[医学]皮肤病理石蜡切片
石蜡切片免疫组化步骤.
石蜡切片免疫组化步骤1.石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤120分钟。
2.脱蜡和水化：二甲苯(20min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(10min)→95%乙醇(10min)→90乙醇(10min)→80%(10min)4.抗原修复：柠檬酸钠缓冲液95度，10分钟. (枸橼酸三钠3g枸橼酸0.4g然后加水到950毫升左右，然后用NaOH或HCI调pH值6.0，最后定容在1000ml)5. PBS浸洗2次各5min6.加3%H2O2孵育5min(室温或37度，避光)。
肝组织过氧化物酶含量高。
需增加浓度或增长时间。
蒸馏水洗2minx3次8.pbs-曲拉通通透（pv法不需要）9.与二抗种属一致的血清封闭非特异位点。
（pv法不需要）9.滴加一抗4℃过夜10.PBS浸洗3次各5min11.滴加二抗室温或37℃孵育30min12.PBS洗3次各5min15.DAB显色5~20min，自来水充分涮洗16.苏木素复染2~3min，自来水充分涮洗17.氨水反蓝，过蓝可用盐酸酒精分化2s，自来水充分涮洗.用稀氨水返蓝，自来水里加几滴稀氨水，就行了，返蓝时间5分钟左右，就很好看了;淡氨水有人用50ml自来水＋三四滴的氢氧化铵；18.脱水、透明80%(5min)→90%(5min)→95%(5min)→100%(5min)→ 100%(5min)→二甲苯(10min)→二甲苯(10min)19.封片：中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干二、操作流程1、脱蜡和水化脱蜡前，应将组织芯片放在60℃恒温箱中烘烤2h以上，然后按以下流程进行：二甲苯Ⅰ（1h）、二甲苯Ⅱ（30min）、100%酒精（30min）、95%酒精（15min）、70%酒精（15min）、50%酒精（15min）、蒸馏水（15min）2、3%H2O2，室温封闭5～10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。
3、甩去H2O2，蒸馏水洗2min×3次。
石蜡切片
石蜡切片（paraffin section）技术相关内容组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
教学中，光镜下观察切片标本多数是石蜡切片法制备的。
活的细胞或组织多为无色透明，各种组织间和细胞内各种结构之间均缺乏反差，在一般光镜下不易清楚区别出；组织离开机体后很快就会死亡和产生组织***，失去原有正常结构，因此，组织要经固定、石蜡包埋、切片及染色等步骤以免细胞组织死亡，而能清晰辨认其形态结构。
石蜡切片制作基本技术石蜡切片法包括取材、固定、洗涤和脱水、透明、浸蜡、包埋、切片与粘片、脱蜡、染色、脱水、透明、封片等步骤。
一般的组织从取材固定到封片制成玻片标本需要数日，但标本可以长期保存使用，为永久性显微玻片标本。
1.取材应根据要求选取材料来源及部位。
例如植物细胞有丝分裂多选取洋葱根尖，细胞分裂快又便于切取；猪的肝小叶边界清晰明确；耳蜗以豚鼠的内耳易于定位和剥离。
材料必须新鲜，搁置时间过久则产生蛋白质分解变性，导致细胞自溶及细菌的滋生，而不能反映组织活体时的形态结构。
2.固定用适当的化学药液——固定液浸渍切成小块的新鲜材料，迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分、终止细胞的一切代谢过程、防止细胞自溶或组织变化，尽可能保持其活体时的结构。
固定能使组织硬化，有利于切片的进行，而且也有媒浸作用，有利于组织着色。
固定液的种类很多，其对组织的硬化收缩程度以及组织内蛋白质、脂肪、糖类等物质的作用各不相同。
例如纯酒精可固定肝糖而能溶解脂肪，甲醛能固定一般组织，但溶解肝糖和色素。
固定液可分为单一固定液及混合固定液。
前者有甲醛（蚁醛、福尔马林）、酒精、醋酸或冰醋酸、升汞、锇酸（四氧化锇）、重铬酸钾及苦味酸等，单一固定液不能固定细胞中的所有成分；混合固定液可以互补不足，常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液（配方见有关技术书籍）。
病理标本取材的方法、原则及注意事项及石蜡切片染色技术
病理标本取材的方法、原则及注意事项及石蜡切片染色技术临床医学医学信息 2013 年 7 月第 26 卷 2中 Medical Information. Jul. 2013. Vol. 26患有尿毒症老年人的静脉留置针的护理体会熊蔚方( 广西贵港市人民医院肾内老年科 , 广西贵港 537000 ) 我国已进入老龄化社会,老年人日渐增多,他们疾病复杂,慢性疾病多发, 进针速度要慢, 以免刺破血管, 采用边退针芯边置入外套管法, 见回血后沿血特别是患有尿毒症老年人的患者,病情变化快,危急,经常需要静脉输液治疗。
管平行置入外套管针直至外套管针尖端全部进入血管, 左手固定针柄, 右手取为了保护好患有尿毒症老年人的血管及有利于配合抢救,又能快速给药,减少出针芯, 并松开止血带, 无菌透明贴固定, 并注明穿刺日期及时间。
禁食、创伤、反复穿刺给患者带来的痛苦,静脉留置针的使用能减少反复静脉穿刺而造成失血、疼痛、环境温度低、个体循环不良等造成外周血管充盈不佳的情况下 , 可的痛苦及对打针的恐惧感,血管难找及血透破坏血管的弹性及增加他们的穿采用先选择好穿刺部位后热敷, 待血管充盈后再行穿刺 ;也可采用穿刺前扎止刺难度,减轻患有尿毒症老年人的焦躁情绪,便于临床用药,急、危重患者的抢血带,用手轻轻摩擦穿刺部位皮肤后,放松止血带片刻再扎止血带。
救用药,减轻护士的工作量,减少疼痛,因而静脉留置针在临床广泛应用,面对 3.2封管方法封管是留置成功的关键, 方法得当, 可延长置管时间, 防止置管患有尿毒症老年人这一特殊群体,静脉留置针留置时间的长短和患有尿毒症并发症的发生;封管时采用双重正压封管法,就是输液完毕后夹闭输液器, 将老年人的舒适成为护士及家属最为关注的问题。
头皮针斜面撤于肝素冒腔内 ,反折头皮针乳头, 与夹闭的输液器断开 , 连接含1 穿刺前的评估肝素盐水溶液的 5ml 注射器均匀推注肝素盐水溶液 3ml , 右手将留置针延长先对穿刺部位的评估,若把握不大,不能一次穿刺成功的就放弃,重新选管抬高 30°后, 将其延长管上的小夹将延长管夹闭,再推注肝素盐水溶液0.5择穿刺部位;对护士自身心理状态的评估,护士自身是否镇静,情绪是否稳定, lm 封管, 分离退出以再次呈正压的头皮针 ;封管后再次输液时套管内肝素溶若不就做深呼吸休息片刻再行穿刺;作为一名职业护士不但要有良好的心理液相对呈高压状态,使液体通畅的流入体内。
皮肤病理石蜡切片
功能：①保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。
②AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段， 缓冲组织的收缩。
注意：口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合
此种固定方法。
议: AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的 完整性，是否造成组织收缩程度加大？
比较：
我们修材的大小一般要比 口腔医院修的组织块小。大概 有黄豆粒大小。
原因：
口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大 小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。
注意：组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守
常规，一概而论。
固定
中性10％福尔马林 1h AF液 0.5－1h
比较：
切片机：LEICA（莱卡)RM 2255
单次切片的特点：组织片不易褶皱 切片的时间较长 粘片的组织较少
摊片
水浴温度37℃ 每个玻片黏贴两个组织片
比较：
水浴温度不稳32-45 ℃极 易造成组织片摊不开或张力过 大而裂开。由于我们是连续切 片，所 以玻片上的组织片大 于四个。
烤片
烤箱温度55℃ ≧1.5h
浸蜡
干燥箱温度65-70℃ ≧1.5h
比较：
我们的干燥箱温度不稳， 在72-84℃之间波动。
功能：
石蜡溶解二甲苯，已达到石蜡浸入整个组织的目的。
注意：干燥箱中的温度过高或不稳，使组织变脆或烫伤，造成切片困
难，不能制成理想的切片。
议：石蜡的厂家（物理性能）不同，是否影响浸蜡的时间和切 片？
包埋
比较：
AF液（500ml） AF液 500ml）
福尔马林 无水乙醇 蒸馏水 50ml 405ml 45ml 90%乙醇450ml 90%乙醇450ml
大鼠皮肤石蜡切片的制作技巧与质量控制
ｐ Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ２ ０ １ ５ Ｎ ｏ ｖ ； ３ １ （ １ １ ）
・１ ３ ０ ７・
网 络 出版 时 间 ： ２ ０ １ ５—１ １ — ２ ３ ０ ８ ： ４ ９ 网络 出版 地 址 ： ｈ ｔ ｔ ｐ ： ／ ／ ｗ ｗ ｗ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． ｎ ｅ ｔ ／ ｋ ｃ ｍ ｓ ／ ｄ ｅ ｔ ａ ｉ ｌ ／ ３ ４ ． １ ０ ７ ３ ． Ｒ ． ２ ０ １ ５ １ １ ２ ３０ ８ ４ ９ ． ０ ２ ９． ｈ ｔ ｍｌ
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材料
ｍ， 在生物组织摊片机 ４ ８℃去离子水 中进行展片 ， 组织舒展
平整时将其捞在洁净 的载玻片上 ， 然后将切 片置 于６ Ｏ℃温箱
清 洁级 健康 成年雌性 Ｓ Ｄ大 鼠 ６只 ， 体重
石 蜡组 织切 片机 （ Ｌ ｅ ｉ ｃ ａ Ｒ Ｍ ２ ２ ３ ５ ） ，
１ ． １ ． ２ 主要 仪 器 设 备
一
蒸馏水 ， Ｈａ ｒ ｒ ｉ ｓ 苏木精染核 ８ ｍｉ ｎ ， 水洗去浮色 ， １ ％盐酸乙醇分 色１ — ２ Ｓ ， 自来 水返蓝 １ ５～ ２ ０ ｍ ｉ ｎ ， ０ ． ５ ％伊红 水溶液染 胞质
皮肤组织病理切片技术
一、V — G法（胶元纤维染色法） 结缔组织含有三种纤维，即胶原纤维、网 状纤维、弹力纤维。胶原纤维在结缔组织中 含量最多，起支持作用，具有一定的韧性和 坚固性，抗拉力强的特点。胶原纤维染色在 病理诊断上主要用于和肌纤维的鉴别。常用 的胶原纤维染色方法为V—G法。 结果： 细胞核蓝黑色或黑色，胶原纤维红色，肌 纤维、细胞浆、红血球呈黄色。
配法：(PH 7.0~7.2)
甲醛 NaH2PO4· 2H2O 或 无水 Na2HPO4· 12H2O 或 无水 蒸馏水 100ml 5.2g 4.0g 16.4g 6.5g 900ml
三、脱水
组织脱水，就是把组织内的水分彻底 除掉，故亦称无水法。无论任何组织都 含有不同程度的水分。一般组织经过固
皮肤组织病理切片技术
一、取材
1、手术取材。 适用于：（ 1 ）面部、关节部，易出血部位 等；（2）较大、较深的皮疹；（3）结节 和囊肿性皮疹；（ 4 ）切除治疗和检查， 主要用于小的肿瘤。 2、钻孔取材。（角膜钻孔器）
适用于一般的皮疹取材。
二、固定
固定的作用和目的：
1、可以防止组织溶解及腐败。
2 、使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶 等各种成分沉淀保存下来，保持它原有
透明
切片 染色
切 片 质 量 标 准（100分）
切片完整 没有刀痕 厚薄均匀 附贴适量 平坦无褶 10分 5分 10分（一层细胞） 5分 10分
树胶适量 染色鲜艳 对比清晰 透明度好 片内无污染 无“人工”现象 玻片整洁 标签端正
5分 10分 10分 10分 10分 5分 5分 5分
常 规 染 色
固定的注意事项：
1、组织块必须小而薄。 2、固定液对组织有收缩及硬化作用，亦有 使组织膨胀的作用。
石蜡切片的具体步骤与做法
石蜡切片的具体步骤与做法？石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。
石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法，因此用得最多，它有很多优点：比较省时间，容易操作，可切成极薄的切片（4um以下），能制作连续切片，组织块可包埋在石蜡中永久保存。
缺点是只能用于较小的组织块，较大的组织块不易切好，容易破碎，组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。
制片时间太长。
石蜡切片的制作过程（一）材料与用具1．材料：鱼皮肤、性腺、肠、肝胰脏等。
2．用具：溶蜡箱、蜡杯、不同熔点的石蜡、酒精灯等。
（二）实验内容与步骤1．取材及固定取动物体上的小块组织成为组织块。
组织块的大小以不超过0.5立方厘米为宜。
切去组织块时动作要轻，切忌用力牵引或挟持，以免组织内部发生变化。
组织块取下后，先用先用0.85％的生理盐水漂洗以戏曲血液与污渍，如果是管状组织则必须把管腔中污物洗净，可用注射器自一端向管腔中注射生理盐水数次，使其管腔冲洗干净，切忌不可用刀或其他器具刮之。
由动物身上切取的组织必须是新鲜的，材料越新鲜越好，一般不应超过死后24小时。
如果是管状器官或是其中有分泌之消化液，则死后应迅速采取，以免组织自溶或上皮剥落。
材料由动物体取下后应当迅速固定，固定的目的是尽快使固定液渗入组织内部，将组织固定，以保持其原有的结构。
不同的组织应选用适当的固定液。
固定液的用量与组织块体积之比一般在20：1。
不应使组织块贴于容器壁上，应记录固定液的名称，材料的种类，动物品种及开始固定的时间。
2．冲洗固定后的组织块在进行脱水前必须用流水洗去固定液。
组织块应用纱布包好，注名，放金属水洗网中用流水冲洗，甲醛固定液固定的组织一般水洗24小时，Bouins固定液固定的组织水洗24小时。
AFA固定液则不需要水洗。
3．脱水和硬化经过固定后的组织在水洗后要进行脱水，脱水的目的将组织内的水分用酒精或其他溶剂置换出来，使组织逐渐变硬，便于油类或其他透明及浸入，为熔化的石蜡浸渗到组织中创造条件。
病理组织切片制作技术
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
皮肤病理石蜡切片
省二院：
厂地：上海懿洋仪器有限公司
伊红（曙红Y） EosinY
配制伊红，有许多种方法，根据各单位的情况，使用不同 种类的伊红。 市售的伊红有两种：一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红， 在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配 制得当，其效果非常好。 伊红 1g 70-75%酒精 100ml 先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加 边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸， 加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片， 效果很好。
目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）
脱苯（水）→蒸馏水
无水乙醇 95%乙醇 80%乙醇 2min 2min 数秒
70%乙醇
流水冲过
反 酒 精 梯 度
比较：
我们没有反酒精梯度脱水， 只用了95%乙醇进行脱苯1min。
功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。 注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇
3-4h
①我们95%乙醇采用两步脱水， 以减小收缩力。
无水乙醇Ⅰ ≧1.5h 无水乙醇Ⅱ ≧1.5h
功能：
②无水乙醇的脱水时间不超过 2h，与此相比较，相差将近2倍。
脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。
注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。
②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过 长。 议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？
透明
二甲苯Ⅰ 20min
比较：
20min
透明时间都相同，但我们用 的是松节油进行组织透明。
二甲苯Ⅱ
功能:
二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目 的是为石蜡的浸入作媒介。
大鼠足垫皮肤石蜡切片制作体会109
大鼠足垫皮肤石蜡切片制作体会摘要】大鼠足垫皮肤存在角质层厚、组织层次复杂等特点，给石蜡切片的制作增加了很大的难度。
我们利用大鼠足垫为毛囊诱导的对象，制作了大量的大鼠足垫石蜡切片，并进行相应的免疫组化实验，摸索出许多制作大鼠足垫石蜡切片的经验，藉此介绍以期作为相关研究者的参考。
【关键词】大鼠；足垫；石蜡切片制作【中图分类号】R361.2【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2010）08-0430-01皮肤因其致密的角质层、复杂的组织层次、且各层次之间的密度差别非常大，因而成为皮肤病理科的难题之一。
本课题组长期应用大鼠足垫作为毛囊诱导的对象，因实验要求动物标本的取材的需覆盖整个足垫且需深达肌层，使足垫皮肤石蜡切片的制作较普通皮肤切片难度大大提高。
我们在长期的研究中积累了大量的经验，现将具体的制作过程及体会介绍如下。
1材料与方法1.1材料处理与固定1.1.1材料来源及处理:成年SD大鼠，雌雄不限，实验组用9＃针头自足后跟进针，将体积0.1ml的人头皮毛乳头细胞微囊注入足垫皮下，观察到局部有皮丘形成后，迅速退针并以生物胶封闭进针口。
6周后足垫皮肤取材行组织学检查。
该实验的目的是观察毛乳头细胞微囊是否能诱导大鼠足垫无毛区形成毛囊结构，以及毛乳头细胞微囊的变化，因注射的层次在皮下组织与肌层之间，所以取材时要将整个足垫从表皮至肌层同时剪下，且在包埋之前不能剪碎以避免微囊漏出影响结果观察。
1.1.2标本固定:大鼠以乙醚麻醉后脱颈处死，沿足垫外周无毛区将整个足垫表皮至部分肌层剪下，大小约2.5cm×1cm×0.5cm，该体积较正常取材要求的1cm×1cm×0.2cm明显增大，但我们大量的实验证明这样的体积并不影响固定液的渗透。
因这些标本后期需进一步行免疫组化检测，故固定时采用4%多聚甲醛以保护组织抗原，固定液的配制严格按照文献介绍[1]，配制置后于4℃保存，一般使用期一个月，避免其PH值等参数改变影响固定效果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸，
加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色，染出切片，
LEICA（莱卡)RM2235
单次切片的特点：组织片不易褶皱 切片的时间较长 粘片的组织较少
摊片
水浴温度37℃ 每个玻片黏贴两个组织片
比较：
水浴温度不稳32-45 ℃极 易造成组织片摊不开或张力过 大而裂开。由于我们是连续切 片，所 以玻片上的组织片大 于四个。
烤片
比较：
烤箱温度55℃ ≧1.5h
商标：睛晶牌 熔点：55-59℃
伊红许多种方法，根据各单位的情况，使用不同
种类的伊红。
市售的伊红有两种：一是水溶性伊红，二是醇溶性伊红，
在我们的实践中，水溶性伊红用低浓度的酒精来配制，只要配
制得当，其效果非常好。
伊红
1g
70-75%酒精
100ml
先将伊红用蒸馏水(少许)调成浆糊状，再加入酒精，边加
目的，否则不易染色！（石蜡不与染液结合）
脱苯（水）→蒸馏水
无水乙醇 2min
95%乙醇 2min
反 酒
80%乙醇 数秒
精
70%乙醇 数秒
梯
流水冲洗 1-2min
度
蒸馏水 洗过
比较：
我们没有反酒精梯度脱水， 只用了95%乙醇进行脱苯1min。
功能：脱去组织上多余的苯，使组织梯度进水水，进而染色。
注意：如果组织进入95%乙醇中有云雾状现象，说明二甲苯没有脱彻底或乙醇
皮肤病理石蜡切片
（1）修材 （2）固定 （3）脱水 （4）透明 （5）浸蜡 （6）包埋 （7）切片 （8）摊片
概述
（ 9 ）烤片 （10）脱蜡 （11）脱苯（水）→蒸馏水 （12）染色 （13）脱水 （14）透明 （15）封片
修材
一般修材不超过1.5× 1×0.2cm 但在实际工作 中，平均修材在1.0 ×0.5 ×0.2cm左右
透明
二甲苯Ⅰ 2min 二甲苯Ⅱ 3min
比较：我们略去此步。
功能：提高组织片的折射率，增强组织片的质量。
注意：此步透明可以延长时间，提高组织片镜下的“新鲜”度。
封片
中性树胶
中性树胶的处理：新买来看的树胶较粘稠，我们 可以用二甲苯进行调和。
注意：封片树胶不能过稀，封片时树胶要均匀充满盖
玻片且树胶不及外溢为佳。要将组织全部覆盖，也不能有 气泡。最后，粘贴标签 。
浸蜡
干燥箱温度65-70℃ ≧1.5h
功能：
比较：
我们的干燥箱温度不稳， 在72-84℃之间波动。
石蜡溶解二甲苯，已达到石蜡浸入整个组织的目的。
注意：干燥箱中的温度过高或不稳，使组织变脆或烫伤，造成切片困
难，不能制成理想的切片。
议：石蜡的厂家（物理性能）不同，是否影响浸蜡的时间和切 片？
包埋
比较：
苏木素 Hematoxylin
（10g）
分子式：C16H14O6 分子量：302.29 PH：5.0-7.2（黄-紫）
中国医药公司 上海化学试剂采购供应站（进口分装）
石蜡的不同
口腔医院：
省二院：
厂地：上海疑难病理会诊中心监制 上海华申康复器材厂
商标：衡永 熔点：56-58℃
厂地：上海懿洋仪器有限公司
我们烤箱温度不稳，在82 ℃左 右烤≧1h。
功能：是组织切片能够与玻片粘在一
起，防止在染色过程中脱片。
注意：烤片过程中温度不能过高，
防止烫伤组织。
脱蜡
二甲苯Ⅰ ≧12min 二甲苯Ⅱ ≧ 12min
比较：
时间都在20min左右，基本相同。
功能：二甲苯溶解切片中的石蜡，以便染色。
注意：二甲苯脱蜡的时间不能太短，已达到脱蜡彻底的
比较：
我们修材的大小一般要比 口腔医院修的组织块小。大概 有黄豆粒大小。
原因：
口腔医院包埋机提供的包埋框大小适宜，包埋时受组织大 小的影响较小，而我们手工包埋大的组织较困难。
注意：组织块的大小修材受实际病变程度的影响，不能墨守
常规，一概而论。
固定
中性10％福尔马林 1h
AF液
0.5－1h
比较：
增加了AF液，相对比我 们固定标本节约了约5个小时。
透明
二甲苯Ⅰ 20min 二甲苯Ⅱ 20min
比较：
透明时间都相同，但我们用 的是松节油进行组织透明。
功能:
二甲苯是酒精和石蜡的共同溶剂（媒剂）目 的是为石蜡的浸入作媒介。
注意：二甲苯也能使组织变硬，故时间不宜过
长。如果时间过长组织变硬，可以在香柏油中进 行软化。
议：松节油透明较慢，我们会不会透明不彻底？是否加长透明时间？
微镜下观为准，不能一概而论。
议：苏木素的不同是否影响组织染色的效果？
脱水
70%乙醇 80%乙醇 95%乙醇 无水乙醇
数秒 数秒 数秒 10min
比较：
我们梯度酒精不健全， 在无水乙醇中2min。
功能：脱去组织中的水分并对染片进行分化。
注意：脱水过程中也是对伊红染色的分化，所以在梯度酒精
中不宜过长。
包埋机进行！
手工包埋，温度不宜掌握！
注意：
①手工包埋时蜡的温度不宜过高，最好做到组织的温度与蜡的 温度相同。
②蜡块上下两端应当修平，但留余蜡，否则切片弯曲不直，或 无法连成带状，左右两端应不留余蜡，若余蜡过多时，是切片容易 褶皱。
切片
切3μm厚度 单次切片
切片机：LEICA（莱卡)RM 2255
比较：4-5μm厚度，连续切片
过陈旧、不纯。
染色
比较：
苏木素
5-10min
流水冲洗
数分钟
酸酒精（分化） 数秒
流水冲洗
≧2min
1%氨水（反蓝） 1min
流水冲洗
充分
伊红
10s-1min
流水冲洗
数分钟
基本相同。
酸酒精具有脱色作用洗不彻底， 染色较淡。 氨水碱性，洗不彻底会影响伊红的亲 和力。
注意：染色时间的长短和组织的酸碱度和染液配制的时间有关，所以要以显
功能：①保持原有组织形态，防止细菌腐蚀标本。
②AF液是固定和脱水过程中的过渡阶段， 缓冲组织的收缩。
注意：口腔组织与皮肤组织的区别，不一定完全符合
此种固定方法。
议: AF液相当于90%乙醇进行脱水，时间较短，简略了梯度酒精脱水的 完整性，是否造成组织收缩程度加大？
脱水
95%乙醇 1-1.5h 无水乙醇Ⅰ ≧1.5h 无水乙醇Ⅱ ≧1.5h
3-4h
功能：
比较：
①我们95%乙醇采用两步脱水， 以减小收缩力。
②无水乙醇的脱水时间不超过 2h，与此相比较，相差将近2倍。
脱去组织中的水分，以便石蜡浸入。
注意：①水和石蜡不相容，需脱水彻底，以便制备出好的切片。
长。
②无水乙醇同样具有使组织收缩变硬的影响，故不能时间过
议：无水乙醇脱水3-4h皮肤组织会不会变硬？