磁珠法核酸提取概述 ppt课件
核酸提取试剂盒ppt正式完整版
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革兰氏阳性细菌主要包含细菌中的厚壁菌门(Firmicutes)（低G+C革兰氏阳性细菌）和放线菌门(Actinobacteria)（高G+C革兰氏阳性细
菌）。
DNA提取方法
磁珠法：生物磁珠是一种新型的功能化固体载体，其表面包被有活性基团，可以与多 种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点，在外磁场的 作用下可以定向移动和集中，当撤去外磁场后，稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体 中，从而使固液相的分离变的十分快捷方便，通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶 向物质。
➢核酸提取试剂盒
DNA提取试剂盒 RNA提取试剂盒
DNA提取方法
➢DNA提取方法
种子用粉碎机打成粉末状使用，样品为种子时，裂解时间为30min。
磁取珠10法µlD病N毒A（进1D行.碱N0A裂. /R解NA法）：提碱取裂试剂解盒法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的。 如快果速是 质干粒材DN料2A，.提煮适取沸当试法延剂：长盒裂煮解沸时时间将；样品中的DNA通过核酸裂解液的作用释放出来，离心沉淀后将杂质去
蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将
DNA 钠盐沉淀出来。
DNA提取方法
4.苯酚抽提法： 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液 时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋 白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含 DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物 质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 。
核酸提取磁珠法原理
核酸提取磁珠法原理
核酸提取磁珠法是一种利用磁珠上的亲和基团与核酸靶分子特异性结合的原理来纯化和提取核酸的方法。
该方法基于磁珠具有磁性的特性，使其能够通过磁力吸附和分离。
核酸提取磁珠法的原理如下：
1. 表面修饰：磁珠表面通常会修饰上与核酸分子相互吸附的功能性基团，如亲和基团、融合蛋白或短链引物。
这些亲和基团具有特异性和高亲和力，可以与目标核酸的特定序列或结构相结合。
2. 样品处理：将待提取的核酸样品加入到磁珠悬浮液中，样品中的核酸分子会与磁珠表面的亲和基团发生特异性结合。
同时，通过调节条件（如pH、盐浓度和温度），可以优化核酸与磁
珠之间的结合效果。
3. 磁性分离：使用外部磁场或磁力装置，将磁珠定位于管壁或底部，使其与其余液相分离。
磁珠的磁性能够快速地在磁力作用下聚集，使得磁珠能够被方便地沉淀在容器的底部，而上清液相中残余的杂质则会被分离。
4. 洗脱和回收：通过改变溶液条件，如改变pH或盐浓度，可
以解离核酸与磁珠的结合。
这样，纯化的核酸分子可以从磁珠上洗脱下来，从而得到目标核酸的纯度较高的样品。
核酸提取磁珠法具有高度的选择性和特异性，能够有效去除样
品中的杂质，并获取较高纯度的核酸样本。
此外，磁珠法还具有操作简单、高通量和自动化的优点，因此在分子生物学、遗传学和临床诊断等领域广泛应用。
《核酸的分离与纯化》ppt课件
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核酸提取方法——分别与纯化
——加热煮沸法 1、高速离心富集含核酸物质；
2、参与促细胞裂解的化学物质〔SDS、Triton X-100 、Tween 20 、NP-40 、CTAB、sarcosyl 、Chelex-100 〕等；参与蛋白酶K消 化一段时间，也可不加，直接95℃以上加 热10分钟左右；
过程中可加热。 高速离心后，提取沉淀核酸。 2、蛋白酶消化过夜，直接处置全部液体。
3、Saccomno液+DTT
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实验室常见样本核酸提取方法
——痰标本提取方法： Saccomno液：每50毫升固定液中含50％ 乙醇48 mL，2％聚乙 二醇1 mL、0.3利福平1 mL ； DTT (二硫苏糖醇)液: 0.1g DTT、0.78g NaCl、0.02g KCl、0.112g 磷 酸二氢钠、0.02g 磷酸二氢钾，加水至2L，使DTT浓度为0.005 ％； 上述两种液体等体积混合，1～2倍体积参与到痰液中，振摇液 化30min，高速离心，沉淀提取核酸。
性在临床可接受范围。 2、磁珠法； 本钱较高
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实验室常见样本核酸提取方法
——血清样本核酸提取方法： 血清中微生物来源RNA提取方法：
1、 酚氯仿法； 繁琐，手工操作反复性较差
2、磁珠法； 方便，易于自动化，反复性很好，本
钱较高
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实验室常见样本核酸提取方法
——血清样本核酸提取方法： 血清中循环核酸提取方法：
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核酸提取方法——分别与纯化
——盐析法-NaAC 1、细胞裂解同前述；并参与蛋白酶K消化
2、参与1/10体积的3mol/L的NaAC，与1体积 的细胞裂解液混合，震荡混匀，-20℃孵 育 ~15 min；台式离心机最大速度离心 15—20min；
磁珠法提取核酸的原理
磁珠法提取核酸的原理磁珠法（Magnetic bead method）是一种常用的核酸提取方法，其原理是利用磁珠的磁性在外加磁场的作用下迅速沉降和聚集，实现目标核酸在复杂样品中的高效分离和纯化。
核酸是一种带有负电荷的大分子，其在磁场中的行为受到库伦力的影响，故而磁性细胞和磁珠质粒对核酸的吸附选择性较差。
为了提高核酸的选择性捕获，经常将磁珠表面修饰上特异性的亲合分子，如抗体、寡核苷酸或亲核基团（如硅胶），以与目标核酸特异配对并进行捕获。
根据核酸提取的目的，可选择修饰与RNA或DNA特异结合的磁珠，例如与多聚T的磁珠用于RNA的富集，而与多聚A的磁珠则用于mRNA的纯化。
第一步：样品处理。
根据实验的需要，将样品采集后，加入适量的裂解缓冲液，破坏细胞结构，使核酸裸露于裂解液中。
通常，核酸裂解需要使用蛋白酶和离心来去除细胞蛋白和细胞碎片，使裂解液中只包含核酸和其他溶性物质。
第二步：磁珠结合。
加入相应的磁珠悬浮液到样品中，使磁珠与目标核酸特异性结合。
根据核酸的类型和目的，选择不同的磁珠表面修饰，以实现特异性的核酸结合。
在特定的pH、离子浓度和温度下，磁珠上的修饰物结合到核酸上，形成稳定的结合。
第三步：磁珠分离。
将含有磁珠的样品置于磁场中，通过磁场的作用，磁珠在磁力的驱动下沉降到管底。
随后，用试管架等工具将液相去除，并保持磁珠在磁场中。
第四步：洗涤。
多次加入洗涤缓冲液，使非特异性结合的物质从磁珠上洗脱。
洗涤缓冲液中一般含有高盐浓度或洗涤剂，以去除与磁珠非特异性结合的蛋白、杂质等。
第五步：洗涤液去除。
将洗涤液去除，此时仍然保持磁珠在磁场中。
第六步：核酸洗脱。
加入洗脱液解离磁珠与核酸的结合，使核酸从磁珠上洗脱下来。
洗脱液的化学成分一般可以改变溶液的PH值或离子浓度，从而破坏核酸与磁珠的结合。
第七步：纯化和浓缩。
通过离心等方式，获得纯化后的核酸溶液，并将其浓缩到较小的体积。
总的来说，磁珠法提取核酸的原理是利用磁珠的磁性以及磁珠表面修饰物与目标核酸的特异性结合，通过磁场的作用实现核酸的分离和纯化。
自动核酸提取仪原理PCR(新)PPT参考幻灯片
chemagic Prepito
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1 – 12 samples per run integrated buffer dispensing revolutionary resuspension technology standard plastic devices chemagic Kits and protocols for a huge variety of
sample materials பைடு நூலகம் quantitative yield, highest purity sample sizes up to 600 µl bar code reading available
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Sample volumes from 1 µl to 10 ml processable High speed, 15 min. for 96 low volume blood
samples Low to high throughput (4,000 samples/d) 96 rod head for parallel separating and
resuspending in 96 well plates 12 rod head for parallel separating and
全自动核酸提取仪基本原理
1 磁笔式 国外：Chemagen 国内：厦门百维信，厦门欧达科，博日
2 吸管式 国外：Roche，Qiagen，生物梅里埃
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Chemagen 核酸提取仪原理示意图
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免疫磁珠技术ppt课件
O 保护性壳可防止磁性内核漏出或被载液腐蚀； O 免疫配基可特异性地结合反应体系中相应的抗原、抗
体、核酸等生物活性物质。
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文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
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1.1.2 免疫磁珠的性质
O 由于免疫磁珠的大小和形状具有均一性， 从而可使 靶物质迅速和有效地结合到磁珠上，也可使生成的新 复合物在磁场中具有相同的磁响应性，且行为一致
O 磁珠的球形结构可消除与不规则形状粒子有关的非特 异性结合
工作量大等缺点。
采用免疫磁珠技术，能够快速地从各种食品样 品中分离富集E.coli O157∶H7，满足流行病学 的研究要求和提高控制力度。
现在这种免疫磁珠的方法已经被英国公共健
康服务实验室认定为标准的分离方法，我国也
已将免疫磁珠法对大肠杆菌O157的检测纳入
国家标准 (GB/T 4789.36-2008 ) 和出入境检
验检疫行业标准(SN/T 1059.5-2006)。
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检样
25g(mL)+225mL改良EC肉汤(mEC+n)，均质225mL
↓ 36±1oC
18h~24h
免疫磁珠捕获
1.2 免疫磁珠技术
O 免疫磁珠( immunomagnetic bead, IMB)技术： 是 一种以特异的抗原抗体反应为基础的免疫学检测和分 离技术。它是以抗体包被的磁珠为载体，通过抗体与 反应介质中特异性抗原结合，形成抗原—抗体复合物， 此复合物在外加磁场的作用下发生定向移动，从而达 到分离抗原的目的。
核酸提取原理及方法课件
新技术与新方法的探索
纳米材料在核酸提取中的应用
利用纳米材料的特性和功能，开发新型核酸提取方法 。
微流控技术在核酸提取中的应用
通过微流控芯片技术，实现核酸的快速、高效提取。
THANKS
感谢观看
核酸完整性的检测
琼脂糖凝胶电泳
通过观察DNA在电场中的迁移行为，判断DNA的完整性。
脉冲场凝胶电泳
利用不同的脉冲电场来分离不同大小和结构的DNA片段，以 评估核酸的完整性和大小分布。
核酸纯度的检测
紫外光谱分析
通过测量核酸在260nm和280nm紫外光下的吸光度，判断核酸中蛋白质、酚 和其他杂质的含量。
基因组测序
通过对基因组进行测序，可以深入了 解基因的结构和功能，为疾病诊断、 药物研发和生物进化研究提供重要信 息。
基因表达分析
通过比较不同组织或条件下的基因表 达谱，可以研究基因在生命活动中的 作用，以及基因与疾病的关系。
分子生物学研究
分子克隆
利用核酸提取技术，可以获得目的基因的克隆，为进一步研究基因的功能和表达调控机制提供基础。
吸附法
原理
利用吸附剂（如硅藻土、氧化铝 等）对DNA的吸附作用，将
DNA从细胞或组织中分离出来。
步骤
细胞裂解→加入吸附剂→搅拌→ 洗涤→解吸附→DNA。
注意事项
操作过程中要控制好吸附剂的用 量和洗涤次数，同时要保证解吸
附时的温度和pH值。
其他提取方法
酶法
利用酶（如蛋白酶、核酸酶等）将细 胞或组织中的DNA或RNA释放出来 ，再进行提取。
高效液相色谱
利用色谱柱将核酸中的杂质与核酸分离，并通过检测器检测纯度。
磁珠法
磁珠法提取DNA试剂盒磁珠法提取DNA试剂盒，它是生物科学和纳米材料科学二者合一的高新技术产品，是我国DNA提取技术和纯化技术的一次大的突破，它彻底的解决了我国DNA的提取与纯化长期依赖进口的局面，其价格只有进口产品的1/3。
中文名磁珠法提取DNA试剂盒属性高新技术产品学科生物科学和纳米材料科学二者合一贡献一次大的突破价格进口产品的1/3技术现状两个问题1背景2DNA提取技术现状3发展历程4适用范围5优势背景众所周知,DNA提取技术是分子生物学研究的基础技术。
提取DNA的纯度及结构的实验，是进行基因工程各项研究所必须的条件，DNA提取技术是DNA检验的第一步骤，也是最关键的步骤。
能否成功地进行DNA检验，完全取决于能否从生物检材中获得纯量的DNA。
DNA提取技术的优劣，将直接关系下游实验的安全与成败。
DNA提取技术现状就我国的DNA提取技术现状来讲，主要存在以下两个问题：1，技术发展滞后。
现在采用的DNA提取技术仍然停留chelex—100法。
有机提取法等常规方法上，存在着提取DNA不纯、耗时、效率低，不能定量提取和DNA提取后扩增成功率低等诸多缺陷。
2，缺少自主的知识产权。
美国、德国、挪威、芬兰等国家的生物公司，这些年来相继开发的新的DNA提取试剂盒，成功的解决了DNA提取纯化和定量提取等很多的难题，尤其是磁珠法可以实现自动化提取的技术更加的诱人。
但由于这些试剂盒基于专利技术，价格昂贵，不可能在国内推广使用。
应用于建立DNA数据库所需大量的生物样本的提取，更是可望不可及的事情。
发展历程2005年7月25日，磁珠法提取DNA试剂盒在公安部第三期法医物证检验技术推广班上受到参会百余名专家学者的一致认可。
2005年11月30日，磁珠法提取DNA试剂盒通过公安部刑事技术产品质量监督检验中心检验。
2005年8月12日，磁珠法提取DNA试剂盒在教育部、初高中生物实验课经验交流会议上受到来自生物实验课知道老师的一致认可和好评。
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提取原理
磁珠法中的细胞裂解液是一种蛋白变性剂，可使动植物的细胞裂解， 并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离释放，磁珠可以特异地吸附 DNA，通过洗涤，去除DNA以外的蛋白质、多糖等杂质，再用洗脱液 解离吸附在磁珠上的DNA，得到纯度和浓度均很高的DNA，可用于 PCR模板、基因工程等。
提取步骤
磁珠法核酸提取
• 洛阳惠尔纳米科技有限公司
• 植物基因组DNA提取试剂盒 • 动物组织基因组DNA提取试剂盒 • 动物病毒（DNA/RNA）提取试剂盒 • 中草药基因组DNA提取试剂盒 • 细菌基因组DNA提取试剂盒 • 全血基因组DNA提取试剂盒 • 血清游离DNA提取试剂盒 • 快速质粒DNA提取试剂盒 • 血清病毒（DNA/RNA）提取试剂盒 • 海洋生物DNA提取试剂盒 • 磁珠法病毒（DNA/RNA）提取试剂盒 • 法医样本DNA提取试剂盒（骨骼、牙齿、指甲等） • 法医样本DNA提取试剂盒（毛发、口腔拭子、血斑、精斑、烟蒂等） • 禽类全血DNA提取试剂盒 • 真菌DNA提取试剂盒 • PCR纯化试剂盒
要，减少人为因素。 4.用时少，操作简单，适用于大多数生物检材。 5.全自动核酸提取最大限度地减少了操作人员与检测的接触，可有效保护实验操作
人员。 6.不使用酚、氯仿、异戊醇等有毒试剂，安全无毒，绿色环保。
效果分析
关于我们
洛阳惠尔纳米科技有限公司
洛阳惠尔纳米科技有限公司 洛阳市高新区凌波路1号惠尔纳米科技园 QQ:625006192 E-mail: dgh@ Web:
磁珠法核酸提取概述
生物磁珠
生物磁珠就是指具有细小粒径的超顺磁微球
1.在磁场中能够迅速聚集，离开磁场后又能够有助于磁分离地均匀分散 2.有合适的且差别较小的粒径，保证了足够强的磁响应性又不会沉降 3.有丰富的表面活性基团，可以和生化物质偶联，并在外磁场的作用下实现与被待测样品的分离
磁珠分类
• 洛阳惠尔纳米科技有限公司主要从事无机纳米材料的公司。
裂解
破坏细胞
结构，使 DNA充分游 离出来
结合
加入磁珠
结合液，使 DNA与磁珠 结合
洗涤
利用洗涤 液去除残留 杂质的DNA 溶液
优点
1. 生物磁珠具有小尺寸效应和表面效应，可高效DNA提取，满足微量生物样本DNA 提取的要求。
2.生物磁珠表面功能团数量可以控制提取的DNA的浓度，实现定量提取的要求。 3.生物磁珠能够通过仪器进行自动化操作，满足数据库建设对大批量样本提取的需
• 按功能用途：环氧基磁珠、氨基磁珠、羧基磁珠、醛基磁珠、硅基磁珠等。 • 按直径：纳米级、微米级、亚微米级 • 按包被情况：裸珠、包被磁珠 • 按磁珠形态：磁流体、磁粉
生物磁珠的用途
1.核酸提取 2.细胞分离（CD4、CD8） 3.蛋白、抗体分离（氨基磁珠、羧基磁珠、环氧基磁珠） 4.重金属检测（巯基磁珠） 5.核磁共振（无包被磁珠）用于造影剂等。