高效液相色谱串联质谱法学习交流
高效液相色谱串联API四 极杆质谱仪讲解
三重四级杆的概念
• 四极杆是质量分析器的一种三重四极杆也 就是一般的LC/MS/MS,一个MS就是一个四 极杆，但是第二个四极杆一般作碰撞室， 所以只有两个MS做质量分析器，即只有 MS/MS,但是一般都叫三重四极杆。当然碰 撞室也不一定是四极杆，也有六极杆的碰 撞室的，但是大家都叫习惯了
案例（目前还在探索过程中）
大气压离子化接口（API）
（1）电喷雾电离（ESI） （2）大气压化学离子化（APCI)
（1）电喷雾电离（EPI）
流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘； 气帘的作用：雾化；蒸发溶剂；阻止中性溶剂分子
电喷雾电离（ ESI）的特点
➢ 通常小分子得到[M+H]+ 、[M+Na]+ 或[M-H]-单电荷离子； ➢ 最软的电离技术，通常只产生分子离子峰，因此可直接
检出限的确定
配制混标溶液，在夜质连用仪器上跑出 图谱后，观察其信号和噪音的比(s/n)， 然后不断的稀释数倍，直至其很小为止 （结合色谱图综合分析）。
标准曲线的绘制
配置储备液 用储备液配置标准物质绘制峰面积和质
量浓度的标准曲线（可是由于实验仪器 出现故障实验告一段落，并未开始做）
后续工作
比较在地下水的情况下和超纯水的情况 下，混标中各物质峰面积的百分比，由 数据得出物质在超纯水在地下水中的峰 面积大约是超纯水中的98%左右，说明 地下中基质效应无明显影响
源参数的优化
考虑电喷雾电离中参数CUR,IS,TEM,GS1， GS20，依次调节发现CUR=20，IS=4500，TEM=550，GS1=50，GS2=50时 峰高最高
样品 高效液相色 谱仪
接口
真空系统
质量分析器
高效液相色谱质谱联用-HPLC-MS-实验-含思考题
高效液相色谱质谱联用-HPLC-MS-实验-含思考题液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）的各种模式探索一、实验目的1、了解LC-MS的主要构造和基本原理；2、学习LC-MS的基本操作方法；3、掌握LC-MS的六种操作模式的特点及应用。
二、实验原理1、液质基本原理及模式介绍液相色谱-质谱法（Liquid Chromatography/Mass Spectrometry，LC-MS）将应用范围极广的分离方法——液相色谱法与灵敏、专属、能提供分子量和结构信息的质谱法结合起来，必然成为一种重要的现代分离分析技术。
但是，LC是液相分离技术，而MS是在真空条件下工作的方法，因而难以相互匹配。
LC-MS经过了约30年的发展，直至采用了大气压离子化技术（Atmospheric pressure ionization，API）之后，才发展成为可常规应用的重要分离分析方法。
现在，在生物、医药、化工、农业和环境等各个领域中均得到了广泛的应用，在组合化学、蛋白质组学和代谢组学的研究工作中，LC-MS 已经成为最重要研究方法之一。
质谱仪作为整套仪器中最重要的部分，其常规分析模式有全扫描模式（Scan）、选择离子监测模式（SIM）。
（一）全扫描模式方式（Scan）：最常用的扫描方式之一，扫描的质量范围覆盖被测化合物的分子离子和碎片离子的质量，得到的是化合物的全谱，可以用来进行谱库检索，一般用于未知化合物的定性分析。
实例：（Q1 = 100-259m/z）（二）选择离子监测模式（Selective Ion Monitoring，SIM）：不是连续扫描某一质量范围，而是跳跃式地扫描某几个选定的质量，得到的不是化合物的全谱。
主要用于目标化合物检测和复杂混合物中杂质的定量分析。
实例：（Q1 = 259m/z）本实验采用三重四极杆质谱仪（Q1：质量分析器；Q2：碰撞活化室；Q3：质量分析器），由于多了Q2、Q3的存在，在分析测试的模式上又多了四种选择：（三）子离子扫描模式（Product Scan）：第一个质量分析器固定扫描电压，选择某一质量离子（母离子）进入碰撞室，发生碰撞解离产生碎片离子，第二个质量分析器进行全扫描，得到的所有碎片离子都是由选定的母离子产生的子离子，没有其它的干扰。
高效液相色谱质谱联用法实验报告
高效液相色谱质谱联用法实验报告
实验背景
高效液相色谱质谱联用法（LC-MS）是一种结合了高效液相色
谱（HPLC）和质谱（MS）技术的分析方法。
HPLC用于分离混合
物中的化合物，而质谱用于对这些化合物进行鉴定和定量分析。
实验目的
本实验旨在使用LC-MS方法分析给定样品中的化合物，并确
定其组成和含量。
实验步骤
1. 样品准备：将给定样品按照实验要求进行前处理，并将其溶
解于适当的溶剂中。
2. 校准仪器：使用标准品进行仪器的校准，确保LC-MS系统
正常运行，并设定适当的参数。
3. 样品进样：将样品溶液加入进样器中，并设置合适的进样量。
4. HPLC分离：使用合适的色谱柱和流动相进行HPLC分离，
使样品中的化合物逐一分离。
5. MS检测：将HPLC分离后的化合物进入质谱仪中进行检测，获取质谱图谱和相关数据。
6. 数据分析：根据质谱数据进行化合物的鉴定和定量分析。
实验结果
通过LC-MS方法，成功分离和鉴定了样品中的多个化合物。
经定量分析，确定了各化合物的含量范围和相对含量比例。
结论
LC-MS方法是一种可靠和高效的分析技术，在化合物分离和
鉴定方面具有重要应用价值。
通过本实验的结果，我们对所研究样
品的化学组成和含量有了更深入的了解，并为进一步研究提供了参
考依据。
延伸研究
在今后的研究中，可以进一步探索LC-MS方法在不同样品和
化合物类别中的应用，以及进一步提高分析的准确性和灵敏度。
同时，结合其他分析技术，如质谱成像等，可以开展更加全面和深入
的分析研究。
高效液相色谱串联质谱法学习交流
2、Agilent 6420 液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
脱气 真空泵
自动进样器
色谱柱
学习过程中主要操作和使用的仪器设备有 高效液相色谱串联质谱仪；液相色谱法；凝 胶色谱渗透净化仪；氮吹仪；旋转蒸发仪； 固相萃取装置，详细介绍如下：
1、Waters ACQUITY UPLC 沃特世超高效液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
紫外 TUV Detector
自动进样器 Sample Manager
18932.22-2003 8、牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定 液相色谱-串
联质谱法 （质控-3个混标）------ GB/T 22992-2008 9、婴幼儿配方粉及婴幼儿补充谷粉通用技术条件（含第1号、第2号和第3号修改单，已作废） GB 10767-1997 （维生素D测定 D2、D3） 10、动物源性食品中11种激素残留检测 液相色谱-串联质谱法----------农业部1031号公告-1-2008 11、粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（凝胶色谱渗透仪净化）--GB/T 20770-2008 12、动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法---------GB/T 21312-2007 13、食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱 法（地方标准） DB31/ 2010-2012
学习提纲
第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）★ ★ ★ 第二部分：微生物实验室（5.18-5.29） 第三部分：理化实验室（6.1-6.12） 第四部分：仪器操作★ ★ ★ 第五部分：资料收集★ ★ 第六部分：学习总结、心得体会
高效液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用
高效液相色谱质谱联用技术在药物分析中的应用随着现代医学的发展，药物的临床应用逐渐得到扩大。
为了确保药物的安全性和有效性，药物分析技术得到了越来越广泛的应用。
其中，高效液相色谱质谱联用技术被认为是一种非常有效的药物分析方法，它不仅解决了传统色谱分离技术的局限性，还添加了质谱检测的高灵敏度和特异性，成功地推动了药物分析技术的发展。
一、高效液相色谱质谱联用技术的原理1、高效液相色谱技术高效液相色谱是一种液态色谱技术，它可以将化合物从混合样品中分离出来，并通过化学吸附、亲和性、离子交换等不同的机制得到分离。
高效液相色谱还可以通过对流相与静相的优化，以及增加柱温、压力等参数的控制，从而显著提高色谱的分辨率和速度。
2、质谱技术质谱技术是一种非常高灵敏度的分析方法，它可以对样品中的化合物进行定性和定量分析。
质谱技术通常通过分子质量、碎片质量比和分子离子的内部结构等多种特征，确定分析物的化学结构和分子组成。
3、高效液相色谱质谱联用技术高效液相色谱质谱联用技术结合了高效液相色谱和质谱技术的优点。
通过将这两种技术结合起来，可以使用高效液相色谱分离化合物，并将溶液中的样品引入到质谱仪中进行检测。
在此过程中，先通过一个离子源将分离后的化合物转化为离子，然后在分析器区域将离子碎片化，最后将质谱峰与物质的质谱库进行比对，确定分析物的化学结构和分子组成。
二、1、药物结构分析高效液相色谱质谱联用技术可以用于药物结构的分析和鉴定。
在用药物分析中，“药物认证”是很重要的一环，需要对药物的化学结构进行检测，以确保药物的质量和安全性。
高效液相色谱质谱联用技术可以对药物的分子式、分子量、结构等属性进行检测，进而为“药物认证”给出准确的分析结果。
2、新药成分分析高效液相色谱质谱联用技术还可以应用于新药成分的分析。
在药物研发过程中，新药的结构和组成是需要被研究和确定的。
采用高效液相色谱质谱联用技术可以毫不费力地确定药物成分中存在的组分和精确的化学结构。
浅析高效液相色谱-_串联质谱法测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素
近年，酵素产品深受广大消费者的追捧，《 酵素产品分类导则》（QB/T 5324—2018）规定，以动物、植物、菌类等为原料，经微生物发酵制得的含有特定生物活性成分的产品即为酵素。
酵素果冻口感好、体积小，具有促进肠道蠕动、改善肠道环境、改善便秘、降脂减肥等功能，受到消费者青睐[1]。
目前，市面上酵素果冻多为复合原料，高达10多种。
部分不法商家在生产过程中采用障眼法，利用决明子、芦荟等本身doi:10.16736/41-1434/ts.2023.22.067基金项目：赞宇科研基金项目（2023）。
作者简介：李远飞（1984—），男，大专，工程师，研究方向为食品安全检测。
通信作者：郑静（1990—），女，本科，工程师，研究方向为食品和农产品质量安全检测。
E -mail：*********************。
浅析高效液相色谱-串联质谱法测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素Determination of Emodin and Aloe-emodin Amounts in Enzyme Jelly by High Performance LiquidChromatography-tandem Mass Spectrometry ◎ 李远飞1,2，郑 静1，贺 璐1，魏寒桥1，林晓敏1（1.浙江宏正检测有限公司，浙江 宁波 315100；2.赞宇科技集团股份有限公司，浙江 杭州 310009）LI Yuanfei 1,2, ZHENG Jing 1, HE Lu 1,WEI Hanqiao 1, LIN Xiaomin 1 (1.Zhejiang Hongzheng Testing Co., Ltd., Ningbo 315100, China；2.Zanyu Technology Group Co., Ltd., Hangzhou 310009, China)摘 要：本文建立了高效液相色谱-串联质谱法，测定酵素果冻中大黄素和芦荟大黄素的分析方法。
超高效液相色谱串联质谱法
超高效液相色谱串联质谱法
超高效液相色谱串联质谱法（Ultra High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，UHPLC-MS/MS）是一种结合了超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC）和串联质谱（Tandem Mass Spectrometry，MS/MS）的分析方法。
UHPLC是一种高效的液相色谱技术，它利用更小颗粒的固定
相和更高的操作压力，能够获得更高的分离效率和分析速度。
UHPLC能够提供更好的分离能力和更短的分析时间，与传统
的高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）相比，具有更高的灵敏度和解析度。
MS/MS是一种使用两个串联的质谱仪进行分析的方法。
它包
括两个主要的步骤：一是通过质谱仪进行初级质谱（MS）扫描，将样品中的化合物分离出来；二是选择其中一个离子进行碎裂，生成离子碎片，然后通过再次质谱扫描（MS/MS）来
检测和鉴定这些离子碎片。
MS/MS能够提供更丰富的质谱信息，帮助分析人员准确鉴定和定量分析样品中的目标分子。
UHPLC-MS/MS的组合可以充分发挥两种技术的优势。
UHPLC提供了高分离效率和分析速度，能够有效地分离复杂
的样品基质，减少干扰物对目标分析物的影响；MS/MS则可
以提供更准确的鉴定和定量结果，提高分析的灵敏度和选择性。
因此，UHPLC-MS/MS在生物医学、环境监测、食品安全等领域得到了广泛的应用。
超高效液相色谱-串联质谱使用流程
超高效液相色谱-串联质谱使用流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!超高效液相色谱-串联质谱的使用流程详解超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）是现代分析科学中一种强大的工具，尤其在生物化学、药物分析和环境监测等领域有着广泛的应用。
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2.中性丢失扫描
在QQQ中进行中性丢失扫描，Q1和Q3分析器的结合使灵敏 度 和选择性得到最大化。Q1/Q3中性丢失扫描可监测母离子 特定的中性丢失，例如缩氨酸磷酸盐中一个磷酸根的丢失。 在这个例子中，Q1和Q3的扫描得到母离子的谱图，这张谱图 是母离子为了磷酸化，丢失了碎片98而得到的
Q1
碰撞池
在仪器实验室的两个月时间里主要学习了高效 液相色谱-串联质谱法和高效液相色谱法，简单的学 习了原子吸收和原子荧光法的基本原理和检测内容。 在学习液-质联用仪的过程中主要学习了样品前 处理、标准样液的配制（扩项）、流动相的配制和 仪器原理-仪器操作的学习。总计5大类，12个检测 项目，13个常用标准
第四部分：仪器操作
此次培训学习中我主要学习操作的仪器是 液相色谱-串联质谱，下面对其进行简单电系统
进样系统
离子源
质量分析器 真空系统
检测接收器
液相色谱串联质谱原理简介
三重四极杆基本功能 ● Q1 可以筛选母离子Mz1 ● Q2 通过碰撞碎裂打碎离子，形成碎片离子峰 ● Q3 筛选子离子，定量子离子碎片强度Mz2
选择m/z
子离子扫描
Q1和Q3均为选择性离子监测模式
质谱应用
1、液质联用（LC-MS）主要可解决如下几方面 的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的 分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量 化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定。 2、质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷 比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析 目的的一种分析方法。
高效液相色谱-串联质谱法 学习交流
学习提纲
第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）★ ★ ★ 第二部分：微生物实验室（5.18-5.29） 第三部分：理化实验室（6.1-6.12） 第四部分：仪器操作★ ★ ★ 第五部分：资料收集★ ★ 第六部分：学习总结、心得体会
第一部分：仪器实验室（3.18-5.15）
抽真空泵 Binary Solvent Manger
2、Agilent 6420 液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
脱气
真空泵
自动进样器
色谱柱
学习过程中主要操作和使用的仪器设备有 高效液相色谱串联质谱仪；液相色谱法；凝 胶色谱渗透净化仪；氮吹仪；旋转蒸发仪； 固相萃取装置，详细介绍如下：
1、Waters ACQUITY UPLC 沃特世超高效液相色谱串联质谱仪
液相
C18色谱柱连接
质谱
紫外 TUV Detector 自动进样器 Sample Manager
串联质谱QQQ几种操作方式：
1.子离子扫描 2.母离子扫描 3.中性丢失扫描 4.多重反应监测
1.子离子扫描
Q1选择某一特定质量的母离子，Q2碰撞池碰撞产 生碎片离子。Q3只分析一个碎片离子。此过程产生 一个简单的单个离子碎片谱图 Q1 Q2碰撞池 Q3
Q1只允许目标离 子210通过
Q3只检测来自母离子 210的碎片158，进行 定性定量分析
质谱的特点
1、样品必须离子化，只有离子是带电的，带电的才 有可能分析，离子化的化合物才能被移动，控制和 质量分析。 2、必须具有一定的真空（真空系统）和分子涡旋泵， 离子飞行的平均自由程需要最大化，理论上，真空 度越高越好。 3、必须测量离子的质量数、质荷比（m/z）
常见术语
1、质荷比：离子质量（以相对原子量单位计）与它所带电荷 （以电子电量为单位计）的比值，写作m/z. 2、峰：质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰。 3、离子丰度：检测器检测到的离子信号强度。 4、分子离子：自由基离子M+ 很活泼，易碎裂而产生广义的 碎片离子。 5、准分子离子：由软电离技术产生的质子或其它阳离子加合 离子以及质子化或其它阴离子加合离子。 6、碎片离子：电离后具有过剩内能的分子离子能以多种方式 裂解生成碎片离子。
1、实验检测项目有
1.豆芽中的赤霉素，六-苄基腺嘌呤（液相）；2.豆 芽中的四氯苯氧乙酸钠（液相）；3.动物源性食品 中的激素、瘦肉精（沙丁胺醇、莱克多巴胺、盐酸 克伦特罗）-（液质）； 4.乳制品的维生素B6（液 相）、维生素D（液相）、三聚氰胺（液质） 5.蜂 蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，粮谷中农药和 保健食品中脱氢表雄甾(zai)酮(DHEA) 其中最多的是：1.豆芽中的赤霉素，六-苄基腺 嘌呤；2.肉食品中的瘦肉精；3.乳品中的三聚氰胺 2、主要检验的方法为高效液相色谱法和液相串联质 谱法
1、四级杆分析器由四根棒状电极组成。相对两根电 极间加有电压（Vdc+Vrf）,另外两根电极间加有 -（Vdc+Vrf）,其中Vdc为直流电压，Vrf为射频电压。 四个棒状电极形成一个四级电场，下图为分析器示 意图。
（Vdc+Vrf）
-（Vdc+Vrf）
2、离子从离子源 经过离子光学系统聚焦 后进入四极电场，在四 极电场的作用下做简谐 振荡，如果质量为m， 电荷为e的离子从z方向 进入四极场。
Q3
扫描
中性丢失扫描
3.多重反应检测
Q1选择某一质量的母离子，碰撞单元产生碎片离子。Q3 用于搜寻多个选择反应监测，这就是多重反应监测（MRM）。 Q1 碰撞池 Q3
只允许目 标里子210 和350通过 Q3仅监测来自离子 210的特征碎片191和 来自离子350的特征 碎片226，进行定性 定量分析
★ ★ ★在本次仪器实验室学习的过程中，参 与了质检院的何冲老师的一个CNAS认证，加有三个 混标盲样（牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、 己烯雌酚残留量的测定 GB/T 22992-2008 ）的质控 实验。实验过程中从实验原理、样品量取、样品前 处理、净化的每一个过程中都做到认真、细心的学 习和参与，保证实验中氮吹、固相萃取柱的活化、 淋洗、洗脱以及流动相的配制等每个环节都顺利进 行，圆满的完成了质控、比对实验，提高了我对标 准的认识，注重实验过程中细节操作的重要性。
仪器实验室具体实验内容有：
1、出口水果中赤霉素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 ----------SN/T 0350-2012 2、无公害豆芽 第3部分：6-苄基腺嘌呤残留量和4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 --------DB33/T 625.32007 3、动物源性食品中多种β -受体激动剂残留量的测定 液相色谱串联质谱法（瘦肉精）--------GB/T 22286-2008 4、原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法 -------GB/T 22388-2008（婴幼儿乳粉） 5、婴幼儿食品和乳品中维生素B6的测定--------GB 5413.13-2010 6、保健食品中脱氢表雄甾(zai)酮(DHEA)测定-------GB/T 5009.193-2003 7、蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法 液相色谱示差折光检测法------GB/T 18932.22-2003 8、牛奶和奶粉中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定 液相色谱-串 联质谱法 （质控-3个混标）------ GB/T 22992-2008 9、婴幼儿配方粉及婴幼儿补充谷粉通用技术条件（含第1号、第2号和第3号修改单，已作废） GB 10767-1997 （维生素D测定 D2、D3） 10、动物源性食品中11种激素残留检测 液相色谱-串联质谱法----------农业部1031号公告-1-2008 11、粮谷中486种农药及相关化学品残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（凝胶色谱渗透仪净化）--GB/T 20770-2008 12、动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法---------GB/T 21312-2007 13、食品安全地方标准 火锅食品中罂粟碱、吗啡、那可丁、可待因和蒂巴因的测定 液相色谱-串联质谱 法（地方标准） DB31/ 2010-2012