4-2淀粉酶的激活剂与抑制剂
实验一：酶的性质：影响酶活性的因素(淀粉酶为例)
速度，但另一方面又会加速酶蛋白的变性速度，所以在较低的
温度范围内，酶反应速度随温度升高而增大，但是超过一定温 度后，反应速度反而下降。
酶反应速度达到最大时的温度称为酶的最适温度。酶的最
适温度不是一个常数，它与作用时间的长短有关系。
三、试剂和器材
1. 试剂
0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液、新鲜唾液、KII2溶液
粉的作用为例，说明酶的特异性。淀粉和蔗糖都没有还原性， 但淀粉水解产物为葡萄糖，蔗糖水解产物为果糖和葡萄糖， 均为还原性糖，能与Benedict试剂反应，生成砖红色的氧化 亚铜沉淀。
三、试剂和器材
1. 试剂
新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、 0.5%淀粉、含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液
锥形瓶号
1 2 3
0.2mol/L磷酸氢 二钠（mL）
5.15 7.72 9.72
0.1mol/L柠 檬酸
4.85 2.28 0.28
缓冲液pH
5.0 6.8 8.0
2. 另取3只干净试管，按下表操作。
2. 另取3只干净试管，按下表操作。
试管编号 试剂处理 pH5.0缓冲溶液/mL pHh6.8缓冲溶液/mL pHh8.0缓冲溶液/mL
淀粉 → 红色糊精→ 无色糊精 → 麦芽糖 → 葡萄糖 （紫蓝色）（红色） （无色）
所以根据水解液和碘反应的颜色，可以判断水 解是否已完全。
三、试剂和器材
1. 试剂
新鲜唾液稀释液、1%蔗糖溶液、Benedict试剂、 0.5%淀粉、含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液、 5％氯化 钠溶液、0.1％硫酸铜溶液、 0.2 mol/L磷酸氢二钠 溶液、柠檬酸钠溶液、KI-I2溶液
一、实验目的
温度、PH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
（一）、温度、P H对酶活性的影响一、实验目的了解温度对酶活性的影响。
了解酶活性的最适PH及掌握一种检测最适PH的方法。
二、实验原理三、实验步骤1、温度对酶活性的影响取3支试管，编号后按下表加入试剂试剂试管编号1 2 30.2%淀粉溶液 1.5 1.5 1.5稀释唾液/ml 1 1 无煮沸过的稀释唾液/ml 无无 1摇匀后，将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。
10min后取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
将2号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何？记录并解释结果。
注意事项：1、唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，0.5~1min后，使其流入量筒，并稀释到50ml。
2、PH对酶活性的影响取4个标有号码的20ml试管。
用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液以制备PH=5.0~8.0的4种缓冲液。
试剂试管编号1 2 3 40.2mol/L磷酸氢二钠/ml 5.15 6.05 7.72 9.720.1mol/L柠檬酸/ml 4.85 3.95 2.28 0.28PH 5 5.8 6.8 8 从4个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。
向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。
将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。
第四管加入唾液2min后，每隔1min由第二管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。
待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。
添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第一管起，均为1min。
观察各试管内容物呈现的颜色，分析PH对唾液淀粉酶活性的影响。
淀粉酶酶学性质的研究
生物化学学号：淀粉酶酶学性质的研究学生姓名：####指导教师：#####所在院系：生命科学学院所学专业：#######学号：######### 大学中国·哈尔滨2011 年12 月摘要：酶是酶是一种生物催化剂，它具有催化剂属性，同是也具有一些无机催化剂所不具有的特性。
催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。
是生物催化剂，能通过降低反应的活化能加快反应速度，但不改变反应的平衡点。
本实验通过利用淀粉酶水解还原糖，还原糖能使3，5-二硝基水杨酸还原，生成棕色的3-氨基-5硝基水杨酸。
淀粉酶活力与还原糖的量成正比，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位质量样品在一定时间内生成还原糖的量表示酶活力。
酶的活性又同时受到温度、PH、激活剂抑制剂等的影响。
关键词：淀粉酶活力温度 PH 激活剂和抑制剂前言：淀粉酶是水解淀粉和糖原的酶类总称，通常通过淀粉酶催化水解织物上的淀粉浆料，由于淀粉酶的高效性及专一性，酶退浆的退浆率高，退浆快，污染少，产品比酸法、碱法更柔软，且不损伤纤维。
淀粉酶的种类很多，根据织物不同，设备组合不同，工艺流程也不同，目前所用的退浆方法有浸渍法、堆置法、卷染法、连续洗等，由于淀粉酶退浆机械作用小，水的用量少，可以在低温条件下达到退浆效果，具有鲜明的环保特色。
此酶以Ca2+为必需因子并作为稳定因子和激活因子，也有部分淀粉酶为非Ca2+依赖型。
淀粉酶既作用于直链淀粉，亦作用于支链淀粉，无差别地随机切断糖链内部的α－1，4-链。
因此，其特征是引起底物溶液粘度的急剧下降和碘反应的消失，最终产物在分解直链淀粉时以葡萄糖为主，此外，还有少量麦芽三糖及麦芽糖，其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的终产物主要以麦芽糖为主且不含大分子极限糊精，在烘焙业和麦芽糖制造业具有广泛的应用。
另一方面在分解支链淀粉时，除麦芽糖、葡萄糖、麦芽三糖外，还生成分支部分具有α-1，6-键的α-极限糊精（又称α-糊精）。
生物化学实验4-2淀粉酶的激活剂与抑制剂
淀粉酶的激活剂与抑 制剂
一、实验目的
了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。
二、原理
酶的活性受某些物质的影响，能使酶活 性增加的称为激活剂，能使酶活性降低的 称为抑制剂。很少量的激活剂和抑制剂就 会影响酶的活性，而且常具有特异性，但 激活剂和抑制剂不是绝对的，浓度的改变 可能使激活剂变成抑制剂。
三、试剂和器材
1. 试剂 1％淀粉溶液、新鲜唾液稀释液、5％氯化 钠溶液、0.1％硫酸铜溶液、KI-I2溶液 2. 器材 试管和试管架、恒温水浴锅 Nhomakorabea四、操作方法
取3只试管，照下表操作。
试管 编号 试剂处理 1％ NaCl溶液 /mL 0.1%CuSO4溶液 /mL 蒸馏水 1%淀粉溶液/mL 稀释的唾液/mL
1
2
3
1 _ _ 3 1
_ 1 _ 3 1
_ _ 1 3 1
摇匀，放入37℃恒温水浴中保温10～15min，取出， 冷却 KI-I2溶液/mL 记录观察结果 2滴 2滴 2滴
五、思考题
1、试说明可逆抑制剂与不可逆抑制剂的作用特 点。 2、三种可逆抑制剂的抑制程度与底物浓度有何 关系？
酶的抑制剂与激活剂
(4)反应结束时加入10%三氯醋酸溶液2 ml(终止反应) ， 立即摇匀，静置10 min。
(5)各取上清1.5ml于EP管中，6000rpm,离心1min 。取上 清1ml于试管中，各加入0.4 mol/L Na2CO3溶液5ml及 福林一酚试剂1 ml，置于40℃显色15 min 。
(6)测定OD680值 ，并以原酶活力为100，算出相对酶活 。空白试验时，先加三氯醋酸溶液，再加入酶液和 底物，同样测定OD680值。
Folin-酚法测碱性蛋白酶酶活原理
Folin-酚试剂在碱性条件下，其磷钼酸盐-磷钨酸 盐易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钼蓝和钨蓝的混 合物)。
在一定浓度范围内，蓝色深浅与含酚羟基氨基酸 (酪 氨酸)的量成正比，通过比较加入金属离子(或洗衣粉)后 和未加入金属离子(或洗衣粉)的反应酶液的OD680值，可 以推断出该种金属离子是该酶的激活剂还是抑制剂。
2．洗衣粉对酶活力的影响： (1)分别在pH 7.0和pH 10.0酶液中加入洗衣粉(反应液
终浓度为0.03%)。 (2)混合液和pH7原酶液、 pH7空白(共4支)于25℃下放
置20 min。 (3)测酶活力，并以原酶活力为100，算出相对酶活。
五.注意事项
1.实验中，以先加TCA的酶液为空白，以原酶液试管为 标准液，对其操作应与实验试管同步一致。
表2 洗衣粉对酶活力的影响
剩余酶活
相对酶活
pH7.0 酶
100
标
准
pH10.0 酶
100
洗 pH7.0酶
100
衣
粉 pH10.0 酶
100
八.问题与思考
1.根据你的实验结果，上述实验因子哪些是枯草杆 菌碱性蛋白酶的抑制剂，哪些是激活剂？
"激活剂与抑制剂对酶促反应的影响"实验的新型装置
“激活剂与抑制剂对酶促反应的影响”实验的新型装置赵玉萍【摘要】摘要:“激活剂与抑制剂对酶促反应的影响”实验,是影响酶活性的因素中其中一个实验,在多年的实验教学中发现该实验存在一些问题,从而使实验结果有较大的差异,为此笔者在以马如骏编写的第三版《生物化学》教材原有实验三的基础重新进行设置后,实验效果更好。
【期刊名称】生物学杂志【年(卷),期】2011(028)003【总页数】2【关键词】关键词:激活剂与抑制剂;唾液淀粉酶;实验设置1 原实验存在的问题笔者在多年的生物化学实验教学中发现“激活剂与抑制剂对酶促反应的影响”实验中存在一些问题,使老师和学生疑惑不解。
实验目的不够明确;实验原理有待于进一步完善;实验器材不够齐全;在制备酶方面存在不足;1%淀粉溶液的浓度偏低;使用Na2SO4和H2O的实验结果相同,因而不能体现Na2SO4的盐析作用。
2 实验的改进与重新设置2.1 目的通过观察激活剂与抑制剂及盐析作用对酶促反应的影响,从而了解淀粉被水解的程度。
2.2 原理唾液淀粉酶可催化淀粉水解,生成分子量大小不同的糊精,最后水解为麦芽糖。
淀粉被酶水解的程度,可通过遇碘呈不同颜色来观察。
淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序,遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色,最小的糊精和麦芽糖遇碘不显色。
酶的活性受许多因素的影响,使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质称为酶的激活剂;能够有选择地使酶活性降低或丧失但不能使酶蛋白变性的物质称为酶的抑制剂。
如是唾液淀粉酶的激活剂,而Cu2+为其抑制剂。
因此可根据颜色反应判断淀粉被水解的程度,进而判断激活剂与抑制剂对酶促反应的影响。
2.3 器材在原器材的基础上再增加小烧杯(50mL)、冰浴、滴管、漏斗、滤纸或纱布。
2.4 关于制备唾液淀粉酶的改进在制备唾液淀粉酶前,先漱口以除去口腔中的食物残渣;制备前先给学生讲吃酸杏子或望梅止渴的故事,3～5min后取自然分泌的唾液。
目的是缩小他们在制备唾液淀粉酶时分泌量的差异;原教材是用单个学生的唾液直接后续实验,而改进后的实验是混合4～5人的唾液,并将其稀释十倍,目的是减小酶的个体差异,消除各人的酶对酸碱度的适宜程度不同的影响及得到相对一致的酶浓度[1-3]。
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响
实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。
能提高酶活力的物质，称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。
温度、PH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响
（一）、温度、PH对酶活性的影响一、实验目的了解温度对酶活性的影响。
了解酶活性的最适PH及掌握一种检测最适PH的方法。
二、实验原理三、实验步骤1、温度对酶活性的影响取3支试管，编号后按下表加入试剂试剂试管编号1 2 3%淀粉溶液稀释唾液/ml 1 1 无煮沸过的稀释唾液/ml 无无 1摇匀后，将1、3号两试管放入37摄氏度恒温水浴中，2号试管放入冰水中。
10min后取出，将2号试管内的液体分为两半，用碘化钾-碘溶液来检验1、2、3号试管内淀粉被唾液淀粉酶水解的程度。
将2号试管剩下的一半溶液放入37摄氏度水浴中继续保温10min后，再用碘液检验，结果如何记录并解释结果。
注意事项：1、唾液制备时，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一小口蒸馏水，~1min后，使其流入量筒，并稀释到50ml。
2、PH对酶活性的影响取4个标有号码的20ml试管。
用吸管按下表添加L磷酸氢二钠溶液和L柠檬酸溶液以制备PH=~的4种缓冲液。
试剂试管编号1 2 3 4L磷酸氢二钠/mlL柠檬酸/mlPH 5 8 从4个试管中各取缓冲液3ml，分别注入到4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加%淀粉溶液2ml和稀释唾液2ml。
向各试管中加入稀释唾液的时间间隔分别为1min。
将各试管内容物混匀，并依次置于37摄氏度恒温水浴中保温。
第四管加入唾液2min后，每隔1min由第二管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1滴碘化钾-碘溶液，检验淀粉的水解程度。
待混合液变为棕黄色时，向所有试管中依次添加1或2滴碘化钾-碘溶液。
添加碘化钾-碘溶液的时间间隔从第一管起，均为1min。
观察各试管内容物呈现的颜色，分析PH对唾液淀粉酶活性的影响。
注意事项：1、从第三管中取混合液，是因为它的PH接近唾液淀粉酶的最适PH。
2、间隔1min，是为了有足够的时间去加稀释唾液和足够时间观察颜色，保证各试管反应时间相同。
四、实验结果1、温度1 2 3浅蓝一半暗褐一半浅蓝深蓝2、PH1 2 3 4深蓝浅蓝浅紫深紫分析：酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。
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_ _ 3 1
_
1 _ 3 1
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摇匀，放入37℃恒温水浴中保温10～15min，取出， 冷却
KI-I2溶液/mL
记观察结果
2滴
2滴
2滴
五、思考题
1．本实验中如何通过淀粉液加碘后的颜色的变 化来判断酶促反应快慢的？ 2．如何通过加入班氏试剂后生成沉淀多少来反 映酶促反应快慢的？ 3．通过本实验，结合理论课的学习，小结出哪 些因素影响唾液淀粉酶活性？是如何影响的？
1. 试剂
0.5％淀粉溶液、新鲜唾液稀释液、5％氯 化钠溶液、0.1％硫酸铜溶液、KI-I2溶液 2. 器材 试管和试管架、恒温水浴锅
四、操作方法
取3只试管，照下表操作。
试管 编号 试剂处理
1
2
3
1％ NaCl溶液 /mL
0.1%CuSO4溶液 /mL 蒸馏水 0.5%淀粉溶液 /mL 稀释的唾液/mL
实验四－2
淀粉酶的激活剂与抑制剂
一、实验目的
了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。
二、原理
酶的活性受某些物质的影响，能使酶活
性增加的称为激活剂，能使酶活性降低的 称为抑制剂。很少量的激活剂和抑制剂就 会影响酶的活性，而且常具有特异性，但 激活剂和抑制剂不是绝对的，浓度的改变
可能使激活剂变成抑制剂。
三、试剂和器材