中国药典与英美药典对高效液相色谱法的叙述对比
高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用
医药制剂医药卫生2015年8月·109·高效液相色谱法简介及其在药品检验中的应用杨芳铜仁市食品药品检验所，贵州铜仁 554300摘要：高效液相色谱法是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法，已在药品检验中获得广泛应用，发挥巨大作用。
本文介绍了高效液相色谱法的有关知识、新方法和技术以及在药品检验中的应用。
关键词：高效液相色谱法；药品检验；概述中图分类号：R927 文献标识码：A 文章编号：1671-5608（2015）08-0109-011 前言色谱法最初仅仅是作为一种分离手段，是根据混合物中不同组分在流动相和固定相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些组分在两相间进行反复多次的分配，从而得到分离。
直到五十年代，人们才开始把这种分离手段与检测系统连接起来，成为一种独特的分析方法。
是近几年来分析化学中最富活力的领域之一，也是生命科学和制备化学中广泛应用的一种手段。
高效液相色谱分析方法不仅在分离速度、分离效能，检测灵敏度、自动化等方面具有着巨大的优势，还具有样品适用范围广（特别对热不稳定物，难气化的样品）等优点。
因此它已在仪器分析法中占有愈发重要的地位，是药品质量控制的关键技术之一。
2 高效液相色谱法的分类2.1 吸附色谱法以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。
使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。
在吸附色谱中，不同的组分因受固定相吸附力的不同而被分离。
组分的极性越大，固定相的吸附力越强，则保留时间越长。
流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。
2.2 液-液分配色谱法液-液分配色谱的固定相（覆盖于填料表面的溶剂膜）和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相中，不同的组分因分配系数（K）的不同而被分离。
按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。
（1）正相色谱法，固定相极性大于流动相极性的分配色谱法称为正相色谱法。
2020年中国药典运用高效液相色谱法测定含量的品种
2020年我国药典是一部权威的药品标准，其中包含了大量的药品、原料药和药用辅料的规范。
药品的质量和安全性对于人们的生命健康至关重要，而药典中的含量测定方法是评价药品质量的重要手段之一。
而高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）作为一种快速、准确的分析方法，在药典中得到了广泛的应用。
本文主要介绍了2020年我国药典中运用高效液相色谱法测定含量的品种。
一、什么是高效液相色谱法高效液相色谱法是一种利用溶液在固定相载体上进行分配平衡的色谱分析方法。
它利用流动相的不同速度使样品中的成分在固定相上分离出来，再通过检测器对各个成分进行检测和定量。
该方法具有分离效率高、灵敏度高、准确性高、重现性好等优点，因此被广泛应用于药品质量控制领域。
二、2020年我国药典中运用高效液相色谱法测定含量的品种1.对乙酰氨基酚片对乙酰氨基酚片是一种用于退烧和镇痛的常用药品，其含量测定需要高效液相色谱法进行。
根据2020年我国药典，对乙酰氨基酚片中对乙酰氨基酚的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，并以此作为评价药物质量的重要指标。
2.阿莫西林胶囊阿莫西林是一种广谱抗生素，常用于治疗呼吸道、泌尿生殖系统和消化道感染等疾病。
2020年我国药典规定，阿莫西林胶囊中阿莫西林的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，以确保药品的质量。
3.复方甘草酸苷片复方甘草酸苷片是一种常用的抗炎、抗过敏药品，其含量测定也需要采用高效液相色谱法进行。
2020年我国药典规定，复方甘草酸苷片中甘草酸二钾的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，并以此作为评价药物质量的重要指标。
4.硫酸链霉素滴眼液硫酸链霉素滴眼液是一种用于治疗眼部感染的药品，其含量测定也需要采用高效液相色谱法进行。
2020年我国药典规定，硫酸链霉素滴眼液中链霉素的含量可以采用高效液相色谱法进行测定，以确保药品的质量。
5.丙溴定胶囊丙溴定是一种中枢神经系统调节药，常用于治疗癫痫等疾病。
中国、美国、欧洲药典比较
姓名：徐涛学号：14211020462 专业：中药生物技术学《中国药典》、《美国药典》、《欧洲药典》比较1、各国药典概况1.1 历史沿革《中国药典》英文名称Pharmacopoeia of The People’s Republic of China；简称Ch .P。
1950年4月，成立了第一届中国药典编纂委员会，药典委员会分设名词、化学药、制剂、植物药、生物制品、动物药、药理、剂量8个小组，第一版《中国药典》于1953年由卫生部编印发行。
1957年出版《中国药典》1953年增补本。
1953年药典共收载药品531中，其中化学药215种，植物药与油脂类65种，动物药13种，抗生素2种，生物制品25种，各类制剂211种。
1965年1月26日卫生部颁布《中国药典》1963年版（第二版）发行通知和实施办法。
本版药典收载药品1310种，分一、二部，各有凡例和有关的目录，一部收载中医常用的中药材446种和中药成方制剂197；二部收载化学药品667种。
此外，一部记载药品的“功能主治”，二部增加了药品的“作用与用途”。
1979年10月4日卫生部颁布《中国药典》1977年版（第三版），自1980年1月1日起执行。
本版药典共收载药品1925种，其中一部收载中草药材（包括少数民族药材）、中草药提取物、植物油脂以及单味药材制剂等882种，成方制剂（包括少数民族药成方）270种，共1152种；二部收载化学药品、生物制品等773种。
1985年9月出版《中国药典》1985年版（第四版），1986年4月1日起执行。
本版收载药品1489种，其中一部收载中药材、植物油脂及单味制剂506种，成方制剂207种，共713种，二部收载化学药品、生物制品等776种。
1990年12月3日卫生部颁布《中国药典》1990年版（第五版），自1991年7月1日起执行。
1990年版的第一、第二增补本先后于1992、1993年出版，英文版于1993年7月出版。
中国药典2020 高效液相色谱
中国药典2020 高效液相色谱高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、检测、定量化合物的分析技术。
它通过样品在固相填充柱（也称为色谱柱）中与流动相相互作用，达到物质的分离和检测的目的。
高效液相色谱的主要设备包括进样器、泵、检测器和色谱柱。
进样器负责将样品注入到色谱柱中，泵则负责向色谱柱内注入流动相，检测器则负责检测和记录某特定物质的浓度，并把数据传回计算机。
色谱柱则是样品分离的关键部分，它由一种或多种材料组成，使样品能够在流动相中以一定速率流过。
高效液相色谱通常用在检测复杂样品中的化合物，如食品、药品、生物样品等。
它的主要特点是高分离能力、高灵敏度、高准确性和高重现性。
它能够检测到微量量级以下的化合物，并且很容易从复杂矩阵中提取所需的物质。
高效液相色谱的工作原理是基于化学物质的亲性性质。
样品经过某种预处理后，以一定的注入速度进入色谱柱中。
在色谱柱中，样品物质会和填充柱内固定的某种材料作用，根据化合物的特性不同，有些化合物会与某些色谱柱材料形成亲和作用，有些则会与其他材料发生反应，并根据这些作用发生时的瞬间不同时刻，生成不同的荧光信号。
高效液相色谱的流动相包括两种，一种叫极性流动相，即水相。
另一种叫做非极性流动相，即有机溶剂。
在高效液相色谱的运用过程中，这两种流动相经常会互相使用，互相搭配，以达到更好的分离效果。
总结来说，高效液相色谱是一种分离、检测和定量化合物的重要技术，其优点包括高分离能力、高灵敏度、高准确性和高重现性等。
在现代科学和工业生产中，高效液相色谱不仅在药品、食品、生物样品分析方面得到广泛应用，而且还在环保、冶金、化工等其他关键领域起到了巨大的作用，使科技更加先进，生产更为精准。
中国药典2010-高效液相色谱
附录Ⅵ D 高效液相色谱法高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件所用的仪器为高效液相色谱仪。
仪器应定期检定并符合有关规定。
（1）色谱柱反相色谱系统使用非极性填充剂，常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷相等）也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含炭量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
分析分子量小于2000的化合物应选择孔径在15nm（1nm=10Å）以下的填料，分析分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，普通分析柱的填充剂粒径一般在3~10µm之间。
粒径更小（约2µm）的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm）。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准。
以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40℃，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60℃流动相的PH值应控制在2~8的。
当PH大于8时，可使载体硅胶溶解；当PH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
当色谱系统中需使用PH值大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包裹聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶基键合填充剂等；当需使用PH值小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶填充剂、有机-无机杂化填充剂等。
高效液相色谱法
高效液相色谱法高效液相色谱法(《中国药典》2010年版二部附录V D)系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带人柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局"液相色谱仪检定规程"定期检定并符合有关规定。
1.1 色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶(如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等〉也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换色谱系统使用离子交换填充剂；分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。
填充剂的性能(如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等)以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。
孔径在15nm(lnm= lOA)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10µm之间。
粒径更小(约2µm)的填充剂常用于填装微径柱(内径约2mm)。
使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。
当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。
以硅胶为载体的键合固定相的使用温度通常不超过40°C，为改善分离效果可适当提高色谱柱的使用温度，但不宜超过60°C。
流动相的pH值应控制在2～8之间。
当pH值大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH值小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
《中国药典》2015版通则0512高效液相色谱法
通则0512高效液相色谱法高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。
超高液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
中国药典-高效液相色谱PPT医学课件
21
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪 器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质 的峰面积或峰高，按下式计算含量：
Ax 含量（Cx）＝f·─────
式中 t R2为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR1为相邻两峰中前一峰的保留时间； W1、W2及W1，h/2、W2,h/2分别为此相邻两峰的峰宽及半高峰宽。 当对测定结果有异议时，色谱柱的理论板数（n）和分离度（R）
均以峰宽（W）的计算结果为准。
18
重复性
用于评价连续进样中，色谱系统响应值的重复 性能。采用外标法时，通常取各品种项下的对 照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其 峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％ ；采用内标法时，通常配制相当于80％、100 ％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标 溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进 样2次，计算平均校正因子。其相对标准偏差 也应不大于2.0％。
25
美国药典还讨论了多波长检测器，特别是二极管阵列多波长检测 器的特点，指出，二极管阵列检测器比固定波长检测器或可变波 长检测器的信噪比低，不适宜于低浓度化合物的分析。在讨论示 差折光检测器中，认为该检测器不如紫外光检测器灵敏，且受溶 剂组成、流速、温度变化的影响大，要得到满意的基线，需用参 比柱。
由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十 八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动 相中有机溶剂的比例通常应不低于5%，否则C18链的 随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳 定。
14
二、系统适用性试验
《中国药典》2015版通则0512高效液相色谱法
通则0512高效液相色谱法高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。
色谱柱内径一般为3.9～4.6mm，填充剂粒径为3～10μm。
超高液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。
（1）色谱柱反相色谱柱：以键和非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。
常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂优十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。
常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。
氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反向色谱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。
有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。
手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
色谱柱的内径和长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。
温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。
为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。
残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相的pH值一般应在2～8之间。
残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH值小于2或大于8的流动相。
（2）检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
2020版《中国药典》三部通则3204收载的戊二醛残留量测定法(高效液相色谱法)
戊二醛残留量测定法（高效液相色谱法）《中国药典》（2020版）的三部通则3204中收载了戊二醛残留量测定法，采用了高效液相色谱法（HPLC）进行检测。
本文将对该测定法进行详细介绍。
戊二醛是一种常用的消毒剂，也被广泛应用于医疗、制药和食品工业等领域。
然而，由于其具有一定的毒性和致癌性，对其残留量进行监测和控制非常重要。
《中国药典》（2020版）的三部通则3204中收录的戊二醛残留量测定法就是用于这一目的。
该测定法采用高效液相色谱法（（HPLC）进行分析。
HPLC是一种广泛应用于药物分析和质量控制的分析技术，其特点是分离效果好，灵敏度高。
在戊二醛残留量的测定中，HPLC 技术可以准确、快速地分离和测定药物样品中的戊二醛。
以下是该测定法的主要步骤和操作流程：1.（样品准备：将待测样品进行合适的前处理，例如提取、固相萃取等，以获得戊二醛的纯化样品。
2.（色谱条件设置：根据具体仪器和柱的性能，优化色谱条件，包括流动相、柱温、检测波长等参数的选择与调整。
3.（样品注射：将纯化的样品注入到色谱仪中，一般采用自动进样器进行精确控制。
4.（色谱分离：在设定的色谱条件下，样品中的戊二醛与色谱柱发生相互作用，分离出各组分。
5.（检测和定量：利用紫外可见光检测器检测样品中戊二醛的吸收峰，并根据标准曲线或外标法进行定量分析。
6.（结果分析：计算出样品中戊二醛的浓度，并与相应的规定限度进行比较，判断样品是否符合要求。
通过上述步骤，该测定法能够准确、可靠地测定样品中的戊二醛残留量，为药物生产等领域的质量控制提供重要参考。
需要注意的是，该测定法的操作人员应具备一定的理论知识和实验技能，确保操作的准确性和可重复性。
同时，还需要严格控制实验条件和各项参数，以确保测试结果的准确性和可信度。
综上所述，《中国药典》（2020版）部通则3204中收载的戊二醛残留量测定法采用了高效液相色谱法（（HPLC），该方法具有准确、灵敏的特点，对戊二醛残留量进行测定具有重要意义。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高效液相色谱法中国药典（2005年版附录VD）高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。
注入的供试品，由流动相带人柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。
1 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。
仪器应定期检定并符合有关规定。
（1）色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。
反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用。
正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。
离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。
填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。
孔径在15nm以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。
以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用pH2-8的流动相。
当pH大于8时，可使载体硅胶溶解，当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。
当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等，当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。
（2）检测器最常用的检测器为紫外检测UV，其他常见的检测器有二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。
紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的化合物均有响应；蒸发光散射检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关；二极管阵列检测器可以同时记录待测物在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱鉴定和色谱峰的纯度检查。
紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测溶液的浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测溶液的浓度通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。
不同的检测器，对流动相的要求不同。
如采用紫外检测器，所用流动相应至少符合紫外-可见分光光度法项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。
蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。
（3）流动相由于C18链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常应不低于5%，否则C18链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。
各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组成、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。
但对某些品种，必须用特定牌号的填充剂方能满足分离要求者，可在该品种项下注明。
2 系统适用性试验色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。
其中，分离度和重复性是系统适用性试验中更具实用意义的参数。
按各品种项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品对色谱系统进行试验，应符合要求。
如达不到要求，可对色谱分离条件作适当的调整。
（1）色谱柱的理论板数（N）在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间和半高峰宽, 计算色谱柱的理论板数。
（2）分离度（R）无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。
除另有规定外，定量分析时分离度应大于1.5。
（3）重复性取各品种项下的对照溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0％。
也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80％，100％和120％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种不同浓度的溶液，分别至少进样5次，计算平均校正因子。
其相对标准偏差应不大于2.0％。
除另有规定外，峰高法定量时，T应在0.95-1.05% 之间。
峰面积法测定时，T值偏离过大，也会影响小峰的检测和定量的准确度。
3 测定法（1）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液。
取一定量注入仪器，记录色谱图。
测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，计算校正因子：当配制校正因于测定用的对照溶液和含有内标物质的供试晶溶液，使用等量同一浓度的内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称(量)取。
（2）外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注人仪器，记录色谱图，测量对照晶溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环或自动进样器进样为好。
（3）加校正因子的主成分自身对照法测定杂质含量时，可采用加校正因子的主成分自身对照法。
在建立方法时，按各品种项下的规定，精密称（量）取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，按上述（2）法计算杂质的校正因子。
此校正因子可直接载入各品种项下，用于校正杂质的实测峰面积。
这些需作校正计算的杂质，通常以主成分为参照采用相对保留时间定位，其数值一并载入各品种项下。
测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度，将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节检测灵敏度（以噪音水平可接受为限）或进样量（以柱子不过载为限），使对照溶液的主成分色谱峰的峰高约达满量程的10-25％或其峰面积能准确积分［通常含量低于0.5％的杂质，峰面积的相对标准偏差（RSD）应小于10％；含量在0.5-2％的杂质，峰面积的R SD应小于5％；含量大于2％的杂质，峰面积的RSD应小于2％。
然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品溶液的记录时间，除另有规定外，应为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积，分别乘以相应的校正因子后与对照溶液主成分的峰面积比较，依法计算各杂质含量。
（4）不加校正因于的主成分自身对照法当没有杂质对照品时，也可采用不加校正因子的主成分自身对照法。
同上述（3）法配制对照溶液并调节检测灵敏度后，取供试品溶液和对照溶液适量，分别进样，前者的记录时间，除另有规定外，应为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质含量。
若供试品所含的部分杂质未与溶剂峰完全分离，则按规定先记录供试品溶液的色谱图Ⅰ，再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。
色谱图Ⅰ上杂质峰的总面积（包括溶剂峰），减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积，即为总杂质峰的校正面积。
然后依法计算。
（5）面积归一化法由于峰面积归一化法测定误差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供试品中的杂质含量。
除另有规定外，一般不宜用于微量杂质的检查。
方法是测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积及其之和占总峰面积的百分率。
美国药典第24版通法中的高效液相色谱法，简要说明了本法的特点，指出了本法用于大多数药物分析是以分配色谱法为基础，可在30min内完成。
叙述分仪器和方法两部分。
在仪器项下，详细分述了泵系统、进样器、柱、检测器和数据收集装置。
关于检测器，重点讨论了常用的分光光度检测器。
对于配有单色器的可变波长检测器的波长准确度，应该用该仪器制造厂提供的方法进行校正，如果观察到的波长与正确的波长相差3nm以上，则提示需进行再校正。
还讨论了多波长检测器，特别是二极管阵列多波长检测器的特点，指出，二极管阵列检测器比固定波长检测器或可变波长检测器的信噪比低，不适宜于低浓度化合物的分析。
在讨论示差折光检测器中，认为该检测器不如紫外光检测器灵敏，且受溶剂组成、流速、温度变化的影响大，要得到满意的基线，需用参比柱。
在方法项下，强调要用高纯度的试剂和HP LC级的有机溶剂，色谱用水的电导率和紫外吸收应低，并指出，流动相的组成对容量因子的影响远大于温度的影响。
本部分还讨论了梯度洗脱的应用、检测器的线性动态范围（即检测器信号响应与被测成分量呈比例的范围）、自动进样测定、外标法和内标法测定和系统适用性试验。
在通法中还有专门一节讨论系统适用性试验。
英国药典2000年版附录ID 液相色谱法，简要叙述了仪器、方法、归一化法、效能及与正文有关的内容。
在方法项下，说明要用对照溶液测试，以决定仪器的设置和获得适当响应的注样量，进行重复进样以验证重复性，必要时，还要检测理论板数。
除另有规定外，测定被测物峰的峰面积。
若被测物峰的对称因子为0.8-1.2，也可测定峰高。
在应用梯度洗脱时，则测定峰面积。
在归一化项下，说明在用归一化法测定时最好使用宽范围放大器和自动积分仪。
在效能项下说明，柱效的要求在正文中规定，理论板数以每米理论板数或以柱的理论板数表示，并列出了在等度洗脱条件下以每米理论板数或以柱的理论板数计算的公式。
相邻两峰的分离度以半高宽和保留时间的公式计算，对称因子的计算公式与中国药典中的拖尾因子公式相同，并列出了容量因子计算公式和信噪比测定法。
在与正文有关内容项下，建议流动相要经脱气，脱气装置应不影响流动相的组成；正文规定的定量方法如果不是内标法，建议用固定体积的定量环进样器；色谱柱通常为不锈钢柱，其尺寸规定在正文中（长度和内径）；正文中规定的固定相如以字母表示，即指本节所附的固定相，该固定相的粒度在字母后的括号内写明，有时标明适用牌号，并不等于别的牌号不能用。
本节所附的固定相有：固定相A为硅胶颗粒，固定相B为表面化学键合辛烷基硅烷的硅胶颗粒，固定相C为表面化学键合十八烷基硅烷的硅胶颗粒。
除另有规定外，色谱分离是在恒定的室温下进行，光度检测器的流通池体积以10ul为宜。
对色谱条件的变更未作详细说明，但说明了分析工作者改变色谱条件，应能得到与要求一致的结果。