网状纤维染色液(改良Gomori银氨法)
网状纤维染色的影响因素分析
网状纤维染色的影响因素分析摘要】网状纤维是网状结缔组织的一种纤维，为分支交织成网的纤细纤维，由含有糖蛋白的胶原蛋白组成。
在一定病理条件下，可能转变为胶原纤维。
网状纤维染色在病理诊断中意义显著，染色方式诸多，极易受到多种因素影响，结合实际情况，本文首先阐述了网状纤维染色在病理诊断中的意义，后对影响网状纤维染色的相关因素以及解决方式进行全面分析，旨意为相关人员的研究工作提供参考资料。
【关键词】网状纤维染色；影响因素；解决方式；质量提升【中图分类号】R73 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）25-0134-02在对患者开展临床病理检查过程中，切片内网状纤维（下称纤维）以及糖类物质显示对于癌瘤组织来源以及多种疾病鉴别诊断有着相当重要的现实意义。
在通常情况下，除了要进行嗜银染色以显示网状纤维以外，也要开展PAS染色，以显示出糖类物质。
流程相对繁琐、费时费力，这在很大程度上影响了诊断时间[1]。
结合实际情况，本文全面分析了影响网状纤维染色的因素，以寻求合适染色方式，提升工作效率。
现将具体结果汇报如下。
1.网状纤维染色在病理诊断中的意义网状纤维染色应用广泛，在病理诊断中意义显著，组织内的网状纤维多寡以及分布特征，预示着不同的病理诊断结果。
网状纤维染色基本原理[2]为组织内的蛋白质和银化合物结合，再经过还原成为金属银沉淀于组织内及其表面，因此得以着色，该染色能够全面显示病理组织网状支架受损详情。
纤维多寡、疏密、是否存在断裂等，对于判别疾病性质以及病情发展、预后来讲，均存在相当重要的现实意义[3]。
这一点重点体现在肿瘤疾病诊断中，如用此染色方法鉴别上皮性还是非上皮性来源恶性肿瘤、血管内皮细胞瘤或外皮细胞瘤、恶性淋巴瘤或组织细胞肉瘤、粘液纤维瘤与粘液肉瘤、脑膜瘤与星形细胞瘤等，还可用于判断肝组织的网状支架塌陷破坏或增生情况。
2.影响网状纤维染色的相关因素以及解决方式2.1 切片厚度我们科室切片厚度为3～5微米。
乳腺纤维上皮肿瘤性病变中不同纤维分布特点
乳腺纤维上皮肿瘤性病变中不同纤维分布特点丁桂龄;章亚琴;邢宏宇;徐光;郑唯强【摘要】目的探讨乳腺纤维上皮性肿瘤间质中不同纤维成分的分布特点.方法利用组织学三联特殊染色法检测26例乳腺纤维腺瘤和14例乳腺分叶状肿瘤中不同纤维的染色分布.结果乳腺纤维腺瘤和分叶状肿瘤中肿瘤间质均以网状纤维与胶原纤维两种成分为主,前者主要分布于导管的基膜,后者在导管周围间质中最丰富,二者在不同肿瘤中的分布有明显差异.结论乳腺纤维上皮性肿瘤中纤维分布的特点及其不同纤维的分布差异,为探索乳腺纤维上皮性肿瘤的发生、发展、鉴别诊断提供基础理论依据.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2013(029)011【总页数】3页(P1184-1186)【关键词】乳腺纤维上皮性肿瘤;胶原纤维;网状纤维;弹力纤维;特殊染色【作者】丁桂龄;章亚琴;邢宏宇;徐光;郑唯强【作者单位】第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433;第二军医大学附属长海医院病理科,上海200433【正文语种】中文【中图分类】R737.9正常乳腺导管的周围间质中主要由纤维母细胞、颗粒状基质、胶原纤维束和偶见的弹力纤维构成，从内向外作交替同心层状排列[1]。
最常见的乳腺纤维上皮性肿瘤包括乳腺纤维腺瘤和乳腺分叶状肿瘤。
乳腺纤维腺瘤是由乳腺上皮和纤维组织按不同比例增生构成;乳腺分叶状肿瘤有良恶性之分，也是由纤维、上皮两种成分共同组成的一型肿瘤。
二者基本组织相似，除分叶状肿瘤因良恶性不同而其纤维含量的丰富程度不同外，其间质的纤维成分是否相似，尤其是不同纤维成分的比例分布情况，尚未见文献报道[2]。
目前对弹力纤维和网状纤维的染色有不同的改良方法[3，4]。
本文现利用三联染色法观察[5]乳腺纤维腺瘤和分叶状肿瘤中胶原、网状和弹力纤维的分布情况。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。
病理学 (2)
病理学1. 优质切片的先决条件是（） [单选题] *A. 固定(正确答案)B. 染色C. 透明D. 切片E. 脱水2. 下列哪种溶液被推荐为病理标本的首选固定液（） [单选题] *A. 10%福尔马林液B. 10%中性缓冲甲醛液(正确答案)C. 酒精D. Zenker固定液E. 甲醇3. 脂肪染色最好的标准封固剂是什么？（） [单选题] *A. 中性树脂B. 甘油明胶封固剂(正确答案)C. 液体石蜡D. 松节油E. 二甲苯4. 以下哪种是幽门螺杆菌的染色法（） [单选题] *A. PAS染色法B. Warthin-starry染色法(正确答案)C. 过碘酸雪夫反应法D. Gridley染色法E. 奥辛蓝染色法5. 固定的目的下列哪项正确（） [单选题] *A. 增加组织硬度B. 防止细胞自溶C. 凝固细胞内物质D. 以上都对(正确答案)E. ABC都不对6. 最常用的石蜡切片机是（） [单选题] *A. 骨组织切片机B. 冰冻切片机C. 旋转式切片机(正确答案)D. 超薄切片机E. 螺旋式切片机7. 具有剧毒作用的固定剂是（） [单选题] *A. 重铬酸钾(正确答案)B. 四氧化锇C. 铬酸D. 苦味酸E. 高锰酸钾8. 常用于脱钙的酸类是（） [单选题] *A. 硝酸(正确答案)C. 醋酸D. 磷酸E. 甲酸9. 以下哪种不是细胞质染料?（） [单选题] *A. 美蓝(正确答案)B. 橙黄-GC. 伊红D. 苦味酸E. 光绿SF(lght green SF)10. HE染色中呈蓝色的成份是（） [单选题] *A. 红细胞B. 细胞核(正确答案)C. 嗜酸性颗粒D. 细胞质E. 细胞膜11. 常规HE制片固定的目的？（） [单选题] *A. 保持离体组织细胞与生活时的形态相似B. 保持细胞内组织抗原，DNA及RNA，便于进一步的特殊检查。
C. 硬化组织有利于切片D. 有利于染色反应，便于光镜下对细胞内不同成分进行区别。
Gomori银染色法
[试剂配置]
氨性银溶液甲液:硝酸银10.2g，蒸馏水 100ml，乙液：氢氧化钠3.1g，蒸馏水 100ml。 取甲液5ml，滴加氨水至溶解清亮为止。 再加入5ml乙液，此时该溶液突然变为黑 色，在滴加氨水至清亮为止。补加4滴氨 水，用蒸馏补足50ml。
染色步骤
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片5um，常规脱蜡至水 （2）高锰酸钾氧化液（高锰酸钾0.5g，蒸馏水95ml，在加入5ml 3%硫酸）5min。再用自来水洗1min。 （3）2%草酸漂白2min，水洗2min （4）2%硫酸铁氨媒染2min （5）水洗1min，蒸馏水洗2次 （6）加入氨性银溶液内1min。 （7）蒸馏水洗2次后。用20%甲醛液还愿5min。 （8）蒸馏水浸洗2次 （9）0.2%氯化金液1min，蒸馏水洗2次 （10）用丽春红S苦味酸染色液复染3-5min。 （11）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：
网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景 呈黄色。
注意事项：
()
Gomori银染色法
主讲：李磊
姜明星
概述：
网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维， 由交错排列的纤维组成，还有大量堆积时 则形成致密的网状，固有网状纤维之称。 若用银氨液浸染能使纤维变成黑色，固又 称为嗜银纤维（argentaffin fibres）
原理：
由于组织蛋白质与银化合物的结合，在经 过甲醛还原成为金属银而沉淀于组织内及 表面的物质。
几种常用特殊染色操作过程中的要点
一、网状纤维染色 ——氢氧化银氨法（Gomori法）
5
（一）网状纤维的形态结构
较细的纤维组织、短、分支多，交织成网状
（与胶原纤维共同为细胞丰富的器官起到支撑作用）
HE呈淡红色，银氨液浸染、甲醛还原后呈黑色
（嗜银性/嗜银纤维：黑色）
主要由Ⅲ型胶原蛋白构成，表面被覆糖蛋白
（PAS染色：淡紫红色）
6
＋蒸馏水，洗涤沉淀（50-100ml蒸馏水） <反复/3次，沉淀不浑浊>
留下沉淀及少许上清液（4ml）
<保留沉淀物质>
逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入）
<边加摇晃>
至沉淀逐渐完全溶解
<无色溶液>
逐滴＋10%硝酸银，至刚出现浑浊 加氢氧化铵一至数滴，使沉淀消失
＋蒸馏水至40ml，2-8°C冰箱
<浑浊状态>
2
四、淀粉样物 刚果红法（甲醇刚果红、碱性刚果红）、甲基紫法 五、色素 含铁血黄素（Perls）、黑色素（Masson-Fontana）铜（罗 丹明、红氨酸） 六、糖类物质 糖原（PAS）、黏液物质（AB-PAS、AB） 七、脂内物质 中性脂肪（苏丹Ⅲ、Ⅳ、油红O）
3
八、神经组织 尼氏体（硫瑾、甲苯胺蓝）、神经髓鞘（变色酸2R、砂罗 铬花青） 九、肝脏穿刺 Masson、网状纤维、含铁血黄素、PAS、铜等。 十、肾脏穿刺组织 Masson、六胺银、PAS、刚果红等
1.氧化（KMnO4）：使网状纤维内羟基转变为醛基。<选择性> 2.漂白（H2C2O4）：棕色变为无色。 3.媒染（铁明矾）：增加网状纤维对银氨液的选择性。 4.浸银（氢氧化银氨）：银氨液中Ag（NH3）2+被组织吸附后与醛基结合。 5.还原（甲醛）：与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成黑色的金属 银。
各种组织染色方法大全主要内容结缔组织多色染色法胶原纤维染色
各种组织染色方法大全主要内容：结缔组织多色染色法胶原纤维染色法网状纤维染色法弹力纤维染色法第一节结缔组织多色染色法一、Mallory三色染色法1. 试剂配制（1）重铬酸钾液重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml （2）苯胺蓝桔黄G液苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml（3）酸性复红液酸性复红0.5g，蒸馏水100ml2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（2）重铬酸钾液10min。
（3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。
（4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。
（5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。
（6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。
4.注意事项（1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。
（2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。
（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。
（4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。
二、Masson三色染色法1.试剂配制（1）Masson复合染色液酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。
（2）亮绿染色液高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。
2.染色步骤中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（1）Masson复合染色液5min。
（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。
（3）5%磷钨酸5-10min。
（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。
（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。
（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
3.结果胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。
4.注意事项（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。
（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。
改良Gomori网状纤维染色减少背景染色的体会
例、 丙型肝炎 ２ ０例 、 内胆 管细 胞癌 ５ ０ 肝 ０例 、 内胆 管结石 肝 １５例 、 发性 胆汁性肝硬化 ６例 、 ０ 原 自身免疫性肝炎 １ ０例 、 肝 局 灶性结 节性 增生 ４例 。其 中 ４０例 用改 良 Ｇ ｍ ｒ 染色 ， ０ ｏ ｏｉ
４ ７例标本做经典 Ｇ ｍ ｒ染色 。 ０ ｏ ｏｉ
・
１５ ・ ２４
『 与 实验病理学杂志 临床
ＪＵｉ Ｅ ｐＰ ｔｏ ０ １Ｎ ｖ２ （ １ ｎ ｘ ａｈｌ ２ １ ｏ ；７ １ ）
改 良 Ｇ ｍ ｒ 网状纤维染色减少 黄 熊喜 生 ， 郑智 勇
关 键 词 ： ｏ ｏ 染 色 ； 状 纤 维 ； 组 织 ； 良 Ｇｍ ｆ ｉ 网 肝 改 中 图分 类 号 ： ４ Ｒ４ ６ 文 献 标 识 码 ： Ｂ 文 章 编 号 ： ０ —７９ （ ０ １ １ １ １ ３ ９ ２ １ ） １—１５ ０ ０ ２ ４— ２
０ ０ 冰醋 酸 ０ ５ｍ ＋双 蒸馏水 ５ 混匀 、 解 、 ．５ｇ＋ ． ｌ ０ｍｌ 溶 过滤 ， 室温保存 待用。所用试剂均为 国产分析提纯 。 １ ３ 染色方法 ． 改 良 Ｇ ｍｏ 染色法 ：１ 石蜡切片常规脱 ｏ ｆ ｉ （）
郑智勇 ， ， 男 教授 ， 主任医师 ， 硕士生导师 ， 通讯作者 。Ｅ ．
作者单位 ： 南京军区福州总医院病理科 ， 福州
３０ ２ ５０ ５
作 者 简 介 ： 育 连 ， ，技 师。 Ｔ ｌ ０ ９ ）２ ９ ７ ９ ，Ｅｍａ ： 朱 女 ｅ：（ ５ １ ４ ３ ０ ５ ． ｉ ｌ
ｘ ５ ７ ８ ＠ ｓｎ ． ｏ ｌ３ ０ ９１ ｉ ａ ｃ ｍ
匀、 溶解 、 过滤 ， 室温保 存待 用。 （ ） ． ％ 固绿 染色液 ： ４０１ 固绿
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网状纤维染色液(改良Gomori 氨银法)
简介：
网状纤维(Reticular fiber)是网状结缔组织内的一种纤维，由网状细胞所产生，直径多在0.2～1.0μm ，有韧性而没有弹性。
网状纤维的染色方法很多，但染色原理基本一致，大都采用氨银浸法。
改良Gomori 网状纤维染色原理是利用氨银液易被组织吸附与组织的蛋白质结合，经甲醛还原成黑色或棕黑色的金属银，沉积于组织内及其表面。
传统方法中还原后先采用氯化金调色，再用硫代硫酸钠溶液洗去组织上未还原的银盐，本改良法省略该步骤，使网状纤维对比得更清晰。
Leagene 网状纤维染色液(改良Gomori 银氨法)主要经过氧化、漂白、媒染、浸银、还原步骤，与改良Gordon-Sweets 法不同之处在于后者采用酸性氧化剂和核固红复染液。
冰冻切片、低温切片和火棉胶切片均可用于网状纤维染色，各种固定液均可采用，重金属汞盐或锇盐固定液偶尔会产生一些非特异性银背景。
常用于鉴别肿瘤的性质和来源、癌与肉瘤、淋巴肉瘤与网状细胞肉瘤、血管内皮瘤与血管外皮瘤、骨尤文瘤与骨网状细胞肉瘤脑膜瘤与星形细胞瘤、恶性神经鞘瘤及早期浸润癌等。
组成：
自备材料：
1、10%福尔马林固定液
2、染色架
3、蒸馏水
操作步骤(仅供参考)：
1、组织固定福尔马林固定液，常规脱水包埋。
2、切片厚，常规脱蜡至水。
3、把切片平置在染色架上，滴加Gomori 氧化剂，氧化。
编号 名称
DC0021 5×50ml
Storage 试剂(A): Gomori 氧化剂 50ml RT
试剂(B): 草酸溶液 50ml RT 试剂(C): 硫酸铁铵溶液 50ml RT 试剂(D): Gomori 银氨溶液 50ml
4℃ 避光 使用说明书
1份
4、稍水洗
5、入草酸溶液漂白。
6、流水冲洗，蒸馏水稍洗。
7、硫酸铁铵溶液媒染。
8、稍水洗，蒸馏水稍洗。
9、滴加Gomori银氨溶液染色。
10、蒸馏水稍洗。
11、Gomori还原剂还原。
12、流水冲洗。
13、常规脱水透明，中性树胶封固。
染色结果：
网状纤维黑色
胶原纤维黄色至黄棕色
胞核褐色至褐黑色
注意事项：
1、玻璃器皿必须用洗涤液浸泡1天，自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗2次。
2、10%福尔马林固定液是较为适合的固定液，不宜采用含汞的固定剂如Zenker液，否则易导致切片非特异性沉淀。
3、Gomori氨银溶液不太稳定，对光的敏感性强，应4℃避免保存，恢复至室温后使用。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
DC0032 Masson三色染色液
DD0002 EDTA脱钙液
DE0001 碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法)
DH0006 苏木素伊红(HE)染色液
PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)
TE0002 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)。