兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性检测
执业兽医全科类预防科目12年真题
1.属于细菌基本结构的是（）。
A.鞭毛B.荚膜C.菌毛D.核体E.芽孢答案:D2.细菌在组织内扩散，与其相关的毒力因子是（）。
A.菌毛B.荚膜C.外毒素D.内毒素E.透明质酸酶答案:E3.螺形西中西体只有一个弯曲，呈弧状或逗点状的细菌称为（）。
A.螺菌B.弧菌C.球菌D.杆菌E.以上都不是答案:B4.细胞壁缺损或没有细胞壁的多形细菌称为（）。
A.L型细菌B.球形菌C.弧形菌D.螺形菌E.杆形菌答案:A5.菌毛的主要功能是（）。
A.细菌的运动器官B.延长细菌的寿命C.保护细菌D.吸附作用和繁殖器官E.繁殖器官答案:D6.必须在有氧的条件下才能生长繁殖的细菌是（）。
A.专性需氧菌B.微需氧菌C.兼性厌氧菌D.专性厌氧菌E.以上都不是答案:A7.细菌的生化试验不包括（）。
A.糖发酵试验B.甲基红试验C.吲哚试验D.沉淀试验E.氧化酶试验答案:D8.在一定时限内能使接种的实验动物在感染后死亡一半所需的微生物量或毒素量，称为（）。
A.最小致死量B.半数致死量C.最小感染量D.半数感染量E.最大致死量答案:B9.湿热灭菌法中应用最广，效果最好的方法是（）。
A.高压蒸汽灭菌法B.流通蒸汽灭菌法C.间歇灭菌法D.巴氏消毒法E.煮沸法答案:A10.引起断奶仔猪水肿病的病原体是（）。
A.大肠杆菌B.沙门氏菌C.多杀性巴氏杆菌D.链球菌E.布鲁氏菌答案:A11.猪出血性痢疾的病原体属于（）。
A.细菌B.真菌C.螺旋体D.病毒E.支原体答案:C12.可引起禽类肿瘤性疾病的双股DNA病毒是（）。
A.鸡疽病毒B.新城疫病毒C.禽流感病毒D.马立克氏病毒E.传染性法氏囊病病毒答案:D13.只有一种核酸作为遗传物质的微生物是（）。
A.细菌B.支原体C.立克次氏体D.病毒E.衣原体答案:D14.引起产蛋鸡产蛋下降为主要致病特征的病毒是（）。
A.鸡传染性喉气管炎病毒B.鸡马立克氏病毒C.鸡痘病毒D.鸡产蛋下降综合征病毒E.新城疫病毒答案:D15.抗原特异性取决于（）。
生物制品的运输、保存和使用—生物制品的使用
氢氧化铝、矿物油、卡介苗
5.免疫途径
• 非注射途径
– 经口投喂；口、鼻腔喷雾；点眼；皮肤
• 注射途径
– 肌肉 – 皮下 – 皮内 – 腹膜内 – 卵内或胚胎内 – 靜脉内
6.免疫策略
• 通常注射2次，年度追加注射 • 新生幼畜通常由母畜免疫而获得母源抗
程序：成年公母猪一年一次，仔猪7-15日龄一次， 后备配种前一次。
11.猪传染性萎缩性鼻炎（AR）
猪AR是由支气管败血波氏杆菌和产毒素多杀性巴氏杆菌引 起的一种慢性呼吸道传染病。
其特征为：鼻炎、颜面变形，鼻甲骨下卷曲萎缩。打喷嚏， 流鼻血。 防制：可用抗生素治疗。
疫苗：A、支气管败血波氏杆菌Ⅰ项菌灭活菌苗。 B、支气管败血波氏杆菌＋D型产毒素多杀 性巴氏
缺点: 在体内不复制，接种剂量为刺激免疫反应的全部剂量。 通常需要2次以上注射7-14天开始产生；21天达到较高水 平。 副反应：局部和全身（过敏等）
猪场常用的灭活苗
• 口蹄疫 • 喘气病 • 大肠杆菌 • 萎缩性鼻炎 • 细小病毒 • 传染性胃肠炎/流行性腹泻 • 蓝耳病灭活苗 • 细菌性疾病灭活苗：链球菌、副猪嗜血
3.猪传染性胃肠炎
猪传染性胃肠炎（TGE） 猪流行性腹泻（PED） —— TP二联疫苗
猪传染性胃肠炎是由TGE病毒引起的猪的一种 急性胃肠道传染病。
猪流行性腹泻是由PED病毒引起的猪的一种高 度接触性肠道传染病。
该病10日令内仔猪死亡率100％，成年猪几乎 不死。
我国哈兽研成功研制的——TP二联灭活苗经后 海穴接种，灭活苗主动免疫保护率为96％、被动 免疫保护率为85.1％。
将病原体杀死或致弱=> 疫苗
兽医微生物学重点
兽医微生物学笔记重点串珠反应：在含青霉素0.5U/ml的培养基中，幼龄炭疽杆菌因细胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生质体相互连接成串细菌特殊结构荚膜(capsule)某些细菌在其细胞壁外包绕一层黏液性物质，用理化方法去除后并不影响细胞的生命活动。
1.抗吞噬作用2.抗有害物质的损伤作用3.营养物质的贮存场所与废物排出之地S 层某些细菌的一种特殊的表层结构，完整包裹菌体，由单一的蛋白质亚单位组成，排列规则，呈晶格样结构1.分子筛和离子通道2.屏障作用，保护细菌3.黏附宿主细胞4.重要的表面抗原鞭毛(flagellum)许多细菌在菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物，称为鞭毛，是细菌的运动器官。
鞭毛是运动器官。
鞭毛有抗原性。
与致病性有关芽胞(spore)某些细菌在一定的环境条件下，能在菌体内部形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠形式。
芽胞形成后细菌即失去繁殖能力。
产生芽胞的都是革兰阳性菌。
菌毛(filus菌体表面存在着一种比鞭毛更细、更短而直硬的丝状物，与细菌的运动无关。
巴氏杆菌科巴氏杆菌属（Pasteurella)两端钝圆，中央微凸的短杆菌G-菌抵抗力不强多杀性巴氏杆菌(P.multocida)是本属中最重要的畜禽致病菌，可引起多种动物发生出血性败血症或传染性肺炎,如猪肺疫、禽霍乱、兔巴氏杆菌病等,动物患病痊愈后，可获得较强的免疫力，且对其他血清型具有交叉保护力在普通培养基上生长贫瘠，血液或血清培养基中生长良好,不溶血,瑞氏染色或美蓝染色时，可见典型的两极着色血清型:1.菌体抗原:16个型，以阿拉伯数字表示 2.荚膜抗原:多糖成分，有6个型，微生物学诊断1.涂片或触片镜检染色（美蓝或瑞氏），两极着色2.分离培养麦康凯琼脂不生长,血平板不溶血3.动物试验病料悬液或培养物接种小白鼠,引起小白鼠迅速死亡里氏杆菌属（Riemerella )菌体呈杆状或椭圆形，多为单个，少数成双或短链排列。
可形成荚膜，无芽胞，无鞭毛。
微生物与免疫笔记
1.细菌的基本结构: 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质体、核糖体。
2.细菌的特殊结构: 鞭毛、菌毛（纤毛）、性菌毛、荚膜、芽孢。
3.细菌以二分裂方式进行无性繁殖。
4.细菌分为: 球菌、杆菌、螺旋菌。
5.细菌的形态：菌落：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。
菌苔：当固体培养基形成的菌落连成一片是, 便形成菌苔。
6.细胞壁主要有肽聚糖（又叫黏肽）--------革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的区别肽聚糖的不同。
7.磷酸壁时革兰氏阳性菌的特有成分。
细胞壁有缺陷仍然能生长的细菌称为 L形细菌。
8.细胞壁的主要功能: 1.保持细菌的一定外形。
2.保护细菌免受外界渗透压和有害质的损害。
3.与细菌的致病性、抗原性、对噬菌体和药物的敏感性有关。
4.与革兰氏染色特性反应有关。
9.脂多糖内毒素的主要成分。
外毒素的主要成分是蛋白质。
10.细胞膜是半渗透性的生物膜。
11.荚膜的作用 1.保护细菌免受干燥。
2.储存营养。
3.有助于细菌粘附。
4.能抵抗吞噬细胞的吞噬和抵抗抗体, 使细菌发挥致病性, 是细菌致病的重要因素。
12.鞭毛 1.细菌运动有关。
2.与细菌的粘附有关。
13.性菌毛: 传递遗传物质。
14.芽孢是细菌的休眠体。
芽孢杀灭方法: 160℃干热灭菌或高压蒸汽灭菌。
15.对数期：细菌生长最快, 大小基本一致。
对外界最敏感。
药敏试验对数期。
16.细菌的合成产物1.致热源（本质是多糖）。
2.毒素。
3.侵袭性酶类。
4.细菌素。
5.色素。
6.抗生素。
7、维生素（大肠杆菌合成维生素B.K）。
17.培养基分类: 1.基础培养基。
2.营养培养基。
3.选择培养基。
4.鉴别培养基。
18.正常菌群的作用: 1.营养作用。
2、刺激免疫应答。
3、生物拮抗作用。
19.致病性：一定的病原微生物, 在一定的条件下能在特定的寄住体内引起感染过程的性能。
20.毒株: 同一种病原微生物的不同分离病原珠。
执业兽医全科兽医传染病学(A2型题)
1.某规模化猪场断奶仔猪和哺乳仔猪发生了以脑膜炎症状为主的神经性疾病。
病初意识障碍，运动失常，作圆圈运动或无目的地行走；有的头颈后仰，前肢张开，呈典型的"观星"姿势；口吐白沫，倒卧地上，四肢划动呈游泳状。
体温初期正常，偶有低烧，后期体温下降至36.5℃。
根据以上提示该病最有可能是A.猪Ⅱ型链球菌病B.猪李氏杆菌病C.圆环病毒病D.猪伪狂犬病E.猪蓝耳病答案:B2.一专业养鸡户的鸡群发现突然减食，闭目昏睡，精神高度抑制。
一夜之后产蛋量大幅度下降，甚至停止，头面部水肿，无毛处皮肤和鸡冠、肉髯出血、发绀，流泪；呼吸极度困难，不断吞咽、甩头，口流粘液，叫声沙哑，头颈部上下点动，有的扭曲颤抖：拉黄白或绿色稀粪。
对死亡的鸡只进行剖检，发现：腺胃粘膜呈点状、片状出血，腺胃与食道交界处、腺胃与肌胃交界处有出血带或溃疡。
整个肠道特别是小肠肠壁有大量的枣核样坏死。
盲肠扁桃体肿胀、出血、坏死。
由以上临床症状和病理变化可初步判定此病为A.鸡新城疫B.产蛋下降综合征C.鸡传染性支气管炎D.鸡瘟E.禽流感答案:E3.某鸡场鸡只出现呼吸困难，咳嗽，有黏液性鼻液，常表现为伸头，张口呼吸，并发出"咯咯"的喘鸣声或尖叫声。
嗉囊内有大量积液，倒提时这些液体（酸臭）从口出流出，部分鸡只因昏迷而死亡。
剖检病变：嗉囊内充满大量黄色酸臭液体及气体。
腺胃粘膜高度水肿，其乳头或乳头间有出血点和溃疡；腺胃和肌胃交界处出血明显：肠外观可见紫红色枣核样肿大的肠淋巴滤泡；盲肠扁桃体肿大，出血，坏死；其他病变不明显。
根据以上临床症状和剖检病变可初步诊断为A.禽流感B.鸡传染性法氏囊病C.鸡新城疫D.真性鸡瘟E.禽霍乱答案:C4.某鸡场1日龄雏鸡接种了马立克氏病疫苗，10日龄饮水免疫新城疫疫苗，3月龄发现鸡群发病，呈大劈叉的特殊姿势，一侧或两侧翅膀下垂，仰头或扭头，剖检发现有一根坐骨神经比另一根粗3～4倍，这种现象不可能的原因为A.马立克氏病疫苗保存不当失效B.新城疫疫苗对马立克氏病疫苗产生杭体有抑制作用C.超强毒株感染D.疫苗使用方法不当造成效价降低或失效E.疫苗在细胞传代上过度致弱，免疫原性大幅下降答案:B5.发现猪呼吸困难，排恶臭液状粪便并混有血液，四肢下端皮肤有出血斑点，可怀疑为A.猪支原体肺炎B.猪瘟C.猪流感D.猪水泡病E.猪痢疾答案:B6.一养鸡专业户饲养蛋鸡5000只，突然发现这些鸡中的一些鸡只咳嗽和气喘、流鼻涕等，也有的表现为严重的呼吸困难，并咳出血样黏液。
【国家自然科学基金】_系统侵染_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
心叶烟 形态 干扰素调节因子-3 干扰素 差异表达基因 小麦条锈菌 小叶锦鸡儿 家蚕微孢子虫 家蚕丝腺 大豆疫霉 大豆 大肠杆菌表达系统 基因表达分析 基因组合量 基因工程 基因克隆 培养性状 型交叉中和 土壤因子 叶霉菌 反向遗传系统 卫rna 几丁质合成酶 净化选择 冰草 内表皮细胞 共生 免疫原性 光系统ⅱ 光系统ⅰ 信号转导 人乳头瘤病毒11型 亚细胞定位 三型分泌系统 一氧化氮 β -1 sar8.2b启动子 rnf5 race ngnpr1 mpasr蛋白 mita ibnpr1基因 hrpa hrap基因 ghf5家族 est era疫苗株 co_2浓度 cf基因 cdna 抗病毒活性 抗病性 抗性 扩展 感染特性 形态 序列分析 尖孢镰刀菌 小麦赤霉病 小麦条锈菌 小麦 寄主植物 天然次生林 大麦条纹花叶病毒 大豆胞囊线虫3号生理小种(scn3) 大肠杆菌o157:h7 外源肽 外壳蛋白 基因组序列 四跨膜蛋白超家族(tm4sf) 发根农杆菌 卫星dnaβ 南方根结线虫 半夏 初选核心种质 分类鉴定 几丁质酶 冰冻切片 全序列分析 全基因组 免疫原性 免疫 光生物学效应 侵染性克隆 侵染性 侵入 作用机制 体细胞胚胎发生 亲缘关系 产毒多杀性巴氏杆菌 亚克隆 丛枝菌根真菌(amf) 丛ห้องสมุดไป่ตู้菌根真菌 φ min27(△stx::cat) virg蛋白 uv辐射 tunel检测 tmv(tobacco mosaic virus) tetraspanins stx2噬菌体 pmt elisa don积累抗性
生物制品的基本知识
7,猪流行性感冒 该病是由猪流感病毒引起的猪的一种急性,高度接触性呼吸 道传染病. 临床上以突然发病,发热,咳嗽,呼吸困难,衰竭然后迅速 康复. 猪流感无特效药,只有对症治疗. 疫苗:猪流行性感冒灭活苗,国外已经研制成功.国内已经 进入疫苗审批程序.
8,猪链球菌病 该病是由各种致病性链球菌感染引起的一种人畜共患的传染 病.败血症,化脓性淋巴结炎,脑膜炎,关节炎为主要特征. 猪链球菌 型菌珠可导致人类的脑膜炎,败血症,心内膜炎, 严重可致人死亡. 防制:抗生素有一定效果. 弱毒苗是由C群链球菌制备的.(我公司有) 灭活苗是由链球菌二型菌株制备的. 也可用本场分离的菌株制备的灭活苗效果更加.
9,大肠杆菌病 大肠杆菌病是由致病性大肠埃希氏菌的血清型引起的多种动 物不同疾病的统称.以新生幼畜动物为主的肠道传染病. 仔猪黄痢:(早发性大肠杆菌病)五日龄内发生.有高发病 率和死亡率. 仔猪白痢:(迟发性大肠杆菌病)10-30日龄5天,各 分别注射疫苗,常用的有:A,仔猪大肠杆菌三价灭活苗, 带有K88,K99,987P菌毛抗原.(im) B,仔猪大肠杆菌 K88,K99双基因工程灭活苗.(耳根 或 in) C,仔猪大 肠杆菌K88,LTB双基因工程灭活苗.(im 或 口服)
一什么是生物制品一什么是生物制品生物制品是根据免疫学原理用微生物细菌病毒生物制品是根据免疫学原理用微生物细菌病毒立克次氏体以及微生物的毒素等动物的血液组织立克次氏体以及微生物的毒素等动物的血液组织制成的用以预防治疗以及诊断人或动物传染病的一制成的用以预防治疗以及诊断人或动物传染病的一类药品
生物制品的基本知识
一,什么是生物制品
生物制品是根据免疫学原理,用微生物(细菌,病毒,立 克次氏体以及微生物的毒素等),动物的血液,组织制成 的,用以预防,治疗以及诊断人或动物传染病的一类药品. 其中包括:供预防传染病发生的菌苗,疫苗,类毒素;供 治疗或紧急预防用的抗菌血清,抗病毒血清,抗病毒素, 噬菌体,干扰素等;和供诊断传染病用的各种抗原抗体诊 断液等.
动物传染病试题及答案1[1]
动物传染病试题及答案1[1]动物传染病试题及答案一、单项选择题（1×30）1．传染病流行的三个基本环节有传染源、传播途径和。
A．免疫动物 B．易感动物 C．家禽 D．家畜2．注射油乳剂灭活苗后产生的抗体比注射相同的活疫苗产生的抗体。
A．维持时间短，效价高 B．效价低，维持时间长 C．效价高且维持时间长3．疫点、疫区、受危胁区和封锁令由划定公布。
A．县级以上地方人民政府 B．市地畜牧兽医行政部门 C．省畜牧兽医行政部门D．农业部4．免疫血清的优点是注射后立即生效，缺点是免疫时间较短，一般维持天。
A．5～7 B．10～15 C．15～205．待检病毒材料，一般保存在。
A.50％甘油缓冲液B.30％甘油缓冲液C.10％福尔马林液D.5％福尔马林液6．增殖的大量炭疽菌可在血管内形成引起循环障碍、出血、水肿等病理变化。
A．溶血 B．栓塞 C．肿瘤 D．休克7．动物突然发病死亡，天然孔出血应首先怀疑是。
A．猪瘟 B．炭疽 C．羊肠毒血症8．破伤风的治疗方法可采用抗破伤风血清中和毒素、镇静、解痉、消除病原和对症治疗，消除病原可首选。
A．青霉素或链霉素 B．抗病毒草药 C．土霉素 D．普鲁卡因9．狂犬病毒可被日光、紫外线、超声波、2％肥皂水、碘酒等灭活，对酸、碱、石炭酸、新洁尔灭、福尔马林、等消毒药物敏感。
A．链霉素 B．氯霉素 C．氨基比林 D．升汞10．沙门氏杆菌进人机体，在肠道中大量繁殖，产生大量毒素，引起肠壁发炎，慢性病例病菌在大肠勃膜和淋巴滤泡中大量繁殖，引起勃膜和淋巴坏死而产生特征性的猪副伤寒淋巴滤泡。
A．溃疡 B．充血 C．淤血 D．卡他性炎11．是沙门氏菌属中造成死亡率最高的。
A.鼠伤寒沙门氏菌B.肠沙门氏菌C.猪霍乱沙门氏菌12．疑似或确诊为口蹄疫的家畜应。
A．禁宰 B．急宰 C．缓宰13．______乳兔、乳鼠接种试验为阳性。
A.口蹄疫病毒B.水疱病病毒C.水疱疹病毒D.水疱性口炎病毒14．结核结节眼观病变特征为半透明灰白色或黄色结节，切开可见______。
猪传染性胸膜肺炎 PPT
我国流行的优势血清型
“九.五和十.五”期间, 我们共检测了全国各 地 送 检 的 100 ， 000 多 份 猪 血 清 ， 阳 性 率 为 53%左右，有的甚至超过了70% 。
我们从湖北、湖南、广东、浙江、上海、 河南、山东、广西、福建、江西等10个省（市） 出 现 呼 吸 道 症 状 猪 的 肺 脏 中 分 离 到 100 余 株 APP，主要流行的血清型主要为1、2和7型。
型，针对性强 ▪ 免疫原性好，免疫保护率高 ▪ 含有天然毒素、保护更全面 ▪ 先进的发酵工艺、新型浓缩与乳化工艺
细菌发酵罐系统
电脑自动记录数据
1、安全性
结果1：疫苗对最小使用日龄仔猪、不同接种途 径的一次单剂量接种的安全性
灭活疫苗分别以2ml分别通过接种35-40日龄断 奶仔猪后，仔猪无临床症状，包括呼吸情况、精神 状况、食欲等正常，未见异常变化。同时，作为TSB 培养基接种的对照猪，体温也未升高（P>0.05）， 疫苗安全性很好 。
1. 急性：以出血性纤维素性胸膜肺炎为特征， 胸腔内有血液样液体。在急性死亡病例、气 管和支气管充满泡沫状血样粘性渗出物。
2.慢性：以纤维素性坏死性胸膜肺炎为特征， 在大部分慢性病例，大小不同的结节，这 些脓肿样结节被一层厚结缔组织膜包裹， 有些区域胸膜粘连。在许多病例肺部病变 消失，只残留局灶性胸膜粘连。
2. 病原学诊断方法 （1）病原分离鉴定
(2)PCR诊断方法
华中农业大学自1996年以来，已建立了ApxI、 ApxII、ApxIII、 ApxIV、omlA(外膜蛋白)、tfb(转 铁结合蛋白)PCR诊断方法。由于ApxIV只在体内表 达而在体外不表达， ApxIV-PCR可作为鉴别诊断， 结合当前我国用得最多商品化灭活疫苗， 可以区 分灭活疫苗免疫猪和野毒感染猪，达到净化并最 终根除猪传染性胸膜肺炎。
执业兽医全科类预防科目15年真题
1.细菌在固体培养基上生长形成的菌落连成一片，称为（）。
A.菌丝B.菌膜C.菌苔D.菌团E.菌膜团答案:C2.革兰氏阳性菌细胞壁特有的组分是（）。
A.蛋白质B.脂质C.脂多糖D.磷壁酸E.肽聚糖答案:D3.与细菌黏附细胞有关，只能在电子显微镜下观察到的结构是（）。
A.普通菌毛B.性菌毛C.鞭毛D.夹膜E.芽孢答案:A4.必须在无氧条件下才能生长繁殖的细菌是（）。
A.大肠杆菌B.炭疽芽孢杆菌C.破伤风梭菌D.伤寒沙门氏菌E.金黄色葡萄球菌答案:C5.有助于病原菌在动物组织中扩散的细菌产物是（）。
A.内毒素B.肠毒素C.细菌素D.卵磷脂酶E.色素答案:D6.与内毒素相比，细菌外毒素具有的特点是（）。
A.化学成分是脂多糖B.毒性弱C.耐热D.免疫原性弱E.免疫原性强答案:E7.可用于检测细菌遗传物质的方法是（）。
A.涂片镜检B.分离培养C.生化实验D.聚合酶链式反应E.免疫转印答案:D8.实验室空气消毒常用的方法是（）。
A.紫外线照射B.α射线照射C.β线照射D.γ线照射E.X射线照射答案:A9.禽霍乱的病原是（）。
A.多杀性巴氏杆菌B.大肠杆菌C.沙门氏菌D.鸡毒支原体E.衣原体答案:A10.与病毒囊膜特性或功能无关的是（）。
A.保护病毒核酸B.介导病毒吸附易感细胞C.对脂溶剂敏感D.抗原性E.为病毒复制提供遗传信息答案:E11.必须用活细胞才能培养的微生物是（）。
A.霉菌B.放线菌C.病毒D.支原体E.酵母菌答案:C12.用于空斑试验进行病毒定量时应选用（）。
A.鸡胚B.细胞C.实验动物D.宿主动物E.合成培养基答案:B13.产蛋下降综合征病毒属于（）。
A.疱疹病毒科B.腺病毒科C.冠状病毒科D.动脉炎病毒科E.反转录病毒科答案:B14.与牛瘟病毒存在明显抗原交叉反应的病毒是（）。
A.伪狂犬病毒B.牛病毒性腹泻病毒C.牛暂时热病毒D.小反刍兽疫病毒E.口蹄疫病毒答案:D15.引起机体发热反应的热原质属（）。
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收稿日期:2006211214 基金项目:国家自然科学基金资助项目(3067114,30740077);山东省自然科学基金资助项目(Y2006D09) 作者简介:王 伟(19812),男,在读研究生。
3通讯作者,E 2mail :zhurl @兔支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性检测王 伟1,朱瑞良13,李新苍1,胡晓娜1,王永花2 (1.山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;2.上海美农公司,上海201000)摘要:2004年,山东省某一大型养兔场的20～30日龄幼兔突然大批发病死亡。
病兔早期精神不振,多数病兔鼻腔流出脓性鼻液,随着病程的延长逐渐表现为呼吸困难,并出现鼻鼾声,以体况瘦弱,腹泻为主要症状。
从中主要分离到4株细菌,根据其形态学特性、培养特性、生化特性、血清学反应特性等将分离菌鉴定为兔支气管败血波氏杆菌。
然后对所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株进行(G +C )mol %含量的测定以及16SrRNA 的扩增,结果(G+C )mol %含量为61.7%～62.4%,与Kersters K 结果相符(61.6%～62.6%);而该菌16SrRNA 核苷酸序列与GenBank 中收录的AF177666株禽波氏杆菌核苷酸序列同源性为82.7%,与本实验室保存的禽波氏杆菌及兔败血波氏杆菌参考菌株S80103株同源性高,分别为99.7%和99.9%。
利用所分离到的兔支气管败血波氏杆菌菌株制备免疫原,通过免疫孕前母兔,使仔兔获得母源抗体,而使幼仔兔获得早期保护,效果较好。
关键词:兔;波氏杆菌;鉴定;(G +C )mol %;16SrRNA ;免疫中图分类号:S852.61 文献标识码:A 文章编号:100524545(2008)0820897204Isolation ,identif ication and molecular biology characterisitics of rabbit Bor detell abronchise pticaWAN G Wei 1,ZHU Rui 2liang 13,L I Xin 2cang 1,HU Xiao 2na 1,WAN G Y ong 2hua 2 (1.College of A n 2i m al H usband ry and V eteri nary M edici ne ,S handong A g ricult ural U ni versit y ,T ai an ,S han 2dong 271018,Chi na;2.S hang hai Mei non g Feed Co ,L t d ,S hang hai 201000,Chi na ) Abstract :In 2004,the 20,302day 2old young rabbits of a large 2scale farm in Shandong were diseased suddenly andwere caused to death.The rabbits discharged the purulent nasal secretion in early phase ,and with the process of dis 2ease ,the rabbits manifested the dyspnea ,snore ,feebleness ,and diarrhea.Four bacteria were isolated ,and through morphological ,cultural ,biochemical characteristics and serial reactional traits ,the bacteria were identified as rabbit B ordetella bronchise ptica .The G +C mol %of isolated bacteria was from 61.7%to 62.4%,which accorded to theresults of Kereters (61.6%262.6%);the homology of gene sequnence of 16srRNA from the isolated strains with the corrensponding parts of avian B ordetella bronchiseptica recorded in G eneBank was 82.7%;and the homology of gene sequnence of 16srRNA with the corrensponding parts of Avian strian and rabbit B ordetella bronchise ptica Ref 2erence strian A F177666was higher ,which was 99.7%and 99.9%,respectively.The immunogens were prepared u 2sing the isolated bacteria ,and the female rabbits were vaccinated before pregnancy.The new 2born rabbits showed the high titer abtibody and the good protection against rabbit B ordetella bronchiseptica . K ey w ords :rabbits ;B ordetella bronchise ptica ;idenfiction ;(G +C )mol %;16SrRNA ;immune 3Corres ponding author ,E 2mail :zhurl @ 兔支气管败血波氏杆菌病是家兔常见的传染病,主要引起哺乳仔兔和断乳仔兔的急性死亡,成年兔的鼻炎、支气管炎和脓疱性肺炎等,对养兔业造成很大的危害[122]。
2004年,山东省某一大型兔场及其周围养殖户饲养的新西兰肉种兔2400余只,其所产仔兔共计465只,均在20～30日龄发病,表现为精神不振,多数病兔鼻腔流出脓性鼻液、周围的被毛沾有粘液脓性分泌物,后期出现结痂,随着病程的延长逐渐表现为呼吸困难,并出现鼻鼾声,体况瘦弱,下痢拉稀。
从病兔肝脏中分离到4株革兰氏阴性菌,经鉴定均为兔支气管败血波氏杆菌,现将该菌的分离鉴定及其部分生物学特性的研究情况报告如下。
1 材料与方法111 被检病料及被检血清 病兔的鼻腔分泌物、肝脏、脾脏、肾脏、血清等病料,均采自于山东某兔场的同一批发病或死亡的幼兔。
病兔初期主要表现为鼻腔流出少量浆液性或黏液性分泌物,后期呈脓性分泌物,呼吸困难,食欲不振,逐渐消瘦。
剖检表现为鼻腔粘膜及气管粘膜出血,鼻腔、咽喉部及气管内充满淡黄色粘液性或脓性分泌物,肺充血水肿,表面有大小不一的化脓灶,切开后有乳白色的脓汁流出,一侧肺的尖叶部分发生肉变,另一侧肺呈灰白色坏死,切面有大量白色干酪样物质;肝肿胀、淤血,质地坚硬,肝表面有少量细小的坏死点,有的病例脾脏边缘有坏死、肿大;胃底粘膜轻度出血;肠粘膜充血、出血、水肿变厚,直肠变厚。
1.2 培养基 普通营养琼脂、麦康凯、普通肉汤培养基,购自天津市珠江卫生材料厂。
细菌生化微量反应管,购自杭州天和微生物试剂有限公司。
1.3 参考菌株及阳性血清 兔支气管败血波氏杆菌参考菌株S80103株及其阳性血清是由扬州大学兽医学院微生物实验室惠赠。
大肠杆菌的阳性血清、鸡白痢沙门菌阳性血清、新城疫阳性血清及禽流感阳性血清,均购自中国兽药监察所。
1.4 药敏纸片 常见药物的药敏纸片,购自上海医学化验所。
1.5 试验用兔 购自泰安市郊区种兔厂。
1.6 化学试剂 10#白油由杭州炼油厂生产,硬脂酸铝由上海远航化工厂生产,Tween280和Span280由上海大众制药厂生产。
1.7 分子生物学材料 小量细菌总DNA抽提试剂盒、小量胶回收试剂盒和小量质粒抽提试剂盒均购自上海华舜公司;TaqDNA酶、pMD182T载体、Bam HⅠ、HindⅢ,均购自大连宝生物工程公司;E.coli T GⅠ由本实验室保存;其他试剂均为分析纯试剂。
1.8 细菌的分离及鉴定1.8.1 细菌分离培养 无菌取病死幼兔的鼻腔分泌物、肝脏、脾脏、肾脏等病料接种于普通营养琼脂, 37℃培养24h。
挑取单个菌落纯培养后,再将纯培养物移植到普通肉汤培养基、麦康凯培养基及血琼脂培养基上,37℃培养24h,观察培养特性。
1.8.2 细菌形态学观察 取纯培养物涂片,革兰氏染色,显微镜观察;18h的普通肉汤培养物涂片,在暗视野显微镜下观察菌体的运动情况;硝酸银染色法观察菌体周身是否具有鞭毛;用湿墨水染色法观察菌体是否具有荚膜;用Schaeffer2Fulton染色法观察菌体是否具有芽孢。
1.8.3 细菌生化试验 将分离菌纯培养物分别接种到微量生化管,37℃培养24h,观察并记录结果。
1.8.4 血清学鉴定 将分离菌的纯培养物与兔支气管败血波氏杆菌的标准阳性血清进行平板凝集试验,观察凝集现象。
1.8.5 细菌的致病性检测 将15只20日龄的仔兔随机分成3组,分别为试验组、对照组、健康组,每组5只。
试验组每只接种6×1010CFU/mL的37℃培养24h的细菌肉汤培养液012mL;对照组每只接种0.2mL的无菌肉汤培养基;健康组不接种。
1.8.6 细菌药物敏感性试验 采用药敏纸片扩散法进行,37℃培养24h,观察并记录结果。
1.9 分离菌部分分子生物学特性1.9.1 (G+C)mol%的测定 参照文献[425]方法进行。
1.9.2 16SrRNA的PCR扩增 根据GenBank已发表的B or detell a avi um(登录号为A F177666)的16SrRNA序列,用DNAStar软件设计1对引物16SF:5′2A G A GTTTG ATCCTGGCTCA G23′;16SR: 5′2A GCAAACA GGA T TA GA TACC23′,由上海英俊生物技术有限公司合成。
对所分离细菌用华舜小量细菌总DNA抽提试剂盒抽提DNA,进行16SrRNA的PCR扩增。
16SrRNA的PCR按常规方法进行。
PCR纯化产物与pMD182T载体连接,导入感受态大肠杆菌中(T GI,E.coli T GI)[6]。
在含有氨苄青霉素(50 mg/L)的平板培养基上培养,挑取阳性克隆,提取质粒,经HindⅢ和Bam HⅠ双酶切,产物用0.8%琼脂糖电泳检测,阳性克隆送上海英俊生物技术有限公司测序。