pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响 - 实验教学中心
pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响
根据水解液和碘反应的颜色，可以判断 水解是否已完全，观察底物、温度、pH及 激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
淀粉和蔗糖都无还原性，但淀粉水 解产物为葡萄糖，蔗糖水解产物为 果糖和葡萄糖，均为还原性糖，糖 类的醛基或酮基能与Benedict试剂反 应，生成砖红色的氧化亚铜沉淀
试剂和器材
1. 试剂
新鲜唾液稀释液、2%蔗糖溶液、Benedict试剂、 0.5%淀粉、0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）、 1％氯化钠溶液、0.1％硫酸铜溶液、碘液、 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液、0.1 mol/L柠檬酸溶液
2. 器材
恒温水浴锅、4度冰箱、电磁炉(沸水锅) 纸杯、试管、试管架、锥形瓶，pH试纸
四、激活剂与抑制剂对酶的影响
实验目的 了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。 实验原理 酶的活性受某些物质的影响，能使酶活性增 加的称为激活剂，能使酶活性降低的称为抑制 剂。很少量的激活剂和抑制剂就会影响酶的活 性，而且常具有特异性，但激活剂和抑制剂不 是绝对的，浓度的改变可能使激活剂变成抑制 剂。
操作步骤
3. 淀粉酶的专一性实验
试管编号
（取2只试管，按下表操作）
#1 1 3
#2 1 －
试剂处理
已稀释的唾液溶液（mL） 含0.3％NaCl的0.5%淀粉溶液 （mL） 2%蔗糖溶液（mL） Benedict试剂（mL） 记录观察结果
—
2
3
2
摇匀，置37℃水浴保温15min 摇匀，沸水浴煮沸2min
二、pH对淀粉酶活性的影响
操作步骤 1. 取3个锥形瓶，按下表比例移取磷酸氢二钠溶 液和柠檬酸钠溶液，制备 pH 为 5.0 、 6.8 、 8.0 的 三种缓冲溶液。
实验三抑制剂和激动剂对酶活性的影响
六、思考题：(Questions)
什么叫酶的竞争性抑制作用？举例说明在医 学上的应用。
七.注意事项：(Notices)
1．注意密切观察颜色变化。 2．加入各种试剂要注意看清标签，不能 混用滴管
• 反应模式
竞争性抑制作用
+
I
EI [S]>>[I]：高浓度的底物可解除抑制
竞争性抑制作用特点 1、I结构常与S结构类似 2、I/S与酶的结合部位相同:酶的活性中心 3、[S]↑可以降低甚至消除抑制作用 4、(表观）Km值增大，Vm值不变
1/V
抑制剂↑
1/[S]
• 丙二酸与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶
二、实验原理(Experimental Principles)：
影响酶活性的因素：
温度 pH值 激活剂 抑制剂
对酶活性的抑制作用分类
不可逆性抑制作用
竞争性抑制作用 可逆性抑制作用 非竞争行抑制作用 反竞争性抑制作用
抑制剂(I)与底物(S)的结构相似，能与底 物竞争酶的活性中心，从而阻碍酶底物复 合物的形成，使酶的活性降低。这种抑制 作用称为竞争性抑制作用。 E+S ES E+P
四、操作步骤（Operating Procedure）
1 酶的提取液的制备：将兔子处死，取出肝 脏，切成碎片后，放入乳钵中，每组取8g 左右，加入1/15mol/L的Na2 HPO4溶液 5ml研成糊状后，再加入10 ml1/15mol/L 的Na2 HPO4溶液，混匀后，倒入离心管中， 2000转/分钟离心4分钟，取上清液转入其 它试管备用。
COOH CH2 CH2
琥珀酸脱氢酶
琥珀酸
FAD
COOH CH2 COOH
丙二酸
温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响
温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促作用的影响【目的】通过本实验，观察影响酶促作用的一些因素。
【原理】唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成分子大小不同的糊精及最后水解成麦芽糖。
淀粉及糊精遇碘各呈不同的颜色反应。
直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色，糊精按分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色，睛褐色和红色。
最小的糊精和麦芽糖遇碘不显色。
根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。
由于在不同温度、不同酸碱度下，唾液淀粉酶的活性高低不同，所以淀粉被水解的程度也不一样。
另外，有些物质可作为激活剂，能提高酶活性，有些物质可作为抑制剂，能降低酶活性，也能影响淀粉被水解的程度。
因此、通过与碘产生的颜色反应判断淀粉被水解的程度，了解温度、pH，激活剂和抑制剂对酶促作用的影响。
【试剂】1、1％淀粉溶液配制取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水80毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升。
2、稀释唾液制备将痰咳尽，用水漱口，再含蒸馏水30毫升，作咀嚼运动，2分钟后吐入烧杯中，再用滤纸过滤后待用。
3、不同PH缓冲液（1）PH6.8缓冲液用0.2M磷酸二氢钠溶液772毫升，0.1M柠檬酸溶液485亳升，混合即得。
（2）pH5.0缓冲液取0.2M磷酸氢二钠溶液515毫升，0.1M柠檬酸溶液485毫升，混合即成。
（3）pH8.0缓冲液取0.2M磷酸氢二钠溶液972毫升，0.1M柠檬酸溶液28毫升，混合即成。
4、0.9％NaCl溶液。
5、0.1％CuSO4溶液。
6、0.1％Na2SO4溶液。
【器材】10×100毫米试管、恒温水浴、沸水浴、水浴、蜡笔。
【操作】一、温度对酶促作用的影响1、取试管三支，用蜡笔编号，每管各加入pH6.8缓冲液20滴，1％淀粉10滴。
2、将第一管放入37℃恒温水浴，将第二管放入沸水浴，将第三管放入冰浴。
3、放置5分钟后，分别向各管加入稀唾液5滴，再放回原处。
4、10分钟后，分别向各管滴加碘液1滴，观察三管中颜色的区别，说明温度对酶促作用的影响。
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
激活剂和抑制剂对酶活性影响实验报告
影响酶作用的因素：影响酶促反应的因素常有酶的浓度、底物浓度、pH值、温度、抑制剂、激活剂等。
其变化规律有以下特点：
1、酶浓度对酶促反应的影响：在底物足够，其它条件固定的条件下，反应系统中不含有抑制酶活性的物质及其它不利于酶发挥作用的因素时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。
2、底物浓度对酶促反应的影响：在底物浓度较低时，反应速度随底物浓度增加而加快，反应速度与底物浓度近乎成正比，在底物浓度较高时，底物浓度增加，反应速度也随之加快，但不显著，当底物浓度很大且达到一定限度时，反应速度就达到一个最大值，此时即使再增加底物浓度，反应也几乎不再改变。
3、酶的活性受激活剂或抑制剂的影响。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂，激活剂使酶的活性升高，抑制剂使酶活性降低。
注意事项：
激活剂和抑制剂对于酶活性的影响，常常分不清激活剂，因为加入蒸馏水、NaCl、Na2SO4这3支试管的颜色一致，都是黄色。
出现这种现象的原因是酶活性太高了，需要稀释唾液，唾液稀释至加入蒸馏水的试管呈浅红色即可。
这样一来，这3支试管的颜色分别是浅红、黄、浅红，就可以断定Cl-是激活剂。
偶尔也有分不清抑制剂的就是加入蒸馏水、CuSO4、
Na2SO4这三支试管的颜色一致，都是蓝色。
因为酶活性太低，需要提高酶活性，只要重新制备唾液淀粉酶就行（但是新酶的活性不可太高，否则又分不清激活剂）。
最后3支试管的颜色应该是浅红、蓝、浅红，可以断定Cu2+是抑制剂。
温度ph激活剂和抑制剂对酶活性的影响
（一）、温度、PH对酶活性的影响一、实验目的了解温度对酶活性的影响。
了解酶活性的最适PH及掌握一种检测最适PH的方法。
二、实验原理三、实验步骤1、温度对酶活性的影响取3支试管，编号后按下表加入试剂试管编号试剂1 2 30.2%淀粉溶液1.5 1.5 1.5无稀释唾液/ml1 1煮沸过的稀释唾液/ml 无无1摇匀后，将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。
10min后取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
将2号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。
注意事项：1、唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，0.5~1min后，使其流入量筒，并稀释到50ml。
2、PH对酶活性的影响取4个标有号码的20ml试管。
用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液以制备PH=5.0~8.0的4种缓冲液。
试剂试管编号1 2 3 40.2mol/L磷酸氢二钠/ml5.156.057.72 9.720.1mol/L柠檬酸/ml4.85 3.95 2.28 0.28PH 5 5.8 6.8 8从4个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。
向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。
将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。
第四管加入唾液2min后，每隔1min由第二管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。
待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。
添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第一管起，均为1min。
观察各试管内容物呈现的颜色，分析PH对唾液淀粉酶活性的影响。
注意事项：1、从第三管中取混合液，是因为它的PH接近唾液淀粉酶的最适PH。
酶活性因素_实验报告
一、实验目的1. 探究温度对酶活性的影响；2. 探究pH值对酶活性的影响；3. 探究底物浓度对酶活性的影响；4. 探究酶浓度对酶活性的影响；5. 探究抑制剂和激活剂对酶活性的影响。
二、实验原理酶是一种具有催化功能的蛋白质，其活性受多种因素的影响。
温度、pH值、底物浓度、酶浓度、抑制剂和激活剂等都是影响酶活性的重要因素。
本实验通过探究这些因素对酶活性的影响，了解酶的催化特性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉酶、蔗糖酶、淀粉、蔗糖、pH缓冲液、温度计、酸碱滴定管、试管、烧杯、计时器等；2. 实验仪器：恒温水浴锅、酸度计、酶标仪等。
四、实验方法1. 温度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别置于不同温度（如0℃、20℃、40℃、60℃、80℃）的水浴锅中，保温5分钟；（2）取一定量的淀粉溶液，加入不同温度的淀粉酶溶液，记录反应时间；（3）重复实验3次，计算酶活性。
2. pH值对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液分别置于不同pH值的缓冲液中，如pH 2、pH 4、pH 6、pH 8、pH 10；（2）取一定量的淀粉溶液，加入不同pH值的淀粉酶溶液，记录反应时间；（3）重复实验3次，计算酶活性。
（1）将淀粉酶溶液置于一定温度的水浴锅中；（2）取不同浓度的淀粉溶液，加入淀粉酶溶液，记录反应时间；（3）重复实验3次，计算酶活性。
4. 酶浓度对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液置于一定温度的水浴锅中；（2）取一定量的淀粉溶液，分别加入不同浓度的淀粉酶溶液，记录反应时间；（3）重复实验3次，计算酶活性。
5. 抑制剂和激活剂对酶活性的影响（1）将淀粉酶溶液置于一定温度的水浴锅中；（2）取一定量的淀粉溶液，加入不同浓度的抑制剂（如重金属离子、有机磷化合物等）或激活剂（如ATP、Mg2+等），记录反应时间；（3）重复实验3次，计算酶活性。
五、实验结果与分析1. 温度对酶活性的影响实验结果显示，随着温度的升高，酶活性先逐渐增强，达到一定温度后活性达到最大值，随后活性逐渐降低。
ph对酶活性的影响实验报告
ph对酶活性的影响实验报告PH对酶活性的影响实验报告。
酶是一类生物催化剂，能够加速生物体内的化学反应速率。
酶活性受多种因素影响，其中PH值是一个重要的因素。
本实验旨在探究不同PH值对酶活性的影响，以期为生物化学领域的研究提供一定的参考价值。
实验材料与方法：1. 实验材料，酶溶液、不同PH值的缓冲液、底物液、试管、比色皿等。
2. 实验方法，首先，将不同PH值的缓冲液分别加入到试管中。
然后，分别加入相同量的酶溶液和底物液，并在恒定温度下反应一定时间。
接着，将反应液分别倒入比色皿中进行比色测定，记录不同PH值下的酶活性。
实验结果与分析：经过实验测定，我们得到了不同PH值下酶活性的数据。
通过分析数据，我们发现酶活性随着PH值的变化呈现出不同的趋势。
在中性PH值范围内，酶活性较高；而在酸性或碱性条件下，酶活性则呈下降趋势。
这表明PH值对酶活性有着显著的影响，不同PH值下酶的构象和功能状态发生改变，从而影响了其催化作用的效果。
结论与展望：通过本次实验，我们得出了PH对酶活性的影响规律。
这一规律的发现对于生物化学领域的研究具有一定的指导意义。
未来，我们可以进一步探究不同酶在不同PH值下的活性变化规律，以及PH调节对酶活性的作用机制，为生物医学和生物工程领域的应用提供更为深入的理论基础。
总结：本实验通过对PH对酶活性的影响进行了系统的研究与分析，得出了一定的结论。
这一研究成果对于深入理解酶活性的调控机制，以及在生物医学和生物工程领域的应用具有一定的指导意义。
希望本次实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值。
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。
能提高酶活力的物质，称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。
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温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响
（间接碘量法）
（effects of temperature pH activitor and inhibitor to activity of enzyme）
一、目的
1.了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响
2.学习酶活性的判定
二、原理
酶活性大小可以用反应速度来表示，即在单位时间内，酶所催化底物的消耗量或产物的生成量来衡量。
酶活性大，反应速度就快。
反之则慢。
酶促反应速度受多种因素的影响。
如温度、pH、激活剂、抑制剂等。
本实验是观察在不同温度，pH，以及缺乏激活剂或有抑制剂的条件下唾液淀粉酶的活性大小。
借以验证各种因素对酶活性的影响。
唾液中含有唾液淀粉酶，此酶可以使淀粉逐步水解，最后生成麦芽糖。
麦芽糖具有还原性。
根据淀粉被唾液淀粉酶水解后产物的生成量（即还原性麦芽糖的多少）判定酶活性的大小。
用碘的反滴定法测定还原物的量，还原物多，酶活性大。
具体反应如下：
1、试剂成分（S、H、S试剂）：CuSO4、Na2CO3、NaHCO3、KI、KIO3、酒石酸钾钠、草酸钾。
2、判定酶活性大小的化学反应过程：
Na2CO3 ＋2H2O —→2NaOH ＋ H2CO3
CuSO
4＋2NaOH —→Cu(OH)
2
↓＋Na2SO4
5KI ＋KIO3 ＋ 3H
2SO
4
—→3I2＋3K2SO4 ＋3H2O
酶
淀粉———→麦芽糖麦芽糖＋Cu++—→麦芽糖氧化产物＋Cu+
Cu+＋ I
2
—→Cu++ ＋ 2I-
COO- 草酸钾COO-
Cu++＋|—————→| >Cu
COO- 防止逆反应COO-
剩余I
2
＋Na2S2O3—→2I- ＋Na2S4O6
（与淀粉呈兰色) （与淀粉无色)
3、判定酶活性大小的标志
酶活性大→麦芽糖多→Cu+ 生成量多→I
2
消耗量多→
剩余I
2
少→Na2S2O3消耗量少
酶活性越大，Na2S2O3消耗量越少。
空白实验无酶活性，因此Na2S2O3消耗量最多。
与空白实验进行对比，差值越大，说明此条件下酶活性越大。
三、实验用品：
（一）器材
1.中试管16支。
2.试管架1个。
3.恒温水浴箱1台。
4.温度计1支。
5.50ml量筒1个。
6.吸管：0.5ml 1支，1ml 2支，2ml 1支，5ml 1支，10ml 1支。
7. 25ml、100ml烧杯各1个。
8.电炉子一个。
（二）试剂
1.2% 淀粉溶液
2.1N NaCl溶液：称取58.5gNaCl，溶于1000ml水中。
3.磷酸盐缓冲液
甲液：称取Na
2HPO
4
·12H
2
O 23.9g溶于1000ml水中，既为M/15 Na
2
HPO
4
溶液，
此溶液pH为8.5。
乙液：称取KH
2PO
4
9.08g溶于1000ml水中，既为M/15 KH
2
PO
4
溶液，此溶液
pH为4.5。
取甲液37.5ml，乙液62.5ml，两液混匀后既为pH 6.6磷酸盐缓冲液。
4. 0.01% HgCl
2。
5.1N H
2SO
4
溶液：取水约250ml，加入浓H
2
SO
4
28ml，稀释至1000ml。
6.Shaffer-Hartman-Somogyi试剂（S、H、S试剂）
溶液A：结晶硫酸铜（CuSO4.5H2O）6.5g溶于100ml水中。
溶液B：酒石酸钾钠12g，无水碳酸钠20g，碳酸氢钠25g溶于500ml水中。
溶液C：碘化钾10g，碘酸钾0.8g，草酸钾18g溶于300ml水中。
将溶液B倒入溶液A中混匀，再倒入溶液C混匀后定容至1000ml。
7.标准0.005N Na2S2O3溶液：取硫代硫酸钠（Na2S2O3.5H2O）25g溶于1000ml 水中。
此溶液浓度约为0.1N ，其准确浓度须用碘酸钾标准方法标定。
（方法略）取已调整至0.1N 标准Na2S2O3溶液50ml稀释至1000ml即为0.005N。
四、实验步骤：
1、制备稀释唾液：收集唾液于小烧杯内，吸取下层唾液0.5ml（要求无气泡）加入量筒内，用蒸馏水稀释至25ml，混匀备用。
2、取中试管8支，标号0—7，0号为空白对照，1-3号为测定温度对酶活性的影响，4-5号为pH对酶活性的影响，6-7号为激活剂和抑制剂对酶活性的影响
按下表操作。
加入试剂及唾液后各管充分混匀。
影响因素管号淀粉NaCl 缓冲溶液H2O 温度稀释温度
（ml）（ml）pH ml ml 时间唾液时间
空白0 4.0 2.0 6.6 2.0 3.0 37℃ 10ˊ-- 37℃20ˊ温度的 1 4.0 2.0 6.6 2.0 2.5 37℃ 10ˊ0.5 37℃20ˊ影响 2 4.0 2.0 6.6 2.0 2.5 10℃ 10ˊ0.5 10 ℃20ˊ 3 4.0 2.0 6.6 2.0 2.5 80 ℃10ˊ0.5 80℃20ˊpH值的 4 4.0 2.0 4.5 2.0 2.5 37℃ 10ˊ0.5 37℃20ˊ影响 5 4.0 2.0 8.5 2.0 2.5 37℃ 10ˊ0.5 37℃20ˊ激活剂 6 4.0 — 6 .6 2.0 4.5 37 ℃10ˊ0.5 37℃20ˊ抑制剂 7 4.0 HgCL2 6 .6 2.0 2.5 37 ℃10ˊ0.5 37℃20ˊ的影响（2ml）
3、充分混匀后开始保温，保温后立即由各管吸取2ml分别加入已预先加入2ml S、H、S试剂相应号码的试管中，并充分混匀。
4、各管放入沸水中加热8分钟。
5、向各管加入1N H2SO4 2ml，轻轻摇动至不产生气泡为止。
6、以0.005N Na2S2O3滴定各管，至蓝色消退为止。
并记录结果。
7、由零号试管消耗Na2S2O3 ml数分别减去其余各管所消耗ml数，以此结果判定各种因素对酶活性的影响。
五、实验结果与分析（略）
思考题：
1.本实验判定酶活性大小的化学反应过程是什么？为什么酶的活性越大，消耗Na2S2O3越少？
3.加入H2SO4的作用是什么？
3.根据实验结果分析温度、pH、激活剂、抑制剂对酶活性的影响。
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