葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究
原花青素的提取、分离及抗氧化性、稳定性的研究本文以葡萄籽、葡萄叶子为原料，对其原花青素的提取工艺进行了研究。
在提取葡萄籽中的原花青素时采用50％乙醇，料液比1／40，于60℃下热回流浸提2个小时，提取2～3次最优提取工艺，此工艺提取得到的原花青素提取物得率为22.01％，产品纯度为51.17％；提取葡萄叶子时采用70％乙醇，料液比1／50，于80℃下热回流浸提3个小时，提取1～2次的最优提取工艺，此工艺得到的原花青素得率为34.14％，纯度为13.66％。
对上述提取物进一步纯化，葡萄籽提取物选用AB-8大孔吸附树脂，50％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，葡萄籽原花青素总的提取得率为9.09％，产品纯度能达到94～95％；葡萄叶子提取物选用D-101大孔吸附树脂，70％乙醇为洗脱剂，流速控制在4mL／min左右，其原花青素提取得率为18.21％，纯度为25.63％。
采用超滤法对大孔吸附后的葡萄籽精提物进行低聚体的提纯，其过膜后的单体儿茶素含量有明显增加，P5000约为过膜前的6.6倍，P1000为过膜前的7.7倍。
其中压力对超滤通量的影响较大，而温度影响较小，一般选择20～30psig，室温下操作即可，避免在操作过程中长时间将过滤液暴露于强光及空气中。
利用Sephadex LH20将P5000样继续分离，使含量较高的一种二聚体得到了富集。
原花青素的抗氧化(FRAP)、清除DPPH自由基实验表明，葡萄叶子原花青素抗氧化、清除自由基活性均强于抗坏血酸，稍强于葡萄叶子提取物，而与原花青素的低聚体、高聚体相差不大。
原花青素在不同温度、光照、氧气的条件下1～2天内具有较好的稳定性。
经长期(10天)紫外光照射不稳定，含量下降甚至消失，溶液颜色逐渐加深，但其抗氧化、清除自由基能力无显著性变化(p＞0.05)。
抗坏血酸对紫外照射引起的原花青素不稳定能起到保护作用，并且存在剂量依赖效应。
类似于口服液等的原花青素溶液产品较适用微波法灭菌。
葡萄籽低聚原花青素化学成分及抗氧化研究
（ ０ ８ ０ ０ １ ２０４２２ ）
研究表 明 ， 葡萄籽原花青素是迄今 为止所发 现的最有 效 的 自由基 清除剂之一 ， 特别是低 聚花青 素可 以清 除 体 内的 自由基和活性氧 ， 能预防因人体血 液 中低密度
葡 萄籽原花 青素 由不 同数 目的黄烷 醇一 茶素 、 儿
表儿茶 素聚合而成 ，通 常将 二一 四聚体称为低 聚原 花 青素 （ｒｃａｉｏ ｃ ｌ ｏ ｅ， Ｐ ， ｐｏｙｎｄｌ ｉ ｍ ｒＯ Ｃ）五聚体 以上 的称 为 ｉｏｇ 高聚体 （ｒｃａｉｏ ｃ ｏ ｍ ｒ，Ｐ ）对于葡萄籽原 花 ｐｏｙｎｄｌ ｌ ｅｓＰ Ｃ ， ｉｐ ｙ 青素抗 氧化性 的研究报 道很 多Ｉ ｌ ｌ， ＿ 既包括动物体 内抗 ５ 氧化试 验 ，又包括体外 细胞 培养及用化 学方法测定 。
和ｏｃ 对 Ｄ Ｐ 自由基 和羟 自由基都 具有较好的清除活性。对 Ｄ Ｐ 自由基的清除作 用与 ｖ 相 ３，其 Ｉ 分别为 ｐ Ｓ ＰＨ ＰＨ ＂ － ｃ １ ０ｔ ／ Ｌ和 １ ９ Ｉ ／ Ｌ ． ｇｍ ２ ｘ ． ￣ ｍ ，明显 强 于 Ｖ 和 Ｔｏ ｘ ３ ｇ ｃ ｒｏ ；原花青 素 Ｂ 和 ｏｃｓ ｌ ２ ｐ 对羟 自由基 的抑制 率明显 高于 Ｖ 、 Ｅ ｃＶ 和 Ｔｏｏ。ｐ 经过层析分离纯化后得 到的原花青素 Ｂ 清除 Ｄ Ｐ 自由基 的效果有所提 高，但 对于羟 自由基的清除活 ｒ ｘｏｃ ｌ ｓ ＰＨ
ａ ｄ ＲＰ ｎ —ＨＰ ＬＣ． ｅａ ｔｏ ｉａ ｔａ ｔ ｉ ｆｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ， ｅ ｖ ｒｔｏ ， ｎ ｘｒｃ ｓ ａ ｐｅ ｐ ｌｐ ｅ ｏ ， ， Ｔｈ ｎ ｉｘｄ ｎ ｃ ｉ ｔ ｏ ｒ ａ ｔｏ ｙ ｎ ｄｎ Ｂ２ｒ ｓ ｅ ａｒ ｌｗｉｅｅ ｔａ ｔ， ｐ ｌ ｏｙ ｈ ｎ ｌ Ｖｃ ｖｙ ＶＥａ ｄ Ｔｒｌｘ ｗｅ ｅ ｄ ｔｒ ｉｅ ｙｓ ａ ｅ ｇｎ ＰＨ ａ ｉａ ｎ ｙ ｒ ｘ ｌｒｄ ｃ １ Ｈｏ ｖ ｒ ｐ ｏ ｎ ｈ ｃ ａ ｉ ｉ ｎ ｏｏ ｒ ｅｅｍ ｎ ｄ ｂ ｃ ｖ ｎ ｉ ｇ ＤＰ ｒ ｄ ｃ ｌａ ｄ ｈ ｄ ｏ ｙ ａ ｉ ａ． ｗｅ ｅ ， ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｎ ｄ ｎ Ｂ ｎ ｏ ｃＳ ｈ ｗｅ ｍｏ ｅ ｆ ｃｉｅ ｔ ｃ ｖ ｎ ｉｇ ２ ａ ｄ ｐ ｓ ｏ ｄ ｒ ｅｆ ｔｖ ａ ｓ ａ ｅ ｇｎ ＤＰ ｅ ＰＨ ・ ｗｉｈ Ｃ５ ｖ ｌ ｅ ｏ １２ ａ ｄ ．９ ￣ｍｏ／ ｔ Ｉ ０ ａｕ ｓ ｆ ．０ ｎ １３ ｌＬ．
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究_金华_刘志刚_曾晓丹_高艳_
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究金华＊，刘志刚，曾晓丹，高艳，马明硕（吉林化工学院分析测试中心，吉林吉林 １３２０２２）摘要：研究利用响应曲面法优化超声提取葡萄籽原花青素的工艺。
在单因素实验基础上，采用中心组合设计响应面实验，考察了提取温度、液料比、乙醇浓度以及超声时间对原花青素提取率的影响，并建立回归模型。
优化后的工艺：提取温度５５℃，液料比２０（ｍＬ／ｇ），乙醇浓度６５％，超声时间１０ｍｉｎ；在此条件下葡萄籽原花青素的提取率为２．４８２％，与回归模型预测值的相对偏差为０．３６％。
同时进行了提取物的抗氧化性检验，结果表明葡萄籽原花青素对超氧阴离子自由基具有较好的清除能力，且呈剂量相关性。
关键词：葡萄籽原花青素（ＧＰＡ）；超声提取；响应曲面；抗氧化中图分类号：ＴＳ２０２．３ 文献标志码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－９９７３．２０１４．０４．０２６文章编号：１０００－９９７３（２０１４）０４－０１０２－０６Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｆｒｏｍ Ｇｒａｐｅ Ｓｅｅｄｓ ａｎｄ Ｉｔｓ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ＡｃｔｉｖｉｔｙＪＩＮ Ｈｕａ＊，ＬＩＵ Ｚｈｉ－ｇａｎｇ，ＺＥＮＧ Ｘｉａｏ－ｄａｎ，ＧＡＯ Ｙａｎ，ＭＡ Ｍｉｎｇ－ｓｈｕｏ（Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｌｉｎ １３２０２２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ）ｉｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｆｒｏｍ ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄｓ．Ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｆａｃｔｏｒ ｔｅｓｔ，ａ ｃｅｎｔｒａｌ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｄｅｓｉｇｎｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｉｓ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｓ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆｆｏｕｒ ｍａｉｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌ，ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ．Ｔｈｅｎ ａ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｄｅｌ ｉｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ ｉｓ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ５５℃，ｒａｔｉｏ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｔｏ ｒａｗ ｍａｔｅｒｉａｌ ｏｆ ２０（ｍＬ／ｇ），ｅｔｈａｎｏｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ６５％ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｆ １０ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ ｓｕｃｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｙｉｅｌｄ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓｉｓ ２．４８２％，ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｅｘｔｒｅｍｅｌｙ ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｖａｌｕｅ ｗｉｔｈ ａ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｅｒｒｏｒ ｏｆ ０．３６％．Ｐｙｒｏｇａｌｌｏｌ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｉｎｇｒａｐｅ ｓｅｅｄｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｈａｓ ｃａｐａｃｉｔｙ ｔｏ ｓｃａｖｅｎｇｅ ｒａｄｉｃａｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｇｒａｐｅ ｓｅｅｄ ｐｒｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ（ＧＰＡ）；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ 东北山葡萄是在长白山高山气候环境下生长的特有品种，所酿造的山葡萄酒以其独特的风味和集滋补养身、祛病延年为一体的至高品质深受国内外欢迎。
葡萄原花青素提取与纯化技术的研究及应用研究总结报告
（2）在相同的条件下，选择水、石油醚、乙醇三种不同溶剂对原花青素提取效果进行实验对比，取相同量的提取液定容，于500nm波长下测定吸光值，石油醚提取液的吸光值0.002，水提取液的吸光值0.413，乙醇提取液的吸光值0.523。
通过3种不同溶剂对原花青素提取效果影响的研究，选择了乙醇作为提取原花青素的溶剂。
自2022年11月成立以来，建立了天然植物活性成分多功能提取纯化研究、加工生产基地，对枸杞多糖、葡萄原花青素、番茄红素产品进行了开发，其中番茄红素获国家发明专利，并获得自治区科技进步二等奖；枸杞多糖通过了自治区科技成果鉴定，番茄红素粉、葡萄原花青素产品通过了自治区新产品鉴定，技术达到国内先进水平。
公司现有一套工业化生产设备，具有年产2吨植物活性产品的生产能力，产品有天然番茄红素、枸杞多糖、葡萄原花青素和叶黄素产品，产品已进入国际市场。2022年，实现销售收入810万元，公司资产由创业初期的30万元，增加到了2205万元，新增就业30人。因2022年新疆“七.五”事件的影响，企业的国外市场受到毁灭性打击，效益严重下滑，经过公司努力，现已逐步改变了市场形势。
葡萄原花青素提取与纯化技术的研究及应用研究总结报告
Masquelier通过对葡萄籽的提取物中OPC的深入研究发现，OPC是当今医学界发现的最安全高效的纯天然抗氧化剂，其抗氧化能力是维生素E的50倍、维生素C的20倍，它能有效清除体内多余的自由基，保护人体细胞组织免受自由基的氧化损伤，同时，还具有改善人体微血管的通透性，使严重静脉曲张病人的静脉增加弹性，提高皮肤抗氧化技能，加强和保护人体活性组织、稳定细胞膜以及抗酶活性（组胺脱羧酶）等生物特性。
葡萄籽原花青素的制备及活性研究
注： “＋”表示有显色反应呈阳性， “－ ”表示显色反应呈阴性。
２．３ 葡萄籽原花青素含量 在酸性条件下，原花青素环的化学活性较高，
其结构中的间苯二酚或间苯三酚可与香草醛缩合， 产物在浓盐酸作用下形成有色的正碳离子，采用吸 光度法测其吸光度，根据原花青素标准曲线（图 １）， 即可得到原花青素含量（表 ３）。原花青素在索氏提 取各组分中的含量进行比较：乙酸乙酯＞丙酮＞乙 醇＞乙醚＞二氯甲烷＞石油醚，原花青素主要存在于 乙酸乙酯、丙酮、乙醇和乙醚组分中。
Ｄｅ ｔｅ ｃｔｉｏｎ ＆ Ａｎａ ｌｙｓ ｉｓ
检测与分析
葡萄籽原花青素的制备及活性研究
荆晓艳，马庆一，王玲玲 （郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 ４５０００２）
摘要：选用多种有机溶剂，经过梯度分离，从葡萄籽中得到葡萄籽原花青素提取物，并采用邻苯三酚和 ＤＰＰＨ 方法研究 提取物的清除自由基活性。实验结果表明：通过显色反应，可初步判断各溶剂提取物中含有黄酮类和多酚类物质；利用 邻苯三酚和 ＤＰＰＨ 检测方法，证明各提取物具有清除超氧阴离子自由基和 １，１－ 二苯基－ ２－ 苦肼基的活性，其中乙酸乙 酯提取物清除自由基的效果最好。 关键词：葡萄籽；原花青素；邻苯三酚法；ＤＰＰＨ 法 中图分类号：Ｏ６５７．３１ 文献标识码：Ａ
超声提取葡萄籽原花青素工艺的优化及其抗氧化活性研究
（ Ａｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄ Ｔｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｃｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｆ Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｉ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ １ ３ ２ ０ ２ ２， Ｃｈ ｉ ｎ ａ ） Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｒｅ ｓ ｐ ｏ ｎ ｓ ｅ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ（ Ｒ Ｓ Ｍ）ｉ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄ ｔ ｏ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｏ ｆ
ｃ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｓ ｏ ｎ ｉ ｃ ｔ ｉ ｍｅ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ｙ ｉ ｅ ｌ ｄ ｏ ｆ ｐ ｒ ｏ ｃ ｙ ａ ｎ ｉ ｄ ｉ ｎ ｓ ．Ｔｈ ｅ ｎ ａ ｒ ｅ ｇ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｍｏ ｄ ｅ ｌ ｉ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ．
籽原花 青素的提取率 为 ２ ． ４ ８ ２ ， 与回 归模型预测值 的相 对偏 差为 ０ ． ３ ６ ９ ， ６ 。 同时进行 了提取 物的抗氧化性
检验 ， 结 的清除能力 ， 且呈剂量相 关性 。
关键 词 ： 葡 萄籽 原花 青素 （ ＧＰ Ａ） ； 超 声提 取 ； 响应 曲面 ； 抗 氧化 中图分类 号 ： ＴＳ ２ ０ ２ ． ３ 文献 标志 码 ： Ａ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ０ － ９ ９ ７ ３ ． ２ ０ １ ４ ． ０ ４ ． ０ ２ ６
葡萄籽中分离提取原花青素的研究
葡萄籽中分离提取原花青素的研究花青素是一类多酚类化合物，其具有高效的清除自由基的功能，是一种新型、高效、低毒的天然抗氧化剂。
本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
研究结果表明：本项目产品投资费用少，操作费用低，产品附加值高；原料为废物利用，变废为宝符合国家相关产业政策；几乎没有“三废”排放，使用的溶剂全部回收利用，废渣可以作为造纸或者饲料综合利用。
标签：花青素；葡萄籽；提取；正交实验1 概述原花青素是广泛存在于植物中的一类天然多酚类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
属于缩合鞣质或黄烷醇类。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红。
它于1879年在意大利上市。
由于原花青素的多种功效，由葡萄籽提取的原花青素已被我国卫生部批准为保健原料。
目前对原花青素的提取研究及保健作用研究已非常成熟。
已经将其应用到工业化产业，开发出多种原花青素的保健产品和化妆产品。
原花青素的产品已被广大消费者普遍接受。
2 葡萄籽中花青素的提取本实验通过浸提的方法从葡萄籽中提取原花青素，考察了不同溶剂、浸提时间、浸提温度、乙醇体积分数和料液比等单因素对浸提效果的影响，确定了最佳的单因素水平。
并通过设计正交实验，得出原花青素提取最佳工艺条件。
2.1 实验方法2.1.1 葡萄籽中原花青素的提取本实验采用甘肃紫轩酒业葡萄酒厂生产葡萄酒产生的葡萄籽下脚料作为本实验的原材料。
在生产葡萄酒压榨葡萄汁的糟粕和葡萄酒生产前和发酵后压榨的榨粕，所得的这些榨渣中，以换成干品计，约有50%的葡萄皮，45%的葡萄籽和少量的梗等，将该榨渣经粗选分离出葡萄籽，作为提取的原料。
所得的葡萄籽用粉碎机粉碎后，过20目筛，于磨口三角瓶中，经石油醚脱脂脱水份，得脱脂葡萄籽粉，用一浸提液在50℃的恒温水浴中回流浸提，离心后取上清液，反复提取若干次，最后洗涤残渣，将上清液和洗涤液合并，加入固体无水硫酸钠脱水，倾出上层溶液，在真空度为0.095MPa，温度为40℃的条件下真空浓缩，浓缩液冷却至室温，得到原花青素粗提液，干燥，制得粗提物。
葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化
生研1002班姚远学号：2010001225葡萄籽中原花青素(OPC)的提取与纯化一、原花青素简介原花青素是一种水溶性色素，可以随着细胞液的酸碱改变颜色。
细胞液呈酸性则偏红，细胞液呈碱性则偏蓝。
花青素(Anthocyanins)是构成花瓣和果实颜色的主要色素之一。
花青素为植物二级代谢产物，在生理上扮演重要的角色。
花瓣和果实的颜色可吸引动物进行授粉和种子传播。
常见于花、果实的组织中及茎叶的表皮细胞与下表皮层。
花青素属于酚类化合物中的类黄酮类(Flavonoids)。
基本结构包含二个苯环，并由3碳的单位连结(C6-C3-C6)。
花青素经由苯基丙酸路径和类黄酮生合成途径生成，由许多酵素调控催化。
以天竺葵色素(Pelargonidin)、矢车菊素(Cyanidin)、花翠素(Delphinidin)、芍药花苷配基(Peonidin)、矮牵牛苷配基(Petunidin)及锦葵色素(Malvidin)六种非配醣体(Aglycone)为主。
花青素因所带羟基数(-OH)、甲基化(Methylation)、醣基化(Glycosylation)数目、醣种类和连接位置等因素而呈现不同颜色。
[9]颜色的表现因生化环境条件的改变，如受花青素浓度、共色作用、液胞中pH値的影响(Clifford)。
橙色和黄色是胡萝卜素的作用。
1910年在胡萝卜中发现了β-胡萝卜素，以后共发现另外2种胡萝卜素异构体，分别是：α、β、γ三种异构体。
1958年β-胡萝卜素获得专利，目前主要从海洋中提取，也可人工合成。
[1]食品中几种重要花青素的结构自然界有超过300种不同的花青素。
他们来源于不同种水果和蔬菜如紫甘薯、越橘、酸果蔓、蓝莓、葡萄、接骨木红、黑加仑、紫胡罗卜和红甘蓝、颜色从红到蓝。
这些花青素主要包含飞燕草素（Delchindin）、矢车菊素（Cyanidin）、牵牛花色素（Petunidin）、芍药花色素（Peonidin）。
花青素颜色随PH值发生变化，从当PH值为3时的覆盆子红到当PH值为5时的深蓝莓红。
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吸附量 ＝（初始浓度 － 平衡浓度）×溶液体积 树脂重量
解吸率＝ 洗脱液中原花青素总量 树脂吸附原花青素总量
× １００％
２．３．２ ＡＤＳ－８ 树脂的吸附流出曲线与解吸曲线的绘制 处理后的Ａ Ｄ Ｓ － ８ 树脂于水中湿法装柱，玻璃柱
Ｏ１ １ ． ９ ×４２ｃｍ，其中树脂装填高度３２ｃｍ ，床体积约 ９０ｍｌ。将葡萄籽原花青素粗提物用水稀释至原花青素 浓度分别为５．８、１５．０ｍｇ／ｍｌ，以２ｍｌ／ｍｉｎ流速上样分 步收集流出液（１０ｍｌ／管），测定其中原花青素浓度。 以流出液体积（ＢＶ ）为横坐标、流出液中原花青素浓 度Ｃ与进样原花青素浓度Ｃ０之比（Ｃ／Ｃ０）为纵坐标，绘 制吸附透过曲线。
青素提供参考。
１ 实验材料
１．１ 实验仪器 Ｗａｔｅｒｓ公司高压液相色谱仪，ＨＨＳ型电热恒温水浴
锅，ＳＨＺ－８２水浴恒温振荡器，ＵＶ－２１００紫外／可见分光 光度仪，Ｚ Ｆ Ｑ － ８ ５ Ａ旋转蒸发仪，Ｔ Ｄ ５ Ａ － Ｗ Ｓ台式低速离 心机。 １．２ 实验材料
ＡＢ－８、ＡＤＳ－８和Ｓ－８型大孔树脂，购于南开大学化 工厂；原花青素标准品（浓度≥９５％），购自天津尖峰 天然产物有限公司；葡萄籽是新疆葡萄酒厂下脚料；亚 油酸（不含抗氧化剂，含量≥９０％）由本实验室用红花 油提取；工业级乙醇、Ｔｒｉｓ（三羟甲基氨基甲烷）及所 用其他化学试剂均为分析纯。
洗脱液原花青素浓度（ｍｇ／ｍｌ）
１２０ １００ ８０ ６０ ４０ ２０
０ ０
２０％ 乙醇 ４０％ 乙醇 ５０％ 乙醇
１
２
３
４
５
６
图 ２ ＡＤＳ－８树脂解吸曲线
洗脱液体积（Ｂ Ｖ ）
朱靖蓉等：葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究
３７
清除率（％ ） Ａ５００ｎｍ
表 ２ 不同浓度乙醇对 ＡＤＳ－８树脂吸附原花青素的解吸率
中抗氧化作用的最常用的体系。图４是高聚和低聚原花 青素对亚油酸体系氧化抑制率（原花青素抗氧化性） 分别为９３．０４％和７６．８８％，而同浓度的ＶＣ及ＶＥ抑制率 分别为３５．５２％和６４．２８％。在所研究的两种聚合度下 原花青素抗氧化效果低于Ｂ Ｈ Ｔ，但与空白对照相比， １０μｇ／ｍｌ浓度时原花青素对亚油酸乳化体系的抗氧化 效果已很明显，而且其抗氧化效果在一定范围内随浓度 的增加而增强，在实际应用中可以通过适当增加其添加 量而达到与Ｂ Ｈ Ｔ相近的抗氧化效果。
看，Ｓ－８树脂对原花青素的解吸回收率很低，很难再洗 脱下来。而ＡＤＳ－８树脂不仅对原花青素吸附量高、解吸 率高，对原花青素的选择性较强而且能够较容易地解吸 下来。所以，从吸附与解吸特性综合衡量，ＡＤＳ－８树脂 优于其它二种吸附树脂，是分离葡萄籽原花青素较理想 的吸附剂，可用于原花青素的层析分离。
３６
２ 实验方法
２．１ 葡萄籽原花青素粗提方法 称取１０．０００ｇ经石油醚脱脂葡萄籽粉（４０目），用
体积分数７０％的乙醇溶液搅拌提取３次，合并提取液， 离心过滤，得澄清的滤液。滤液在４０℃以下减压浓缩， 经真空干燥，得葡萄籽原花青素粗提物。此样品用于静 态吸附及解吸性能试验。
＊ 基金项目：新疆维吾尔自治区重点科技攻关项目（２００１ＢＡ５０７Ａ０４－Ｐ０２）。 作者简介：朱靖蓉（１９７２～ ），女，新疆乌鲁木齐人，实验师，硕士研究生，研究方向为食品活性成分。
２００７ 年第 ４ 期
中国食物与营养 Food and Nutrition in China
Ｎｏ．４，２００７
葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究＊
朱靖蓉 １，王忠民 ２，李瑾瑜 １，马兴旺 ３
（１ 新疆农业大学食品科学学院，乌鲁木齐 ８３００５２；２ 新疆食品药品监督管理局，乌鲁木齐 ８３０００２； ３ 新疆农业科学院，乌鲁木齐 ８３００９１）
摘 要：本文以脱脂葡萄籽为原料从中提取原花青素，研究用大孔吸附树脂对原花青素分级纯化方法，以及纯 化的原花青素产品清除超氧阴离子自由基、亚油酸体系的抗氧化等方面的抗氧化活性。结果显示：ＡＤＳ－８ 大孔树脂 对葡萄籽原花青素具有较强的吸附能力，得到的产物纯度达 ９５％以上，是分离葡萄籽原花青素较理想的吸附剂； ２０％和 ４０％的乙醇原花青素洗脱液具有很强的清除 Ｏ２－·的能力，抑制邻苯三酚自氧化率分别达 ８８．３５％和６７．２％， 说明葡萄籽原花青素为抗自由基的有效活性成分；在亚油酸体系中，ＯＰＣ’ｓ 的抗氧化能力高于 ＶＣ 和 ＶＥ。
关键词：葡萄籽；原花青素；大孔吸附树脂；自由基
原花青素是迄今为止所发现的最有效的自由基清除 剂之一，它对近７０多种疾病具有直接或间接的预防治疗 作用，具有广泛的生化和药理活性，在医药、化妆品及 保健食品等领域具有广泛的用途［１］。原花青素广泛存在 于各种植物（如葡萄、银杏、白桦树、可可豆等）的 核、皮或种籽中，大多数原花青素产品从各种植物中提 取，但多数的原花青素含量比较低。目前普遍认为葡萄 籽是提取原花青素的较好来源［２，３］，但葡萄籽提取物是 多酚（ｐｏｌｙｐｈｅｎｏ１）类黄酮，由单体（儿茶素、表儿茶 素等）、基于此单体的聚合物（原花青素 ｐｒｏａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｌｎ）和其它酚类组成。这一组成分中生物 活性最强的部分是低聚（二，三聚体）原花青素，即 ＯＰＣｓ（ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ ｐｒｏａｎｔｈｏ ｃｙａｎｉｄｉｔｎｓ）［４］。在葡萄籽提 取物中ＯＰＣｓ含量高低就成为产品质量的最关键指标。 葡萄籽粗提物中原花青素含量较低，需进一步分离纯 化。在各种分离方法中，由于近年来发展起来的大孔吸 附树脂吸附洗脱法具有选择性好、吸附容量大、再生处 理方便，及吸附迅速、解吸容易等优点，在天然产物工 业化提取分离中得到广泛应用。本文以葡萄籽为原料从 中提取原花青素，并选用大孔吸附树脂对自制的原花青 素进一步吸附、洗脱分离，进行纯化，就纯化后的原花 青素产品在不同体系中清除自由基的活性进行研究，探 索提取高纯度原花青素的方法，为进一步开发利用原花
过氧化值的测定采用硫氰酸铁法：取０．１ｍｌ亚油酸 乳化液，依次加入９．７ｍｌ ７５％的乙醇和０．１ｍｌ ３０％的硫 氰酸氨，再加入０．１ｍｌ ０．０２Ｍ溶解于３．５％盐酸的氯化亚 铁，快速混匀，反应３ ｍ ｉ ｎ 后测定５ ０ ０ ｎ ｍ 吸光度，以 Ａ５００ｎｍ表示亚油酸氧化程度，０ 时刻测定，以后每隔 ２４ｈ测定一次，扣除０时刻值即为ｔ时刻过氧化值。各样 品的抗氧化能力以１９２ｈ时的氧化程度按下式计算，以抑 制率（％）表示：
用体积分数１０％、２０％、４０％、５０％、７０％的乙醇
溶液进行解吸，流速２ＢＶ／ｈ ，洗脱体积３ Ｂ Ｖ。将洗脱 液真空浓缩，得到葡萄籽原花青素纯化物浓缩液。 ２．５ 研究葡萄籽原花青素清除自由基活性的方法 ２．５．１ 清除 Ｏ２－·自由基试验
在试管１中加入２．８ｍｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ溶液、０．１ｍｌ水和０．１ｍｌ 的０．０１ ｍｏｌ ＨＣｌ，在试管２中加入２．８ｍｌ Ｔｒｉｓ．ＨＣｌ溶液、 ０．１ｍｌ ０．０１ｍｏｌＨＣｌ，在试管３中加入２．８ｍｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ溶 液、０．１ｍｌ水，在试管４中加入２．８ｍｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ溶液，将试 管１～４、邻苯三酚溶液、２．４中提取原花青素溶液于２５℃ 保温２０ｍｉｎ。然后以试管１作为参比，取０．１ｍｌ原花青素 溶液加入到试管２ 中，迅速摇匀，４ ２ ０ ｎ ｍ处测量吸光值 Ａ１；取０．１ｍｌ邻苯三酚溶液加入到试管３中，迅速摇匀， 每隔３０ｓ测一次４２０ｎｍ处吸光值Ａ２；分别取０．１ｍｌ原花青 素溶液和０．１ｍ１邻苯三酚溶液加入到试管４中，迅速摇 匀，每隔３０ｓ测一次４２０ｎｍ处吸光值Ａ３。按下式计算各样 品对Ｏ２－·的清除率Ｉ（％）。
抑制率（％）＝（１－ 含抗氧化剂样品Ａ５００ｎｍ（ｔ＝１９２）－Ａ５００ｎｍ（ｔ＝０））×１００％
空白样品Ａ５００ｎ
－Ａ５００ ｍ（ｔ＝１９２）
ｎｍ（ｔ＝０
）
３ 结果与分析
３．１ 三种大孔吸附树脂对原花青素静态吸附及解吸性 能比较 由表１中吸附量看，ＡＢ－８、ＡＤＳ－８和Ｓ－８型树脂均对
原花青素具有相对较强的吸附能力。但从解吸效果来
Ｉ（％）＝（１－ Ａ ３ － Ａ １ ）×１００％ Ａ２
２．５．２ 原花青素对亚油酸体系抗氧化能力的检测—— 硫氰酸铁法（ＦＴＣ 法）
取１ｍｌ已溶解于无水乙醇的样品溶液，加入１ｍｌ含 ２．５１％（Ｖ／Ｖ）亚油酸的无水乙醇溶液，２ｍｌ ０．０５Ｍ、 ｐＨ７．０的磷酸盐缓冲液，１ｍｌ蒸馏水，密封后４０℃恒温避 光氧化，以乙醇代替抗氧化剂做空白对照。
能洗脱的原花青素。经ＡＤＳ－８大孔树脂层析分离，原花 青素的纯度可达９５％。 ３．３ 原花青素的梯度洗脱效果
从表２ 看，５ ０ ％的乙醇可以较完全地将吸附在 ＡＤＳ－８树脂上的原花青素解吸下来，这在工业生产 中是可行的。７０ ％的乙醇已经基本能够洗脱吸附于 树脂上的绝大部分固形物，可以用于树脂柱的初步 再生。这充分证明了树脂法分离原花青素时简单、 高效的特点。
朱靖蓉等：葡萄籽原花青素的分离纯化及其抗氧化活性研究
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２．２ 原花青素含量分析方法 采用盐酸—香草醛法［５，６］，以原花青素标准品作
标准曲线，计算样品中原花青素含量。 ２．３ 大孔树脂筛选 ２．３．１ 静态吸附量及解吸率的测定
准确称取吸附树脂２ｇ ，用少量乙醇湿润后，以蒸 馏水洗去乙醇，再吸干其表面水分后置于１５０ｍｌ三角瓶 中，加入４０ｍｌ原花青素溶液（１５ｍｇ／ｍｌ），置于水浴 摇床，３０ ℃，１ ２ ０ ｒ／ｍ ｉ ｎ振荡３６ｈ后过滤，再用１ ０ ０ ｍ ｌ ９５ ％乙醇洗脱树脂，分别测定滤液及洗脱液中原花青 素总量，计算树脂的吸附量及解吸率。
Ｃ／ＣＯ
０．１２ ０．１０ ０．０８ ０．０６ ０．０４ ０．０２ ０．００
０
１５．０ｍｇ／ｍｌ ５．８ｍｇ／ｍｌ
２
４
６
８
１０
上样体积（Ｂ Ｖ ）
图１ 不同浓度原花青素在ＡＤＳ－８树脂上的吸附透过曲线
３．２ ＡＤＳ－８ 树脂的解吸特性 用不同浓度的乙醇溶液梯度洗脱ＡＤＳ－８树脂吸附的