葡萄籽原花青素的分离提纯及抗氧化性研究
葡萄是世界上经济价值较高的一种水果,为葡萄科(Vitaceae)葡萄属(Vitis)植物。葡萄果实中含有大量的酚类物质,其中30-40%存在于葡萄皮中,60-70%存在于葡萄籽中。原花青素(Proanthocyanidin,简称PC)是葡萄籽中含量最大的酚类物质,具有高度羟基化的结构,能够抗氧化、清除自由基、治疗心血管疾病,有很大的开发利用价值。 经改良的香草醛-盐酸法测定原花青素含量的精密度、准确度比原方法有明显提高,而且大大提高了显色稳定性,缩短了分析时间。改良后的测定方法快速、简便、有效,可用于葡萄皮、籽、梗及其提取物中的游离态原花青素含量测定。在正丁醇-盐酸液中加入SDS和2-巯基乙醇,能够将结合态中的原花青素分离出来,通过显色反应确定结合态原花青素的含量,其测定结果的精密度和稳定性较好,可用于葡萄籽、梗中蛋白结合态和纤维素结合态原花青素含量的测定。葡萄籽中游离态、蛋白结合态、纤维素结合态原花青素含量分别为3.86%、2.93%、2.80%。在低温条件下贮藏,铝箔真空包装可减少多酚和游离态原花青素的损失以及向结合态原花青素的转化。 以真空干燥葡萄籽为原料,用70%乙醇提取葡萄籽原花青素,其最佳工艺参数为葡萄籽粉粒度80-150目、搅拌时间55min、提取温度15℃、加酸量0.75%。20℃时,HP-2MGL树脂对葡萄籽原花青素的纯化效果最好,吸附率为91.1%,解吸率为95.8%。经HP-2MGL纯化的GSPP3组分的原花青素含量为96.5%,明显高于GSPP1和GSPP2。LC-MS分析结果表明,GSPP3质谱总离子流共有27个峰,说明GSPP3组分中原花青素的组成较为复杂,其中2号峰和4号峰的质谱及碎片信息表明,它们是原花青素二聚体。用SephadexLH-20对GSPP3组分进一步纯化,用70%丙酮洗脱得到GSPP3-SP1和GSPP3-SP2两个组分。LC-MS分析表明,GSPP3-SP1有四个峰
取物原花青素对皮肤急性光损伤Fas蛋白及Bcl-2蛋白表达的影响-中国美容医学2008,17(3)
目的:评估外用葡萄籽提取物原花青素对急性光损伤的Fas蛋白及Bcl-2蛋白表达的影响.方法:实验设计正常皮肤组、单纯2MED照射组、基质+2MED照射组、含葡萄籽提取物原花青素样品外用+2MED照射组共四组,连续3天同样处理24h后对皮肤取材,进行Fas蛋白及Bcl-2蛋白免疫组化染色.结果:含葡萄籽提取物原花青素样品外用+2MED照射组的Fas蛋白表达积分与单纯2MED照射比较明显下降,Bcl-2蛋白表达积分明显增加,接近正常皮肤.结论:葡萄籽提取物原花青素对日晒伤具有一定的防护作用,其机制可能是与Fas蛋白及Bcl-2蛋白表达相关.
5.期刊论文钟振声.冯焱.孙立杰超声波法从葡萄籽中提取原花青素-精细化工2005,22(1)
研究了从葡萄籽中提取原花青素的改进工艺,主要考察超声波作用对原花青素提取率和提取物含量的影响,并与传统溶剂法进行了对比.实验表明,把风干的葡萄籽破碎成0.6~1 mm的微小颗粒,先按1 g葡萄籽加3 mL溶剂的比例加入石油醚,常温浸泡48 h脱除油脂;再按照1 g葡萄籽加20 mL溶剂的比例
反相高效液相色谱-电喷雾质谱法鉴定葡萄籽低聚原花青素-食品与发酵工业2006,32(3)
建立了采用LC-ESI-MS对葡萄籽提取物中的多种低聚原花青素进行分析鉴定的方法.原花青素用体积分数60%乙醇水溶液从葡萄籽中提取并用聚酰胺柱层析精制后,以乙腈-1%醋酸水溶液为流动相在ZORBAXSB-C18柱上进行梯度洗脱分离,在电喷雾电离负离子模式下采用选择离子监测模式(SIM)将几种低聚体进行了选择性的分离.结果所检葡萄籽提取物中共含有(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素和(-)-表儿茶素没食子酸酯3种单体、8种非酯型和4种没食子酸酯型共12种二聚体及4种非酯型三聚体等.建立的方法可以较好地解决葡萄籽中各种低聚原花青素的定性检测,了解提取物中原花青素的成分.同时文中还对原花青素二聚体的质谱碎裂途径进行了讨论.
新疆农业大学
硕士学位论文
葡萄籽原花青素的分离提纯及抗氧化性研究
姓名:朱靖蓉
申请学位级别:硕士
专业:食品科学
指导教师:王忠民
200氧化性研究
,分别用乙醇[w(C2H5OH)=95%]、丙酮[w(CH3COCH3)=99%]和纯水在常温下浸泡2 h,浸泡期间采用超声波震荡加强传质,原花青素的提取率分别达到4.63%、4.59%和2.55%(以葡萄籽的投料质量计算),提取率分别比不施加超声波震荡的传统溶剂提取法提高11%、66%和48%.
,GSPP3-SP2有七个峰,通过质谱及碎片信息分析,它们主要含有单体和二聚体原花青素。 根据葡萄籽原花青素提取物GSP和纯化级分GSPP1、GSPP2、GSPP3红外谱图分析,发现葡萄籽原花青素基本结构单元主要为原花青定。利用LC-MS对葡萄籽原花青素醇解产生的花色素进行分析测定,确定为矢车菊素,从而证明葡萄籽原花青素主要结构单元为花青定,即其B-环上含有两个羟基。 激光光散射与GPC联用测定了葡萄籽原花青素纯化分级级分的重均相对分子质量,乙酰化GSP的平均相对分子质量为9.39×104Da,相对分子质量分布范围较宽,多分散系数为1.65;乙酰化GSPP3的重均相对分子质量为9.64×103Da,GSPP3的重均相对分子质量为4.26×103Da,平均聚合度为13,多分散系数为1.56,相对分子质量分布曲线呈对称分布,以高聚合度原花青素为主;乙酰化GSPP3-SP的重均相对分子质量为4.25×103Da,GSPP3-SP的重均相对分子质量为1.89×103Da,平均聚合度为6,多分散系数为
作者:朱靖蓉
学位授予单位:新疆农业大学
1.期刊论文马红江.王莹.葛彬.唐慧芬.李予霞.任雪艳吐鲁番地区常见品种葡萄籽中原花青素和脂肪含量的测定
-安徽农业科学2008,36(8)
[目的]测定吐鲁番地区常见葡萄品种葡萄籽中活性成分的含量.[方法]以吐鲁番地区常见的13个葡萄品种的葡萄籽为材料,测定并比较各品种葡萄籽中原花青素和脂肪的含量.[结果]在各品种葡萄籽中.和田红葡萄籽的脂肪含量最高,达21.5%;玛奶子葡萄籽次之,为21.0%;星浦一号葡萄籽最少,仅
1.45,分子量分布曲线基本呈对称分布,以低聚合度原花青素为主。 DPPH法测定葡萄籽原花青素抗氧化实验结果表明,葡萄籽原花青素纯化物抗氧化、清除自由基的能力大于Vc和芦丁;茶多酚与GSPP3接近;葡萄籽原花青素提取物略低于Vc,但高于芦丁。GSP、GSPP1、GSPP2、GSPP3、GSPP3-SP、Vc、芦丁、茶多酚的半抑制量分别为118.01、9
12.5%.原花青素含量最高的葡萄籽是黑提,达9.150%;赤霞珠次之,为8.790%;哈什汉最少,仅3.800%.[结论]该研究为吐鲁番地区葡萄籽的综合开发利用提供了理论依据.
2.期刊论文任其龙.魏冠红.金米聪.苏宝根.黄梅.Ren Qilong.Wei Guanhong.Jin Micong.Su Baogen.Huang Mei
6.期刊论文李春阳.许时婴.王璋.LI Chun-yang.XU Shi-ying.WANG Zhang从葡萄籽中提取分离原花青素的研究-
中外葡萄与葡萄酒2004(4)
葡萄籽中总酚含量(以没食子酸计)大约为4.85%,原花青素含量为3.05%(以湿基含水10%计算),具有很大的开发利用价值.研究结果表明:选择
4.期刊论文袁小英.刘玮.谢艳飞.郭广进.孟如松.范立英.张洁.田燕.马慧敏.信许亚.YUAN Xiao-ying.LIU Wei. XIE Yan-fei.GUO Guang-jin.MENG Ru-song.FAN Li-ying.ZHANG Jie.TIAN Yan.MA Hui-min.XIN Xu-ya葡萄籽提
2.59、88.20、86.07、62.80、110.24、169.88、86.56g/kg[DPPH·],其自由基清除能力AE分别为
0.85×10-2、1.08×10-2、1.13×10-2、1.16×10-2、1.59×10-2、0.91×10-2、0.59×10-2、1.16×10-2。 小鼠血清生化指标和病理切片研究表明,葡萄籽原花青素可以降低高脂模型小鼠血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量,对小鼠的肝脂肪变有一定的缓解和治疗功能。葡萄籽原花青素对酵母菌的最小抑制浓度>10mg/mL,对大肠杆菌的最小抑制浓度为1.25mg/mL,枯草芽孢杆菌的最小抑制浓度为313μg/mL。葡萄籽原花青素对龋齿菌(即变异链球菌Streptococcusmutans)具有较强的抑制作用,100μg/mL时抑菌圈直径为10mm,250μg/mL时为14mm,500μg/mL时为20mm。葡萄籽原花青素对沙门氏菌、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用,当含菌量约为100个/mL、原花青素浓度为500μg/mL时,对金黄色葡萄球菌抑菌率为29.6%,当原花青素浓度为1000μg/mL时,可以完全抑制金黄色葡萄球菌。而对于沙门氏菌和大肠埃希氏菌来说,当原花青素浓度为1000μg/mL时,抑制作用才较为显现,原花青素浓度为5000μg/mL时,抑制作用显著。 以RT-N-20乙基纤维素为壁材,以葡萄籽原花青素为心材,当心材与壁材的比例为4:1,总固形物含量为25%,进风温度为160℃时,葡萄籽原花青素微胶囊化产率和效率最大,分别为93.91%和95.06%。微胶囊化葡萄籽原花青素光照贮存三个月原花青素损失率比未微胶囊化减少40.01%,避光贮存三个月原花青素损失率比未微胶囊化减少23.71%。以熔点为55℃的复合氢化植物油为壁材,以葡萄籽原花青素为心材,当心材与壁材比为1:2时,原花青素微胶囊化产率和效率最高,分别为83.2%和91.5%。微胶囊化葡萄籽原花青素光照贮存三个月,原花青素损失率比未微胶囊化减少34.01%,避光贮存三个月减少27.71%。从扫描电子显微镜(SEM)图片来看,微胶囊化原花青素颗粒整个表面结构呈球状,具有较好的连续性、完整性和致密性。以氢化植物油为壁材制备的微胶囊化葡萄籽原花青素,比乙基纤维素为壁材的微胶囊产品表面粗糙。 当油为外相(含量>90%),以油酸聚甘油单酯为表面活性剂、乙醇为助表面活性剂(4:1),15%葡萄籽原花青素水溶液为内相,可形成葡萄籽原花青素微乳。经测定葡萄籽原花青素微乳液中90%微粒的平均粒径为23.96nm。当油与混合表面活性剂比为90:10时,葡萄籽原花青素最大添加量为1632μg/mL;当油与混合表面活性剂比为98:2时,葡萄籽原花青素最大添加量为538μg/mL远远大于抗氧化正常添加量200μg/mL。油脂过氧化加速实验结果表明,葡萄籽原花青素微乳液与TBHQ抗油脂氧化能力相同,可以使油脂在常温下的贮存保质期比对照组提高1.2倍,如二者协同作用可显著提高油脂的抗氧化能力,使油脂的保质期在常温(20℃)贮存条件下比对照组提高1.8倍,天然葡萄籽原花青素可以替代合成的TBHQ,添加在油脂中更安全、更可靠。
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究本文以葡萄籽、葡萄叶子为原料，对其原花青素的提取工艺进行了研究。
在提取葡萄籽中的原花青素时采用50％乙醇，料液比1／40，于60℃下热回流浸提2个小时，提取2～3次最优提取工艺，此工艺提取得到的原花青素提取物得率为22.01％，产品纯度为51.17％；提取葡萄叶子时采用70％乙醇，料液比1／50，于80℃下热回流浸提3个小时，提取1～2次的最优提取工艺，此工艺得到的原花青素得率为34.14％，纯度为13.66％。
对上述提取物进一步纯化，葡萄籽提取物选用AB-8大孔吸附树脂，50％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，葡萄籽原花青素总的提取得率为9.09％，产品纯度能达到94～95％；葡萄叶子提取物选用D-101大孔吸附树脂，70％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，其原花青素提取得率为18.21％，纯度为25.63％。
采用超滤法对大孔吸附后的葡萄籽精提物进行低聚体的提纯，其过膜后的单体儿茶素含量有明显增加，P5000约为过膜前的6.6倍，P1000为过膜前的7.7倍。
其中压力对超滤通量的影响较大，而温度影响较小，一般选择20～30psig，室温下操作即可，避免在操作过程中长时间将过滤液暴露于强光及空气中。
利用Sephadex LH20将P5000样继续分离，使含量较高的一种二聚体得到了富集。
原花青素的抗氧化(FRAP)、清除DPPH自由基实验表明，葡萄叶子原花青素抗氧化、清除自由基活性均强于抗坏血酸，稍强于葡萄叶子提取物，而与原花青素的低聚体、高聚体相差不大。
原花青素在不同温度、光照、氧气的条件下1～2天内具有较好的稳定性。
经长期(10天)紫外光照射不稳定，含量下降甚至消失，溶液颜色逐渐加深，但其抗氧化、清除自由基能力无显著性变化(p＞0.05)。
抗坏血酸对紫外照射引起的原花青素不稳定能起到保护作用，并且存在剂量依赖效应。
类似于口服液等的原花青素溶液产品较适用微波法灭菌。
葡萄籽中原花青素的提取工艺研究
葡萄籽中原花青素的提取工艺研究摘要：本文初步研究了葡萄籽中原花青素溶剂提取工艺，考察了溶剂种类、溶剂浓度、提取时间、提取温度、料液比等因素对原花青素提取量的影响，最终确立最佳提取条件：溶剂为乙醇（乙醇浓度为60%），提取时间为50min，提取温度为60℃，料液比为1：6。
关键词：葡萄籽；原花青素；溶剂提取中图分类号：ts2644文献标识码：a基金项目：吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目（项目编号：吉教科合字[2010]第517号）葡萄是日常生活中非常常见的水果，可以直接使用，但绝大部分作为酿酒原料，而酿酒后的葡萄籽多被作为工业废渣弃去，这不仅浪费资源而且污染环境。
研究发现，葡萄籽中富含原花青素。
花青素具有抗氧化、抗突变、抗癌细胞等多种生物活性。
原花青素是一种可供选择的、极好的保健品原料，此外还具有抗辐射、抗疲劳，改善记忆力等作用。
本文初步探索有关葡萄籽中原花青素的溶剂提取方法，研究了最佳溶剂提取条件，为下步分离提纯提供理论依据。
1材料与方法11材料巨丰葡萄籽；原花青素，无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、三氯甲烷、水均为分析纯。
12设备食品粉碎机，北京环亚天元机械技术有限公司；722紫外可见分光光度计，上海悦丰仪器仪表有限公司；电子天平，上海卓精bsm —2100；恒温水浴锅，广州威德玛环境仪器有限公司；85-2数显恒温磁力搅拌器；紫花牌循环水真空泵；飞鸽牌系列离心机。
13试验方法131标准曲线的绘制分别取原花青素标准液100、200、300、400、5 00ml于10ml刻度试管中，加入无水乙醇定容至10ml，塞紧后充分摇匀，制得浓度分别为104、208、312、416、52 0ug/ml的标准系列溶液。
在500nm处以无水乙醇作空白调零扣除背景值，测定标准系列溶液吸光值a，并绘制原花青素浓度-吸光值标准曲线。
溶液中原花青素浓度在104～520ug/ml范围内，与吸光值a呈线性关系，其回归方程式为a=3612c-0032，相关系数r=09991。
葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化
富含原花青素的刺葡萄
logo
一、原花青素的介绍
原花青素抗氧化机理的介绍
logo
二、原花青素提取纯化具体方法
OPC纯化
OPC初步分离提取
①溶剂提取法 ②微波法 ③超临界C02萃取法
①大孔树脂吸附法
②超过滤法
logo
二、原花青素提取纯化具体方法
1、原花青素的初步分离提取 ①溶剂提取法 ●溶剂提取法是提取葡萄籽中原花青素的最常用的方法 ●方法：石油醚脱脂---乙醇粗提---调节pH---乙酸乙酯萃取 ●青葡萄籽产物纯度和得率达67.35％和7.86％；红葡萄籽产物纯度 和得率达55.20％和5.36％
logo
二、原花青素提取纯化具体方法
2、原花青素的提纯 ②超过滤法 ●原理：超滤是一种加压膜分离技术，即在一定的压力下，使小分 子溶质和溶剂穿过一定孔径的特制的薄膜，而使大分子溶质不能透 过，留在膜的一边，从而使大分子物质得到了部分的纯化。
●最后纯度可达到99.9%
logo
三、综合讨论
对于原花青素(OPC)的分离纯化工艺的选择没有明确的标准，根据 具体情况可以分为以下几种： ●对于花青素的初步分离提取，溶剂法明显更适合，原由它剂毒性小、 副作用小、提取率较高。如对产品纯度有进一步要求，微波提取法便 更合适。 ●对于花青素纯度要求很高的工艺，超临界CO2萃取和超滤法相结合便是 最好选择。 ●大孔树脂分离技术是当前分离纯化研究重点，应用于大多数分离纯化 工艺中，具有远大前景。
logo
二、原花青素提取纯化具体方法
1、原花青素的初步分离提取 ②微波法 ●原理：利用磁控管所产生的每秒24.5亿次超高频率的快速震动， 使植物内分子间相互碰撞、挤压，从而有利于其有效成分的浸出 ●方法：以70％乙醇水溶液为介质，葡萄籽整粒料液比(g:mL)l:11， 微波功率180 w处理10 s，然后在50℃水浴浸提30 min ●提取率达到38％，超过传统水煮法。
葡萄籽低聚原花青素化学成分及抗氧化研究
（ ０ ８ ０ ０ １ ２０４２２ ）
研究表 明 ， 葡萄籽原花青素是迄今 为止所发 现的最有 效 的 自由基 清除剂之一 ， 特别是低 聚花青 素可 以清 除 体 内的 自由基和活性氧 ， 能预防因人体血 液 中低密度
葡 萄籽原花 青素 由不 同数 目的黄烷 醇一 茶素 、 儿
表儿茶 素聚合而成 ，通 常将 二一 四聚体称为低 聚原 花 青素 （ｒｃａｉｏ ｃ ｌ ｏ ｅ， Ｐ ， ｐｏｙｎｄｌ ｉ ｍ ｒＯ Ｃ）五聚体 以上 的称 为 ｉｏｇ 高聚体 （ｒｃａｉｏ ｃ ｏ ｍ ｒ，Ｐ ）对于葡萄籽原 花 ｐｏｙｎｄｌ ｌ ｅｓＰ Ｃ ， ｉｐ ｙ 青素抗 氧化性 的研究报 道很 多Ｉ ｌ ｌ， ＿ 既包括动物体 内抗 ５ 氧化试 验 ，又包括体外 细胞 培养及用化 学方法测定 。
和ｏｃ 对 Ｄ Ｐ 自由基 和羟 自由基都 具有较好的清除活性。对 Ｄ Ｐ 自由基的清除作 用与 ｖ 相 ３，其 Ｉ 分别为 ｐ Ｓ ＰＨ ＰＨ ＂ － ｃ １ ０ｔ ／ Ｌ和 １ ９ Ｉ ／ Ｌ ． ｇｍ ２ ｘ ． ￣ ｍ ，明显 强 于 Ｖ 和 Ｔｏ ｘ ３ ｇ ｃ ｒｏ ；原花青 素 Ｂ 和 ｏｃｓ ｌ ２ ｐ 对羟 自由基 的抑制 率明显 高于 Ｖ 、 Ｅ ｃＶ 和 Ｔｏｏ。ｐ 经过层析分离纯化后得 到的原花青素 Ｂ 清除 Ｄ Ｐ 自由基 的效果有所提 高，但 对于羟 自由基的清除活 ｒ ｘｏｃ ｌ ｓ ＰＨ
ａ ｄ ＲＰ ｎ —ＨＰ ＬＣ． ｅａ ｔｏ ｉａ ｔａ ｔ ｉ ｆｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ， ｅ ｖ ｒｔｏ ， ｎ ｘｒｃ ｓ ａ ｐｅ ｐ ｌｐ ｅ ｏ ， ， Ｔｈ ｎ ｉｘｄ ｎ ｃ ｉ ｔ ｏ ｒ ａ ｔｏ ｙ ｎ ｄｎ Ｂ２ｒ ｓ ｅ ａｒ ｌｗｉｅｅ ｔａ ｔ， ｐ ｌ ｏｙ ｈ ｎ ｌ Ｖｃ ｖｙ ＶＥａ ｄ Ｔｒｌｘ ｗｅ ｅ ｄ ｔｒ ｉｅ ｙｓ ａ ｅ ｇｎ ＰＨ ａ ｉａ ｎ ｙ ｒ ｘ ｌｒｄ ｃ １ Ｈｏ ｖ ｒ ｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｎ ｏｏ ｒ ｅｅｍ ｎ ｄ ｂ ｃ ｖ ｎ ｉ ｇ ＤＰ ｒ ｄ ｃ ｌａ ｄ ｈ ｄ ｏ ｙ ａ ｉ ａ． ｗｅ ｅ ， ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ Ｂ ｎ ｏ ｃＳ ｈ ｗｅ ｍｏ ｅ ｆ ｃｉｅ ｔ ｃ ｖ ｎ ｉｇ ２ ａ ｄ ｐ ｓ ｏ ｄ ｒ ｅｆ ｔｖ ａ ｓ ａ ｅ ｇｎ ＤＰ ｅ ＰＨ ・ ｗｉｈ Ｃ５ ｖ ｌ ｅ ｏ １２ ａ ｄ ．９ ￣ｍｏ／ ｔ Ｉ ０ ａｕ ｓ ｆ ．０ ｎ １３ ｌＬ．
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究_金华_刘志刚_曾晓丹_高艳_
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究金华＊，刘志刚，曾晓丹，高艳，马明硕（吉林化工学院分析测试中心，吉林吉林 １３２０２２）摘要：研究利用响应曲面法优化超声提取葡萄籽原花青素的工艺。
在单因素实验基础上，采用中心组合设计响应面实验，考察了提取温度、液料比、乙醇浓度以及超声时间对原花青素提取率的影响，并建立回归模型。
优化后的工艺：提取温度５５℃，液料比２０（ｍＬ／ｇ），乙醇浓度６５％，超声时间１０ｍｉｎ；在此条件下葡萄籽原花青素的提取率为２．４８２％，与回归模型预测值的相对偏差为０．３６％。
同时进行了提取物的抗氧化性检验，结果表明葡萄籽原花青素对超氧阴离子自由基具有较好的清除能力，且呈剂量相关性。
关键词：葡萄籽原花青素（ＧＰＡ）；超声提取；响应曲面；抗氧化中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－９９７３．２０１４．０４．０２６文章编号：１０００－９９７３（２０１４）０４－０１０２－０６Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｆｒｏｍ Ｇｒａｐｅ Ｓｅｅｄｓ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ＡｃｔｉｖｉｔｙＪＩＮ Ｈｕａ＊，ＬＩＵ Ｚｈｉ－ｇａｎｇ，ＺＥＮＧ Ｘｉａｏ－ｄａｎ，ＧＡＯ Ｙａｎ，ＭＡ Ｍｉｎｇ－ｓｈｕｏ（Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｌｉｎ １３２０２２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ）ｉｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｆｒｏｍ ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄｓ．Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔ，ａ ｃｅｎｔｒａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｄｅｓｉｇｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆｆｏｕｒ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ．Ｔｈｅｎ ａ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ｉｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｉｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ５５℃，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌ ｏｆ ２０（ｍＬ／ｇ），ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ６５％ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ １０ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ ｓｕｃｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｓ ２．４８２％，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｖａｌｕｅ ｗｉｔｈ ａ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｒｒｏｒ ｏｆ ０．３６％．Ｐｙｒｏｇａｌｌｏｌ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｉｎｇｒａｐｅ ｓｅｅｄｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｈａｓ ｃａｐａｃｉｔｙ ｔｏ ｓｃａｖｅｎｇｅ ｒａｄｉｃａｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ（ＧＰＡ）；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ 东北山葡萄是在长白山高山气候环境下生长的特有品种，所酿造的山葡萄酒以其独特的风味和集滋补养身、祛病延年为一体的至高品质深受国内外欢迎。
葡萄原花青素提取与纯化技术的研究及应用研究总结报告
（2）在相同的条件下，选择水、石油醚、乙醇三种不同溶剂对原花青素提取效果进行实验对比，取相同量的提取液定容，于500nm波长下测定吸光值，石油醚提取液的吸光值0.002，水提取液的吸光值0.413，乙醇提取液的吸光值0.523。
通过3种不同溶剂对原花青素提取效果影响的研究，选择了乙醇作为提取原花青素的溶剂。
自2022年11月成立以来，建立了天然植物活性成分多功能提取纯化研究、加工生产基地，对枸杞多糖、葡萄原花青素、番茄红素产品进行了开发，其中番茄红素获国家发明专利，并获得自治区科技进步二等奖；枸杞多糖通过了自治区科技成果鉴定，番茄红素粉、葡萄原花青素产品通过了自治区新产品鉴定，技术达到国内先进水平。
公司现有一套工业化生产设备，具有年产2吨植物活性产品的生产能力，产品有天然番茄红素、枸杞多糖、葡萄原花青素和叶黄素产品，产品已进入国际市场。2022年，实现销售收入810万元，公司资产由创业初期的30万元，增加到了2205万元，新增就业30人。因2022年新疆“七.五”事件的影响，企业的国外市场受到毁灭性打击，效益严重下滑，经过公司努力，现已逐步改变了市场形势。
葡萄原花青素提取与纯化技术的研究及应用研究总结报告
Masquelier通过对葡萄籽的提取物中OPC的深入研究发现，OPC是当今医学界发现的最安全高效的纯天然抗氧化剂，其抗氧化能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，它能有效清除体内多余的自由基，保护人体细胞组织免受自由基的氧化损伤，同时，还具有改善人体微血管的通透性，使严重静脉曲张病人的静脉增加弹性，提高皮肤抗氧化技能，加强和保护人体活性组织、稳定细胞膜以及抗酶活性（组胺脱羧酶）等生物特性。
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究
（ Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ Ｔｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｆ Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ １ ３ ２ ０ ２ ２， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｒｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ（ Ｒ Ｓ Ｍ）ｉ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｆ
ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ｔ ｉ ｍｅ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｄ ｉ ｎ ｓ ．Ｔｈ ｅ ｎ ａ ｒ ｅ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｉ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ．
籽原花 青素的提取率 为 ２ ． ４ ８ ２ ， 与回 归模型预测值 的相 对偏 差为 ０ ． ３ ６ ９ ， ６ 。 同时进行 了提取 物的抗氧化性
检验 ， 结 的清除能力 ， 且呈剂量相 关性 。
关键 词 ： 葡 萄籽 原花 青素 （ ＧＰ Ａ） ； 超 声提 取 ； 响应 曲面 ； 抗 氧化 中图分类 号 ： ＴＳ ２ ０ ２ ． ３ 文献 标志 码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ０ － ９ ９ ７ ３ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ４ ． ０ ２ ６
葡萄籽原花青素的提取技术研究概况
葡萄籽原花青素的提取技术研究概况葡萄籽原花青素的提取技术研究概况摘要：原花青素是植物界广泛存在的一类多酚类化合物，葡萄籽被认为是提取原花青素的最正确原料。
随着科技的开展和进步，提取技术不断被突破，本文分析和整理近年来国内外期刊有关的文献，对葡萄籽原花青素的提取技术进行综述，为葡萄籽原花青素的工业生产研究提供参考。
关键词：葡萄籽，原花青素，提取原花青素是植物界广泛存在的一类多酚类化合物。
葡萄籽作为葡萄酒及葡萄汁生产的下脚料，是原花青素的主要来源，具有明显的本钱优势，被认为是提取原花青素的最正确原料。
原花青素由不同数量的单体黄烷-3-醇缩合而成，黄烷醇结构上可以连接不同的酰基或糖酰基，最常见的是没食子酸与-表儿茶素C3羟基缩合形成的酯。
由于单体组成及单体间连接键的不同，每种聚合体还可能包含许多同聚异构体，形成复杂的混合物。
通常将聚合度2～4的称为低聚体，将聚合度5以上的称为高聚体。
随着科学技术的快速开展和进步，传统提取方法不断被突破，超临界流体萃取、微波辅助提取以及动态罐组式连续逆流提取等新的提取方法和技术不断完善。
这些新技术具有提取率高、提取物纯度高、提取速度快等优点，具有十分广阔的应用前景。
1 提取技术1.1 超临界流体萃取超临界流体萃取是以超临界流体代替常规有机溶剂，对中草药中有效成分进行萃取和别离的新技术。
气体在超临界状态下兼有气液两相的双重特点，既具有与气体相当的高扩散系数和低黏度，又具有与液体相近的密度和对物质良好的溶解能力。
将处于超临界状态下的流体与待别离的中药材接触，选择性地溶解其中的某种成分，然后通过减压，使超临界流体迅速挥发，被溶解的物质以固态或液态形式析出，从而实现所需组分的提取与别离。
国内外均有运用CO2超临界流体萃取法制备葡萄籽原花青素的报道。
胡佳兴【1】利用甲醇为夹带剂的超临界萃取法提取葡萄籽中的原花青素；Chafer等【2】也是采用乙醇作为夹带剂提取原花青素，并用HPLC法测定提取物中的成分；Pinelo等【3】比较了超临界流体萃取法与固液萃取法，发现前者提取的原花青素具有更好的抗氧化性。
葡萄籽中分离提取原花青素的研究
葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。
本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。
标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
属于缩合鞣质或黄烷醇类。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。
它于1879年在意大利上市。
由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。
目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。
已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。
原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。
2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。
2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。
在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。
所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。
葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究
吸附量 ＝（初始浓度 － 平衡浓度）×溶液体积 树脂重量
解吸率＝ 洗脱液中原花青素总量 树脂吸附原花青素总量
× １００％
２．３．２ ＡＤＳ－８ 树脂的吸附流出曲线与解吸曲线的绘制 处理后的Ａ Ｄ Ｓ － ８ 树脂于水中湿法装柱，玻璃柱
Ｏ１ １ ． ９ ×４２ｃｍ，其中树脂装填高度３２ｃｍ ，床体积约 ９０ｍｌ。将葡萄籽原花青素粗提物用水稀释至原花青素 浓度分别为５．８、１５．０ｍｇ／ｍｌ，以２ｍｌ／ｍｉｎ流速上样分 步收集流出液（１０ｍｌ／管），测定其中原花青素浓度。 以流出液体积（ＢＶ ）为横坐标、流出液中原花青素浓 度Ｃ与进样原花青素浓度Ｃ０之比（Ｃ／Ｃ０）为纵坐标，绘 制吸附透过曲线。
青素提供参考。
１ 实验材料
１．１ 实验仪器 Ｗａｔｅｒｓ公司高压液相色谱仪，ＨＨＳ型电热恒温水浴
锅，ＳＨＺ－８２水浴恒温振荡器，ＵＶ－２１００紫外／可见分光 光度仪，Ｚ Ｆ Ｑ － ８ ５ Ａ旋转蒸发仪，Ｔ Ｄ ５ Ａ － Ｗ Ｓ台式低速离 心机。 １．２ 实验材料
ＡＢ－８、ＡＤＳ－８和Ｓ－８型大孔树脂，购于南开大学化 工厂；原花青素标准品（浓度≥９５％），购自天津尖峰 天然产物有限公司；葡萄籽是新疆葡萄酒厂下脚料；亚 油酸（不含抗氧化剂，含量≥９０％）由本实验室用红花 油提取；工业级乙醇、Ｔｒｉｓ（三羟甲基氨基甲烷）及所 用其他化学试剂均为分析纯。
洗脱液原花青素浓度（ｍｇ／ｍｌ）
１２０ １００ ８０ ６０ ４０ ２０
０ ０
２０％ 乙醇 ４０％ 乙醇 ５０％ 乙醇
１
２
３
４
５
６
图 ２ ＡＤＳ－８树脂解吸曲线
洗脱液体积（Ｂ Ｖ ）
朱靖蓉等：葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究