试管苗生根

试管苗生根
录入时间:2009-6-15 9:08:16 来源：百度

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试管苗生根
离体繁殖产生大量的芽、嫩梢、原球茎，需进一步诱导生根，才能得到完整的植株。生根属试管繁殖的第三个阶
段，其后栽入土中。这是最后一道微繁工序，也是能否进行大量生产和实际应用的又一重要问题，同时也是商品化生
产出售产品，取得效益的最终关节，应给予高度重视。试管繁殖往往诱导产生大量的丛生芽或丛生茎、原球茎，再转
入生根培养基中生根或直接栽入基质中，进一步长大成苗。试管苗的生根可分为试管内生根和试管外生根两种方式。

1、试管内生根
植物离体培养根的发生都来自不定根。根原基的形成和生长素有关，根原基的伸长和生长则可以在没有外源生长
素下实现。一般从诱导至开始出现不定根时间，快的只需3d—4d，慢的则要3周—4周。植物组织培养中，关于根的
发生规律研究的还不够，尤其是在木本植物培养中，往往芽易诱导并且生长良好，而根则难发生（例如牡丹），故应当
加强这方面的研究。影响植物离体培养中生根的因素很多，有离体材料自身的生理生化状态，也有外部的多种因素。

（1）植物材料 不同植物、不同基因型、同一植株不同部位和不同年龄对分化根都有决定性的影响。生根难易还
与母株所处的生理状态有关，因为取材季节和所处环境条件均有影响。所以试管内若不生根，不要完全从培养中去找
原因，也应在取材时考虑。不同植物生根的一般规律是：木本植物比草本植物难，成年树比幼年树难，乔木比灌木难。

（2）基本培养基 大多数使用低浓度的MS培养基，其中不少使用1/2MS和1/3MS培养基。如许智宏等在无籽西
瓜生根中，用不同浓度的MS培养基（用MS、1/2MS和1/2MS无机盐加铁盐）进行生根对此，结果降低无机盐浓度，
有利于生根，而且根多而粗壮，发根也快，加铁盐则更好。水仙的小鳞茎在1/2MS培养基下才生根。矿质元素对生根
的影响也有一些报道。大量元素中有人认为NH 多可能不利于发根，生根需要磷和钾元素，但不宜太多；而Ca2+多数
报道有利于根的形成和生长。糖的浓度，生根培养时通常使用的是蔗糖，其浓度多数采用低浓度，一般在1%—3%。
如桉树的不定枝发根最适蔗糖浓度为0.25%，马铃薯发根为1%。但也有些植物在高浓度时生根较好，李明军等（1998）
在怀山药试管繁殖中发现3%—9%的蔗糖浓度均能诱导生根，但6%时根粗而发达。

（3）植物生长调节剂 生根培养中使用激素的情况，据报道单用一种生长素的占51.5%，生长素加激动素占20.1%。
按外植体类型归类统计，愈伤组织分化根时，使用萘乙酸最多，浓度在0.02—6.0，以1.0—2.0为多。使用吲哚乙酸+
激动素的浓度范围分别为0.1—4.0和0.01—1.0，而以1.0—4.0和0.01—0.02居多数。而胚轴、茎段、插枝、花梗等材
料分化根时，使用吲哚丁酸居首位，浓度为0.2—10，以1.0为多。可见生根培养多数使用生长素，大都以吲哚丁酸、
吲哚乙酸、萘乙酸单独用或配合使用，或与低浓度激动素配合使用。萘乙酸与细胞分裂素配合时摩尔比在（20—30）：
1为好。由此可见，在不定根形成中，植物激动起着决定性作用，生长素都能促进生根。一般赤霉素、细胞分裂素、乙
烯通常不利于发根，如与生长素配合，一般浓度宜低于生长素浓度。脱落酸（ABA）可能有助于发根。植物生长延缓
剂如多效唑（MET）对不定根的形成也有良好的作用，在诱导生根中所使用的浓度一般为0.1—4.0（李明军，1995）。

（4）植物生长调节剂的使用方法 通常的使用方法是将植物生长调节剂剂预先加入到培养基中，然后再接种材料
使其诱导生根。近年来为促进试管苗的生根，改变了这种做法，而将需生根材料先在一定浓度植物生长调节剂中浸泡
或培养一定时间，然后转入无植物生长调节剂培养基中培养，能显著提高生根率。如将苹果新梢预先在吲哚乙酸溶液
中浸泡1h，这样比预先加到培养基中效果要好。又如将栗的新梢基部1cm处在1.0浓度的IBA溶液中浸泡2min，然后
转入1/2硝酸盐的MS培养基上，可使生根率高达90%，每茎生根数为12.3条。再如将桃新梢浸入100BA溶液中浸2h
后，再转入除去激素、蔗糖和水解乳蛋白的1/2MS培养基上，可诱导生根。

（5）其他物质 有些材料报道培养基中加入一些其他物质，有利于生根。
（6）继代培养 许多作者报道，新梢生根能力随继代时间增长而生根能力增加。如杜鹃茎尖培养，随培养次数的
增加，小插条生根数量逐渐增加，第四代最高，最后达百分之百的生根。
（7）光照 光照强度和光照时数对发根的影响十分复杂，结果不一。一般认为发根不需要光，如胡霓云等发现，
毛樱桃新梢转入1/2LS附加0.1mol/L萘乙酸培养基中经12d暗培养，比不经暗处理的发根率增加20%。据报道4个苹
果品种，叶、节间、根诱导愈伤组织后，转入生根培养，加入NAA，在黑暗中培养，使茎的愈伤组织再生了不定根。
另据报道苹果试管苗经8d暗处理，用1.0 IBA能促进生根，并改善根系质量。

（8）pH值 试管苗的生根，也要求一定的pH值范围，一般在5.0—6.0。据报道pH值显著影响小萝卜幼苗切后侧
根的形成，pH为3.8时，侧根原基为为每平方厘米60条，pH为5.8时则降为每平方厘米18条。水稻离体种子根生长，
随pH值由3.3升高至5.8而加快。

（9）温度 试管苗在试管内生根，或在试管外生根，都要求一定的适宜温度，一般在16℃—25℃，过高过低均不
利于生根。不同植物最适生根温度不同。据报道，草莓继代培养芽的再生是32℃，生根是28℃最好，16℃时根长增加
5mm—8mm，根数为5条，而28℃时根长可增加11mm，产生19条根。温度对马铃薯块茎离体培养物发根也有影响，
发根最适温度高于分枝的最适温度。

2、试管外生根
有些植物种类在试管中难以生根，或有根但与茎的维管束不相通，或根与茎联系差，或有根而无根毛，或吸收功
能极弱，移栽后不易成活，这就需要采用试管外生根法。

试管外生根有以下三种方法：
1、在试管内诱导根原基后再移栽 朱鹿鸣等（1989）报道月季试管苗移栽时易发生机械损伤，成活率低，又不稳
定。用有根原基的试管苗移栽既耐贮运，又能异地移栽，成活率还高（97%）。其方法是剪取丛生芽，转入
MS+0.5BA+0.01NAA中待小芽生长，当长至3cm—4cm时，转入加有0.5NAAMS培养基中，培养7d—10d后，待嫩茎
基部长出根原基后取出栽入营养钵中，5d—6d后自行生根，此根系有根毛，吸收功能好。此法不仅移栽成活率高，而
且可缩短生产周期，还适于长距离运输。一个广口保温瓶可装1000株带有根原基的小苗，转运千里之外再进行移栽，
实现苗木运输移栽的微型化。1984年他们用此法移栽50个品种月季试管苗，成活2万余株。此法简便、易行，不伤根
又便于贮运。在楸树、猕猴桃、山楂等试管苗中也获得了成功。

2、在生根小室进行生根和炼苗 做一个生根小室，不用琼脂和蔗糖，而用透气又保湿的基质如泥炭、蛭石、珍珠
岩、苔藓等，并要人工控制温度、光照、采用人工喷雾，雾滴要细，以提高空气湿度，又不致使叶面有水滴流出。把
剪下长1cm—3cm的嫩茎转入生根小室，经3周—4周培养，即可产生发育良好，具吸收功能的根。其后再栽入温室，
则易成活。国外杜鹃即用此法移栽。杜鹃花的嫩枝在试管内外都能很好地生根，而一种银球花长约1cm的嫩枝，切下
栽入瓶外基质，比试管内根长的更好。生根小室效果好，条件易控制，但成本高，面积小。国外有些商业性实验室用
自动化湿度调节系统，旋转培养，进行生根驯化，取得了良好效果，但因费用很高已不再使用（Preece和Sutter,1991）。

3、盆插或瓶插生根法 巴岩磊等（1986）为解决我国西北干旱地区杨树试管苗难以移栽问题，提出用盆插或瓶插
生根法来简化生根和移栽，节省设备，降低成本，提高移栽成活率。其法是用罐头瓶或盆内装有泥炭或腐殖土与细沙，
每瓶插入20株—30株无根苗，插入深度约为0.3cm—1.2cm，加入1/2MS+1.0—5.0IBA或LAA生根营养液，在一定温
度、湿度及光照下培养，20d后长出新根，30d后二级根长至8cm—12cm时移栽，成活率高而稳定。甘肃农大葡萄脱
毒研究组研制成功葡萄脱毒苗简易快繁技术，用废旧罐头瓶代替三角瓶，用蛭石代替琼脂，用去糖的GN营养液，瓶
口用打了孔的膜包扎，当接入10株—12株二节无根小苗或一节带根小苗，半开放培养，经15d—20d培养能长4cm—
5cm的健壮幼苗，即可栽入沙床。变三步炼苗为一步炼苗，大幅度降低成本，简化移栽过程，在较粗放移栽下也有较
高的成活率，适用于葡萄试管苗的繁殖与移栽。

有些植物可以把试管繁殖的嫩枝当作微型插条，直接入土生根，也能成活。如Berbee等，Chalupa & McCowns，
以及Amos(1981)将杨树、桦木和其他阔叶树试管繁殖的嫩梢，直接栽入泥炭和蛭石基质中，很快生根，并有很高的成
活率。

英国格拉斯哥植物园全国秋海棠中心（1988），用无菌简易快繁技术对秋海棠叶进行离体繁殖获得成功，也是体外
生根和驯化一步完成，还是在带菌条件下完成，认为在植物微繁殖及保存中有广泛的应用前景。