葡萄籽原花青素的提取和检测方法
葡萄籽原花青素的提取及其抗紫外线活性测定_杨健
收稿日期：2013-10-10 基金项目；西北农林科技大学科技创新重点项目（ZD2013017） 作者简介：杨健（1988—），女，硕士，研究方向为葡萄酒化学。E-mail：yangjane10@ *通信作者：袁春龙（1969—），男，副教授，博士，研究方向为葡萄酒化学。E-mail：yuanchl69@
Abstract: An accelerated solvent extractor (ASE) was used to extract proanthocyanidins from defatted grape seed powder.
Grape seed proanthocyanidin extracts (GSPE) were obtained under the optimal operating conditions established by one
(1. College of Enology, Northwest A & F University, Yangling 712100, China; 2. Shaanxi Engineering Research Center for Viti-Viniclture, Yangling 712100, China; 3. College of Food Science and Engineering, Northwest A & F University, Yangling 712100, China)
70 2014, Vol.35, No.18
食品科学
※工艺技术
费，缩短提取时间，并且简化了样品前处理程序[15-17]， 以乙醇作为提取溶剂更加安全，在合理选择溶剂体积分 数、萃取时间、温度、压强的基础上，可以快速获得安 全的葡萄籽原花青素提取物。
葡萄籽原花青素液相检测方法
原花青素原花青素原花青素原花青素HPLC初步方案初步方案初步方案初步方案一．实验目的：分析样品原花青素纯度，了解其中杂质成分。
二．实验方案：1. 方案一：Waters 公司高效液相色谱，C18柱(4.6 ×250 mm) , 检测波长为280 nm，进样量10μL ,柱温为室温。
待测液均经0.45μm 孔径的滤膜过滤。
流动相及流速见下表(A —10 %乙酸,B —重蒸水)：2. 方案二：（间接法定量）（原理类似铁盐催化比色法）(1) 标准曲线：称取前花青素标准品10mg 溶于10ml甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml 置于10ml 容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
各取1ml 测定。
(2) 试样测定: 将正丁醇与盐酸按95 ：5的体积比混合后,取出6.0ml 置于具塞锥瓶中,再加入0.2ml硫酸铁铵[NH4Fe(SO4) 2·12H2O]溶液（用浓度为2mol/L 盐酸配成2%(w/v)的溶液）和1.0ml 经0.45μm滤膜过滤的试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,待进行高效液相色谱分析。
(3)液相色谱参考分析条件: 色谱柱Shimadzu Shim –pak CLC –ODS 4.6 ×150mm;柱温35 ℃;检测器:紫外检测器,检测波长525nm流动相: 水:甲醇:异丙醇:10 %甲酸= 73 :13 :6 :8 流速0.9ml/min。
注：该方法使用的水解方法与我们当前使用的铁盐催化水解原花青素方法稍有差异，哪种效果更好，可进行预实验加以比较。
3．方案三：（反相高效液相色谱）标样：原花青素标准品色谱柱：Hypersi ODS-2 ，150 × 4.6mm 5μm；流动相：A：0 . 2%(V/V) 乙酸；B：乙腈；流量：1ml /min；进样量：5μl;柱温：30℃；检测波长：280nm.洗脱梯度：以乙腈的百分比浓度表示(B液溶于A液)0 ～5 % ，10min；5%～20%，10～20min；20%～40%，20～40min；40%～50%，40～50min；50%～5%，45～50min；5%～0，50～60min。
葡萄籽原花青素获取过程
葡萄籽原花青素的获取过程涉及以下步骤：
1.采摘：首先，需要选择成熟的葡萄果实进行采摘。
这些葡萄应该是优质的，无病虫害，
并且在最佳成熟期采摘以保持其最高的花青素含量。
2.压榨：采摘后的葡萄会被送往加工厂进行压榨。
压榨的目的是将果皮和葡萄籽与果汁分
离开来。
3.分离果汁与固体物：通过机械或手动操作，将葡萄的果汁与固体物（包括果皮和葡萄籽）
分离开来。
果汁可以用于制作葡萄酒等产品，而固体物则用于提取葡萄籽原花青素。
4.粉碎：将分离出来的葡萄籽进行粉碎，通常使用专门的设备或机械破碎来确保葡萄籽内
的花青素能够更容易地释放出来。
5.提取：利用溶剂（如乙醚、丙酮等）或超临界二氧化碳等工艺，将葡萄籽中的花青素提
取出来。
这一步骤可以通过浸泡、过滤和蒸馏等方式进行。
6.浓缩和纯化：提取出的原花青素溶液可能需要经过浓缩和纯化步骤，以去除杂质和水分，
并获得更高纯度的葡萄籽原花青素。
7.干燥和粉末化：最后，将葡萄籽原花青素溶液进行干燥，通常使用喷雾干燥或凝固干燥
等技术，使其转变成粉末形式，方便在制药、保健品等领域中的应用。
需要注意的是，获取葡萄籽原花青素的具体方法和设备可能因不同的生产厂商和专利技术而有所差异。
以上步骤仅为一般性描述，并不能代表所有实际生产过程的细节。
葡萄籽原花青素的提取技术研究概况
葡萄籽原花青素的提取技术研究概况葡萄籽原花青素的提取技术研究概况摘要：原花青素是植物界广泛存在的一类多酚类化合物，葡萄籽被认为是提取原花青素的最正确原料。
随着科技的开展和进步，提取技术不断被突破，本文分析和整理近年来国内外期刊有关的文献，对葡萄籽原花青素的提取技术进行综述，为葡萄籽原花青素的工业生产研究提供参考。
关键词：葡萄籽，原花青素，提取原花青素是植物界广泛存在的一类多酚类化合物。
葡萄籽作为葡萄酒及葡萄汁生产的下脚料，是原花青素的主要来源，具有明显的本钱优势，被认为是提取原花青素的最正确原料。
原花青素由不同数量的单体黄烷-3-醇缩合而成，黄烷醇结构上可以连接不同的酰基或糖酰基，最常见的是没食子酸与-表儿茶素C3羟基缩合形成的酯。
由于单体组成及单体间连接键的不同，每种聚合体还可能包含许多同聚异构体，形成复杂的混合物。
通常将聚合度2～4的称为低聚体，将聚合度5以上的称为高聚体。
随着科学技术的快速开展和进步，传统提取方法不断被突破，超临界流体萃取、微波辅助提取以及动态罐组式连续逆流提取等新的提取方法和技术不断完善。
这些新技术具有提取率高、提取物纯度高、提取速度快等优点，具有十分广阔的应用前景。
1 提取技术1.1 超临界流体萃取超临界流体萃取是以超临界流体代替常规有机溶剂，对中草药中有效成分进行萃取和别离的新技术。
气体在超临界状态下兼有气液两相的双重特点，既具有与气体相当的高扩散系数和低黏度，又具有与液体相近的密度和对物质良好的溶解能力。
将处于超临界状态下的流体与待别离的中药材接触，选择性地溶解其中的某种成分，然后通过减压，使超临界流体迅速挥发，被溶解的物质以固态或液态形式析出，从而实现所需组分的提取与别离。
国内外均有运用CO2超临界流体萃取法制备葡萄籽原花青素的报道。
胡佳兴【1】利用甲醇为夹带剂的超临界萃取法提取葡萄籽中的原花青素；Chafer等【2】也是采用乙醇作为夹带剂提取原花青素，并用HPLC法测定提取物中的成分；Pinelo等【3】比较了超临界流体萃取法与固液萃取法，发现前者提取的原花青素具有更好的抗氧化性。
葡萄籽中分离提取原花青素的研究
葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。
本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。
标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
属于缩合鞣质或黄烷醇类。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。
它于1879年在意大利上市。
由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。
目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。
已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。
原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。
2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。
2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。
在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。
所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%执行标准
葡萄籽提取物原花青素95%的执行标准主要包括以下内容：
1. 提取方法：采用超声波辅助萃取、回流萃取等方法，从葡萄籽中提取目标成分。
2. 成分含量：葡萄籽提取物原花青素的含量应达到95%以上。
3. 鉴定方法：应运用高效液相色谱（HPLC）或者紫外分光光度法等可靠的分析方法对葡萄籽提取物原花青素进行鉴定和分析。
4. 检测限值：确定葡萄籽提取物原花青素的检测限值，保证提取物的质量符合要求。
5. 外观特征：葡萄籽提取物原花青素应为深紫色至红棕色粉末，无异味。
6. 残留溶剂：葡萄籽提取物原花青素中不得含有明显的溶剂残留。
7. 重金属限量：葡萄籽提取物原花青素应符合国家或地区规定的重金属限量标准，确保产品安全。
需要注意的是，具体的执行标准可能会因国家、地区以及生产厂家的要求而有所不同，以上内容仅为常见的执行标准举例，具体要求还需参考相关标准文件。
葡萄籽原花青素含量检测方法
杭州尼诺生物科技有限公司葡萄籽原花青素一目的：建立葡萄籽原花青素含量测定法。
二仪器：紫外可见分光光度UV—UNIC7200。
三责任者：QC检验员。
四原理：原花青素在酸性条件下加热水解产生色素，产生色素的过程是定量反应。
通过检测水解产物的最大吸收波长下的吸光度对原花青素进行定量。
在吸光度0.2-0.7纳米范围内浓度和吸光度呈线性关系。
五试剂和对照品：甲醇（分析纯）正丁醇（分析纯）盐酸（分析纯）硫酸铁铵（分析纯）葡萄籽对照品（公司自制）六试剂配制及溶液配制：1 试剂配制：50%甲醇溶液：量取50毫升甲醇溶于50毫升纯化水中。
盐酸正丁醇溶液：量取5毫升盐酸溶于95毫升正丁醇，置阴凉处避光保存。
硫酸铁铵盐酸溶液：称取2克，NH4F e (SO4)212H2O溶于100毫升2摩尔/升的盐酸水溶液中。
2 溶液配制：对照品溶液：称取10毫克葡萄籽对照品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
供试品溶液：称取10毫克葡萄籽供试品，精密称定，用50%甲醇溶解并定容到100毫升容量瓶中。
七测定步骤：在一系列10毫升具塞硼硅酸玻璃刻度试管中，各加0.2毫升硫酸铁铵盐酸溶液，6毫升正丁醇盐酸溶液，再逐个加1毫升待测样品溶液，1毫升对照品溶液，1毫升甲醇（空白），记录试管体积V A。
加塞，振荡混匀。
于98。
C沸水浴中反应45分钟，取出试管于冰水中迅速冷却，记录试管的体积V B。
在546纳米处用紫外分光光度计检测相对于空白的吸光度。
八计算：此方法受环境因素影响，操作中用对照品来定量待测样，其计算公式如下：原花青素%=K×A1×M2×V1/（A2×M1×V2）式中：A1 为供试品吸收度A2 为对照液吸收度M1 为供试品称样量M2 为对照品称样量V1 为供试品最终体积V A-V BV2 为对照品液最终体积K 为对照品的含量。
葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化
生研1002班姚远学号：2010001225葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化一、原花青素简介原花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。
细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。
花青素(Anthocyanins)是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。
花青素为植物二级代谢产物，在生理上扮演重要的角色。
花瓣和果实的颜色可吸引动物进行授粉和种子传播。
常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。
花青素属于酚类化合物中的类黄酮类(Flavonoids)。
基本结构包含二个苯环，并由3碳的单位连结(C6-C3-C6)。
花青素经由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，由许多酵素调控催化。
以天竺葵色素(Pelargonidin)、矢车菊素(Cyanidin)、花翠素(Delphinidin)、芍药花苷配基(Peonidin)、矮牵牛苷配基(Petunidin)及锦葵色素(Malvidin)六种非配醣体(Aglycone)为主。
花青素因所带羟基数(-OH)、甲基化(Methylation)、醣基化(Glycosylation)数目、醣种类和连接位置等因素而呈现不同颜色。
[9]颜色的表现因生化环境条件的改变，如受花青素浓度、共色作用、液胞中pH値的影响(Clifford)。
橙色和黄色是胡萝卜素的作用。
1910年在胡萝卜中发现了β-胡萝卜素，以后共发现另外2种胡萝卜素异构体，分别是：α、β、γ三种异构体。
1958年β-胡萝卜素获得专利，目前主要从海洋中提取，也可人工合成。
[1]食品中几种重要花青素的结构自然界有超过300种不同的花青素。
他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡罗卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。
这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）。
花青素颜色随PH值发生变化，从当PH值为3时的覆盆子红到当PH值为5时的深蓝莓红。
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葡萄籽原花青素的提取和检测方法摘要:对原花青素的概念、测定方法及其存在的问题进行了分析，综述了原花青素的性质，安全性和提取、检测方法，并对统一的原花青素检测方法进行了展望。
关键词:葡萄籽原花青素提取检测EXTRACTION AND DETERMINATION METHODS OF PROANTHOCYANIDIN FROM GRAPE SEEDAbstract:The definition, determination methods of proanthocyanidin from grape seed and their problems were analyzed. The character, safety, extraction methods of proanthocyanidin were also introduced in this paper. Besides, the development foreground of uniform determination method of proanthocyanidin was illustrated.Key words:grape seed ; proanthocyanidins ; extraction; determination20世纪70年代，法国科学家J．Masqulier发现了比松树皮更好的原花青素资源——葡萄籽。
“地中海地区膳食”健康效果揭示了酚类化合物和不饱和脂肪酸的神奇功效Ⅲ；“法国悖论”现象更是揭示了葡萄籽的多酚神奇功能。
葡萄籽中含有丰富的亚油酸、蛋白质、原花青素等成分，但研究最多的还是原花青素成分，现已被证明具有显著的抗氧化和清除自由基的活性，具有极大的开发前景。
同时由于葡萄籽原花青素成分的复杂性，原花青素概念认识的不一致，还没有统一的检测方法。
因此，迫切需要建立葡萄籽原花青素含量的统一分析方法，以便对葡萄籽原料及其产品中的原花青素准确定量。
1 葡萄籽原花青素的概念、性质和安全性1．1 原花青素的概念研究表明，葡萄籽中原花色素物质只有原花青素一种[21。
关于原花青素的定义还不统一。
原花青素因在酸性介质中加热产生红色的花青素而得名【3】，而儿茶素类单体在热酸条件下反应没有花色素现象，所以儿茶素单体应不属于原花青素。
这个概念也得到了美国葡萄籽方法评定委员会和国内主要生产葡萄籽提取物的企业认可。
葡萄籽原花青素是由儿茶素、表儿茶素及其没食子酸酯通过C4-C 或C4-C。
键共价相连组成的多聚体，结构通式见图l【5J。
通常把二～四聚体称为低聚体(OPCs)，五聚体及五聚体以上的称为高聚体。
R=3p—OH儿茶素，R=3p—O一没食子酸儿茶素O一没食子酸酯 R-3a-OH表儿茶素。
R-3a-O 一没食子酸表儿茶素o-没食子酸酯图1 原花青素的结构及其组成单元1．2 原花青素的主要性质原花青素在热酸条件下能够生成红色的花青素，此性质可用于原花青素的定性和定量分析。
结构中具有较多的羟基，具有较大的极性，使其能够很好的溶解于水、甲醇、丙酮、乙醇等极性溶剂而不溶解于苯、氯仿、石油醚等非极性物质。
较多羟基结构也使其成为良好的氢原子给予体，具有较强的抗氧化性质。
研究表明，在0 一、·OH、·CH，中，原花青素对0：一·清除能力最好，而且在聚合度2～5之间范围内，随聚合度增加而增加柳。
对其构效关系分析表明，带有没食子酰基的原花青素具有更强的抗氧化活性，二聚体的抗氧化活性均比单体儿茶素的活性强。
c 一c 连接的二聚体比c 一c 连接的二聚体具有更强的抗氧化活性。
原花青素的最大吸收波长在280 nm附近，使其具有较强的紫外吸收能力。
以上的主要性质使原花青素很好的用于保健食品和化妆品的开发。
13 原花青素产品的安全性美国Creighton大学葡萄籽原花青素研究组与美国环境保护局根据有毒物质控制条例健康效果测试手册协同进行了葡萄籽原花青素萃取物(GSPE)的一系列毒性和生物功效研究。
结果证明GSPE具有很高的安全性和很好的清除自由基、抗氧化能力【8】。
日本学者Yamakoshi等也采用一系列毒理性试验确证富含原花青素的葡萄籽提取物具有很高的安全性。
完全可以用于功能性食品的开发.2 原花青素的提取方法提取原花青素常用的方法有水提取法、有机溶剂一水提取法和仪器辅助提取法。
葡萄籽中的原花青素物质通常以结合态与蛋白质、纤维素结合在一起fl01，一般不易提出，通常选用有机溶剂或水提取，具有断裂氢键的作用。
同时由于有机溶剂的渗透性较差，一般不单独使用，常需要水作为传质剂。
2．1 水提取法Masquelier~l-嘬早从松树皮中用沸水粗提、乙酸乙酯纯化得到原花青素。
选水作为提取剂，浸提耗时长，温度高，容易造成原花青素的损失。
同时水的极性较大，溶出杂质也较多。
2．2 有机溶剂一水提取法甲醇、丙酮、乙醇和乙酸乙酯是提取葡萄籽原花青素常用的有机溶剂，它们对原花青素有很好的溶解性，它们的极性大II,Jt~序为甲醇>乙醇>丙酮>乙酸乙酯。
乙醇是常用的提取溶剂，价格低廉，来源丰富。
乙酸乙酯提取出的原花青素成分生物活性较好，但是由于极性较小，对原花青素的提取并不完全。
甲醇和丙酮水溶液(50％～75％)对原花青素都有较好的提取性能，同时也多用做原花青素含量测定时的提取溶剂。
熊何 -21比较了甲醇、乙醇、丙酮水溶液对多酚的提取效果，结果表明70％丙酮水溶液为最好溶剂。
丙酮水溶液提取效果好的原因：原花青素分子含有多个苯环和醚键，油溶性较强，同时又有大量的羟基连接在分子骨架上，在水中具有很好的溶解性，拥有油水双溶性的丙酮与之相互匹配，原花青素的溶解度自然增加，其提取率相应得到提高。
2-3 仪器辅助提取法超临界萃取和超声波辅助提取越来越多的用于葡萄籽原花青素的提取。
超临界CO：萃取率高，而且使原花青素不受到空气和光的影响，但由于设备昂贵，推广使用比较困难。
超声波法应用比较广泛，超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌等特殊作用，可以破坏植物的细胞壁，使溶剂渗透到细胞中，令其中的化学成分溶于溶剂中，从而提高提取效率。
在提取原花青素之类的热敏性物质显示出优越的性能.3 葡萄籽原花青素的检测由于葡萄籽和葡萄籽提取物中大多数多酚是原花青素(一般占70％～85％)，所以很多厂家使用原花青素来标定其中有效成分的含量。
原花青素含量是反映葡萄籽提取物或葡萄籽质量的关键指标，主要有两个指标，分别为原花青素值和原花青素含量。
3．1 原花青素值的测定原花青素值的测定采用Bates—smith法和Poaer 法。
原理：原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素，而儿茶素、表儿茶素等黄烷一3一醇单体没有此反应(图2)。
它们测出的结果是原花青素的相对含量，分别用原花青素指数和PVU表示，是根据经验公式求得的。
葡萄籽提取物中的原花青素指数一般在80～100之间，PVU一般在250～350之间。
原花青素值只是相对含量，并非原花青素的真实含量。
据调查，同为原花青素值95的产品，多酚含量相差15％，质量大相径庭㈣。
很多生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量是错误的。
图2 花青素生成反应 Fig．2 Reaction ofproducing cyaniding3．2 原花青素含量的测定原花青素的含量测定方法很多，也比较混乱。
常用的有以下几种方法。
3．2．1 铁盐催化法此方法的反应原理与原花青素值测定原理相同，在计算原花青素的含量时使用了原花青素标准品。
Fe¨、盐酸为常用的催化剂和酸解剂。
由于水、乙醇为反应介质时吸光值很低，一般采用正丁醇为反应介质【15-161。
通常的具体操作：取1．0 mL样液(或原花青素溶液)于10 mL刻度试管中，加入6．0 mL正丁醇一浓盐酸(95：5)与2％硫酸铁铵溶液(溶解于2 mol／L 盐酸)0．2mL，混匀，置于沸水浴中加热40min后，立即取出用冰水快速冷却至室温，在550 Nm处测定吸光值。
此方法较简便，而且对原花青素的选择性反应较好。
铁盐催化法对反应体系中的含水量和Fe 浓度要求比较严格，一般要求含水量6％，Fe 浓度4．5x10 ％，而且过高的Fe¨浓度对反应没有影响【l51。
傅武胜【l61 研究表明3％～4％为合适的含水量，Fe 浓度选择在 9．OxlO ％左右。
但是也有学者总结分析2％～6％含水量对花青素的形成有抑制作用，稍高的Fe¨浓度 (>15 g／L)也抑制花青素的生成.在铁盐催化反应的基础上，杨大进【l I等人利用高效液相色谱法检测了原花青素含量。
该方法将原花青素在上述铁盐催化条件下生成的深红色花青素离子进行高效液相色谱分析，从而确定原花青素的含量。
此方法能够排除部分杂质的影响，具有定性定量准确的优点。
3．2．2 香草醛法测定原理：原花青素和儿茶素类单体的A环的化学活性较高，在酸性条件下，其上的问苯二酚或间苯三酚与香草醛发生缩和，产物在浓酸作用下形成红色的正碳离子，样品的浓度与产生的颜色呈正相关，在500 llm波长下测定其吸收光值【l91(图3)图3 酚醛缩合反应香草醛法测定时，一般以儿茶素为标准物，以甲醇为溶剂。
盐酸、硫酸均可作为反应过程的催化剂，但在使用硫酸时，浓度不易过高，过高的硫酸易使香草醛发生自缩合反应和氧化分解。
具体的操作方式较多：1 mL试液+2．5 mL 1％香草醛甲醇溶液+2．5 mL 25％硫酸或8％盐酸(均溶解于甲醇)，30。
【二下反应 15 min～20 min【2l。
丑；1 mL试液+6 mL 4％香草醛甲醇溶液+3 mL浓盐酸，室温下反应15 minL231；有的更是在2O℃下反应15 h[241。
操作方式差别较大，不利于使用者的选择，有待于统一。
3．2_3 紫外分光光度法原花青素为无色物质，在可见光区无特征吸收峰，在紫外区有唯一特征吸收峰，最大吸收波长在280 Nm 处。
尽管此方法简单快捷，但是此方法只适用于原花青素含量纯度特别高的产品，不适合一般原料中原花青素的检测。
这是因为儿茶素类在280 Nm处也有最大吸收，V 、Vc、Ve。
、Ve 、芦丁、B一胡萝卜素等物质在此波长处都有明显的吸收.3．2．4 Folin—Ciocaheau与HPLC结合法此方法为美国葡萄籽方法评定委员会推荐使用的方法。
Folin—Ciocaheau法测定的是多酚含量，一般以没食子酸为对照物。
在碱性溶液中，多酚可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，在760 Nm处有最大吸收。
葡萄籽提取物中的多酚含量一般在75％～95％之间。
利用 HPLC测定没食子酸、儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯四种单体的含量来代表单体的总量。