阿维菌素的液相色谱分析
高效液相色谱-串联质谱法测定松树木材中阿维菌素的残留量
王奕升，张铮钰，徐勇，等.高效液相色谱-串联质谱法测定松树木材中阿维菌素的残留量［J ］.中南农业科技，2023，44（5）：64-66．阿维菌素别名为阿巴美丁、阿佛菌素、杀虫素等，是一类具有杀虫、杀螨、杀线虫活性的十六元大环内酯化合物，由链霉菌发酵产生。
其具有很强的胃毒作用和触杀作用，对昆虫和螨类均有较好的效果，其中对植物线虫的活性较高，发展前景十分广阔［1］。
阿维菌素于1976年被美国默克公司分离提取之后便被深入研究，中国从20世纪80年代末也开始研究阿维菌素，应用范围广泛，作为一种杀线虫剂，登记农药已达82种［2］。
阿维菌素可以通过影响害虫的神经生理活动，导致神经膜电位极化阻断神经传导以杀灭害虫［3，4］，其对松树病害的防治具有重要意义。
松树在中国分布范围广泛，是一种重要的林业资源，同时被列为国家战略储备树种。
松树可以在不同环境中生长，对土壤的要求较低，能忍耐较为瘠薄的土地，对水需求小，喜好阳光。
松树在生长过程中，容易受到病虫害的影响，且影响程度较大，因此防治病虫害并保护松树具有重要的意义。
松树常见的病虫害包括松毛虫、松材线虫病、松褐天牛、松干蚧壳虫、松梢螟等，其中松材线虫病对松树的危害最大，被称为松树的“癌症”，松树在感染40d 左右便会死亡［5-7］，其传播速度极快，对松树的致死效果极强，并且难以控制［8］。
而阿维菌素能够有效抑制松材线虫病，具有较强的杀线虫活性［9］。
防治松材线虫病的方式之一是向树干打孔注药，适用于古树名木以及公园、景区等区域内松树的重点保护。
为了解阿维菌素在松树树干中的传输过程，需要建立快速、准确检测其在松树中残留的方法。
关于阿维菌素的测定方法以液相色谱法为主，分为高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-PDA ）、高效液相色谱荧光检测法（HPLC-FLD ）、高效液相色谱紫外检测法（HPLC-UV ）、高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS ）等［10］。
高效液相色谱法检测羊奶中阿维菌素类药物残留
今H畜牧曹医高效液相色谱法检测羊奶中阿维菌素类药物残留李曼，李宏娟，马珊珊，杨赵伟*（秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心066000）摘要：为了建立高效液相色谱法测定羊奶中阿维菌素类药物的残留，试验采用乙腈和去离子水提取样品中目标化合物，C18固相萃取小柱净化，通过高效液相荧光检测器测定，外标法定量。
结果表明：该方法2耀200滋g/L线性良好，羊奶中阿维菌素类药物的方法检出限为1.2滋g/kg~2.5滋g/kg,回收率范围为66.7%~104%，相对标准偏差为1.8%~5.4%,该方法简单、快速，可用于羊奶中阿维菌素类药物残留的检测遥关键词：高效液相色谱法；羊奶；阿维菌素；残留阿维菌素类药物（Avermectins,AVMs）是由链霉菌的发酵产物中分离的大环内酯类抗生素，是目前兽医临床上用量最大的抗寄生虫药，被广泛应用于牛、羊等动物，在动物体内残留时间长11-21遥其作用机理是干扰害虫神经生理活动,致使害虫岀现麻痹而中毒死亡叫阿维菌素类药物对哺乳动物的毒性很低，但是长期食用含有此类药物的奶产品会对人类健康产生潜在威胁，应对奶产品中阿维菌素类药物含量进行监测叫GB/T29696-2013《牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定高效液相色谱法》适用于牛奶中阿维菌素类药物残留检测的制样和高效液相色谱测定方法，该方法检测灵敏度高且不需要昂贵的仪器，普及性强|5-61遥本文通过对该方法中的前处理方法和仪器检测条件进行改进,使该方法适用于羊奶中阿维菌素类药物的检测，对有效监控该药在羊的养殖中的应用、评价羊奶食用的安全性具有重要意义。
1材料与仪器1.1仪器高效液相色谱仪（型号为U3000）,购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；荧光检测器（型号为FLD-3100）,购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；漩涡振荡器（型号为MS3）,购自IKA公司；智能高速冷冻离心机（型号为3H20RI）,购自湖南赫西仪器装备有限公司；固相萃取浓缩装置（型号为USE-24S）,购自北京优晟联合科技有限公司；氮吹仪（型号为TTL-域）,购自北京斯珀特科技有限公司；电子天平（型号为XA205）,购自梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司；电子天平（型号为HZF-A200），购自福州华志科学仪器有限公司遥基金项目：河北省重点研发计划项目（19225502D）作者简介：李曼（1980-）,女，汉族，农艺师，本科，从事农畜产品检测通讯作者:杨赵伟（1984-），汉族，高级畜牧师，从事农畜产品检测1.2试剂阿维菌素、多拉菌素、伊维菌素标准品（纯度均逸94%）,购自德国Dr.Ehrenstorfer GmbH公司，埃玛菌素标准品（100滋g/mL）购自天津阿尔塔科技有限公司；甲醇（色谱纯）购自德国CNW公司；乙腈（色谱纯）购自德国CNW公司；冰乙酸（色谱纯）购自沈阳市试剂五厂；三氟乙酸酐（化学纯）购自南京化学试剂股份有限公司；三乙胺（分析纯）购自天津市科密欧化学试剂有限公司；异辛烷（色谱纯）购自德国CNW公司；N-甲基咪唑（色谱纯）购自西亚试剂；C18固相萃取柱（500mg/6mL）,购自沃特世科技（上海）有限公司。
高效液相色谱荧光法测定胡椒中的阿维菌素
高效液相色谱荧光法测定胡椒中的阿维菌素摘要：建立以高效液相色谱荧光（HPLC-FLD）法测定胡椒（Piper nigrum L.）中阿维菌素含量的方法。
样品用乙腈提取，经氨基柱净化，衍生后，以HPLC-FLD 法分析。
结果表明，该法在添加回收浓度为0.005，0.010和0.050 mg/kg 3个不同添加水平的回收率为95%～103%，其检出限为0.005 mg/kg。
关键词：高效液相色谱荧光法；阿维菌素；残留；胡椒（Piper nigrum L.）阿维菌素（Abamectin，A VM）是由链霉菌发酵产生的大环内酯类抗生素，属昆虫神经毒剂，主要干扰神经生理活动，刺激释放γ-氨基丁酸，而γ-氨基丁酸对节肢动物的神经传导有抑制作用，害虫与药剂接触后即出现麻痹中毒而死，无内吸性[1]。
由于具有杀虫性强以及杀虫谱广等特点，被广泛用于蔬菜、果树、棉花和花卉等作物上[2]。
Malanikova等曾使用TLC法检测阿维菌素，在硅胶薄层板上涂上荧光指示剂，用于样品检测。
但TLC与高效液相色谱（HPLC）法相比较，灵敏度低，一般只作定性分析，很少用于残留检测[3]。
根据阿维菌素类药物的共轭二烯结构在240～250 nm处有强烈的紫外吸收，常采用液相色谱-紫外检测分析方法[4，5]。
但另一方面，阿维菌素类药物在体内最小有效浓度低于紫外检测器对其最低检测限（1～2 ng/mL）[6]。
与紫外检测器相比，荧光检测器（Fluorescence detector，FLD）的灵敏度约高100倍，对痕量分析特别适用。
而且只有具有对称共轭和非强离子化的化合物才能发射荧光，因此HPLC-FLD法的基质干扰较少。
由于A VM本身没有对称共轭结构，不能直接用荧光检测器检测，而只有经衍生后生成具有对称共轭的苯环结构才能发射荧光，其在血浆中的A VMs检测限可达0.02 ng/mL[7]。
由于胡椒（Piper nigrum L.）基质复杂，含有大量的挥发油、胡椒碱、粗脂肪、粗蛋白，对液相色谱柱及检测结果产生影响，因此，本试验将围绕建立胡椒中阿维菌素的检测方法展开。
农药阿维菌素的有效成分检测方法
阿维菌素有效成分常用的分析方法：液相色谱法1.方法介绍试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以μ-Bondapak C18为填充物的不锈钢柱和246nm紫外检测器，对试样中的阿维菌素进行高效液相色谱分离和测定。
2.试剂甲醇：色谱纯二次蒸馏水阿维菌素标样：已知质量分数，≥98%3.仪器高效液相色谱仪：具有246nm紫外检测器色谱数据处理机色谱柱：250mm×4.6mm（id）不锈钢色谱柱，内装μ-Bondapak C18填充物（10μm）过滤器：滤膜孔径约0.45μm微量进样器：50μL定量进样阀：20μL4.操作条件柱温：25℃流速：1.5mL/min检测波长：246nm进样体积：20μL流动相：甲醇+水=85+15（φ）保留时间：阿维菌素B1a约17.0min，阿维菌素B1b月12.0min5.测定步骤5.1.标样溶液的制备称取阿维菌素标样100㎎（精确至0.2㎎），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。
5.2.试样溶液的制备称取约含阿维菌素100㎎（精确至0.2㎎）的待测试样，置于100mL 容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。
用0.45μm孔径的滤膜过滤。
5.3.测定在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针阿维菌素对响应值变化小于 1.0%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
6.计算将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积分别进行平均。
试样中阿维菌素质量分数X（%），按公式计算：X=r2·m1·p r1·m2式中：r1——标样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积的平均值r2——试样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积的平均值m1——标样的质量（g）m2——试样的质量（g）P——标样中阿维菌素（B1a+B1b）的质量分数（%）7.本法使用范围阿维菌素TC/EC/WP等单制剂的分析。
阿维菌素的液相色谱分析ppt课件
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1
菌 素• 阿 维 菌
介素 的 绍产
生
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—
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2
菌 素 结 构
• 阿维菌素的天然发酵产物共有8个组分A1a,A21,A2a,A2b,B1a, B1b,B2a 和B2b,它们的区别主要在于C25,C222,23和C226位所连接的基团不同。
对阿维菌素原药、乳油按上述操作条件进行多 次重复测定,试验表明该定量方法具有较好的精密 度。其标准偏差分别为0.32、0.0089,变异系数分别 为0.34 %、1.1 %。
• 8.3 方法准确度试验
称取数个已知含量的阿维菌素原药、阿维菌素 乳油试样,分别加入一定量的阿维菌素标准品,按本 方法测定其中阿维菌素总质量并计算回收率。阿 维菌素原药、乳油的平均回收率分别为99.9 %、 100.4 %,表明该方法具有良好的准确度。
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3
和 试 剂
• 高效液相色谱仪:具有紫外可变波长检测器;(岛津公司LC10A
• 色谱数据处理机;(CLASS-10A工作站。)
• 色谱柱:150 mm×3.9 mm(id)不锈钢柱,内装Nova-Pak C18、 5μm填充物;(Waters )
• 过滤器:滤膜孔径约0.45μm;
• 微量进样器:50μL;
• A和2—的—平—均两值针; 试样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面积
• m1———标样的质量,g; • m2———试样的质量,g; • p———标样中阿维菌素(B1a+B1b)的质量分
数,%。
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和• 8 讨.1 论线
牛奶中阿维菌素类药物残留检测——高效液相色谱法(SOP)修改版-新
牛奶中阿维菌素类药物残留检测—高效液相色谱法1安全要求该检验的提取、净化步骤应在通风橱中进行，操作中需着工作服、戴口罩手套，避免溶剂气体吸入和皮肤接触；废弃的化学试剂收集到专用容器集中处理。
2急救措施皮肤触到有机溶剂或酸,用清水清洗，溅入眼中用纯水灌洗。
3 适用范围该操作规程适用于牛奶中阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素残留量的制样及测定。
4 职责进行该项检验的检验员必须按该操作规程进行检验，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。
5 检测原理用乙腈提取试料中残留的阿维菌素类药物，加水稀释，加三乙胺使溶液呈弱碱性，C18固相萃取柱净化，加三氟乙酸酐和N-甲基咪唑衍生化。
高效液相色谱-荧光检测法测定，外标法定量。
6 方法灵敏度本方法在牛奶中阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素的检测限均为1µg/kg，定量限均为2µg/kg。
7 注意事项7.1 整个净化步骤控制C18柱流速约在1～2 mL/min；7.2 C18柱使用过程中除特别说明外，应避免柱床干涸。
8 材料、仪器、试剂的准备及基本要求除特别注明外，以下所用试剂均为分析纯；水为超纯水。
8.1 阿维菌素标准品含量≥95.7%8.2 多拉菌素标准品含量≥92.6%8.3 伊维菌素标准品含量≥93.9%8.4 乙腈色谱纯8.5 甲醇色谱纯8.6 三氟乙酸酐8.7 三乙胺8.8 异辛烷8.9 N-甲基咪唑8.10 C18固相萃取柱500 mg/6 cc，或相当者8.11 固相萃取柱洗涤液；取乙腈30 mL、水70 mL和三乙胺20 µL，混匀。
8.12 衍生化试剂a) A液：N-甲基咪唑-乙腈（1+1，v/v）。
现用现配。
b) B液：三氟乙酸酐-乙腈（1+2，v/v）。
现用现配。
8.13 1 mg/mL 阿维菌素类药物混合标准贮备液：分别称取阿维菌素、多拉菌素和伊维菌素标准品10 mg，精密称定，于10 mL量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度。
阿维菌素的液相色谱分析课件
阿维菌素的液相色谱分析84最佳操作条件的选择841检测波长的确定由阿维菌素的紫外光谱图可以看出阿维菌素b1a和b1b的最大吸收波长均在245nm附近由于流动相在该波长处无吸收且对b1a和b1b峰位置无干扰故检测波长确定为245nm
阿维菌素的液相色谱分析
1.阿维菌素介绍
• 阿维菌素的产生菌———阿维链霉菌(Streptom yces avermitilis)是1975年日本北里研究所从日本静 岗县的一个土壤样品中分离得到的.阿维链霉菌自 发现以来,以日本北里大学和北里研究所以及美国 Merk公司为主的研究小组分别对它开展了深入研 究,形成了一个重要的抗生素研究领域.与其他链霉 菌一样,阿维链霉菌不仅具有复杂的形态分化,也具 有合成多种次级代谢产物的能力,由它产生的阿维 菌素在医药、农业及畜牧业上有着重要的商业价 值.目前对阿维链霉菌的研究主要集中在阿维菌素 的生物合成领域.
• 式中: • A和1—的—平—均两值针; 标样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面积 • A和2—的—平—均两值针; 试样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面积 • m1———标样的质量,g; • m2———试样的质量,g; • p———标样中阿维菌素(B1a+B1b)的质量分 数,%。
高效液相色谱荧光检测法测定植物性食品中阿维菌素类药物
发射波长为４７５咖处测定。在添加浓度４．ｏ～ｌｏｏ帽／ｋｇ范围内．平均添加回收率在７８．５％～９９．２％之间，相对标
准偏差在Ｏ．５６％～７．２５％之间．检出限为１．Ｏ”ｇ／ｋｇ。方法简便、快速、准确。在０．００４ｍｇ／Ｌ～２．Ｏｍｇ／Ｉ。范围内，阿 维菌素类药物标准工作溶液的色谱峰面积与质量浓度成良好的线形关系，相关系数为ｏ．９９９５。 关键词高教液相色谱法阿维菌素类药物植物性食品残留
（添自Ⅱ２０弘ｇ／ｋｇ）
已酰胺基阿维菌索 阿维菌素 苹果
８１．３０ ８５．５２ ８５．２６ ８２．５５ ７２．８０
９７．９９ ８９．４５ ９７．７６ ９８．８２ ８０．６５
９５．４８ ８８．５０ ９５．５５ ９７．９０ ８１．７９
９６．０５ ８４．０６ ９７．５５ ９３．４８ ８３．２３
多拉菌素 伊维菌素
阿维菌素类标准溶液色谱图
从图１可以看出，目标物可以得到很好的分离， 而且峰行对称，保留时间适中。很多资料中测定阿 维菌素类药物用的流动相都是乙腈＋水（９０＋１０）， 缺点是不仅检测成本较高，而且乙腈的毒性大。将 流动相改为甲醇／水（９５＋５），不仅降低了对环境的 污染，还降低了检测成本，并且能达到同样的检测效
司），配备荧光检测器（美国ｗａｔｅｒｓ公司）；高速均质 机（德国ＩＫＡ）；氮吹仪（美国０ｒｇａｎｏｍａｔｉｏｎ）；离心
基金项目：上海市质量技术监督局科技项目；项目编号：ｚＯｌｌ一３６。 作者简介；罗成玉．男，安徽安庆人，农艺师．研究方向：食品安全。 ＊通讯联系人ｉ罗成玉，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｇｙｕｌｕ０２０００＠１６３．ｃｏｍ
３．２提取溶剂的选择 农药残留分析中对使用的溶剂要求是非常高 的，即要求提取回收率高、杂质干扰小、经济、环境友 好等。提取溶剂的选择直接影响到提取效果的好 坏，选择并比较了丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯和乙腈 作为提取溶剂时的提取效率。结果表明：用乙酸乙
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7.计算
试按样式(中1阿)计维算菌素(B1a+B1b)的质量分数X1(%)
式中: A积1和—的—平—均两值针;标样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 A积2和—的—平—均两值针;试样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 m1———标样的质量,g; m2———试样的质量,g; p———标样中阿维菌素(B1a+B1b)的质量分 数,%。
8.结果和讨论
8.1线性关系试验 在一定质量范围内,按照浓度递增的顺序配制
数个已知样,按上述操作条件进行分析。以阿维菌 素标样质量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲 线。此标准曲线通过原点。计算得回归方程为 Y=2.52×108X+4.69×103,线性相关系数r =0.9999。试验证明当阿维菌素浓度在0.004 g/100 mL~0.2 g/100 mL之间(进样体积5μL) 与其相应的峰面积呈现良好的线性关系。
Pak C18、5μm填充物;(Waters ) 过滤器:滤膜孔径约0.45μm; 微量进样器:50μL; 定量进样管:5μL; 超声波清洗器; 甲醇:色谱级; 水:新蒸二次蒸馏水; 乙腈:色谱级; 阿维菌素标样:已知阿维菌素(B1a+B1b)质量分数≥98.0
%。
4. 色谱操作条件
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5.1标样溶液的制备 称取阿维菌素标样0.05 g(精确至0.00
02g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解并 稀释至刻度,摇匀。 5.2试样溶液的制备
称取含阿维菌素0.05 g的试样(精确0.0 002 g),置于100 mL容量瓶中,用甲醇溶解 并稀释至刻度,摇匀。
6.测定
在上述操作条件下,待仪器稳定后,连续 注入数针标样溶液,直至相邻两针阿维菌素 峰面积相对变化小于1.5 %后,按照标样溶 液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺 序进行测定。
2.阿维菌素结构Biblioteka 阿维菌素的天然发酵产物共有8个组分A1a,A21,A2a,A2b,B1a, B1b,B2a和B2b,它们的区别主要在于C25,C222,23和C226位所 连接的基团不同。
3 仪器和试剂
高效液相色谱仪:具有紫外可变波长检测器;(岛津公司LC10A
色谱数据处理机;(CLASS-10A工作站。) 色谱柱:150 mm×3.9 mm(id)不锈钢柱,内装Nova-
阿维菌素的液相色谱分析
1.阿维菌素介绍
阿维菌素的产生菌———阿维链霉菌(Streptom yces avermitilis)是1975年日本北里研究所从 日本静岗县的一个土壤样品中分离得到的.阿维链 霉菌自发现以来,以日本北里大学和北里研究所以 及美国Merk公司为主的研究小组分别对它开展了 深入研究,形成了一个重要的抗生素研究领域.与 其他链霉菌一样,阿维链霉菌不仅具有复杂的形态 分化,也具有合成多种次级代谢产物的能力,由它 产生的阿维菌素在医药、农业及畜牧业上有着重 要的商业价值.目前对阿维链霉菌的研究主要集中 在阿维菌素的生物合成领域.
流动相:甲醇+乙腈+水=38+38+24,膜过 滤,并进行脱气;
流量:1.0 mL/min; 柱温:室温(温差变化应不大于2℃); 检测波长:245 nm; 进样体积:5μL; 保留时间:B1a15.6 min, B1b11.3 min。
典型阿维菌素乳油高效液相色谱图见图
5.溶液的配制
8.2 方法精密度试验
对阿维菌素原药、乳油按上述操作条件进行 多次重复测定,试验表明该定量方法具有较好的精 密度。其标准偏差分别为0.32、0.0089,变异系 数分别为0.34 %、1.1 %。
8.3 方法准确度试验
称取数个已知含量的阿维菌素原药、阿维菌 素乳油试样,分别加入一定量的阿维菌素标准品, 按本方法测定其中阿维菌素总质量并计算回收率。 阿维菌素原药、乳油的平均回收率分别为99.9 %、100.4 %,表明该方法具有良好的准确度。
8.4 最佳操作条件的选择
8.4.1 检测波长的确定 由阿维菌素的紫外光谱图可以看出,
阿维菌素B1a和B1b的最大吸收波长均 在245 nm附近,由于流动相在该波长处 无吸收且对B1a和B1b峰位置无干扰,故 检测波长确定为245 nm。
8.4.2 流动相的选择
我们首先用单纯的甲醇+水作流动相,结果部 分厂家的乳油产品中B1a和杂质峰分离不开。因 此又改用乙腈+水作为流动相,但B1a和B1b不能 与杂质完全分离。最后尝试用乙腈+甲醇+水作流 动相,改变乙腈和甲醇之间的比例,发现当乙腈与 甲醇比例小于1时,B1a和杂质不能完全分离。当 乙腈与甲醇比例大于1时,B1b和杂质不能完全分 离,当乙腈和甲醇比例在1附近时B1a和B1b均能 与杂质完全分离,因此确定采用甲醇+乙腈+水 =38+38+24为最佳流动相配比。在采用不同的 色谱柱分析时发现:为得到合适的保留值和分离度 可适当的改变体积比为1的乙腈甲醇溶液与水的比 例和(或)流速。