大连理工大学生物化学及生物化学实验考研试题

2015高级生物化学及实验技术试题答案

高级动物生化试题 问答题： 1. 简述非编码RNA（non-coding RNA）的种类、结构特点及其主要功能。 非编码RNA的种类结构和功能 1tRNA转运RNA（transfer RNA，tRNA） 结构特征之一是含有较多的修饰成分，核酸中大部分修饰成分是在tRNA中发现的。修饰成分在tRNA分子中的分布是有规律的，但其功能不清楚。5’末端具有G（大部分）或C。3’末端都以ACC的顺序终结。有一个富有鸟嘌呤的环。有一个反密码子环，在这一环的顶端有三个暴露的碱基，称为反密码子（anticodon）.反密码子可以与mRNA链上互补的密码子配对。有一个胸腺嘧啶环。tRNA具有三叶草型二级结构以及“L”型三级结构，tRNA 的不同种类及数量可对蛋白质合成效率进行调节。tRNA负责特异性读取mRNA中包含的遗传信息，并将信息转化成相应氨基酸后连接到多肽链中。 tRNA为每个密码子翻译成氨基酸提供了结合体，同时还准确地将所需氨基酸运送到核糖体上。鉴于tRNA在蛋白质合成中的关键作用，又把tRNA称作第二遗传密码。tRNA还具有其他一些特异功能，例如，在没有核糖体或其他核酸分子参与下，携带氨基酸转移至专一的受体分子，以合成细胞膜或细胞壁组分；作为反转录酶引物参与DNA合成；作为某些酶的抑制剂等。有的氨酰-tRNA还能调节氨基酸的生物合成。 2rRNA核糖体RNA（ribosomal RNA, rRNA） 核糖体RNA是细胞中最为丰富的RNA，在活跃分裂的细菌细胞中占80%以上。

他们是核糖体的组分，并直接参与核糖体中蛋白质的合成。核糖体是rRNA 提供了一个核糖体内部的“脚手架”，蛋白质可附着在上面。这种解释很直接很形象，但是低估了rRNA在蛋白质合成中的主动作用。较后续的研究表明，rRNA并非仅仅起到物理支架作用，多种多样的rRNA可起到识别、选择tRNA以及催化肽键形成等多种主动作用。例如：核糖体的功能就是,按照mRNA的指令将氨基酸合成多肽链。而这主要依靠核糖体识别tRNA 并催化肽键形成而实现。可以说核糖体是一个大的核酶( ribozyme)。而核糖体的催化功能主要是由rRNA来完成的,蛋白质并没有直接参与。 3 tmRNA tmRNA主要包括12个螺旋结构和4个“假结”结构，同时还包括一 个可译框架序列的单链RNA结构。tmRNA中H1由5’端和3’端两个末端形成，与tRNA的氨基酸受体臂相似。H1和H2的5’部分之间有一个由10-13nt 形成的环，类似tRNA中的二氢尿嘧啶环，称为“D”环。H3和H4，H6和H7，H8和H9，H10和H11之间分别形成Pk1，pK2，pK3，pK4。H4和H5之间则由一段包含编码标记肽ORF的单链RNA连接。H12由5个碱基对和7nt 形成的环组成，类似tRNA中的TΨC臂和TΨC环，称为“T”环。tmRNA 结构按照功能进行划分可分为tRNA类似域（TLD）和mRNA类似域（MLD），TLD主要包括H1,H2,H12,“D”环和“T”环，MDL则包括ORF和H5，这两部分分别具有类似tRNA和mRNA的功能。tmRNA是一类普遍存在于各种细菌及细胞器（如叶绿体，线粒体）中的稳定小分子RNA。它具有mRNA分子和tRNA分子的双重功能，它在一种特殊的翻译模式——反式翻译模式中发挥重要作用。同时，它与基因的表达调控以及细胞周期的调控等生命过程密切相关，是细菌体内蛋白质合成中起“质量控制”的重要分子之一。识别翻译或读码有误的核糖体，也识别那些延迟停转的核糖体，介导这些有问

浙江大学生物化学实验考试

诚信考试沉着应考杜绝违纪 浙江大学2008–2009学年夏学期 《医学生物化学实验》课程期末考试试卷 开课学院：医学院，考试形式：闭卷，允许带___________入场 考试时间： 2009 年 6 月 27 日,所需时间： 60 分钟 考生姓名： _____学号：专业： ______ 考生承诺：“我确认本次考试是完全通过自己的努力完成的。” 考生签名： * 理论考试占总成绩60％，平时实验成绩占总成绩40％。 一、多项选择题（每个2分，共20分） 1. 下列方法中哪一种不能将谷氨酸和赖氨酸分开? A．电泳 B．阴离子交换层析 C．阳离子交换层析 D．凝胶过滤 2. 在什么情况下，一种蛋白质在电泳时既不向正级移动，也不向负极移动，而停留 在原点？ A．发生蛋白质变性 B．电极缓冲液的pH正好与该蛋白质的pI相同 C．电极缓冲液的pH大于该蛋白质的pI D．电极缓冲液的pH小于该蛋白质的pI 3. 可用于蛋白质分子量测定的方法包括 A: SDS－PAGE B: 亲和色谱 C: 排阻色谱 D: 透析 4.分离纯化中可用于物质浓缩的方法包括 A. 沉淀； B. 吸附 C. 超滤 D透析. 5. 用于分离纯化时其方法的原理与被分离物质的分子量有关的是 A.SDS-PAGE B.离子交换色谱 C. 超滤 D 抽提 6. 影响电泳的外界因素有： A.电泳介质的pH值 B.电场强度 C.缓冲溶液的离子强度 D.电渗作用 7. 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有下列哪些效应： A.浓缩效应 B 电荷效应 C 分子筛效应 D 扩散作用

8. 提取核酸的方法有： A 苯酚法 B 氯仿-异戊醇法 C SDS法 D 核酸酶法 9. 血清醋酸纤薄膜电泳结果的条带包括下列哪些蛋白： A 白蛋白 B α2-球蛋白 C γ-球蛋白 D β -球蛋白 10.测定核酸含量的方法有： A 定磷法 B 定糖法 C紫外分光光度法 D定碳法 二、单选题（每个1分，共20分） 1.紫外法定量检测核酸选用的波长是 A. 260nm B.280nm C.254nm D.230nm 2.下列不是用于蛋白质定量测定的方法是 A.福林－酚法 B.考马斯亮蓝法 C.定磷法 D.双缩脲法 3.下列方法与免疫学原理没有关系的是 .A.蛋白印迹技术 B.ELISA C.亲和色谱 D 超滤 4.考马斯亮兰能与蛋白质的哪个区域相结合？ A 疏水区 B亲水区 C 肽键 D羧基末端 5.在DNA提取过程中，沉淀DNA用 A 无水乙醇 B 乙醚 C 氯仿 D 戊醇 6． SDS-PAGE时其迁移速率主要取决于蛋白质的 A 带电性 B 相对分子量 C 分子形状 D 生物活性 7．聚丙烯酰胺凝胶制备过程中使用的催化剂是 A TEMED B SDS C 过硫酸铵 D Tris-HCl 8．脂类薄层层析中使用的显色剂是 A 茚三酮 B考马斯亮兰 C 磷钨酸 D 磷钼酸 9．离子交换层析分离混合氨基酸时，洗脱天冬氨酸用 A pH 5.0, 0.1M 柠檬酸缓冲液 B 0.1M NaOH溶液 C 2M HCl溶液 D pH 2.2,0.1M柠檬酸缓冲液 10．凝集素的制备过程中，洗脱凝集素用 A.NaCl溶液 B.葡萄糖溶液 C.蒸馏水 D. 磷酸缓冲液 11.下列蛋白质通过凝胶过滤层析柱时最先被洗脱的是 A．马肝过氧化氢酶（分子量247,500） B．肌红蛋白（分子量16,900） C．血清清蛋白（分子量68,500） D．牛 -乳球蛋白（分子量35,000） 12.有一混合蛋白质溶液，各种蛋白质的pI分别为4.6、5.0、5.3、6.7、7.3， 电泳时欲使其中四种泳向正极，缓冲液的pH应是多少 A．4.0 B．5.0 C．6.0 D．7.0 13.从组织提取液沉淀活性蛋白而又不使之变性的方法是加入 A．硫酸铵 B．三氯醋酸 C．氯化汞 D．1mol/L HCL 14.一酶促反应，1/V对1/[S]作图得一直线，在某一抑制剂存在时，得到第二 条直线，它在1/[S]轴上与第一条直线相交。这说明： A．该抑制是不可逆抑制 B．该抑制属非竞争性抑制 C．S和I（抑制剂）对酶分子的同一部分都有亲和力

华中农业大学《生物化学实验》试卷

华中农业大学本科生课程考试试卷 考试课程与试卷类型：植物生理学实验原理与技术（A）姓名： 学年学期：2008－2009－1 学号： 考试时间：2009－－班级： 一、名词解释 ( 每题 4 分 , 共 12分 ) 1. 聚丙烯酰胺凝胶 2. 离心技术 3．可见光分光光度法/反相纸层析 二、填空题 ( 每空 2 分 , 共 42分 ) 1. 反相纸层析法分离油菜不饱和脂肪酸的实验中 ,分离后的不饱和脂肪酸经红氨酸溶液显色后 , 其最终产物颜色是（1）,从点样端起层析谱带所对应的脂肪酸依次是 (2) 、（3）、（4）、（5）、（6）。 2. 圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物酶同工酶的实验中 , 电泳时上槽接电源（7）极 ,下槽接电源 (8) 极 , 电泳开始电流应调节至每管（9）mA, 十分钟后电流调节至每管 (10) mA; 在上槽或样品中加入溴酚蓝是起（11）的作用。 3. 核酸提取过程中 , 将含有 DNA 的溶液置72℃处理 3 分钟，其目的是（12）；在淀粉酶活性测定过程中将淀粉酶液置于 70℃下处理 15 分钟的目的是（13）。 4．在微量凯氏定氮法测定植物组织中的总氮和蛋白氮，有三个主要的实验阶段，它们分别是（14）、（15）和（16）。在第二阶段，若收集三角瓶中的溶液颜色由_（17）变为（18），表明反应完全。第三阶段所用的标准浓度的滴定溶液名称是（19）。 5. DNA 提取研磨时加入的研磨缓冲液的NaCl浓度是（20），研磨时加入SDS的作用是（21）

三、是非判断题 (判断对错，对的标T，错的标F，每题 2 分，共 10 分 ) 1．萌发的小麦种子中含有很高活性的淀粉酶，其中α－淀粉酶不耐热，在70℃迅速钝化。（） 2．本学期测定还原性糖和可溶性蛋白含量时都用到了斐林试剂，这两个实验中所用的斐林试剂的配方是相同的。（） 3．DNA提取中，加入冷乙醇是为了使DNA分子复性变粗。（） 4．离心机使用中，要求同一台离心机所用的离心管都有相同的重量。（）5．油菜种子硫甙葡萄糖苷的快速分析法中，反应的实质是测定水解硫苷产生的葡萄糖的数量。（） 四、问答题（共36分） 1．试述维生素C测定的基本原理及其实验过程中的注意事项（12分） 2．简述凯氏定氮法测定蛋白质含量的基本原理。为什么一些不法商人要在蛋白质制品中加入三聚氰胺？（12分） 3．凝胶电泳法测定同工酶的原理是什么？为什么本学期所作的胶条染色后显示的谱带就是过氧化物同工酶带？（12分）

2013大连理工大学生物化学-B卷

姓名：__________大连理工大学 学号：__________ 课程名称：生物化学试卷： B 考试形式：闭卷 院系：__________授课院（系）：生命科学与技术学院考试日期：2010年7月28日试卷共16页_____ 级_____ 班 装订线一、判断是非题（正确的写“√”，错误的写“X”；每题1分，总分10分） 1.[ ] 酮体可在肝脏中合成与分解。 2.[ ] 双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应, 所以二肽具有双缩脲反应。 3.[ ] 核酸分子中因为含有共轭双键系统，所以波长280nm处有较强的紫 外吸收。 4.[ ] 蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子所带 电荷的多少。 5.[ ] 在水溶液中，蛋白质溶解度最小时的pH值通常就是它的等电点。 6.[ ] 三羧酸循环中底物水平磷酸化直接生成的是GTP。 7.[ ] 琥珀酸氧化呼吸链由复合物I、III和IV组成。 8.[ ] 辅酶与酶结合较疏松，可以通过透析方法除去。 9.[ ] 糖酵解过程中的限速酶是1,6-二磷酸果糖激酶。 10.[ ] 核苷酸结构中，磷酸位于戊糖的C3'上。 二、选择题（将正确答案写在题号后的括号内，每题0.5分，总分25分） 1.[ ]既参与嘌呤核苷酸合成又参与嘧啶核苷酸合成的物质是_______。 A天冬氨酸B谷氨酸 C 甘氨酸D丙氨酸 2.[ ]反密码子UGA能与________密码子配对。 A UCA B CAU C ACU D ACT

3.[ ]脂肪酸的-氧化发生在。 A 胞液 B 线粒体内 C 内质网 D 胞液和线粒体 4.[ ]参与肽平面的原子是________。 A Cα-N-C-N B Cα-C-N-Cα C C-N-N-Cα D N-C-Cα-N 5.[ ]下列有关RNA的描述，错误的是。 A mRNA分子可以作为蛋白质合成的模板 B tRNA是分子量最小的一类单链核酸分子 C RNA可分为mRNA、tRNA、rRNA等 D 胞质中只含有mRNA，而不含其它核酸 6.[ ]脂酰CoA由胞液进入线粒体由携带。 A草酰乙酸 B 乙酰乙酸 C肉碱 D柠檬酸 7.[ ]DNA变性后，下列描述正确的是。 A 溶液粘度升高 B 比旋光值升高 C 形成三股链螺旋 D 紫外吸收增高 8.[ ]RNA分子的基本结构单位是________。 A dNMP B dNTP C NTP D NMP 9.[ ]下列关于核酸结构的叙述，错误的是。 A 在双螺旋中，碱基对形成一种近似平面的结构 B G和C之间是两个氢键相连而成 C 双螺旋中每10对碱基对可使螺旋上升一圈 D 双螺旋中大多数为右手螺旋，但也有左手螺旋

生物化学实验理论考试题答案

生物化学实验理论考试题答案 1.醋酸纤维薄膜电泳时点样端应靠近电极的哪一端，为什么？ 答；电泳时点样端应靠近负极，因为血清中各种蛋白质在PH为8.6的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 2.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的作用,为什么？ 答；空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。 3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜的电泳原理？ 答；血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为8.6时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 4.何谓Rf值？影响Rf值的因素？ 答;Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关，对同一种物质来讲Rf是一个常量。 5.什么是盐析？盐析会引起蛋白质的变性吗？一般用什么试剂? 答;盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性，因为蛋白质的结构并未发生改变，去掉引起盐析的因素蛋白质仍能溶解；一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析 6.简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？ 答;还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。 7.影响蛋白质沉淀的因素是什么？沉淀和变性有什么联系？ 答;水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶

大连理工大学生物化学2013-A卷讲诉

姓名：__________ 大连理工大学 学号：__________ 课程名称：生物化学试卷：A 考试形式：闭卷 院系：__________ 授课院（系）：生命科学与技术学院考试日期：2013年7月25日试卷共15 页_____ 级_____ 班 订 线 A 第 1 页共 15 页

2. [ ] 导致苯丙酮尿症是因为婴幼儿体内缺乏。 A. 酪氨酸羟化酶 B. 苯丙氨酸转氨酶 C. 苯丙氨酸羟化酶 D. 酪氨酸转氨酶 3. [ ] 含有可解离的侧链。 A. 苯丙氨酸 B. 赖氨酸 C. 甘氨酸 D. 脯氨酸 4. [ ] 不能用透析方法除去的抑制剂是。 A. 丝氨酸蛋白酶抑制剂二异丙基氟磷酸（DIFP） B. 琥珀酸脱氢酶抑制剂丙二酸 C. 金属酶抑制剂乙二胺四乙酸（EDTA） D. 精氨酸酶抑制剂亮氨酸 5. [ ] 组氨酸的三个解离基团pKa值分别为pK1(α-COOH) 1.82；pK2(α-NH3+) 9.17；pK R 6.00。在pH为条件下进行电泳既不向正极移动，也不 向负极移动。 A. 3.91 B. 5.49 C. 7.59 D. 9.74 6. [ ] 关于蛋白质四级结构特点错误的是。 A. 至少2条肽链 B. 每条肽链都具有完整的三级结构 C. 单独亚基一般无生物学活性 D. 亚基间的结合力主要是二硫键 7. [ ] 含有缬氨酸(Val)、天冬氨酸(Asp)和精氨酸(Arg)的氨基酸混合液在pH 6.0 时电泳，这些氨基酸从负极到正极的排列顺序为。 A. Asp、Val、Arg B. Arg、Asp、Val C. Asp、Arg、Val D. Arg、Val、Asp 8. [ ] 蛋白质的特异性及功能主要取决于。 A. 氨基酸的相对含量 B. 氨基酸的种类 C. 氨基酸序列 D. 半胱氨酸的含量 A 第2 页共15 页

生物化学实验题目

实验一胆固醇的提取2012-11-15 16:20:00 生物师范班题目 1.比色法测定样品的理论基础是什么？ 被测样品必须要有颜色。 2. 胆固醇含量在多少范围时，与值呈良好的线性关系？ 在400mg/ml范围内。 3.在提取胆固醇的过程中，为什么要加无水乙醇？ 促使蛋白质沉淀。 4.在试管中加入1ml磷硫铁试剂，会产生什么现象？（至少写2点） 产生紫红色化合物。产生热量。 5.在无水乙醇中加磷硫铁试剂时，正确的加法是什么？将产生什么现象？请准确描述 该现象。 沿管壁慢慢加入。溶液分层。上层是无水乙醇，下层是磷硫铁试剂。 1. 胆固醇提取过程中，无水乙醇为什么要分两次加入？ 目的是使蛋白质以分散很细的沉淀颗粒析出。 2.我们用比色法测定胆固醇含量的仪器名称是什么？ 分光光度计 3. P-S-Fe试剂配置时，能用稀硫酸吗？为什么？ 不能。因为FeCl3本身是亲水性物质，稀硫酸中含有水，会降低P-S-Fe试剂的浓度，从而导致反应不能发生。 4.请简述移液枪的使用步骤。 根据所要吸取的溶液的体积选定合适量程的移液枪。 调好量程。 插枪头。 吸取液体。 将移液枪的量程调至最大。 5. 请简述0.08mg/ml胆固醇标准溶液的配置方法。 准确称取胆固醇80mg，溶于无水乙醇，定容至100ml 将贮液用无水乙醇准确稀释10倍既得。

实验二总糖和还原糖测定2012-11-15 16:20:00 生物师范班 1. 请写出还愿糖与非还原糖结构的不同之处 拥有自由的醛基和酮基 2. 对没有还原性的糖，用什么方法进行糖含量的测定？ 酸水解的方法将非还原性的糖降解呈还原糖。 3. DNS之所以能和还原糖反应，是因为其结构中含有__________? 硝基 4. 如果将DNS和其与还原糖反应的产物同时进行比色，谁的A值更大？为什么？ 产物的更大，因为产物生成棕红色，颜色越深，吸光度越高。 5. 还原糖提取过程中，为什么要离心两次？ 因为这样可以更好地将还原糖全部提取出来。第二次洗涤沉淀。 海洋技术班 1.单糖都是还原糖吗？为什么？ 是的，因为有自由醛基和酮基 2.为什么能用比色法测定还原糖的量？ 因为还原糖的量与光吸收值呈线性关系。 3.DNS的全称是？ 3,5-二硝基水杨酸 4.总糖提取过程中，碘液的作用是什么？ 确认淀粉水解完全。 5.请简述标准曲线的作用。 通过标准曲线来算出未知样品的浓度。

生物化学实验的答案

生物化学实验的答案 一、理论考试部分 1.醋酸纤维薄膜电泳时，点样的一端应靠近电极的哪一端？为什么？ 答：负极。因为血清中各种蛋白质在PH 为的环境中均带负电，根据同性相吸，异性相斥原理，点样端在负极时蛋白质向正极泳动从而实现蛋白质分离。 2.用分光光度计测定物质含量时，设置空白对照管的意义是什么？ 答：空白对照是为了排除溶剂对吸光度的影响。溶液的吸光度表示物质对光的吸收程度，但是作为溶剂也能吸收，反射和透射一部分的光，因此必须以相同的溶剂设置对照，排除溶剂对吸光度的影响。 3.简述血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳的原理？ 答：血清蛋白中各种蛋白质离子在电场力的作用下向着与自身电荷相反的方向涌动，而各种蛋白质等电点不同，且在PH为时所带电荷不同，分子大小不等，形状各有差异，所以在同一电泳下永动速度不同从而实现分离。 4.xxR f 值？影响R f 值的主要因素是什么？ 答：Rf是原点到层析中心的距离与原点到溶剂前沿的距离之比。Rf的大小与物质的结构，性质，溶剂系统，层析滤纸的质量和层析温度有关， 5.什么是盐析？盐析会引起蛋白质变性吗？一般我们用什么试剂做盐析的实验？ 答：盐析是指当溶液中的中性盐持续增加时，蛋白质的溶解度下降，当中性盐的浓度达到一定程度的时候，蛋白质从溶液中析出的现象。盐析不会引起蛋白质的变性。一般用饱和硫酸铵溶液进行盐析。 6?简述DNS法测定还原糖浓度的实验原理？ 答：还原糖与DNS在碱性条件下加热被氧化成糖酸，而DNS被还原为棕红色的

3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内还原糖的量与3-氨基-5 硝基水杨酸颜色的深浅成正比，用分光光度计测出溶液的吸光度，通过查对标准曲线可计算出3-氨基-5 硝基水杨酸的浓度，从而得出还原糖的浓度。 7.依据我们所做的实验，说明影响蛋白质沉淀的因素是什么？影响蛋白质变 性的因素是什么？沉 xx 变性有何联系？ 答：水溶液中的蛋白质分子由于表面形成水化层和双电层从而形成稳定的亲水胶体颗粒，在一定的理化因素影响下蛋白质颗粒因失去电荷和脱水而沉淀。这些因素包括溶液的酸碱度、盐溶液的浓度、温度、重金属离子以及有机溶剂等。变性蛋白质不一定沉淀，沉淀的蛋白质不一定变性。 8.什么是碘值？脂肪的不饱和程度越大，碘值越大吗？在测定碘值的实验中，氯仿的作用是什么？ 答：每100g 脂肪所吸收的碘的克数，即脂肪的碘值。脂肪的不饱和度越大，碘值就越大。氯仿作为溶剂，去溶解脂肪。 9.简述薄层层析法分离糖类的原理？答:薄层层析的实质就是吸附层析，也就 是在铺有吸附剂的薄层上，经过反 复地被吸附剂吸附以及被扩展剂扩展的过程。而吸附剂对不同的物质的吸附力不同，从而使糖在薄层上的泳动速度不同达到分离的目的。 10.等电点的定义？蛋白质在等电点时有哪些特点？ 答：当溶液的PH为一定数值时，其中的蛋白质正负电荷相等，即净电荷为 零，此时的PH值就是该蛋白质等电点。蛋白质在等电点时的溶解度最小。 11.在蛋白质显色实验的黄色反应中，反应原理是什么？实验结果为什么会出现深浅不一的黄色？

生物化学实验习题及参考答案完整版

生物化学实验习题及参 考答案 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

生物化学实验习题及解答 一、名词解释 1、pI； 2、层析； 3、透析； 4、SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳； 5、蛋白质变性； 6、复性； 7、Tm 值； 8、同工酶； 9、Km值； 10、DNA变性；11、退火；12、增色效应 二、基础理论单项选择题 1、用下列方法测定蛋白质含量，哪一种方法需要完整的肽键（ ） A、双缩脲反应 B、凯氏定氮 C、紫外吸收 D、羧肽酶法 2、下列哪组反应是错误的（） A、葡萄糖——Molish反应 B、胆固醇——Libermann-Burchard反应 C、色氨酸——坂口（Sakaguchi）反应 D、氨基酸——茚三酮反应 3、Sanger试剂是（） A、苯异硫氰酸 B、2，4-二硝基氟苯 C、丹磺酰氯 D、-巯基乙醇 4、肽键在下列哪个波长具有最大光吸收（） A、215nm B、260nm C、280nm D、340nm 5、下列蛋白质组分中，哪一种在280nm具有最大的光吸收（） A、色氨酸的吲哚基 B、酪氨酸的酚环 C、苯丙氨酸的苯环 D、半胱氨酸的硫原子 6、SDS凝胶电泳测定蛋白质的相对分子量是根据各种蛋白质（） A、在一定pH值条件下所带的净电荷的不同 B、分子大小不同 C、分子极性不同 D、溶解度不同 7、蛋白质用硫酸铵沉淀后，可选用透析法除去硫酸铵。硫酸铵是否从透析袋中除净，你选用下列哪一种试剂检查（） A、茚三酮试剂 B、奈氏试剂 C、双缩脲试剂 D、Folin-酚试剂 8、蛋白质变性是由于（） A、一级结构改变 B、亚基解聚 C、空间构象破坏 D、辅基脱落 9、用生牛奶或生蛋清解救重金属盐中毒是依据蛋白质具有（） A、胶体性 B、粘性 C、变性作用 D、沉淀作用 10、有关变性的错误描述为（）

生物化学实验重点试题

一、解词 1、总氮量水中各种形态无机和有机氮的总量 2、酶的抑制作用是指在某个酶促反应系统中，某种低相对分子质量的物质加入后，导致酶活力降低的过程。 3、酶的最适温度酶催化活性最高时的温度 4、蛋白质的等电点每个蛋白都存在一个pH使它的表面净电荷为零即等电点 5、盐析增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低的现象 6、蛋白质变性蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失6、酶的专一性酶对底物及其催化反应的严格选择性通常酶只能催化一种化学反应或一类相似的反应 7、激活剂能提高酶活性的物质大部分是离子或简单的有机化合物 8、抑制剂凡能使酶催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质 9、酶催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体 二、填空 1、球蛋白可在半饱和中性硫酸铵溶液中析出，清蛋白可在高盐浓度溶液中析出。 2、在PH3.0、和9.5时的电场中，卵清蛋白（PI4.6）移动方向分别为负移 动，正移动。 3、唾液淀粉酶的最适温度是37 4、还原糖与本乃狄试剂共热现象生成生成砖红色沉淀。 5、维生素C也称抗坏血酸，它具有很强还原性 6、用苔黑酚浓盐酸溶液可以鉴定核糖核酸 7、当溶液的PH低于蛋白质等电点时，蛋白质分子带正电荷；当溶液的 PH大于蛋白质等电点时，蛋白质分子带负电荷； 10．凯氏定氮法测定蛋白质含量消化终点颜色为清澈的蓝紫色色。 11．蛋白质变性的实质是空间结构被破坏。 12．常用的RNA提取方法有苯酚法、、高盐法等。 13、维持蛋白质亲水胶体稳定的因素是蛋白质颗粒表面的电荷层 和水化膜、 14、蛋白质在等电点时，主要以两性离子离子形式存在；当溶液的P H＞PI 时，蛋白质分子以负离子形式存在；当溶液的P H＜PI时，蛋白质分子带正离子形式存在。 15、蛋白质分子中氮的平均含量为 5.16% ，样品中的蛋白质含量常以测 氮量乘以 6.25 、即 6 。 三、选择 1、盐析法沉淀蛋白质的原理( ) A 与蛋白质结合成不溶性蛋白盐 B 次级键断裂蛋白质的构象改变 C 中和电荷，破坏水化膜 D 调节蛋白质溶液的等电点 2、以下哪项不是酶的特性（） A 酶是生物催化剂，催化效率极高 B 易受Ph，温度等外界因素的影响 C 能加速化学反应但不改变反应平衡点 D 有高度特异性 3、RNA和DNA的最大紫外吸收值是在（） A 280nm B 260nm C 510nm D 620nm 4、．凯氏定氮法使用的混合催化剂硫酸钾-硫酸铜配比为（） A 1:3 B 5:1 C 3:1 D 1:1

生物化学试卷

生物化学试卷2 一、选择题 1. 测定100克生物样品中氮含量是2克，该样品中蛋白质含量大约为： A. 6.25% B. 12.5% C. 1% D. 2% E. 20% 2．Km值是指： A．v等于1/2 Vmax时的底物浓度 B．v等于1/2 Vmax时的酶浓度 C．v等于1/2 Vmax时的温度 D．v等于1/2 Vmax时的抑制剂浓度E．降低反应速度一半时的底物浓度 3. NADH氧化呼吸链的组成部份不包括： A．NAD+ B．CoQ C．FAD D．Fe-S E．Cyt 4．各种细胞色素在呼吸链中传递电子的顺序是： A．a → a3→ b → C1→ 1/2 O2 B．b → C1→ C → a → a3→ 1/2 O2 C．a1→ b → c → a → a3→ 1/2 O2 D．a → a3→ b → c1→ a3→ 1/2 O2 E．c → c1→ b → aa3→ 1/2 O2 5．主要发生在线粒体中的代谢途径是： A．糖酵解途径 B．三羧酸循环 C．磷酸戊糖途径 D．脂肪酸合成 E．乳酸循环 6．糖原分解所得到的初产物是： A．UDPG B．葡萄糖 C．1-磷酸葡萄糖 D．1-磷酸葡萄糖和葡萄糖E． 6-磷酸葡萄糖 7．磷酸戊糖途径： A．是体内CO2的主要来源 B．可生成NADPH直接通过呼吸链产生ATP C．可生成NADPH，供还原性合成代谢需要 D．是体内生成糖醛酸的途径 8. 血浆脂蛋白中胆固醇含量最多的是： A. CM B. VLDL C. IDL D. LDL E.HDL 9. 下列哪种酶不参与脂肪酸的β-氧化： A. 脂肪酰CoA合成酶 B. 脂肪酰CoA脱氢酶 C. 肉碱脂酰转移酶 D. 琥珀酰CoA转硫酶 E. Δ2烯酰水化酶 10. 不能转变成乙酰CoA的物质是： A. β-羟丁酸 B. 脂肪酸 C. 乙酰乙酸 D. 胆固醇 E. 甘油 11. 胆固醇生物合成的限速酶是： A. 硫解酶 B. HMGCoA合成酶 C. HMGCoA还原酶 D. HMGCoA裂解酶 E. 以上都不是 12．急性肝炎时血清中哪些酶的活性可见升高：

生物化学实验复习题

生物化学实验复习题 生物化学实验复习题 一、生物化学的基本操作 1、判断玻璃仪器洗涤干净的标准时什么？ 2、若容器内附有油污，应该怎样洗涤？ 3、玻璃仪器的一般洗涤方法 4、玻璃仪器干燥时，若不急用应怎样干燥，若急用应怎么办？容量玻璃仪器（如容量瓶、吸量管、滴定管）以及烧结、结构复杂的玻璃仪器，能否烧烤？若不能，该怎么干燥？ 5、请准确量取一定量液体从一个器皿转移至另一器皿中（操作） a刻度吸管b奥氏吸管c微量加样器 6、使用奥氏吸管的原则是什么? 7、电动离心机的使用方法（配平、离心机使用的检查、调试） 8、分光光度计的使用方法及注意事项（比色皿选择、洗涤、保护） 二、血清r-球蛋白的提纯 1、盐析、分段盐析法德基本原理 2、凝胶过滤法德基本原理 3、沉淀r-球蛋白所需硫酸铵的最小浓度时多少？ 4、不同型号交联葡聚糖凝胶“G”表示，请问G后面的数字表示什

么含义？ 5、影响凝胶层析分离效果的因素有哪些？ 6、如何检测蛋白质或铵根离子是否流出？ 7、透析法脱盐的原理 三、酚试剂发测定蛋白质 1、酚试剂测定的原理 2、为什么设计空白对照管？ 3、在本实验条件下对蛋白溶液进行比色，选择的波长是多少？ 4、本实验蛋白质浓度在什么浓度范围内呈正相关线形关系？ 5、比色反应最好在什么时间内比色？ 6、制作标准曲线时，有哪些基本要求？ 四、血浆脂蛋白蛋白琼脂糖凝胶电泳 1、血脂的组成 2、脂蛋白的组成及分类 3、电泳的一般原理 4、影响带电颗粒泳动速度的因素主要有哪些？ 5、电泳图谱出现形状不规则的原因是什么？ 6、超速离心法和电泳法分离血浆脂蛋白的主要原理是什么？ 7、有A.B.C.D四种不同的蛋白质，pI分别为4.0、5.0、6.0、7.0.，请设计3中实验方法将它们彼此分开。（电泳、凝胶过滤。盐析） 8、采用不损伤蛋白质结构和功能的物理方法分离纯化蛋白质时，常用技术有哪些？（有:非变性电泳、层析、超速离心、盐析）

生物化学实验考核试题库

生物化学实验考核试题库 生物化学实验考核试题库 要求：参加考核的每位学生须从1－6号题中随机抽1题，从7－12号题中随机抽1题，从13－37号题中随机抽1题，从38－46号题中随机抽1题，共计4道考核题进行考核，总分为60分。 一、理论考核题 1盐析和盐溶（3分） 2电泳（3分） 3层析（色谱）（3分） 4酶的活力单位（3分）5比活力（3分） 6分子筛效应（3分） 7电泳的原理（4分） 8离子交换层析的原理（4分） 9亲和层析的原理（4分） 10凝胶过滤层析的原理（4分） 11吸附层析的原理（4分） 12透析技术的基本原理及其应用（4分） 13聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要优点及用途（6分） 14按层析过程的机理，层析法分哪四类？按操作形式不同又分哪三类？（7分） 15普通离心机的使用注意事项？（6分）

16可见分光光度计的使用注意事项？（6分） 17蛋白质含量测定的常用方法有那些？（6分） 18粗脂肪的提取和含量测定的基本原理（6分） 19索氏提取器是由哪几部分组成的？（6分） 20粗脂肪的提取和含量测定的简要操作步骤（6分） 21粗脂肪的提取实验中如何减少误差？（6分） 22凯氏定氮法测定总氮量的基本原理（6分） 23凯氏定氮实验中用到的主要器材有哪些？（6分） 24核酸的含量测定常用的方法有哪些？（6分） 25双倒数法测定米氏常数的基本原理（6分） 26双倒数法测定米氏常数的实验中，决定实验成败的因素有哪些？关键因素是什么？（7分） 27生物细胞的破碎的常用方法有哪些？（6分） 28酶的制备及提取过程中常注意哪些事项？（6分） 29蛋白质的分离常用的方法有哪些？（6分） 30甲醛滴定法测定氨基酸的基本原理（6分） 31为什么SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳可以用来测定未知蛋白质的相对分子质量？（6分） 32连续聚丙烯酰胺凝胶电泳与不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳有什么不同？（6分） 33聚丙烯酰胺凝胶电泳的优点？（6分） 34琼脂糖凝胶电泳的优点？（6分）

临床生物化学实验原理方法及检测介绍

临床生物化学实验原理、分析方法及检测技术 中国中医研究院广安门医院临床检测中心 生物化学实验——是把化学(分析技术)和生物化学(实验反应原理)的方法应用于疾病的诊断、治疗、监控的实验分支。 一个生化实验的最后测定结果应包括四大部分来完成。 一、实验反应原理及分析方法（理论依据） 二、实验检测技术（手段）生化仪的分析技术。 三、质量控制程序（质量保证）室内质控、室间质评、仪器、试剂、人员五要素。 四、临床意义（目的）咨询服务、异常结果的解释。 实验反应原理及分析方法(理论依据) 一个生物化学实验的反应原理设计，首先要找出所检测的化学特性，如测定体液（首先是血液）中酶的含量血液中除少数酶（如凝血溶血酶、铜氧化酶及假性胆碱脂酶等）含量较多外，血液正常生理状况下含量微乎其微。一般每毫升含微微克（Pg）水平，要直接测定如此微量物质是相当困难的。用免疫化学方法可测定全部酶蛋白分子含量（不论其有无活性）而用化学方法测定只能测定酶的催化活性，间接计算出酶的含量。目前利用酶具有催化活性这一特性，在临床上已普遍应用测定酶蛋白，同时还可以测定三大代谢的产物，如糖、脂类、蛋白质、这样也就建立起利用酶促反应的一级反应测定代谢物的方法。一级反应—反应速度与底物浓度成正比，因此只有当酶反应为一级反应时，才能准确测定底物含量，（如测定血糖、总甘油三脂、总胆固醇等）。从此在临床试剂盒的方法中出现了以酶为试剂测定各种代谢产物。 临床化学方法的分类 特别是自动生化仪方法的特点 以往临床化学实验都采用比色法进行各个项目的测定，这是因为比色法具有微量、迅速、准确的优点，特别适合于微量的生物体体液中各项物质测定。 在一般比色法中，手工使用比色计或分光光度计可以测定各种反应溶液的吸光度，但由于很难控制测定时间和反应温度，很难准确记录反应过程中吸光度变化，因此，毫不奇怪在很长一段时间内我们所使用的方法，都是在呈色反应达到完全或者反应达到平衡时，吸光度达到稳定时才进行测定。即所谓平衡法或终点法。 但自从自动生化仪出现后，从根本上改变了上述情况。通过各项先进技术，人们可以精确测定反应的动态过程。并可以准确计算任何一段反应时间内的反应速率，这样大大开阔了临床化学家对方法选择。除经典的终点法外还可以进行动态测定。这样不仅缩短了操作时间，大大提高了工作效率，还可进行一些用常规比色方法不能进行的测定。如测定酶反应的初速 度（V o ）等等。测酶初速度（V o ）只能用分光光度法。 因此，用好自动生化仪一个重要前提必须对自动生化仪可以提供的测试方法类型有所了解。 生化自动分析仪特点： 1 精确测定反应的动态过程； 2 准确计算任何一段反应时间内的反应速率； 3 除经典的终点法外还可以进行动态测定。 分析方法的分类

12级生物化学实验2期末复习题-考试

12级生物化学实验2期末复习题-考试

生物化学实验（2）理论习题 一、名词解释题 1、聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）：在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚基的点泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，而电荷因素可以被忽略。当蛋白质的分子量在15KD到200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系，可以用来测定蛋白质亚基的分子量。 2、电泳：带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳 3、层析分离技术：是一种物理的分离方法，利用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同的程度分布在两个相中。 4、吸附色谱法：利用同一吸附剂对混合物中不同成分吸附能力的差异，从而使各成分达到分离目的的色谱法。 5、离子交换层析：以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。 6、分配层析：根据一种或多种化合物，在两种不相

融合的溶剂间的分配来分离物质的方法。 7、亲和层析：是利用生物活性物质之间的专一亲和吸附作用而进行的层析方法。是近年来发展的纯化酶和其他高分子的一种特殊的层析技术。 8、凝胶层析（凝胶色谱）：混合物随流动相经过凝胶层析柱时，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。 9、电渗作用：指在电场作用下液体(通常是水)相对于和它接触的固定的固体相作相对运动的现象。 10、担体：担体是一种化学惰性的，多孔性的固体微粒，能提供较大的惰性表面，使固定液以液膜状态均匀地分布在其表面。 11、死时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间.。 12、保留时间：被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，也即从进样开始到出现某组分色谱峰的顶点时为止所经历的时间，称为此组分的保留时间。 13、高效液相色谱法：，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，

生物化学实验内容

《生物化学》实验教学大纲 课程类别：专业基础 适用专业：本科临床学专业 课程总学时：实验学时：32 实验指导书：生物化学与分子生物学实验教程 开课实验室名称：生化实验室 一、目的和任务 生物化学是一门在分子水平上研究生命现象的学科，也是一门重要的实验性较强的基础医学课程．随着医学的发展，该学科已渗透到医学的各个领域。生物化学实验技术已被广泛地应用于生命科学各个领域和医学实验的研究工作。生物化学实验是生物化学教学的重要组成部分，它与理论教学既有联系，又是相对独立的组成部分，有其自身的规律和系统。我们根据国家教委对医学生物化学课程基本技能的要求，开设了大分子物质的常用定量分析法、酶活性分析、电泳法、层析技术、离心技术及临床生化，使学生对生物化学实验有一个比较系统和完整的概念，培养学生的基本技能和科学思维的形成，提高学生的动手能力。 二、基本要求 1.通过实验过程中的操作和观察来验证和巩固理论知识，加深学生对理论课内容的理解。 2.通过对实验现象的观察，逐步培养学生学会观察，比较，分析和综合各种现象的科学方法，培养学生独立思考和独立操作的能力。 3.通过对各类实验的操作和总结，培养学生严谨的科学态度。 4.进行本学科的基本技能的训练，使学生能够熟练各种基本实验方法和实验技术的操作。 三、考试方法及成绩评定方法 四、说明 实验教材及参考书： 1.揭克敏主编：生物化学与分子生物学实验教程（第2版）。科学出版社，2010 参考资料： 1..袁道强主编：生物化学实验（第1版）。化学工业出版社，2011 五、实验项目数据表

2）要求：0：必修1选修 3）类型：0：演示1：验证2：综合3：设计 4）每组人数：指教学实验项目中一次实验在每套仪器设备上完成实验项目的人数。 六、各实验项目教学大纲 实验一蛋白质的沉淀反应 【预习要求】 预习四个小实验的具体实验原理和操作内容。 【实验目的】 1. 加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识； 2. 了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 【实验内容】 （一）蛋白质的盐折 1. 原理 大量中性盐类如硫酸铵((NH4)2SO4)、硫酸钠(Na2SO4)和氯化钠(NaCl)等加入到蛋白质溶液后，可引起蛋白质颗粒因失去水化膜和电荷而沉淀。各种蛋白质分子的颗粒大小和电荷数量不同，用不同浓度中性盐可使各种蛋白质分段沉淀。例如血清中的球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中沉淀。当硫酸铵浓度达到饱和时血清中的白蛋白使沉淀下来。盐析沉淀蛋白质时能保持蛋白质不变性，加水稀释降低盐浓度，能使沉淀的蛋白质重新溶解，并保持其生物活性。因此，利用盐析法可达到分离提纯蛋白质的目的。 2. 操作步骤 ①取小试管1支、加入5％鸡蛋清溶液20滴，饱和硫酸铵溶液20滴，充分摇匀后静置5min，记录结果。

生物化学复习题(带答案,解析)

两性离子状态α-氨基酸的结构通式： 构成天然蛋白质的氨基酸有几种： 20种氨基酸都是 L- α-氨基酸。？ 除甘氨酸外D，天然存在的氨基酸都是L－型氨基酸。？ 天然蛋白水解得到的氨基酸是L-氨基酸。？除甘氨酸以外。 蛋白质营养价值的高低取决于 __其所含必须氨基酸的种类____ ?哪一种氨基酸事实上不是氨基酸？Pro ?不含手性碳的氨基酸： ?具有2个手性碳原子的氨基酸： ?碱性最强的氨基酸： ?含有两个氨基的氨基酸: ?侧链上含巯基的氨基酸是: ?高度疏水性的氨基酸:Ile（疏水性最大） Phe Val Leu Met ?高度亲水性氨基酸：His Gln Asn Glu Asp Lys Arg(亲水性最大) ? 8种人体必需氨基酸：Val Leu Ile Thr Lys Met Phe Trp 1)在紫外280 nm附近没有特征吸收峰的氨基酸是 D 。 A. Tyr B. Phe C. Trp D. Thr 2）谷氨酸的三个解离基团pKa值分别为pK1(α-COOH) 2.19；pK2(α-NH3+) 9.67；pKR 4.25。在pH为 A 条件下进行电泳既不向正极移动，也不向负极移动。 A. 3.22 B. 5.37 C. 5.93 D. 6.96 3）含有Val、Asp、Lys和Thr 的氨基酸混合液在pH6.0时电泳，这些氨基酸从负极到正极的排列顺序为 B 。 A. Asp-Val-Thr-Lys B. Lys-Thr-Val-Asp C. Asp- Thr -Val -Lys D. Lys-Val -Thr -Asp 4）必需氨基酸是 D 。 A. 亮氨酸、异亮氨酸、谷氨酸和赖氨酸 B. 缬氨酸、色氨酸、天冬氨酸和赖氨酸 C. 丝氨酸、亮氨酸、组氨酸和苏氨酸 D. 赖氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和异亮氨酸 5）下列哪组氨基酸都不能在人体内合成 D A 谷氨酸、赖氨酸、精氨酸； B 色氨酸、天冬氨酸、甘氨酸 C 丝氨酸、丙氨酸、亮氨酸； D 苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸 6）在pH5.5时，带正电荷的氨基酸为 B A 谷氨酸； B 精氨酸； C 亮氨酸； D 色氨酸 7）测得某一蛋白样品中的氮含量为0.4 克，此样品约含蛋白克。 A. 2.00 B. 2.50 C. 3.00 D. 6.25