色谱柱冲洗的那些事儿
正相色谱柱冲洗
正相色谱柱冲洗正相色谱柱冲洗正相色谱柱是一种常用的色谱分离技术，它广泛应用于各种领域。
正相色谱柱的表面为极性，能够与非极性物质发生相互作用，实现对样品的有效分离。
然而，在使用正相色谱柱进行分析时，为了提高柱的稳定性和延长其使用寿命，必须进行定期冲洗。
正相色谱柱冲洗的目的是去除残留的样品和杂质，使柱表面恢复到初始状态，保证分离分析的准确性和重复性。
冲洗步骤包括前冲洗、中冲洗和后冲洗。
首先是前冲洗。
在正相色谱柱连接到色谱仪之前，需要将柱内部的残留物清洗干净。
首先，使用纯溶剂（如甲醇或乙腈）进行预冲洗，以去除柱内的非极性杂质。
然后，使用温和的洗涤剂（如混合溶液或酸碱溶液）进行冲洗，去除极性杂质。
最后，用纯溶剂冲洗柱内，使其恢复到初始状态。
接下来是中冲洗。
中冲洗是连接色谱仪后，实际进行分析之前的冲洗步骤。
它的目的是确保柱在使用过程中的稳定性和重复性。
中冲洗可以使用与分析相同的溶剂体系，但浓度要较低，以避免提前洗脱样品。
此外，中冲洗也可以采用一些特殊的溶剂体系，如一些有选择性的溶剂，以去除某些特定的杂质。
最后是后冲洗。
在一定的时间间隔或分析结束后，需要进行后冲洗以保护柱的寿命和性能。
后冲洗可以使用较浓的洗涤剂（如酸碱溶液）进行彻底清洗，去除积累的杂质和结垢。
此外，还可以使用一些专门的柱保护剂，如柱保护液或梨铂醇溶液，以增加柱的稳定性和延长其使用寿命。
虽然正相色谱柱冲洗在分析过程中可能会增加一些耗时和成本，但它是保证分析结果准确可靠的重要步骤。
定期冲洗正相色谱柱可以有效延长其使用寿命，减少柱堵塞和降低背景噪音。
因此，在进行正相色谱分析时，务必要重视柱的冲洗工作，并严格按照前冲洗、中冲洗和后冲洗的步骤进行操作，以确保分析结果的可信度和稳定性。
通过对正相色谱柱的定期冲洗，我们可以避免由于样品残留物和杂质的堆积导致的分析结果的误差和不准确性。
同时，也可以提高色谱柱的寿命和稳定性，为后续的分析工作提供良好的基础。
因此，在进行正相色谱分析时，务必要重视柱的冲洗工作，并严格按照前冲洗、中冲洗和后冲洗的步骤进行操作。
色谱柱清洗及保存方法
色谱柱清洗及保存方法1、尺寸排阻色谱柱：（1）树脂基质分子尺寸排阻色谱柱①离子性吸附：对于阳离子性吸附物质，通过提高盐浓度进行过柱清洗（1mol/L的醋酸缓冲液）②疏水性吸附：对于疏水性吸附物质，可通过提高有机溶剂的浓度（PW·PW XL：50%、α及SuperAW：100%可）进行过柱清洗。
③复合吸附：对于阳离子性·疏水性物质的去除，可提高盐浓度进行过柱，水洗后，提高有机溶剂浓度进行过柱。
（2）硅胶基质分子尺寸排阻色谱柱①碱性物质的去除（离子性吸附）：通过提高淋洗液的盐浓度（通常0.5mol/L）进行过柱清洗。
②疏水性吸附的去除（疏水性吸附）：在淋洗液中添加甲醇、乙腈（10-20%）等水溶性有机溶剂进行过柱清洗。
本法请注意缓冲液中盐的析出。
③在淋洗液中添加尿素、中性界面活性剂：在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性剂（Triton、Tween、Brij等）后进行过柱清洗。
但需注意尿素及界面活性剂的柱中残留。
一般来说，清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。
2、离子交换色谱柱、（1）如果预柱滤片或保护柱在分离之前曾经使用过，需要首先将预柱滤片或保护柱反接用清洗溶液冲洗15-30min。
如果经过冲洗效果没有得到明显改善，则需要更换预柱滤片或保护柱。
对于Proteomix阴离子交换色谱柱，清洗溶液为含150mM硝酸钾的75%乙腈溶液（用HCl调节pH至2）。
对于Proteomix阳离子交换色谱柱，清洗溶液为含1.0M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液（pH10）。
（2）在使用过程中，样品经常会被吸附在柱入口端的筛板或者填料上。
当样品吸附累积到一定程度时，柱压将会升高，色谱峰形也会出现展宽。
这时就需要清洗色谱柱了。
下面是色谱柱清洗的基本步骤：①将色谱柱与检测器断开；②将色谱柱反接后进行冲洗；③将流速设置到所推荐的最大流速的50%进行冲洗。
注意柱压的变化。
C18色谱柱的冲洗方法
C18色谱柱的冲洗方法1.初次使用前的冲洗：在初次使用C18色谱柱之前，需要对其进行特定的冲洗步骤。
首先，将纯水通过柱底部注入柱中，使得柱内充满水。
然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
接下来，使用有机溶剂（如甲醇或乙腈）进行冲洗。
首先，缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
然后，重复此步骤两次以确保彻底冲洗。
2.样品前的冲洗：在每次分析之前，都需要对C18色谱柱进行样品前的冲洗。
首先，使用纯水进行冲洗。
将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。
然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
接下来，使用有机溶剂进行冲洗。
缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
最后，使用移液枪或注射器将样品注入柱中进行分析。
3.淋洗液的冲洗：在一些情况下，可能需要对C18色谱柱进行淋洗液的冲洗。
淋洗液是指用于去除吸附在色谱柱上的杂质或其他有机溶剂的溶液。
常用的淋洗液包括醋酸、甲醇、乙腈等。
将淋洗液通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱，然后缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
根据需要，可以进行多次淋洗液冲洗，以确保柱的性能。
4.结束使用后的冲洗：在每次使用C18色谱柱之后，都需要进行结束使用后的冲洗。
首先，使用纯水进行冲洗。
将纯水通过柱底部注入柱中，使其充满整个柱。
然后，将纯水缓慢通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
接下来，使用有机溶剂进行冲洗。
缓慢注入有机溶剂，使其通过柱底部排出，直到出流液为无色透明。
最后，将柱封口或存放在适当的溶剂中，以保护柱的性能。
总之，C18色谱柱的冲洗方法包括初次使用前的冲洗、样品前的冲洗、淋洗液的冲洗以及结束使用后的冲洗。
通过正确的冲洗方法，可以保证C18色谱柱的性能，提高分析的准确性和可靠性。
正相色谱柱冲洗和保存
正相色谱柱冲洗和保存
（1）使用高纯度水或纯化的有机溶剂进行柱洗，以彻底清洗色
谱柱中的杂质和残留物。
（2）使用专门的柱洗剂进行柱洗，以帮助去除附着于柱子表面的杂质和有机物。
（3）使用有机溶剂进行柱洗，以去除附着于柱子表面的脂类和氧化物。
2. 保存方法：
（1）储存柱子应放在干燥、避光、温度稳定的地方，以保证柱子不受湿气和光照的影响。
（2）避免柱子长时间存放在高温或低温环境中，以避免柱子变形或破裂。
（3）在储存柱子之前，必须将其完全冲洗干净，并确保柱子内不含任何溶液或残留物。
（4）在柱子存放期间，定期检查柱子状态，以确保其没有发生变形或磨损。
以上是正相色谱柱冲洗和保存的相关内容，希望能对您有所帮助。
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色谱柱冲洗方法
色谱柱冲洗方法（最新版4篇）篇1 目录1.色谱柱冲洗的必要性2.色谱柱冲洗的方法2.1 水冲洗法2.2 有机溶剂冲洗法2.3 缓冲盐冲洗法2.4 反冲法3.色谱柱冲洗的注意事项篇1正文色谱柱是液相色谱系统中的核心部件，它在样品分离过程中起着至关重要的作用。
然而，在色谱柱使用过程中，柱内可能会积累一些脏物或盐析物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
下面我们将介绍几种常见的色谱柱冲洗方法。
首先，水冲洗法是最常用的色谱柱冲洗方法。
此方法操作简便，只需将色谱柱连接到水流系统上，使用纯水进行冲洗。
篇2 目录一、色谱柱冲洗的必要性二、色谱柱冲洗的方法1.水冲洗法2.纯有机相冲洗法3.缓冲盐冲洗法4.反冲法5.专用清洗剂冲洗法三、不同类型色谱柱的冲洗方法1.反相色谱柱2.正相色谱柱3.离子交换色谱柱4.凝胶渗透色谱柱四、色谱柱冲洗的注意事项篇2正文色谱柱是高效液相色谱系统中的核心部件，其在样品分离过程中起到关键作用。
然而，在长时间的使用过程中，色谱柱内部可能会积累一些脏物，影响色谱柱的分离效果。
因此，对色谱柱进行定期冲洗是非常必要的。
色谱柱冲洗的方法有很多种，下面我们分别进行介绍：1.水冲洗法：这是一种最常用的色谱柱冲洗方法。
使用纯水或含有少量缓冲盐的水进行冲洗，可以有效去除色谱柱内部的脏物。
对于反相色谱柱，可以使用纯水或甲醇/水混合溶液进行冲洗。
2.纯有机相冲洗法：在冲洗色谱柱时，可以使用纯有机溶剂（如乙腈、甲醇等）来代替水相。
这种方法适用于具有疏水性的色谱柱，如 C18、C8 等。
3.缓冲盐冲洗法：在冲洗过程中，可以加入一定浓度的缓冲盐，以保持色谱柱内部的离子强度。
这种方法适用于离子交换色谱柱和凝胶渗透色谱柱。
4.反冲法：这是一种比较彻底的冲洗方法，可以有效去除色谱柱内部的沉淀物。
在反冲过程中，需要将色谱柱的流动相改为反向，并提高流速。
然而，反冲过程可能会对色谱柱造成一定程度的损伤，因此需要谨慎操作。
超高效色谱柱洗柱方法
超高效色谱柱洗柱方法宝子们！今天来跟大家唠唠超高效色谱柱的洗柱方法哈。
色谱柱就像色谱分析的小心肝儿，要是不好好洗，它就不好好工作啦。
那怎么洗呢？一、常规清洗。
咱先说说比较基础的清洗。
一般情况下呢，要用合适的溶剂来冲柱子。
比如说，对于反相色谱柱，甲醇或者乙腈就是很不错的选择。
就像给柱子洗个舒服的澡一样，用这些有机溶剂把柱子里残留的杂质啊什么的都给冲出来。
你可以用比较低的流速开始，大概0.2 - 0.5 mL/min就行。
这就像是轻轻的给柱子挠痒痒，先让它适应一下这个清洗的过程。
然后呢，再慢慢把流速提高到1 - 2 mL/min，让清洗的力度加大一点。
这个过程可能得持续个10 - 20分钟呢，可不能着急，得让柱子洗得干干净净的。
二、有脏东西的情况。
要是你感觉柱子里面可能有比较顽固的脏东西，那可就得下点猛药了。
比如说，如果是有蛋白质之类的东西留在柱子里了，那可以先用低浓度的酸或者碱溶液来冲洗。
像0.1%的三氟乙酸或者0.1%的氢氧化铵溶液。
不过宝子们要小心哦，这些溶液可不能在柱子里待太长时间，冲个5 - 10分钟就差不多了。
因为它们虽然能把脏东西弄掉，但是在柱子里待久了也可能会对柱子有伤害。
就像给柱子做个小手术，得精准又快速。
冲完之后呢，一定要再用大量的甲醇或者乙腈把柱子里面的酸或者碱溶液给冲干净，可不能让它们留在柱子里捣乱。
三、特殊柱子的特殊对待。
有些特殊的超高效色谱柱呢，可能有自己独特的洗柱要求。
比如说那种专门用来分析手性化合物的柱子。
对于这种柱子，清洗的时候可能需要用到一些特殊的试剂，像是正己烷和异丙醇的混合溶液。
而且清洗的顺序啊，流速啊可能都和普通柱子不太一样。
这就好比每个小宝贝都有自己的小脾气，咱们得根据柱子的特殊性格来照顾它。
在清洗这种特殊柱子的时候，一定要好好看看柱子的说明书，就像看宝宝的成长手册一样，按照上面的要求来，准没错。
四、洗柱后的保养。
柱子洗完了可不能就这么不管了，还得给它做做保养呢。
色谱柱冲洗的那些事儿
色谱柱冲洗的那些事儿（反相色谱柱）衣服穿久了要洗，色谱柱用久了要冲，不过冲洗色谱柱可不像洗衣服那么简单，到底该怎么洗，还是有些门道的：第一个问题：用什么冲1.1：什么叫冲洗色谱柱通常，色谱柱冲洗就是把色谱柱上的脏东西和对色谱柱有损坏的东西冲出来，并且保存在合适的溶剂中；还有另一种情况，也可以算作冲洗的范畴，就是梯度方法间重新平衡色谱柱的过程。
1.2：常用的溶剂针对于反相色谱柱，通常是用到纯的水和有机溶剂，水主要是作为冲洗掉色谱柱中的盐和其他添加剂，而有机溶剂则是用来冲洗掉一些在色谱柱上有较强保留的污染物，除了在分析中常用到的甲醇和乙腈之外，还有一些对污染物去除能力更强的有机溶剂也可以使用，比如异丙醇。
第二个问题：冲多久色谱柱到底要冲多久，这个是经常困扰大家的问题，20分钟，30分钟，还是一个小时？2.1.1：色谱柱冲洗的计算原理其实，冲洗色谱柱并不是一个时间概念，而是一个体积的问题：通常要完全置换色谱柱中的流动相，需要至少十倍柱体积，也就是说，要有至少十倍于色谱柱体积的溶剂流过色谱柱才能把里面原有的溶剂彻底置换。
2.1.2：色谱柱体积的计算色谱柱的柱体积就是色谱柱的圆柱型体积乘以色谱柱柱填料的孔隙率（一般约为0.6），所以算下来，一根常用的4.6×150mm的色谱柱柱体积大约是1.5mL，如果是10倍柱体积的量，就是15mL，按照常用的1mL/min的流速，就是15mi n的时间。
2.2.1：梯度重新平衡的冲洗时间不过，这仅仅是置换所有溶剂的时间，其实仅仅是适合于短期冲洗色谱柱，比如梯度方法间的平衡时间，但是这还要受到仪器延迟体积的影响，已经流动相是否容易重新达到化学平衡的考虑，通常仪器的延迟体积越大，这个时间要越长，如果所使用的流动相不容易达到化学平衡，还要加长时间，比如使用使用某些缓冲盐的情况。
色谱分析中色谱柱使用前和后的处理
色谱分析中色谱柱使用前和后的处理色谱柱是在色谱分析中不可或缺的一部分，其作用是将复杂的混合物分离成各种单一成分。
色谱柱的使用前后的处理对实验结果具有极大的影响。
正确的处理方法可以延长色谱柱的使用寿命、提高实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍色谱柱使用前和使用后的处理方法。
色谱柱的使用前处理1.洗涤在使用一根新的色谱柱之前，需要洗涤柱子。
在洗涤过程中，要使用合适的洗涤溶液，并注意洗涤的时间。
使用不适当的洗涤溶液和时间会破坏柱子的性能，或者对柱子进行污染。
2.等温在进行实验之前，需要将柱子等温。
这个过程是为了使得柱子中的流动相和静止相进入平衡状态，从而对实验结果产生影响。
在等温的过程中，要注意柱子的温度和平衡时间。
3.检查在实验之前，必须检查柱子的性能。
检查的方法是进行水平推动试验和反洗试验。
每次检查都要对试验结果进行记录。
色谱柱的使用后处理1.冲洗在柱子使用之后，需要将柱子进行冲洗。
这个过程是为了保证柱子质量，避免样品残留。
冲洗的方法是使用适当的溶液，实验压力和冲洗时间也需要控制。
2.保存在完成实验之后，需要保存柱子，延长其使用寿命。
保存柱子的方法是封住两端，然后在一个干燥的地方存储。
需要注意的是，在保存柱子的过程中，要避免柱子的碰撞和振动。
3.检查在使用某一根柱子多次之后，需要对柱子进行检查。
经过多次使用之后，柱子的性能会发生改变，此时需要更换柱子。
对于性能出现问题的柱子，需要进行维修或者更换。
总结色谱柱的使用前和使用后的处理对实验结果产生了很大的影响。
正确的处理方法可以确保色谱柱的性能，提高实验结果的准确性和可重复性。
在使用色谱柱进行实验之前，一定要进行洗涤和等温操作。
在使用色谱柱之后，还需要进行冲洗和保存操作。
如果柱子的性能出现问题，需要进行检查和更换。
正确的处理方法可以延长色谱柱的使用寿命，从而为科学实验提供更加准确的结果。
色谱柱的使用说明
色谱柱的使用说明:（1）色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特殊说明, 均为评价报告所示的流动相。
在使用前, 一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中, 如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下, 否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出, 堵塞色谱柱。
（2）流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯, 配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好, 尤其是含盐的流动相。
另外, 装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0, BDS C18适合于碱性化合物, PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时, 每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗, 并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品:样品也要尽可能清洁, 可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理, 要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时, 所有的溶剂和样品应严格脱水。
2.色谱柱的保存（1）反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相, 实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟, 洗掉色谱柱中的盐, 再用甲醇冲洗30分钟。
注意: 不能用纯水冲洗柱子, 应该在水中加入10%的甲醇, 防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存, 必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中, 正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中, 离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中, 并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3.色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品, 随着使用时间或进样次数的增加, 会出现色谱峰高降低, 峰宽加大或出现肩峰的现象, 一般来说可能是柱效下降。
如何清洗和保存反相色谱柱
如何清洗和保存反相色谱柱？如何清洗和保存反相色谱柱？怎样处理新买来的色谱柱？用水来冲洗色谱柱有什么后果？分析结束后如何冲洗？这些问题是HPLC分析人员常常面对的。
本文就这些问题介绍一些色谱柱的维护和保养经验。
新色谱柱的处理对于新购买的色谱柱，首先应该做些什么呢？几乎所有的色谱柱在出厂时都保存在它们测试时的溶剂中，通常是60-80%的甲醇/水，这与在反相色谱中使用的流动相是兼容的，所以可以直接转换到所要使用的流动相。
另外，也可以先用20-30ml流动相中的强溶剂甲醇、乙腈或者四氢呋喃冲洗色谱柱，然后再转换到所需流动相。
需注意的是，在冲洗或平衡色谱柱时，重要的是溶剂的体积而不是冲洗时间。
提高流速可以缩短冲洗平衡时间。
如果使用有机溶剂和水或缓冲溶液，10倍柱体积的流动相可以使色谱柱达到冲洗平衡。
如果流动相使用离子对试剂，则需20-50倍柱体积的流动相。
对于直径4.6mm的色谱柱，其柱体积可以按下式估算：Vm=0.1L其中，Vm为柱体积（ml），L为色谱柱的长度（cm）。
故一个15cm x 4.6mm色谱柱大概的柱体积为1.5ml。
直径2.1mm的色谱柱的柱体积大约为4.6mm的20%，所以5cm x 2.1mm 的色谱柱含溶剂为100uL。
对于B型高纯硅胶基质填料的色谱柱，色谱柱的再现性很规范，这与15年前普遍使用的、不是很纯的A型硅胶基质填料的色谱柱形成鲜明对比，但很多用来分析产品和原料的“流传”下来的HPLC方法仍沿用这种色谱柱。
有的时候，新的色谱柱需要运行几针分析样品才能使保留时间和峰面积保持稳定。
这种情况对于新型的色谱柱比较好一些，但仍需一段时间的磨合。
有时可以通过运行高浓度的样品或对照品来加速最初的色谱柱平衡。
例如，如果你看到运行了几针50ng的对照品，其保留时间和峰面积有所飘移，试一试运行1ug的对照品。
这种方法常常可以加速柱平衡的时间。
用水冲洗色谱柱我们常常会被问到这样一些问题：“我的样品是水溶性的，流动相中含有缓冲盐和甲醇，我不能用水来冲洗所有水溶性的污染物吗？”回答是：“不可以”。
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色谱柱冲洗的那些事儿（反相色谱柱）
衣服穿久了要洗，色谱柱用久了要冲，不过冲洗色谱柱可不像洗衣服那么简单，到底该怎么洗，还是有些门道的：
第一个问题：用什么冲
1.1：什么叫冲洗色谱柱
通常，色谱柱冲洗就是把色谱柱上的脏东西和对色谱柱有损坏的东西冲出来，并且保存在合适的溶剂中；还有另一种情况，也可以算作冲洗的范畴，就是梯度方法间重新平衡色谱柱的过程。
1.2：常用的溶剂
针对于反相色谱柱，通常是用到纯的水和有机溶剂，水主要是作为冲洗掉色谱柱中的盐和其他添加剂，而有机溶剂则是用来冲洗掉一些在色谱柱上有较强保留的污染物，除了在分析中常用到的甲醇和乙腈之外，还有一些对污染物去除能力更强的有机溶剂也可以使用，比如异丙醇。
第二个问题：冲多久
色谱柱到底要冲多久，这个是经常困扰大家的问题，20分钟，30分钟，还是一个小时？
2.1.1：色谱柱冲洗的计算原理
其实，冲洗色谱柱并不是一个时间概念，而是一个体积的问题：通常要完全置换色谱柱中的流动相，需要至少十倍柱体积，也就是说，要有至少十倍于色谱柱体积的溶剂流过色谱柱才能把里面原有的溶剂彻底置换。
2.1.2：色谱柱体积的计算
色谱柱的柱体积就是色谱柱的圆柱型体积乘以色谱柱柱填料的孔隙率（一般约为0.6），所以算下来，一根常用的4.6×150mm的色谱柱柱体积大约是1.5mL，如果是10倍柱体积的量，就是15mL，按照常用的1mL/min的流速，就是15min的时间。
2.2.1：梯度重新平衡的冲洗时间
不过，这仅仅是置换所有溶剂的时间，其实仅仅是适合于短期冲洗色谱柱，比如
梯度方法间的平衡时间，但是这还要受到仪器延迟体积的影响，已经流动相是否容易重新达到化学平衡的考虑，通常仪器的延迟体积越大，这个时间要越长，如果所使用的流动相不容易达到化学平衡，还要加长时间，比如使用使用某些缓冲盐的情况。
当然也后很多情况下，梯度方法间的平衡时间是不需要这么长的。
2.2.2：清洁色谱柱的冲洗时间
如果需要彻底冲洗色谱柱，还需要更长的时间，通常建议是20倍的柱体积，也就是说，对于4.6×150mm的色谱柱，要冲30分钟才能保证冲洗完全。
其他规格的色谱柱可以根据色谱柱的规格和流速进行简单的计算。
第三个问题：怎么冲
色谱柱的冲洗，无非两个情况：正常情况下的冲洗和非正常情况下的冲洗
3.1：正常情况下色谱柱的冲洗步骤
3.1.1：使用不含添加剂流动相后的冲洗
正常情况下，仅仅是对色谱柱进行流动相替换和净化，对于一般的方法，只需在方法结束后使用高比例的有机相比如甲醇或者乙腈冲洗色谱柱大约20倍柱体积即可。
3.1.2：使用含盐或添加剂后的冲洗
如果是使用的到的方法的流动相中含有缓冲盐或者其他添加剂的时候，先要使用和方法流动相起始比例相同的纯水相替代缓冲盐一相，冲洗20倍柱体积之后，再换上高比例有机相冲洗20倍柱体积。
3.1.3：色谱柱冲洗后的保存
对于色谱柱的保存，一般是存放在纯的有机相中，短期存放，甲醇乙腈均可，长期存放，建议储存在甲醇中。
3.2：非正常状况下的冲洗
如果是非正常的状况，就要考虑一些不走寻常路的冲洗办法了：
什么叫做非正常状况？常见的有两种，柱效下降和堵塞：
3.2.1：柱效下降色谱柱的冲洗
对于柱效下降，我们首先要确定是色谱柱的问题而不是由于仪器或分析方法造成的，排除这两者，如果不是色谱柱损坏比如塌陷（物理冲击造成），键合相水解
（高温低pH下长时间使用），硅胶基质水解（高pH下使用）等不可逆损伤造成的柱效下降，因为排除上述问题外，多数情况都是因为色谱柱不太正常的“脏”了，可以首先使用纯的甲醇或乙腈长时间冲洗色谱柱，如果还不能奏效，可以考虑使用纯的异丙醇冲洗色谱柱，异丙醇的洗脱能力比甲醇乙腈更强，能把很多这两种溶剂无法冲洗的污染物从色谱柱上洗脱下来。
如果效果仍旧不明显，可以参考色谱柱说明书中的“色谱柱再生”一项里面的说法，使用更加强大的溶剂冲洗，不过这些溶剂通常不是常用的反相液相色谱溶剂。
3.2.2：堵塞色谱柱的冲洗
如果是遇到堵塞的情况，首先要确定堵塞是由于什么原因引起的，如果是由于色谱柱中残留的缓冲盐引起的，这是最万幸的堵塞了，可以尝试用高比例的水相（推荐95%）在较高的温度下冲洗色谱柱。
如果是由于样品原因导致色谱柱堵塞，又要考虑另外的办法，如果是样品中含有太多吸附性很强的物质（有时是复杂样品中的某些杂质，无法通过过滤离心等办法去除）沉积吸附在柱头导致堵塞，可以尝试使用不同的溶剂（对此类物质有较好溶解性的）慢慢冲洗。
如果是由于样品过滤不当或者样品在色谱柱上析出导致某些颗粒杂质堵塞了色
谱柱，除了尝试寻找合适溶剂冲洗之外，只能考虑反冲了，通常，不建议反冲色谱柱，因为可能对色谱柱造成较大损害，所以反冲是迫不得已的死马当活马医的办法，一定要慎用。
做好样品的前处理并使用预柱或在线过滤器才是保护色谱柱的好办法！
3.3：快速冲洗色谱柱
看上去很好很强大的说法，其实很简单，在冲洗色谱柱的时候，可以通过增加流速来缩短冲洗时间，我们已经知道色谱柱冲洗的完全程度是通过体积衡量的，所以提高流速是可以节省下时间的。
但是要特别注意的是，对于堵塞的色谱柱，提高流速可能并不是个很可行的办法...。