支气管败血波氏杆菌的间接ELISA诊断方法
Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题
Elisa常见类型及实验标准操作方法与常见问题Elisa（酶联免疫吸附试验）是一种常见的免疫检测方法，广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域。
Elisa的操作方法和常见问题对于熟练进行实验和解决实验中的问题都至关重要。
以下是Elisa的常见类型、实验标准操作方法以及常见问题的详细介绍。
一、常见类型：1. 间接Elisa：该方法利用抗体的特异性结合性质来检测特定抗原。
首先，在官网上涂上反应性抗原的试样，然后添加能与抗原结合的一抗，再加入与一抗结合的二抗和标记物，最后通过颜色变化来测定抗原的含量。
2. 直接Elisa：该方法利用特异性抗体与抗原的结合性质来检测特定抗原。
在官网上涂上反应性抗原的试样，然后加入能与抗原结合的标记抗体和标记物，最后通过颜色变化来测定抗原的含量。
二、实验标准操作方法：1.样品制备：收集要检测的样品，并进行必要的处理和制备，如离心、稀释等。
2.官网涂布：将样品或标准物质涂在官网上，并在适当的温度条件下孵育一段时间，使其抗原完全吸附到官网上。
3.阻断：用适当的阻断缓冲液或血清阻止非特异性结合。
4.添加（初级）抗体：加入特异性的初级抗体，让其与官网上的抗原结合。
5.洗涤：用缓冲液洗涤掉未结合的初级抗体。
6.添加（二级）抗体：加入特异性的二级抗体，使其与初级抗体结合，并将标记物引入实验系统。
7.洗涤：用缓冲液洗涤掉未结合的二级抗体。
8.底物添加：加入含有底物的溶液，使底物被标记物催化，产生颜色反应。
9.反应终止：加入适当的溶液将反应停止。
10.测定：通过检测底物催化反应产生的颜色变化，使用酶标仪等设备测量并分析光密度。
三、常见问题：1.如何选择合适的抗体和标记物？2.如何优化实验条件？在实验过程中，可以通过优化浓度和孵育时间等条件来提高实验的敏感性和特异性。
可以尝试不同浓度的抗体和试剂，并对孵育时间和温度进行调整。
3.如何处理实验结果？实验结果通常会通过测量光密度来表示。
典型的Elisa实验结果可以使用标准曲线进行定量，或者通过比较样品和对照组的光密度差异来进行定性判断。
支气管败血波氏杆菌的鉴定及药敏试验
敏 纸片 购 自杭 州 微 生 物 试 剂 有 限 公 司； Ｃ 试 剂 、 ＰＲ
性接 触性 呼吸道 传 染病 叫 。本病 以鼻塞 、 喷嚏 、 打 流 ２ ０ｂ ｒｅ、 Ｂ为上 海 生工 生物 工 程技 术 服务 有 ０ ｐＭａｋｒＥ 鼻血 、 咳嗽 、 呼吸 不 畅 、 面变 形 或 鼻 梁 歪 斜 为 主 要 颜
（．贵 州 大 学 动 物 科 学 学 院 ， 州 贵 阳 ５ ０ ２ ；． 州 省 思 南 县 大 河 坝 乡 畜 牧 站 ， 州 思 南 ５５ ０ ） １ 贵 ５０５２贵 贵 ６ １ ２
摘
要 ： 猪萎 缩性 鼻 炎（ 从 ＡＲ） 临床 症状 猪 群 分 离出 ３ ４株疑 似 支气 管 败 血 波 氏杆 菌 （ ｂ ， 分 离茵进 Ｂ ）对
（ ｏ ｄ ｔｌ ｒ ｎｈ ｓｐ ｉａ Ｂ ） 产 毒 素 多 杀性 巴 Ｂ ｒ ｅｅ ａｂｏ ｃ ｉｅ ｔ ， ｂ 或 ｌ ｃ 氏杆 菌 （ ａ ｔ ｒｌ ｌ ｃｄ ， ｒ） Ｐ ｓ ｕ ｅｌ ｍｕ ｔ ｉ ａ Ｐ 引起 的一种 慢 ｅ ａ ｏ ｏ
１ １ ２ 主要 试剂 ．．
细 菌培养基 、 生化反应试验 管 、 药
特征 。哺乳 仔猪感 染本 病后 ， 主要特 征 外 ， 可 以 除 还 限公 司产 品。
１ ２ 方 法 ．
引起全 身钙 、 磷代 谢 障 碍 ， 使 仔 猪 发 育 迟 缓 ， 料 致 饲
死亡 ， 而 给养殖 业带 来严 重 的经 济损 失［ ］ 从 ２。 ＡＲ于 １ ３ ８ ０年 由德 国 学者 Ｆ ａ ｇ ｅ首 次 报 道 。 ｒｎ ｕ
行 形 态结构 、 色特性 、 染 培养 性状 和 生化特 性等 方 面的测 定 ， 果这 些分 离茵均符合 Ｂ 结 ｂ的生物 学特征 ； Ｂ 对 ｂ
猪支气管败血波式杆菌病诊断与防治
Veterinary clinical science | 兽医临床科学132 ·2021.010 引言如果猪体内产生肺急性纤维素炎症，则很有可能是源于体内放线杆菌引发的病症，部分猪还会产生慢性局部灶性坏死的状况，医学界将上述病症称为传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌。
传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌并没有特定的产生条件，无论是身处哪个生长阶段的猪都有一定的几率产生。
其中幼崽阶段的猪，尤其是断奶后一段时间内，患病几率极大提升。
猪体内一旦产生传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌，将会出现持续扩散传播的情况，还可能会产生菌血症。
由于猪的呼吸道与传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌之间有特异性依赖的关系，相关医务人员可通过抽血检验病菌，但在后续治理中却难以根除。
拥有一定规模的养猪场一旦发现传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌，极有可能会发生猪群体性的感染症状，为猪场带来极大的损失。
1 研究目的和意义传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌的治疗过程十分麻烦，且难以完全清除病毒，需着重对传染过程进行管控，紧抓猪体与空气2大传染源，做好空气消毒工作，遏制空气传播源头，通过提高空气湿度推动尘埃粒子的整体沉降速率。
此外，猪场的相关养殖人员也需要一同参与防疫工作，针对染上病毒的病猪进行重点监管，通过隔离阻断病毒的传染，预防病毒进一步扩散。
发现病猪的状况较为严重，需要及时淘汰，避免僵猪及大规模感染的局面。
另外，血清筛查与监管环节也必不可少，针对不同的血清类型需要采用多元化的处理方式进行处理，通过甲醛进行灭活，在根源出实现防疫管理水平的提升[1]。
2 诊断方法打喷嚏是传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌最显著的特征，而当病毒开始扩散时，病猪的鼻骨将会产生萎缩病状，使病猪的鼻腔变得狭窄，阻碍病猪正常呼吸。
因此，病猪会出现呼吸急促等状况，且伴随摇头或拱地等行为。
传染性胸膜猪支气管败血波式杆菌呈乳白色，形状凸起，且表明较为粗糙，整体夹杂暗灰色，边缘不规则。
猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验
猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验陈鹏举;张红霞;魏晓莉;向忠菊;张光辉【摘要】All field isolates of Bordetella bronchiseptica (Bb) in this study were derived from samples of lung or nose swab of pigs with respiratory disease from pig farms in Henan province. These strains were identified base on culture characteristics, biochemical assay and polytnerase chain reaction (PCR) targeting the specific flaB gene of Bb. The result showed that 8 strains were isolated. The drug sensitivity test results showed that these Bb strains were highly sensitive to doxycycline.chlorampheni-col.Flubendazole,Ofloxacin.tetracycline,kanamycin,gentamicin,Nalidixic acid and amikacin.%本试验从河南省多个养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏和鼻拭子,进行支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的分离鉴定,通过病原的分离、培养对分离菌株进行形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用支气管败血波氏杆菌flaB基因的特异性引物进行PCR鉴定,结果表明,有8株分离菌株扩增出了237 bp的特异性目的条带,结合形态观察及生化试验鉴定,确认成功分离到了8株猪源性支气管败血波氏杆菌；药敏试验结果显示,分离菌株对强力霉素、氯霉素、氟苯哒唑、氧氟沙星、四环素、卡那霉素、庆大霉素、奈丁酸和阿米卡星高度敏感.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)011【总页数】4页(P234-237)【关键词】猪源支气管败血波氏杆菌;分离;鉴定;药敏试验【作者】陈鹏举;张红霞;魏晓莉;向忠菊;张光辉【作者单位】安徽省瑞森生物科技有限公司,安徽合肥261100;合肥市兽药制剂工程研究中心,安徽合肥261100;河南省周口职业技术学院,河南周口 466000;河南省内黄县畜牧局,河南内黄456300;安徽省瑞森生物科技有限公司,安徽合肥261100;河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S852.61支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica，Bb）是广泛感染家畜、野生动物和实验动物呼吸道上皮的病原菌，能引起猪、马、猫、犬、兔、小鼠、豚鼠、雪貂、刺猬、狐狸等哺乳动物的呼吸道疾病（陆承平，2002）。
简述间接elisa法的基本原理
简述间接elisa法的基本原理
间接酶联免疫吸附试验（indirect enzyme-linked immunosorbent assay，简称indirect ELISA）是一种常用的免疫学检测技术，广泛应用于医学、生物学、农业、环境等领域。
本文将简述间接ELISA法的基本原理。
基本原理
间接ELISA法是利用酶标记的二抗来检测样品中的特定抗原或抗体。
其基本原理如下：
1. 将要测定的抗原或抗体与特异性一抗结合，形成免疫复合物。
2. 将未结合的一抗洗脱，将酶标记的二抗加入，与免疫复合物结合。
3. 加入底物，使酶标记的二抗发生化学反应，生成可测量的产物。
4. 通过检测产物的光学密度，来确定样品中的特定抗原或抗体的浓度。
优点和缺点
间接ELISA法的优点是灵敏度高、特异性强、操作简单、成本低、适用范围广。
其缺点是需要进行多次洗涤，操作时间较长，对于复杂的样品矩阵，可能会产生假阳性或假阴性的结果。
应用领域
间接ELISA法广泛应用于血清学检测、病原体检测、免疫学研究、药物研发等领域。
例如，在临床应用中，间接ELISA法可以用于检测病毒、细菌、真菌等感染性疾病的诊断；在药物研发中，可以用于筛选药物的效力和剂量。
总之，间接ELISA法是一种简单、快捷、敏感、特异的免疫学检测技术，对于研究各种生物分子的表达、诊断疾病、药物研发等领域具有重要意义。
间接elisa实验流程
间接elisa实验流程
间接ELISA实验流程
ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗体或抗原的存在。
其中，间接ELISA是一种常用的抗体检测方法，其流程如下：
1.涂层：将待检测的抗原溶液加入96孔板中，使其在孔底形成一层涂层。
通常使用1%的牛血清白蛋白（BSA）或羊血清白蛋白（GSA）作为涂层缓冲液，以防止非特异性结合。
2.阻断：将孔中的涂层缓冲液倒掉，加入5%的牛血清或羊血清，使其在孔底形成一层阻断液。
阻断液可以防止非特异性结合，提高检测的灵敏度。
3.加入一抗：将待检测的样品加入孔中，与涂层中的抗原结合。
一般情况下，使用稀释后的血清或纯化的抗体作为一抗。
孵育时间一般为1-2小时。
4.加入二抗：加入与一抗特异性结合的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，孵育时间一般为1小时。
二抗可以与一抗结合形成复合物，
从而增强信号。
5.加入底物：加入HRP底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），孵育时间一般为10-30分钟。
HRP底物在酶的作用下会发生颜色变化，从而形成信号。
6.停止反应：加入停止液，如2M的硫酸，停止底物的反应。
停止液可以防止底物的继续反应，从而保证结果的准确性。
7.测量：使用酶标仪测量吸光度值，计算样品中抗体或抗原的浓度。
总结：间接ELISA是一种常用的抗体检测方法，其流程包括涂层、阻断、加入一抗、加入二抗、加入底物、停止反应和测量。
通过这种方法可以检测样品中抗体或抗原的存在，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和药敏试验
猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和药敏试验徐引弟;王治方;朱文豪;梁跃;郭成留【摘要】从2006年-2009年河南省发生的猪高热综合征的168家规模化猪场456份病料中分离出革兰阴性小杆菌,通过培养特性、生化试验和PCR检测,结果鉴定出25株猪支气管败血波氏杆菌.结果显示,所分离的猪支气管败血波氏杆菌对小鼠均有毒力,对阿齐霉素、环丙沙星、阿米卡星敏感.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)008【总页数】3页(P110-112)【关键词】猪支气管败血波氏杆菌;分离;鉴定;药敏试验【作者】徐引弟;王治方;朱文豪;梁跃;郭成留【作者单位】河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州,450002;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州,450002;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州,450002;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州,450002;河南省农业科学院畜牧兽医研究所,河南郑州,450002【正文语种】中文【中图分类】S858.28支气管败血波氏杆菌 (Bordetella bronchi-septica,Bb)可引起猪发生非进行性萎缩性鼻炎(non-progressive atrophic rhinitis,NPAR)和支气管肺炎,也是猪呼吸道综合征(Porcine respiratorydisease complex,PRDC)的重要致病因子之一[1-2]。
断奶前仔猪感染Bb,可发生NPAR和支气管肺炎,引起鼻甲骨萎缩。
断奶后仔猪感染主要表现为打喷嚏及鼻塞,不产生或者只产生轻度的鼻甲骨萎缩。
这两种情况下如果继发了产毒多杀性巴氏杆菌,则会发生更严重的进行性萎缩性鼻炎[3-4]。
2006年6月以来我国暴发的高热综合征给养猪业造成了巨大经济损失,高热综合征主要由高致病性猪蓝耳病病毒引起,同时有圆环病毒2型、猪瘟病毒、猪流感病毒和伪狂犬病毒的感染,细菌性病原如猪链球菌、副猪嗜血杆菌、大肠埃希菌、波氏杆菌、巴氏杆菌等继发感染和混合感染,波氏杆菌是主要的细菌性感染之一[5-8]。
家兔支气管败血波氏杆菌重组百日咳杆菌粘附素(PRN)蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立
中 国 比较 医学 杂 志
ＣＨＩ ＮＥＳ ＯＵＲＮＡＬ ０Ｆ Ｃ０ＭＰ ＥＪ ＡＲＡＴＩ ＶＥ ＭＥＤＩ ＮＥ ＣＩ
Ｆ ｂ ｕ ｒ ，２ ２ ｅ ｒ ａ ｙ ０１ Ｖ０ ． ２ ＮＯ ２ １２ ．
第２ ２卷
第 ２期
家兔 支 气 管 败 血 波 氏杆 菌 重 组 百 日咳 杆 菌粘 附素 （ Ｒ Ｐ Ｎ）蛋 白的原 核 表 达 及 其 间接 Ｅ ＩＡ方 法 的建立 ＬＳ
Ｐｒ ｋ ｒ ｏ ｉ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｏ ｂｂ ｔ ｒ ｅ ｅｆ Ｒａ ｉｓ Ｂｏ ｄ ｔ ｌ Ｂｒ ｎｃ ｉｅ ｉ ａ Ｐｅ ｔ ｃ ｉ ａ
Ｒｅ ｏ ｂ ｎ ｎｔＰｒ ｔ ｉ ｎｄ Ｄｅ ｅｏ ｃ ｍ ｉ ａ ｏ ｅ ｎ ａ ｖ ｌ ｐｍ ｅ ｔ ｏ ｎ Ｉ ｄｉ ｅ ｔＥＬＩ Ａ ｎ ｆａ ｎ ｒ ｃ Ｓ ｆ ｒ Ｄｅ ｅ ｔｏ ｆＩ ｓ Ａｎ ｉ ｏ ｉ ｓ ０ ｔ ｃ ｉ ｎ ｏ ｔ ｔｂ ｄ ｅ
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的 间 接 Ｅ ＩＡ 方 法 。 方 法 ＬＳ
特 异 性 引 物 ，Ｃ 扩增 出相 应 的 核 苷 酸 片段 。将 Ｐ Ｒ扩 增 产 物 连 接 至 原 核 表 达 载 体 ｐ Ｅ ＿Ｔ１中 ， Ｅ ｃｌＢ ２ ＰＲ Ｃ Ｇ ｘ４ 一 以 ．ｏ Ｌ １ ｉ （Ｅ ） Ｄ ３ 为表 达 菌 株 进 行 诱 导 表 达 ， 纯 化 重 组 蛋 白 Ｐ Ｎ作 为 诊 断 抗 原 ， 过 探 索 最 佳 抗 原 包 被 量 和 抗 体 血 清 稀 释 以 Ｒ 通 倍数等 ， 建立 检测 支气 管败 血波 氏 杆 菌 抗 体 的 间接 Ｅ ＩＡ 方 法 。 结 果 成 功 克 隆 了 ｐｎ全 基 因 序 列 ， 在 Ｅ ｃｌ ＬＳ ｒ 并 ． ｏ ｉ
家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测
家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测曹洪志;李成贤;彭茜翎;其美拉姆;史纪强【期刊名称】《饲料工业》【年(卷),期】2024(45)5【摘要】为深入了解兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb),试验将病兔体内分离得到的菌株进行菌株鉴定、生长曲线测定、致病性研究、药敏试验及耐药基因检测,期望了解该菌的生长规律,为临床用药及防控奠定基础。
通过Gram染色镜检、分离培养、16S rDNA序列分析对分离菌株进行鉴定,测定了该分离株的生长曲线、半数致死量、耐药性并对分离菌株进行β-内酰胺酶耐药基因的检测。
结果表明:分离得到1株革兰氏阴性杆菌,命名为P201215,该分离株的16S rDNA基因序列与GenBank中支气管败血波氏杆菌(登录号为NR113628.1)的同源性为99%。
分离株的对数生长期为2~9 h,9 h后进入平台期;对KM小鼠的半数致死量为1.19×107 CFU。
药敏试验结果显示,分离株对部分头孢菌素类药物耐药,对大部分β-内酰胺类、喹诺酮类、四环素类及氨基糖苷类药物敏感,PCR检测未检出超广谱β-内酰胺酶耐药基因。
【总页数】7页(P70-76)【作者】曹洪志;李成贤;彭茜翎;其美拉姆;史纪强【作者单位】宜宾职业技术学院;四川农业大学动物医学院;西藏自治区林芝市察隅县上察隅镇农牧综合服务中心【正文语种】中文【中图分类】S855.12【相关文献】1.家兔支气管败血波氏杆菌的分离与鉴定2.兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因检测3.家兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定4.西部白眉长臂猿支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其耐药基因检测5.四川省猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及耐药基因和毒力基因检测分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
间接elisa实验步骤
间接elisa实验步骤嘿，咱今儿就来唠唠这间接 ELISA 实验步骤哈！你想啊，这实验就跟搭积木似的，得一步一步来，可不能乱了套。
首先呢，咱得准备好那些个家伙什儿，像板子啦、试剂啦啥的，这就好比做饭得先有锅碗瓢盆和食材不是。
然后就是包被啦，把抗原啥的好好地给它固定在板子上，让它老老实实地待在那儿，就像给小娃娃穿好衣服一样。
接着就得洗刷刷啦，把那些不要的东西给洗掉，可不能留着捣乱呀。
再然后呢，加上一抗，让一抗去找到它该找的抗原，就像小狗找骨头似的，得找对地方。
又是一轮洗刷刷，把多余的一抗洗掉，可别让它乱凑热闹。
接下来就是加二抗啦，二抗就像个小侦探，专门去找一抗，嘿，这关系还挺复杂呢！再洗一洗，把那些不相关的都给弄走。
最后一步，加显色剂，这时候就像变魔术一样，颜色出来啦，实验结果也就慢慢呈现出来啦！你说这实验有意思不？每一步都得小心翼翼的，就跟走钢丝似的，稍不注意可能就前功尽弃啦！但要是做好了，那成就感，简直爆棚啊！就好像你自己盖了一座漂亮的小房子一样。
做间接 ELISA 实验，可不比做个手工简单呀，得有耐心，还得细心。
要是马马虎虎的，那结果能准吗？肯定不行呀！所以咱得打起十二分的精神来对待。
你想想，要是医生诊断病情靠这个实验，那要是做错了，后果得多严重啊！所以呀，每一个步骤都不能马虎，都得认认真真地去做。
这实验步骤就像是一首曲子，每个音符都得在正确的位置上，才能奏出美妙的音乐。
咱做实验也是一样，每个步骤都做好了，才能得出准确的结果呀！你说是不是这个理儿？反正我觉得，做间接 ELISA 实验就是一次奇妙的旅程，每一步都充满了挑战和惊喜。
只要咱用心去做，就一定能收获满意的结果。
加油吧，小伙伴们！让我们在实验的海洋里畅游，探索那些未知的奥秘！。
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取 波 氏杆菌 种 （ 自患 猪肺 分 离 ） 接 种 入鲜 血 琼 ，
脂 平板 ， ７ ３ ℃培 养 ４ ｈ 用 ｐ ． 、 ． １ ｌＬ Ｐ Ｓ ８， Ｈ７ ３ ０ ０ ｍｏ／ Ｂ
由哈 尔滨 兽 医研究 所 提 供 的 Ｐ Ｌ ０ ５ ｌＬ Ｐ Ｏ、 ． ｍｏ／
七 七 七 七 七 七 七 七 七
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４ 喷 油 嘴 卡 死
喷 油 嘴卡 死 时发 动 机 会 出现 功 率不 足 ， 冒烟 并
５ 供 油 时 间不 正 确
当供 油提前 角 过早 ， 发动 机会 出现 敲缸 、 功率 不 足， 当供 油提前 角 过迟 ， 首先 起 动 困难 ， 起 动 后 喷 若 入气 缸 的燃油 来不 及 完 全燃 烧 即被 排 出， 在 排 气 并 通道 内继 续燃烧 ， 生大量 热 量 ， 发动 机开 始 冒白 产 使
维普资讯
２ ４
现代 化农 业
２０ ０ ６年 第 ６期 （ 第 ３ ３期 ） 总 ２
支气 管败 血 波 氏杆 菌 的 间接 Ｅ ＩＡ 诊 断 方法 ＬＳ
姚 金水 李 兰东 。
（． 龙 江 省 鹤 岗市 东 山区 畜 牧 局 ， １黑 黑龙 江 鹤 岗 １ ４ ０ ；． ５ １ １２ 黑龙 江农 业职 业技 术 学 院 畜牧 兽 医 系）
Ｅ Ａ、 Ｄ（ 苯 二 胺 ） ＴＭＢ浓 缩 液 和 ＴＭＢ稀 ＤＴ ＯＰ 邻 、
收 藕 日期 ： ０ ６ １ ２ ２ ０ —０ — ５
七
洗下 菌苔 ，０ ０ ／ ｎ 离 心 ２ ｎ 取沉 积 菌 体 ， ７ ０ ｒ ｍｉ ， ０ｍｉ ， 悬 浮于 ｐ ． Ｈ７ ３反复 洗 涤 ３遍 ， Ｐ Ｓ悬 浮 ， 加 Ｂ 超声 波 裂 解 至 澄 清 ， ５ 型 紫外 分 光 光 度 计 测 定 Ｏ ｏ， 于７ １ Ｄｓ 加 ｏ
一
Ｅ ＩＡ 反应板 （ ＬＳ 江苏省 海 门塑料 仪 器 厂 ） Ｔ ， Ｅ— Ａ 型 微 量 振 荡 器 ， ｄ ｌ６ ０型 酶 标 仪 ， 式 离 心 Ｍｏ ｅ ８ 台 机， 台式冷 冻高 速离心 机 ， 生化 培养箱 ， 净工作 台 ， 洁
水 平摇 床 ， 紫外透 射分 析仪 。
种 快速 、 准确 、 简便 的方法 ， 并具 有敏 感性 高 、 异 特
性 强 的特 点 ， 能 够 同时 检 验 大 量 血 清 样 品 （ 博 且 陈 文 ） 因此 间接 Ｅ ＩＡ 方 法 是 检测 波 氏 杆 菌抗 体 的 ， ＬＳ
一
２ 检 测方 法
２ １ 阳 性 血 清 的 制 备 ．
２ ２ 抗原 制备 ．
血清 ， 用未 吃过初 乳 和 未 经免 疫 的 出 生仔 猪 静 脉 采 血， 静止 ，２ ０ ｒｍｉ 心 １ ｎ 分 离 血 清 ， ０ １ ０ ０／ ｎ离 ｍｉ ， 一２ ℃ 保存 ， 备用 。 自制标 准 阳性血 清 ， 分离 的支 气管 败 用 血 波 氏杆 菌免 疫实 验 动 物 猪 而制 成 的 阳性 血 清 ， 分 离血 清 ， ０ 一２ ℃保存 备用 。待 检血清 ， 河南 某猪 场未 经 免疫接 种 的疑似病 猪 的鲜血 ， 分离 血清 ， ０ 一２ ℃保 存备 用 。
上 述 菌液 用 ｐ ． ０ Ｏ ｍｏ／ Ｂ Ｈ７ ３、 ． ｌ ｌＬ Ｐ Ｓ悬 浮 ，０ Ｏ ／ ３ ０ ｒ ｍｉ ， 心 ３ ｍｉ ， 复洗 涤 ３遍 ， Ｐ Ｓ悬 浮 ， 声 ｎ离 ０ ｎ反 加 Ｂ 超
由 哈尔 滨兽 医研究 所 提 供 巴 氏杆 菌 阳性 血 清 、 猪丹 毒 阳性 血清 、 大肠 杆菌 阳性 血清 、 门氏菌 阳性 沙
我 国随着集 约 化猪 场 的 迅 速发 展 ， 国外 引种 及
释液（ ＴＭＢ ３ ３ ５ ５ ： ， ， 四联 苯 胺 ） Ｇｉｃ ， ； ｂｏ公 司 的兔 抗 猪 ＩＧ — Ｉ Ｃ； ｉｍａ公 司的兔 抗猪 ＩＧ—ＨＲ ｇ Ｆ Ｔ Ｓｇ ｇ Ｐ。
１ ３ 主 要 仪 器 设 备 ．
国 内种 猪 的频繁 调 动 ， 得 猪 萎 缩 性 鼻 炎在 许 多 猪 使
场 发 生 。在 萎 缩 性 鼻 炎 症 状 的 猪 鼻 腔 分 泌 物 中 ， ６ ． 的分 离 菌 为支 气 管败 血 波 氏杆 菌 ， 明该 菌 １５ 说 是 导致本 病 的主要 病 原菌 （ 克磊 ） 因此 支 气 管败 宋 ， 血波 氏杆 菌 的防 制 和 检 测 方 法 的研 究 显 得 尤 为 重 要 。间接 酶联 免 疫 吸 附试 验 （ 间接 Ｅ Ｉ Ａ 试 验 ） ＬＳ 是
血 清 、 链球 菌 阳性 血 清 、 猪 巴氏杆 菌 阳性 血清 。阴性
波 裂解至 澄清 ，０ ０ ／ ｎ 离 心 ２ ｍｉ ， ３ ０ ｒｍｉ， ０ ｎ 取上 清 液 紫 外 透射分 析 仪 测 蛋 白浓 度 ０ ３ ／ ． ｍｇ ｍＬ， 隔 ９ ， 间 ｄ 对 猪进 行第 ２次接 种 菌 体 蛋 白， 右耳 后 深 部 肌 肉各 左 ｌ ｍＬ， 部 静脉 ｌ 耳 ｍＬ。每 隔 １周 免 疫 一 次 ， 次免 每 疫后 采血 分离血 清 ， ０ 一２ ℃保存 作 为 Ｅ Ｉ Ａ反 应用 ＬＳ 的抗血 清使 用 。
种 优 良方法 。
将提 纯 的细 菌 接 种 于 Ｐ Ｌ 培 养 液 置 于 ３ ℃ Ｐ Ｏ ７
１ 检 测 材 料
１ １ 试验 用血 清 ．
水平摇 床 ， 养 ２ ｈ 然 后 进 行细 菌计 数 ， 培 ４， 紫外 透 射 分析 仪 测 ｏＤ 一１ ６ ５生 理 盐 水 稀 释至 ｏ ∞一 ．５ Ｄ ０ ２ ９ 对猪 进行 腹 腔 注射 ， 种 上述 菌 液 ５ 。将 ．０ ， 接 ｍＬ
有 敲击声 。 当喷油 嘴 针 阀 卡 死在 关 闭 时 ， 动 机 功 发 率 不足 ， 有敲 击声 ， 间长会 使高压 油管 断裂 。当喷 时