维生素类药物的分析
药物分析-第六章-维生素类药物-xzy-02
主讲人：谢智勇 专 业：药学本科 课 程：药物分析学 教研室：药物分析与质量评价实验室
维生素A的分析
维生素（vitamins）：
维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物 活性物质，人体不能合成维生素。
如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素 缺乏症，而影响人体的正常生理机能。
-CO2
H C CHOH 3 CH2OH
O （戊糖）
-H2O
50℃
O CHO
(糠醛)
N CH
O （蓝色）
N H
(吡咯)
N
（三） UV (BP)
0.01 mol/L HCl
l max 243nm
H lmax 245nm OH- lmax 265nm
17
维生素C的分析：结构与性质
C6H2OH H *C OH
5
O
*4
1O
32
HO
OH
1. 溶解性：易溶于水 2. 旋光性：4个光学异构体 3. 水解性：强碱性下水解 4. 酸性：能与碱呈盐 5. 强还原性： 6. 糖类的性质 7. UV：λmax = 243nm
2 维生素A的分析
4.1 结构与性质 4.2 鉴别试验 4.3 杂质检查 4.4 含量测定
2.1 结构与性质 2.2 鉴别试验 2.3 杂质检查 2.4 含量测定
3 维生素B1的分析 3.1 结构与性质 3.2 鉴别试验 3.3 含量测定
5 维生素E的分析
5.1 结构与性质 5.2 鉴别试验 5.3 杂质检查 5.4 含量测定
pKa = 4.17
pKa = 11.57
18
二 维生素C：鉴别方法
药物分析维生素类药物的分析
在方法验证的基础上，可构建维生素类药物分析的评价指 标体系，包括定量限、检测限、回收率、重复性、稳定性 等指标，以全面评价分析方法的性能。
持续改进方向和目标设定
持续改进方向
针对维生素类药物分析过程中存在的问题和 不足，可进一步改进样品前处理方法、优化 分析条件、提高检测灵敏度等，以不断提高 分析结果的准确性和可靠性。
数据处理和结果表达技巧分享
数据处理
对HPLC和UV-Vis法得到的数据进行整理、归纳和统计 分析，包括峰面积、保留时间、浓度等参数的计算和 处理。
结果表达
将分析结果以图表形式呈现，如色谱图、标准曲线图、 含量分布图等，使结果更加直观、易于理解。同时，对 分析结果进行解释和说明，提出改进意见和建议。
在选择维生素类药物的标准品时，应确保其 纯度高、稳定性好，且具有代表性。同时， 应关注标准品的来源和溯源性。
使用注意事项
在使用标准品时，需按照规定的条件进行保 存和使用，避免污染和降解。此外，应定期 对标准品进行复验和更新。
检测方法验证及评价指标体系构建
要点一
检测方法验证
要点二
评价指标体系构建
为确保维生素类药物分析方法的准确性和可靠性，需进行 方法学验证，包括专属性、线性、范围、准确度、精密度 等指标的考察。
质量控制体系建立及实施情况介绍
质量控制体系
为确保维生素类药物分析结果的准确性和可靠性，需建立全面的质量控制体系，包括样 品采集、前处理、分析测试、数据处理等各个环节。
实施情况
目前，质量控制体系已在多个实验室得到广泛应用，有效提高了维生素类药物分析的准 确性和一致性。
标准品选择与使用注意事项
标准品选择
通过对该维生素类药物的定性、定量分析，评估其质量 稳定性和一致性，为药物研发、生产和监管提供科学依 据。
维生素类药物的分析方法
（3）维生素A在光照下产生的无活性的聚合物：鲸醇。 （4）维生素A的异构体等： 以上这些杂质在 310nm~340nm 的波长范围内有吸收， 所以干扰维生素A的测定。
12
5. 合成的维生素A和天然鱼肝油中的维生素A均为酯式
维生素A，如供试品中干扰测定的杂质较少，能符合下 列第一法测定的规定时，可用溶剂溶解供试品后直接 进行测定，否则应按第二法，经皂化提取除去干扰后 测定。
pH不同的溶液，在247nm处分别测定差示吸收值
（ΔA）。以浓度C为横坐标，以差示吸收值ΔA为纵坐 标绘制标准曲线。
30
样品的测定 取本品20片，精密称定，研细。精密称取适量粉末，
（2）反应介质需无水 （3）温度对呈色强度的影响很大 （ 4）本反应并非维生素 A专属，在相同条件下，某些有关物质均与
三氯化锑显蓝色，干扰测定，常使测定结果偏高。
（ 5 ）三氯化锑试剂有强的腐蚀性，易损坏皮肤和仪器，使用时应 严加注意。
15
（三）高效液相色谱法
采用RP-HPLC法同时测定人血清中维生素 A和维生素E的含量。 根据不同病理生理状态下人血清中维生素A、E的浓度，寻求弄清 与某些疾病的关系，为临床治疗学、营养学等研究提供参考。 1. 仪器与色谱条件 色 谱 柱 为 C18 ； 流 动 相 为 甲 醇 - 水 （ 96:4 ） ； 流 速 为 1.2ml/min。内标物为维生素A醋酸酯。 2. 分析用样品液 对照品：维生素A，维生素E，维生素A醋酸酯
维生素类药物的分析方法：
生物法 微生物法 化学法 物理化学法
2
第一节
维生素A的分析
维生素A 包括
第十四章维生素类药物的分析AnalysisofVitamines
CH2OH
N 50℃
-3H2OCH (CHOH)2 C H
O CHO
OH
O
N
N
H
糠醛
戊糖
鉴别 利用其还原性
硝酸银（银镜） 2.6-二氯靛酚(褪色） 高锰酸钾（褪色） 亚甲蓝（蓝色褪去） 磷钼酸（钼蓝） 斐林氏溶液（红色氧化亚铜）
（1）与硝酸银反应 本品→加水溶解→加硝酸银试液 →银黑色沉淀（ChP、BP采用）
第二法： a、λmax不在326～329nm b、校正与未校正吸收度比较<-15%、>+3%
样品：
醇制KOH/ Et2O/提取 挥散 残渣 溶于异丙醇中
9～15IU/ml
(一)紫外法（三点校正法）
①λmax323－327nm之间 300、310、 325及334nm A300/A325≤0.73，计算A325（校正） a、校正在未校正吸收度≤土3% 以未校正吸收度计算 b、>土3%，以校正吸收度计算
第一节
维生素A的分析
（二） 鉴别 1. Carr-price反应（三氯化锑） 三氯化锑的氯仿液与VA作用产生蓝色 渐变成紫红色
①无水：三氯化锑水解、VA不溶 ②无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用
第一节
维生素A的分析
2.紫外法 本品加无水乙醇－盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm单一吸收峰(VA) 水浴加热30s，迅速冷却，再扫描 348、367和389nm三个尖锐吸收峰(去水VA)
Vit B1
Thiamine Hydrochloride
CH3 N NH2 S CH2CH2OH
HCl
N
N
CH2 Cl-
CH3
NaOH
CH3
药物分析 第09章 维生素类药物的分析
ChP 片剂、注射剂
g/100ml
E11c%m = 421 A = ECL
（每片）相当于标示量的%=
E 1 1c % A m 10W 0稀 1 释 平 标 度 均 示 1 片 量 0% 0
g
稀释倍数 稀1释度
规格 g/片
（三） 硅钨酸重量法
1、 重量法特点
准确度高 灵敏度低 操作繁琐 设备简单
（三） 其他反应
S元素反应
V iN t B a N O P a H A b S c P b
HA N O3 g N AO g 白 C N H N lH H OO
K 2 HH + 4 g I淡[黄 B ]H 2H4g
I 2 H + K I 红 [B 色 ]H I2 I
硅 H 钨 + 酸白
色[B]2SiO2OH2
12WO 34H2O
苦 H +酮 酸 白 色 扇 形
橙红色
强氧化剂
H3C
CH3 O
O O
H3C HO
HNO3
CH3 O
CH3
CH3 C16H33
生育酚
CH3 C16H33
生育红（橙红色）
（二） 三氯化铁－联吡啶反应
VitE
K△OH
生育酚
Fe 3
[O]
对 生育醌
Fe 2 联吡啶 红色
H3C
CH3 O
CH3 C16H33
2×337.27
3479.22
换 算 2 因 M V数 i1t B 233 .27 70.19 M 沉淀34.2729
3、 测定方法
药物分析-14维生素类药物的分析
§14 维生素类药物的分析·脂溶性维生素：VitA、D2、D3、E、K1等·水溶性维生素：VitB族（B1、B2、B6、B12）、VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺一、维生素A中国药典收载的维生素A是指人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。
（一）结构与性质1.具有一个共轭多烯侧链的环己烯·具有UV吸收·存在多种立体异构化合物2.不稳定性（1）易发生脱氢、脱水、聚合反应·脱氢维生素A（A2），脱水维生素A（A3）效价低于维生素A ·鲸醇（维生素A醇的二聚体）无生物活性（2）共轭多烯侧链易被氧化维生素A应凉暗处保存，充氮气或加抗氧剂★3.与三氯化锑发生呈色反应4.溶解性不溶于水，乙醇中微溶；易溶于有机溶剂和植物油等（二）鉴别试验1.三氯化锑反应条件: 无水（SbCl3水解），无醇（和碳正离子作用使其电荷消失）。
2.UV法（BP2003）VitA有一个吸收峰，盐酸催化下加热30s生成脱水VitA，有三个吸收峰，且红移（向长波长位移）。
3.TLC法·BP 对照品法（供试品与不同VitA酯类），显色剂：三氯化锑·USP 规定斑点颜色和Rf值，显色剂：磷钼酸（氧化剂）12（三）含量测定 ★1.三点校正法 （1）原理①杂质的吸收在310~340nm 波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；②物质对光的吸收具有加和性。
（2）波长的选择λ1为VitA 的λmax ；λ2、λ3为分别在λ1的两侧各选一点 ①等波长差法——VitA 醋酸酯nm 12340316328=∆λλλλ，、、)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）②等吸收比法——VitA 醇33431032576A A A == 334310325325260.4555.2815.6A A A A --=（校正）（3）测定方法①直接测定法（等波长差法）——高纯度维生素A 醋酸酯 Ⅰ核对λmax/329~326max 328改用造化法与规定值比较求否是−→−−→−∈A A nm i λ Ⅱ计算吸收度比及比值差规定吸光度比值-328/A A iⅢ判断差值是否超过±0.02，确定用A 或A 校正%15%3)3%%,15(]%3,%3[32802.032832832802.0计算用改用皂化法＜或＞计算用计算用、计算无超过（校正）（校正）有超过A f f A f A f f A −−−−→−→-+→--∈→+-∈→−−−−→−±±)2(52.3340316328328A A A A --=（校正）%100328328328⨯-=A A A f （校正）Ⅳ求（样品）%11cm E lc AE cm ⨯=)%(%11（样品）·注意：（纯品）（样品）%11%11cm cm E E ≠，c 为混合样品的浓度。
第九章维生素类药物分析
1、具紫外吸收 2、易氧化变质 3、能与三氯化锑呈色 4、水中不溶。
第一节 维生素A的分析
二、鉴别试验
1. 三氯化锑反应
VA 蓝色 → 紫红色 CHCl
SbCl3
3
2. 紫外吸收光谱
VA的无水乙醇溶液在328nm有最大吸收。 3、TLC
第一节 维生素A的分析
例：VA和其标准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷—乙醚（80：20） 板：硅胶G 显色：SbCl3T.S. Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA棕榈酸酯 0.75
第一节 维生素A的分析
A300 A316 A328 A340 A360 ：0.354 ：0.561 ：0.628 ：0.523 ：0.216
A300 /A328 A316/A328 A328/A328 A340/A328 A360/A328
Ai A 328
：0.555 ：0.907 ：1.000 ：0.811 ：0.299
换算因数
IU / g （纯品）
1% E1cm （纯品）
1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯 1g的维生素A醋酸酯就相当于
1,000,000 2,907 ,000 IU 0.344
% 1530（环己烷、 维生素A醋酸酯 E1cm
328 ）
第一节 维生素A的分析
2907000 换算因子 1900 1530
H3C N N NH2 CH2 N+ S CH2CH2OH
. Cl-.HCl
CH3
1、水中溶解 2、具紫外吸收 3、碱性中可被氧化 4、两个杂环与生物碱沉淀试剂反应
第二节 维生素B的分析
二、鉴别试验： 1、硫色素反应：
维生素B1 铁氰化钾 硫色素
小单元九 维生素类药物的分析 - 卫考在线-卫生行业考试辅导
小单元九维生素类药物的分析细目1 维生素B1及其制剂的分析要点(1)维生素B1的鉴别方法、杂质检查项目和方法、含量测定方法(2)维生素B1片、维生素B1注射液的含量测定方法细目2 维生素C及其制剂的分析要点(1)维生素C的鉴别方法、杂质检查项目和方法、含量测定方法(2)维生素C片、维生素C注射液的鉴别、检查和含量测定方法细目3 维生素E的分析要点维生素E物理常数的测定、鉴别方法、杂质检查项目和方法、含量测定方法细目4 维生素K1及其制剂的分析要点(1)维生素K1物理常数的测定、鉴别方法、杂质检查项目和方法、含量测定方法(2)维生素K1注射液的含量测定方法内容精要一、维生素B1及其制剂的分析1.结构、性质与分析方法的关系维生素B1 (又称盐酸硫胺)是由氨基嘧啶环通过亚甲基连接而成的季铵化合物，在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶；噻唑环上季铵及嘧啶环上氨基为两个碱性基团，具有碱性，药物为其盐酸盐，可利用其碱性采用非水滴定法测定含量；含有共轭体系，具有紫外吸收，其盐酸溶液的最大吸收波长为246nm，可用于定性定量分析；含有氯离子，可发生氯化物的反应用于鉴别；在碱性溶液中，可被铁氰化钾等氧化剂氧化成硫色素，溶于正丁醇中呈蓝色荧光而用于鉴别。
结构如下：2.鉴别(1)硫色素反应硫色素反应属于维生素B1的专属鉴别试验。
鉴别试验名称、原理和方法。
(2)氯化物的鉴别维生素B1的氯化物的鉴别属于一般鉴别实验。
鉴别试验名称、原理和方法。
3.检查(1)硝酸盐特殊杂质名称、检查原理和方法。
(2)总氯量特殊杂质名称、检查原理和方法。
(3)其他酸度、溶液的澄清度与颜色、硫酸盐、干燥失重、炽灼残渣，铁盐和重金属等。
4.含量测定(1)维生素B1的含量测定采用非水溶液滴定法测定维生素B1含量的原理、方法、注意事项及计算。
采用非水溶液滴定法测定维生素B1含量(％)的计算公式如下：含量(%)=30()10100%(1%)V V T F W --⨯⨯⨯⨯-干燥失重式中，V 和V 0为样品测定和空白试验消耗滴定液的体积(ml)；T 为滴定度(mg/ml)；F 为浓度换算因数；W 为取样量(g)。
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共轭多烯侧链 易被氧化
VitA 紫外线、O2、氧化剂
环氧化物
[O]
VitA醛 VitA酸
❖ △或有金属离子存在时氧化↑
三氯化锑反应（ChP2005鉴别试验）
VitA SbCl3 蓝色 紫红
CHCl3
条件：无水无醇
第二节 维生素E
O
HO
苯并－二氢吡喃醇
CH3
R2
O
HO R1
名称 α-生育酚 β-生育酚 γ -生育酚 δ -生育酚
* *
*
R1 CH3 CH3 H H
R2 CH3 H
CH3 H
相对活性 1.0 0.5 0.2 0.1
H3C
CH3 O CH3
H3C CO O
CH3
CH3
CH3
CH3 CH3
dl－α－生育酚醋酸酯
一、结构与性质
苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链 1、UV
2、乙酰化的酚羟基：易水解
H+ or OH-
VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。
维生素A简介：
R : -H -COCH3 -COC15H31
维生素A醇 维生素A醋酸酯 维生素A棕榈酸酯
为一个具有共轭多烯侧链的环己 烯共轭多烯结构，可以形成维生素 A醇或其酯。
❖ 具有UV吸收
❖ 存在多种立体异构化合物
❖ 易发生脱氢、脱水、聚合反应
VitA2 VitA3
生物活性物质
10%油、脂肪
及甜品
10%乳类制品
10%肉类、蛋类 制品
18%蔬菜
12%水果
40%谷类和麦类主食
►人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏 症，而影响人体的正常生理机能。
►例如： VA——夜盲症 VB1——脚气病 VD缺乏——佝偻病
分类 按溶解性分 脂溶性 VitA、D2、D3、 E、K1 等 水溶性 VitB族(B1、B2、B6、B12)
]
HI
I2
硅钨酸
H+
白色
[ B ]2 SiO2 OH 2
12WO3 4 H2O
苦酮酸
H+
白色扇形
三、杂质检查
1、酸度 控制pH2.8~3.3
2、溶液澄清度及颜色 水溶液应澄清无色
3、硝酸盐 靛胭脂法。
4、铁盐 比色法，限量
0.002% 5、干燥失重
干燥失重不超过 5.0%。
四、含量测定 （一）非水溶液滴定法（原料药）
第九章 维生素类药物的分析
概 述 维生素E 维生素B1
维生素A 维生素C 练习与思考
第一节 概 述
维生素： 是维持人体正常代谢机能所
必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。
主要内容
►维生素A ►维生素D ►维生素E ►维生素B ►维生素C
脂溶性 水溶性
►维生素 维持人体正常生理机能所必须的
三、杂质检查
1. 酸度 2. 以NaOH滴定液（0.1mol/L）体积控
制。 2. 游离生育酚
原理
生育酚 + 2Ce4+ 2Ce3+ + 对 - 生育醌
T CM n
（M生育酚= 430.8）
T 0.01 430.8 2.15（ 4 mg / ml） 2
例 取本品0.10g，加无水乙醇5ml 溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸 铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸 铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。
限量 ≤2.15％
限量% V T 100% W
限量% 1.0 0.002154 100% 0.1
2.15%
四、含量测定
（一） GC法（2005） 1、GC特点
选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好
挥发性低、不稳定、 极性强→衍生化易 受样品蒸气压限制
2、结果计算 内标加校正因子法：
第三节 维生素B1
B Cl- HCl + HClO Hg（Ac） B ClO- HClO
喹那啶红－亚甲蓝（紫红→天蓝）
溶剂——冰醋酸； 指示剂——喹哪定红-亚甲蓝； 滴定剂——高氯酸、醋酸汞； 终点——天蓝色
反应摩尔比为1：2
T c M 0.1 337.27
n
2
16.86mg / ml
（二） UV法 （片剂、注射 剂）
ChP 片剂、注射剂
g/100ml
E11c%m = 421 A = ECL
（每片）相当于标示量的%=
A E11c%m×
×磢 D 100 W
× 平标均示片量重× 100%
g
规格：g/片
第四节 维生素C
C6H2OH
H C OH 5 O
4
1O
32
HO
OH L－抗坏血酸
一、结构与性质 （一）溶解性
1、易溶于水 2、水溶液呈酸性
（二）还原性
二烯醇结构
CC OH OH
二烯醇结构
O
CC
OO
二酮基结构
CH2OH
CH2OH
H C OH O O
HO OH
HO CH CHOH CO
有活性
[O] CH2OH H+ OH- C O
H C OH O O
COONa H
无活性
O
O
有活性
（三）具糖的性质
结构与糖类相似
糖类的显色反应
△H+
脱 水
与生物碱↓→↓
（五）盐酸根 呈氯化物的反应，用于鉴别。
二、鉴别试验 （一）硫色素反应（ChP2005）
VitB1 NaOH -H2O 环合 K3Fe[O（] CN）6 硫色素 正丁醇 蓝色荧光 OHH-+荧光消失
（二）沉淀反应
K2HgI4
H+
淡黄
[
B
]
H2HgI4
I2 -KI
H+
红色
[
B
H3C N N
HCl
NH2 S
+
CH2 N
CH2CH2OH CH3
Cl-
氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)
一、结构与性质 （一）溶解性
1、易溶于水 2、水溶液呈酸性
（二）UV 共轭双键
λmax = 246nm
（三）硫色素反应
Vit B1OH- O 硫色素 正丁醇 蓝色光
（四）嘧啶环 —— 噻唑环 ——
HO CH3
生育酚
3+
Fe
弱氧化 剂
[O]
CH3
H3C
O OH CH3
C16H33
O
对-生育醌
CH3
N
2
Fe
+ +
3
N
N Fe
N
2+ 3
血红色
（三）UV法（2000）
0.01%无水乙醇中 λmax = 284nm λmin = 254nm
E11c%m= 41.0～45.5
（四）IR法（2005）
VitE △
生育酚
[O]
醌型化合物
杂质，需检查
二、鉴别 （一）硝酸反应
Vit E
HNO3 75℃15′
生育酚
[O]
生育红
橙红色
（二）三氯化铁－联吡啶反应
CH3 CH3-COO
CH3 CH3
O
CH3
C16H33
KOH
C3H
C3H O
HO C3H
C3H C1H 633
H3C
CH3 O
CH3 C16H33
糠醛 糠醛衍生物
酚类
显色
VitC H+ 脱 水 糠醛 吡 咯 蓝色
50℃
（四）酸性（一元酸）
C3－OH的 pKa = 4.17
C2－OH的 pKa = 11.57