荧光染色。

5.用于细菌、病毒、梅毒螺旋体、钩端螺旋体等微生物的抗原及抗体检测。

主要性能：
0.3ml或根据试验需求的各种包装，并提供浓缩液或冻干粉，含有0.01%NaN3防腐剂。

链霉亲和素含量在1mg/1ml左右.FITC为Sigma异构体I,约在70-80ug/ml,495nm为最大吸收峰，激发波长525 nm .
工作浓度：用0.01mol/l pH7.4 PBS 作1：20–1：50稀释使用。

保存：-20℃可保存一年，避免反复冻融。

②辣根过氧化物酶标记链霉亲和素
2、链霉亲和素酶标板
将链霉亲和素直接或间接预包被在酶标板上，稳定性高，易于保存，使用时只要加入生物素化的抗体或者抗原即可。

产品实例：
ImmobilizerTM-链霉亲和素酶标板/板条
适用于生物素化生物分子瞬间耦合
链霉亲和素共价粘附在表面上
可以随时使用无需进行封闭步骤
极佳的结合力（例如F96透明20pmol/孔*）
表面流失率低
容易接触到反应位置点
非特异性结合
信噪比高
室温下稳定
试剂消耗率低
白色和黑色的板用于发光或荧光应用上
3、链霉亲和素磁珠
链霉亲和素磁珠由1 μm 超顺磁微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。

磁珠可用于捕获生物素标记的底物，包括生物素标记的抗原、抗体和核酸。

由于生物素-链霉亲和素的相互作用很强，其结合常值（Ka）为1015 M-1，并且链霉亲和素的非特异性结合率很低，使得被捕获的底物可满足后续实验要求，包括mRNA 的分离和一抗、二抗的获得。

亲水性链霉亲和素磁珠由2 μm 超顺磁颗粒与高纯度链霉亲和素共价结合形成。

由于这种磁珠有50－60％的磁性成分，因而使得它非常适用于自动化高通量实验操作。

它们也可用来捕捉生物素标记的底物，比如像抗原、抗体和核酸。

对蛋白质和核酸的非特异结合非常低。

产品实例：
Dynabeads® M-280 Streptavidin链霉亲和素磁珠
产品描述：
链亲和素包被的Dynabeads ®为分离生物素抗体，核酸或其他生物素配体和靶分子的最佳选
择。

这种链亲和素-生物素的高亲和力( Kd值10-15 )在分子上有着广阔的应用。

磁珠是单层而不是多层的链亲和素重组体。

这对自由生物素或生物素配体和靶分子而言，在空间排列有着绝大多数的生物素结合位点。

没有过量的物理吸附链亲和素确保了只有微量的链亲和素会遗漏。

批次间变化小，结果重复性好。

优点和特性：
•直接快速捕获任何生物素靶分子
•灵活的固相操作和优化的液相反应动力学
•磁性操作易于适应自动化平台
•批次重复性高，结果可靠一致
本产品包含：
共价偶联了链亲和素重组体的Dynabeads® (2.8 µm) ，保存在PBS中，pH 7.4，0.1% BSA 和0.02% NaN3 作防腐剂。

应用：
过去15年中,，Dynabeads® M-280 Streptavidin已有达到了前所未有的广泛应用。

主要应用在制备单链DNA模板，分离RNA和DNA结合蛋白，固定长链DNA片段，纯化测序产品，特效捕获核酸。

Dynabeads®被全世界的IVD仪器使用了不少于25,000例。

浓度：10mg/ml
储存条件：2-8℃
结合能力：
磁珠的结合能力由DNA片段长度决定。

1mg磁珠结合700-1,000 pmoles自由生物素，200 pmoles生物素标记的核苷酸(单链) ，5 - 10µg生物素标记抗体和5 pmoles的2 - 4 kb双链DNA片段。

结合大片段DNA (>2kb)，我们推荐使用Dynabeads® kilobaseBINDER试剂盒(货号601.01 ) 。

英文名称：Dynabeads® M-280 Streptavidin
中文名称：Dynabeads链霉亲和素磁珠M-280试剂盒。