实验一 红细胞计数

实验一红细胞计数

一、实验目的：

掌握红细胞计数原理及技术。

二、实验原理：

用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。

三、实验器材及试剂：

显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。

四、实验操作：

1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。

2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。

3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。

4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。

5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。

6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。

五、计算

N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升

×5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数

× 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数

× 106：1ul换算为1升内红细胞数

× 200：稀释倍数

六、正常参考值

正常参考值：成年男性：4.00-5.50×1012/升

成年女性：3.50-5.00×1012/升

新生儿： 6.00-7.00×1012/升

实验二血红蛋白测定

一、实验目的：

掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。

二、实验原理：

血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。

HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。

三、实验操作：

1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。

2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水或空白转化液调零，测定吸光度。

3、用血红蛋白浓度为50g/L、100g/L、150g/L、200g/L在721型分光光度计上测定吸光度分别为0.13，0.27，0.405，0.54.

四、计算:血红蛋白（g/L）=测定管吸光度×367.7

成年女性：110-150g/L

新生儿： 170-220g/L

实验三白细胞计数

一、实验目的：

掌握白细胞计数显微镜计数法原理及技术。

二、实验原理：

用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经过换算求得每升血液内的白细胞数。

三、实验器材及试剂：

显微镜、微量吸管、计数板、盖玻片、白细胞稀释液。

四、实验操作：

1、取试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。

2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升。

3、擦去管尖外部余血、轻轻注入稀释液底部，再吸取上清液清洗3次，摇匀。

4、将计数板与盖玻片用软布擦净，将盖玻片覆盖于计数池上，再用微量吸管吸取悬液，充入计数池与盖玻片间的细缝隙中，静止2-3分钟，待白细胞下沉。

5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数。

五、计算

(四个大方格内WBC数/4)×10×20× 106 = WBC数/升

六、正常参考值

正常参考值：成人：（4-10）×109/升

新生儿：（15-20）×109/升

6月-2岁：（11-12）×109/升

实验四白细胞分类计数

一、实验目的：

掌握白细胞分类计数、原理及技术。

二、实验原理：

把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，经wright染色后，显微镜下观察，根据白细胞形态特点逐个分类计数。得出各种白细胞的相对比值，并注意观察其形态和质量的变化。

三、实验器材及试剂：

显微镜、染色缸和架，载玻片、瑞氏染液、香柏油、二甲苯。

四、实验操作：

1、取末梢血1滴。置于载玻片的一端，以边缘平滑的推片制成血涂片，空气干燥。

2、用蜡笔在血膜两端划线，以防染液溢出，然后将血片放于染色架上。

3、先加瑞氏染液数滴，使其覆盖整个血膜，固定染色细胞0.5-1分钟。

4、按1：1或1：2加缓冲液与染料混匀，染色10分钟左右。

5、在血膜染10分钟后，用缓冲液或接近中性的水冲去洗液，待自然干燥或滤纸吸干后，用镜油观察。

五、计数方法：

2、选择血涂片的体尾交界处，染色良好的区域，在油镜下计数100-200个白细胞，按其形态特征进行分类计数，求出各自白细胞所占数值（百分率）。

3、白细胞分类计数方法很多，常用的有，完全记录法、半记录法、分类计数器计数法。

4、每个病人应分类白细胞数，视白细胞总数多少而定。

5、各类细胞所占的百分率乘以白细胞总数/升，既得每升血液中各类白细胞的浓度。

实验五血小板计数

一、实验目的：

掌握血小板计数原理及技术。

二、实验原理：

尿素液能溶解红细胞及白细胞而保存完整形态的血小板，经稀释后在血细胞计数池内直接计数以求得每升容积血液内的血小板数。

三、实验操作：

1、取试管1支，加血小板稀释液0.38ml。

2、先让手指温暖充血，皮肤消毒待干后深刺使血液流出擦去刚出现的少量血。

3、用微量吸管迅速准确地吸取自然流出的第一滴血液20微升，取血时避免产生气泡或多次上下吹吸，取好后立即将血轻轻注入已盛稀释液的试管底部，吸上清液漱洗吸管三次，轻轻混匀。

4、擦净并放好计数板和盖玻片，将试管轻轻震荡1分钟，用吸管吸悬液一滴，注入计数池，避免产生气泡或溢出，放置10-15分钟，待血小板下沉。

5、先用低倍镜找到中央大方格，换高倍镜计数中央大方格内的血小板数，各中格内的血小板差异不得超过10个，如每中格内血小板数小于1个时，应将全大格数完或另滴计数板，再数一大格作对照。

四、计算

五个中方格内所得的血小板数× 109 /L

五、参考值

正常参考值： 100～300×109/L

实验六尿液的一般检查、尿液酸碱度和尿比重

一、尿量

1、尿量：

指24h内排出体外的尿液总量。

2、参考值：

成年人：1-2L/24h，即1ml/（h·kg体重）；

儿童按体重计算尿量，大约比成年人多3-4倍。

3、临床意义：

（1）多尿是指24h尿量超过2.5L。

（2）少尿或无尿：少尿指每小时尿量持续小于17ml（儿童＜0.8ml/kg）或24h尿量少于0.4L；12h无尿或24h小于100ml为无尿；无尿发展至排不出尿称尿闭。

二尿液酸碱度（尿液分析试条目测八联试纸法）

（一）、实验原理：