常用微生物染色法
常用的微生物染色方法
几种常用的微生物染色方法1简单染色不同的细菌，或者由于观察者所侧重观察的内容不同一，所以所使用的染料也有差异，但是简单染色的方法是一样的。
先按照上述的制片方法制片，制成需要观察的玻片后，使用相对应的染料滴加到玻片上菌膜区域，以覆盖菌膜为准。
按照不同染料的要求，结合所观察的内容确定染色时间，染色时间到达时，进行水洗，干燥等步骤(见图5-2)。
最后得到的玻片加盖盖玻片即可进行镜检。
如有需要可以后续再进行油封、蜡封等封片过程。
2芽孢染色法芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属的细菌能产生内孢子，这些孢子耐高温、干旱及有毒化学试剂。
内孢子还能抵制细菌染色液的进入，在革兰氏染色法涂片染色时，革兰氏阳性菌的芽孢呈现无色。
然而，芽孢一旦着色后就很难脱色。
虽然芽孢通常可在革兰氏染色片中看到(芽孢由于不易让染料进入多呈现无色),但在不易清晰观察时，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢与菌体呈现不同颜色，更便于观察。
其实验的操作方法与革兰氏染色类似。
主要的芽孢染色法有以下两种。
(一)孔雀绿染色法(1)将生有芽孢的斜而菌苔按革兰氏染色法涂片后，用饱和孔雀绿水溶液(约为7.6%)染10 min。
(2)用自来水冲洗。
(3)用0.5%番红液复染30%.(4)水洗，吸干。
(5)镜检：芽孢呈绿色，菌体和芽抱囊呈微红色，但应注意菌体中有异染粒时，也可呈绿色。
(二) 石炭酸复红染色法(1)按常规涂片。
(2)滴加石炭酸复红于涂片上，并于玻片下缓缓加热，使染液冒蒸气但不沸腾，并继续滴加染液，不使涂片上染液蒸干，这样保持5 min。
(3)涂片冷却后，倾去染液，用酸性乙醇脱色至无红色染剂洗脱为止。
(4)彻底水洗。
(5)用吕氏美蓝复染2 min -3 min。
(6)水洗、吸干。
(7)镜检：镜检时，菌体及孢囊呈蓝色，芽孢呈红色。
具体实验时，在对一些特殊芽孢染色时，需要对染色液和复染液进行修改。
3鞭毛染色鞭毛是细菌的运动器官，非常纤细，直径一般为10nm~20 nm,超出了光学显微镜的观察极限，因此通常情况下在显微镜下观察不到鞭毛。
常用微生物染色方法
WOIRD格式革兰染色抗酸染色：分支杆菌属，诺卡放线菌属。
石炭酸复红染色，金永染色。
芽孢染色：用于区分细菌的芽孢和营养细胞。
结果芽孢染成绿色，营养细胞为红色。
晶体染色：观察苏云金杆菌不同变种的晶体形状大小。
结果晶体染成紫色，芽孢为透明椭圆形，仅见具有轮廓的折光体。
鞭毛染色：有赖夫生染色法、银盐染色法，西萨-基尔染色法等。
一般以西萨-基尔（Cesares-Gill）染法效果最佳。
异染颗粒染色：用于白喉棒状杆菌染色，直接涂片或改良阿伯特法染色。
墨汁荚膜染色：观察菌体有无荚膜，如新型隐球菌。
碳素墨汁。
镀银染色：螺旋体吉姆萨染色：螺旋体荧光染色魏申染色（wayson）染色：鼠疫耶尔森杆菌。
铬酸P、A、S真菌类染色。
结果：曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。
曲霉菌丝周边紫红色，弹力纤维紫色，背景绿色。
Mann氏甲基蓝伊红染色法：病毒包涵体染色。
Negri氏小体红色。
Nacchiavello氏染色：病毒包涵体染色。
结果：包涵体、立克次氏体均染红色，其余组织呈蓝色。
Crocott-Gomori氏六胺银法：新型隐球菌碘染色法吉姆萨染色：衣原体乳酸酚棉蓝染色，糖原染色：真菌，前者适用于所有真菌，呈蓝色。
吉姆萨染色，瑞氏染色：鞭毛虫，滴虫，锥虫，疟原虫，弓形虫，隐孢子虫等原虫。
三色染色，碘染色：阿米巴等原虫。
荧光素吖啶橙染色：疟原虫。
金胺-酚染色：隐孢子虫。
甲苯胺蓝，四胺银染色：耶氏肺孢子虫。
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细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查是微生物学中非常重要的一部分，它可以帮助
我们了解细菌的形态特征，有助于诊断和治疗疾病。
在细菌形态学
检查中，染色方法是一项关键的技术，它可以使细菌在显微镜下更
容易观察和分辨。
以下是几种常用的细菌染色方法：
1. 革兰氏染色法，革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
它可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
在这种染色方法中，先用紫普鲁士蓝染色，然后用碘液固定，再用酒精脱色，最后
用洋红染色。
革兰氏阳性细菌会呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌
则会呈粉红色。
2. 厌氧染色法，厌氧染色法是专门用于观察厌氧菌的染色方法。
它与革兰氏染色法类似，但在脱色步骤中使用氢氟酸而不是酒精，
这样可以更好地保留厌氧菌的形态特征。
3. 阳性染色法，阳性染色法用于观察细菌的细胞壁结构和形态
特征。
在这种染色方法中，通常使用甲基蓝或结晶紫等染料，可以
使细菌呈现出蓝色或紫色。
4. 阴性染色法，阴性染色法也是用于观察细菌细胞壁结构和形态特征的一种方法。
与阳性染色法不同的是，阴性染色法使用印度墨染料，可以使细菌呈现出浅红色或粉红色。
除了上述列举的染色方法外，还有许多其他特殊的染色方法，如荧光染色、折射染色等，它们都可以根据需要来选择使用。
细菌形态学检查染色方法的选择取决于所研究的细菌种类、研究的目的以及实验室的设备和条件等因素。
希望这些信息可以帮助你更好地了解细菌形态学检查染色方法。
几种常用的微生物染色方法汇总
·健康科学·几种常用的微生物染色方法汇总黄波因微生物细胞比较小且透明，在普通的光学显微镜下不容易进行观察。
染色以后微生物细胞会与背景形成比较鲜明的色差，从而可以清楚地观察到微生物的形态，有利于鉴别、强化细化或细胞组分与周围环境之间产生的反差，方便利用普通光学显微镜对微生物细胞进行观察的简便方法。
一、微生物染色原理因微生物细胞含有大量的水分，所以对光线的吸收、反射及水溶液之间的差异不明显，机体属于无色、透明样，且与周围的环境背景之间也没有明显的反差，在普通的光学显微镜下不容易进行识别，所以必须对微生物进行染色，经过染色以后，菌体会与背景有明显色差的形成，才能更加清楚地观察到其形态与结构。
微生物细胞主要是有由蛋白质、核酸等两性电解质以及其他的化合物所组成，所以会表现出两性电解质的性质。
而两性电解质又兼具了碱性基、酸性基，在酸性溶液当中，会解离出含有碱性基呈碱性带正电；在碱性溶液当中，会解离出酸性基呈酸性带负电。
经过测定后，细菌等电pH值在2~5之间，所以在中性、碱性或是偏酸性的溶液中，细菌的等电点均小于上述中溶液的pH值，因此，细菌是带负电荷，容易和带正电荷的碱性染料相互结合，所以应用碱性染料色的比较多。
此外，微生物体内的各种结构的结合力与染料不同，所以可以使用各种染料对微生物的结构分别进行染色，便于观察。
二、染料的种类与选择染料可以分为2种类型：①天然染料，包含胭脂虫红、地衣素、石蕊、苏木素等，大部分都是从植物中所提取的，成分较为复杂。
②人工染料，又被称为煤焦油染料，大部分都是从焦煤油中所提取的，属于苯的衍生物。
大部分染料都属于带色有机酸或是碱类，有的也与有机溶剂相溶，为了使其能够在水中易溶，通常会把它们制作成盐类。
染料按照电离后的染料离子，所带的电荷性质，将其可分为以下几种类型。
（一）酸性染料该类染料进行电离以后，染料离子带负电，例如伊红、刚果红、苯胺黑等，可以和碱性的物质进行结合，成为盐；当培养基为糖类，而分解产酸的时候会使pH值下降，同时细菌所带的正电荷会增加，这时应该选择酸性染料，微生物容易被染色。
常用染色技术(食品微生物课件)
革兰氏阳性菌——紫色 革兰氏阴性菌——红色
一、细菌革兰氏染色
点样
革
初染
兰
染
媒染
色 步
骤
脱染
复染
二、酵母菌死活鉴别
结果观察：
蓝色酵母：死 无色酵母：活
知识点：细菌革兰氏染色技术
情境：细菌染色与形态观察 任务：细菌革兰氏染色
课程：食品微生物技术
细菌革兰氏染色技术
一、细菌革兰氏染色
革兰氏染色简介
一、细菌革兰氏一、细菌革兰氏染色
革兰氏染色
基本步骤： 涂片固定—— 结晶紫初染1min—— 碘液媒染1min—
知识点：酵母菌美蓝染色及死活鉴别
情境：酵母菌染色与形态观察 任务：酵母菌美蓝染色及死活鉴别
课程：食品微生物技术
酵母菌美蓝染色及死活鉴别
一、酵母菌美蓝染色
1.染色原理
美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。 用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细 胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还 原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代 谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死 细胞和活细胞进行鉴别。
一、酵母菌美蓝染色
2.实验仪器与器材
1）菌种：普通酵母菌 2）染色液：0.1%美蓝染液。 3）器材：显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸、接种环等。
一、酵母菌美蓝染色
3.实验内容
（1）制片 取0.1%美蓝染色液1滴于载玻片中央，用接种环取酵母菌悬液与染色液混匀 ，染色2~3 min后加盖玻片。 （2）镜检 用低倍镜和高倍镜观察细胞形态。根据酵母菌是否染上蓝色区别细胞的死活 。 （3）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。
微生物常用染色法-PPT
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细菌染色的一般程序
涂片(干燥)---固定---染色---脱色---复染
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涂片制备
血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液体培养物,直接 在载玻上作薄涂片. 固体培养基上的菌落或菌 苔的制片,用接种环取1 环9g/L氯化钠溶液置载 玻片中央.再用无菌接种环取少量的培养物在 氯化钠溶液中磨匀,涂成人1CM*1CM大小的涂 面.置室温下自然干燥或火慢慢烘干.
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涂片见G+球菌，呈葡萄状排列
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涂片见G+球菌，呈链状排列
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染色原理:
最广泛接受观点认为与细菌细胞壁结构及化学 组成有关. G+菌细菌壁结构致密,肽聚糖层厚, 脂质含量少,形成结晶紫_碘复合物.脱 色过程 中,虽然溶解细菌壁脂质成分形成小孔.脱水作 用使细胞壁收缩又 构成屏障,阻止结晶紫—碘 复合物被乙醇溶出,细菌保持紫色.G-菌细菌壁 疏松,肽聚糖层较薄,脂质含量高,乙醇溶解脂质, 经复染细菌呈红色.
– 复染色法 用两种或以上的不同颜色的染料进行 染色，可将不同细菌或同一细菌的不同结构染成 不同颜色
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大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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革兰染色
– 细菌涂片经火焰固定,加结晶紫染液1min,清水冲去染液. – 加碘液媒染1min,水洗,甩干. – 用95%乙醇脱色,轻轻摇动约30S,至无紫色洗落为止,水洗,
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染色原理
抗酸性染色细菌与细胞壁成分有关.分枝杆菌 细胞壁含脂质较多,其中主要成分是分枝菌酸. 决定抗酸性染色反应,用乙醚脱去分 分枝菌酸,则呈非抗酸染色性.
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剂.也可用加热法促进着色.
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脱色
使已着色的被染物脱去颜色.常用乙醇,丙酮等 作为脱色剂.脱色剂可以查出细菌与染料结合 的稳定程度,作为鉴别染色用.
微生物染色液配制及染色法
微生物染色液配制及染色法2.1 美蓝染色法2.1.1 吕氏碱性美蓝染色液美蓝0.3g95%乙醇30mL0.01%氢氧化钾溶液100mL 将美蓝溶解于乙醇中，然后与氢氧化钾溶液混合。
2.1.2 染色法将涂片在火焰上固定，待冷。
滴加染液，染1～3min，水洗，待干，镜检。
2.1.3 结果菌体呈蓝色。
2.2 革兰氏染色法2.2.1 结晶紫染色液结晶紫1g95%乙醇20mL1%草酸铵水溶液80mL将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
2.2.2 革兰氏碘液碘1g碘化钾2g蒸馏水300mL将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。
2.2.3 沙黄复染液沙黄0.25g95%乙醇10mL蒸馏水90mL将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。
2.2.4 染色法2.2.4.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
2.2.4.2 滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
2.2.4.3 滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。
2.2.4.4 水洗，滴加复染液，复染1min。
水洗，待干，镜检。
2.2.5 结果革兰氏阳性菌呈紫色。
革兰氏阴性菌呈红色。
注：亦可用1：10稀释石炭酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10s。
2.3 耐酸性染色法(萎－倪二氏法)2.3.1 石炭酸品红染色液碱性品红0.3g95%乙醇10mL5%酚水溶液90mL将品红溶解于乙醇中，然后与酚溶液混合。
2.3.2 3%盐酸－乙醇浓盐酸3mL95%乙醇97mL2.3.3 复染液吕氏碱性美蓝染色液。
2.3.4 染色法2.3.4.1 将涂片在火焰上加热固定，滴加石炭酸品红染色液，徐徐加热至有蒸气出现，但切不可使沸腾。
染液如因蒸发减少时，应随时添加。
染5min，倾去染液，水洗。
2.3.4.2 滴加盐酸－乙醇脱色，直至无红色脱落为止(所需时间视涂片厚薄而定，一般为1～3min)，水洗。
常用微生物染色方法
原理
一 通透性学说 二 等电点学说
三 化学学说
革兰氏阳性菌含有大量核糖 核酸镁盐，其可与结晶紫-碘 结合成大分子复合物，因而 不易被95％酒精脱色；而阴 性菌中此物质含量较少，因 而吸附染料量很少，分子量 也较小，故易被酒精脱色。
细菌涂片的制备
涂片：取一张洁净载玻片，用已灭菌的接种环取一环 生理盐水于玻片中央，再将接种环灭菌，取菌与生理 盐水磨匀，涂布成1cm×1cm大小区域的均匀薄膜，使 盐水磨成灰白色为宜，接种环灭菌后放回试管架。 干燥：涂片最好在室温下自然干燥或将标本片涂抹面 向上，置酒精灯火焰上半尺高处慢慢烘干。 固定：常用火焰加热法，手执载玻片一端，标本面向 上，迅速来回通过火焰三次。
操作步骤 1、涂片经火焰固定，加石碳酸复红溶液用火 焰微热至出现蒸气约3分钟（防止染液蒸发干， 必要时可续加第一液数滴，水洗。 2、用3%盐酸酒精脱色约1分钟，直至涂片无色 或淡粉红色为止，水洗 3、再加复染液复染1分钟，水洗，干后镜检。 结果判断 抗酸杆菌呈红色，其他细菌及细胞 呈蓝色。
注意事项 1．抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加 标本涂片的厚度，发提高检出率。染厚涂片时， 须掌握复染时间，如果背景过深，会影响镜检。 痰标本找抗酸杆菌，应先高压杀菌，避免实验室 污染。 2．尿、粪中找到抗酸杆菌须作潘氏染色，排除 耻后杆菌，才能报告。 标本中找到抗酸杆菌，须作传染病报告。 3．离心应为3000转/分，30分钟。 4．涂片至少保留三个月。
注意点
⒈取菌量不可太多，涂片应均匀，否则影响染色结果 ⒉干燥时切忌高热，以免细菌变形 ⒊固定时温度不可过高时间不可长，以防涂抹面 烧焦及玻片烧裂
固定的目的
杀死细菌，使菌体蛋白凝固，染料易于着色 改变细菌通透性，以利于染料进入细胞内 使菌体与玻片粘附牢固，在染色时不致被染 料和水冲掉
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1革兰染色法：
2.1.1染色剂的配制
1.1.1结晶紫液
称取结晶紫2.0g，加95%乙醇20ml，使溶解为甲液，另取草酸铵0.8g，加水80ml，使溶解为乙液。
甲、乙液相混，静置48小时后使用。
贮存在密闭的棕色瓶中。
有效期为3个月。
1.1.2碘液
称取碘化钾2.0g，加水3~5ml，使溶解，再投入碘1.0g，用力振摇，使之全部溶解，加水稀释至300ml，即得，贮存在棕色瓶中。
密闭保存，有效期为1个月。
1.1.3脱色液：95%乙醇。
1.1.4复染液：
a.沙黄（番红）复染液：称取沙黄0.25g，加95%乙醇10ml溶解，然后再加纯化水至
100ml即得。
b.稀石碳酸复红染液：称取碱性复红2.5g，研细，加95%乙醇25ml。
放置过夜，用滤
纸过滤，加5%石碳酸水溶液20ml混合，为石碳酸复红液，再取此液10ml，加水
90ml，即成稀石碳酸复红液。
1.2染色操作方法：
1.2.1涂片、干燥
在载玻片上，滴一滴无菌水或生理盐水，用接种环挑少许菌苔在水涂成一薄层；或将长菌的培养液取少许轻轻涂在载玻片上，自然干燥，也可以在微火焰上通过几次，使菌体固定。
1.2.2染色步骤
a滴加结晶紫液，覆盖约1分钟，水洗，（勿使水直接冲洗涂片处）。
b滴加碘液，覆盖约1分钟，水洗、吸干。
C用95%的乙醇褪色至脱色乙醇不呈紫色为止，约20~30秒，水洗吸干。
D滴加沙黄染液或稀石碳酸复红染1分钟，水洗吸干。
1.2.3染色结果
革兰氏阳性菌染成紫色，革兰氏阴性菌染成红色。
1.3注意事项
1.3.1涂片必须洁净无油，以免影响涂片质量。
1.3.2涂片的菌量不可太浓厚，否则看不清单个菌落形态。
易出现假阳性。
1.3.3用火焰固定时，不可过热，以载玻璃片不烫手为宜。
1.3.4一般以检查培养18—24小时的菌为宜，革兰氏阴性菌染色反应较稳定，不受菌龄的影响。
革兰氏阳性菌易受菌龄影响，较老的细胞如培养24—48小时以上，则有部分或全部细胞转成阴性反应，所以培养18—24小时染色镜检为宜。
2芽孢染色
2.1染色液的配制
2.1.1石碳酸复红液
称取碱性复红1.0g，研细，加95%乙醇25ml。
再取此溶液10ml与5%石碳酸溶液90ml。
混匀，即得。
2.1.2碱性美兰液：美兰1.0g，溶于95%乙醇50ml中，再取此液30ml与0.01%氢氧化钾溶液100ml混匀即成。
2.2染色方法
2.2.1取待检菌芽孢较多的培养物，涂片，干燥及加热固定后，滴满石碳酸复红液于涂片上，
并以弱火加热，使染液冒蒸汽约5分钟，冷后水洗，并用95%乙醇脱色2分钟，加碱性美兰液半分钟，水洗，干后镜检。
2.2.2染色结果：芽孢呈红色，菌体为兰色。