细菌鉴定之生化反应 ppt课件
细菌学检验ppt课件
2、标本的直接检查： ★ 直接显微镜检查：
革兰阴性小杆菌或多形态杆菌，结合临床 症状，可做出初步诊断。
★ 抗原检测
荚膜肿胀试验等
★ 核酸检测
3、分离培养与鉴定 （1) 分离培养
★ ★ ★ ★ 营养要求：高，生长中需要X、V因子。 气体环境：生长时需要5%～10%的CO2环境。 温度：35℃ 培养基：兔血或马血最好
方法：密集划线接种待测菌，再点种金葡菌，培养后观察。
流感嗜血杆菌
流感嗜血杆菌（兔血+X、V因子）
流感粘液型菌落
大菌落为奈瑟菌
小菌落为嗜血杆菌
咽拭子培养（未加万古霉素）
咽拭子培养（加万古霉素）
标本接种后点种金葡菌
卫星现象
琼脂卫星试验（脑心琼脂）
X、V因子需求试验→又称纸片法卫星试验
① 不含血液琼脂平板上密集划线接种待测菌或0.5麦 氏单位菌悬液涂抹接种。 ②将X、V、X+V因子三种纸片贴在接种细菌的平板上 纸片间相距5cm以上，（因为V因子分子量小，扩散 距离远），否则会出现X因子假阳性结果。 ③培养后观察结果 ④ （X+V）因子结果阴性的几种可能原因
一、分类
根据伯杰细菌分类手册，嗜血杆菌属隶属于 巴斯德菌科。本菌属共包括17个菌种，其中与临 床有关的有9种，分别是流感嗜血杆菌、副流感 嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副溶血嗜血杆菌、杜 克雷嗜血杆菌、埃及嗜血杆菌、嗜沫嗜血杆菌、 副嗜沫嗜血杆菌和迟缓嗜血杆菌。后三者现划归 “凝聚杆菌属”。
二、临床意义
1、致病因子：细菌结构成分、毒素和酶类。
2、在假单胞菌属细菌引起的临床感染中占70%。 3、可引起机体各个系统的感染。 4、眼部感染的铜绿假单胞菌可合成胶原酶，引起角膜 穿孔而失明。
细菌鉴定中常用的生理生化反应
葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的 纤维蛋白原转变为纤维蛋白，导致血 浆凝固。
其他细菌的分类和鉴定
氧化发酵试验
细菌对碳水化合物的代谢方式不同，可分为氧化型和发酵型。通过 观察细菌在氧化发酵培养基中的生长情况和颜色变化来判断结果。
硝酸盐还原试验
细菌可将硝酸盐还原为亚硝酸盐或氮气，通过观察培养基中硝酸盐 的颜色变化来判断结果。
细菌鉴定在医学、工业等领域的应用
细菌鉴定对于医学诊断、流行病学调查、食品卫生、环境监测等领域具有重要意 义，因此，掌握细菌鉴定的方法和技巧至关重要。
细菌鉴定的重要性
准确识别病原菌
通过细菌鉴定，可以准确识别 引起人类和动植物疾病的病原 菌，为疾病的预防和治疗提供
科学依据。
保障食品安全
细菌鉴定在食品工业中用于检 测食品中的有害菌和腐败菌， 确保食品的安全和质量。
细菌鉴定中生理生化反应的改进方向
自动化技术应用
通过自动化仪器和计算机技术，实现 生理生化反应的自动化操作和数据分 析，提高鉴定效率和准确性。
多项指标联合应用
将多个生理生化反应指标联合应用， 形成综合评价体系，提高细菌鉴定的 准确性和可靠性。
新型反应的开发
针对现有生理生化反应的不足，开发 新的反应类型和试剂盒，以满足更多 种类细菌的鉴定需求。
明胶液化试验
某些细菌可分泌明胶酶，将明胶分解为可溶性的多肽和氨基酸，通过 观察明胶的液化情况来判断结果。
05
细菌鉴定中生理生化反 应的优缺点及改进方向
生理生化反应的优缺点
准确性高
通过特定的生理生化反应，可以准确 地鉴定细菌种类。
操作简便
大多数生理生化反应的操作步骤相对 简单，易于掌握。
生理生化反应的优缺点
细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌鉴定中常用的生理生化反应细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有能发酵不同糖（醇）的酶，因此发酵糖（醇）的能力不同。
其代谢产物也不同。
例如，有些产生酸和气体，有些产生酸但不产生气体。
酸的生成可通过指示剂来确定。
在制备培养基2（黄色）-6.8（紫色）]时预先加入甲酚紫[PHS]，当发酵产生酸时，培养基可从紫色变为黄色。
气体的产生可以通过发酵管中倒置的杜氏管中是否存在气泡来证明。
（3）甲基红（methylred）试验（该试验简称mr试验）许多细菌，如大肠杆菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，然后分解生成甲酸、乙酸、乳酸等，将培养基的pH值降低到4.2以下。
此时，如果添加甲基红，指示器将显示红色。
因为甲基红指示剂的变色范围为pH4（红色）-ph6 2（黄色）。
如果某些细菌，如产气菌，分解葡萄糖生成丙酮酸，但迅速解吸丙酮酸并将其转化为酒精，培养基的pH值仍高于6.2。
因此，此时添加甲基红指示剂以显示黄色。
（4）大分子代谢的实验。
靛蓝基质（口服吸收）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌不能直接利用大分子淀粉。
它们必须依靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解成小分子糊精或进一步水解成葡萄糖（或麦芽糖），然后被细菌吸收和利用。
《常见细菌鉴定》课件
绿脓杆菌的鉴定
总结词
常见于土壤和水环境中，可引起皮肤和肺部 感染
详细描述
绿脓杆菌是一种常见的土壤和水环境中的细 菌，可引起皮肤和肺部感染。它对某些抗生 素具有抗性，因此治疗较为困难。鉴定绿脓 杆菌的方法包括细菌培养、生化试验和免疫 学检测等。
肺炎球菌的鉴定
总结词
常见于人类上呼吸道中，可引起肺炎和脑膜炎等疾病
详细描述
大肠杆菌O157:H7是一种常见的肠道致病菌，可通过食物和水传播。它具有强致病性，可引起严重的腹泻、腹痛 等症状，甚至导致溶血性尿毒综合征等严重并发症。鉴定大肠杆菌O157:H7的方法包括细菌培养、生化试验和血 清学检测等。
金黄色葡萄球菌的鉴定
总结词
常见于食品和环境中，可引起食物中毒和感染
细菌鉴定实验操作
04
实验准备
实验材料
显微镜、培养皿、培养基、细菌样本 等。
实验试剂
染色剂、生理盐水、酒精等。
实验仪器
恒温箱、离心机、天平等。
实验步骤
阅读实验指导书，了解实验原理和操 作步骤。准备好实验材料和试剂，检 查实验仪器是否正常工作。
实验操作步骤
步骤一
步骤二
细菌样本制备：将细菌样本进行稀释，涂 布在培养基上，放入恒温箱中培养。
免疫学鉴定
总结词
利用抗原-抗体反应检测细菌的抗原性物质。
详细描述
制备针对特定细菌抗原的抗体，通过抗原-抗体反应检测样品中是否存在相应细 菌，常用于临床病原体快速检测。
分子生物学鉴定
总结词
通过细菌基因组的DNA序列进行分析鉴定。
详细描述
提取细菌基因组DNA，进行基因测序或PCR扩增特定基因片段，通过比对分析确 定细菌的种属和基因型。
铜绿假单胞菌分类鉴定PPT课件
特性：具有产生水溶性色素的能 力，使培养基呈现特有的铜绿色 ，同时具有氧化酶阳性、触酶阳 性等生化特征。
生物学分类
01
界
细菌界
02
科
假单胞菌科
03
属
假单胞菌属
04
种
铜绿假单胞菌
生态分布与环境适应
分布
广泛分布于自然界，如土壤、水 、空气等，也常见于人体皮肤、 肠道等部位。
环境适应
具有较好的适应性，可在多种环 境条件下生存，如低温、高温、 酸碱度变化等。
自动化细菌鉴定系统
利用自动化仪器对细菌进行快速鉴定，通过检测细菌的生理 生化反应，结合数据库比对，确定细菌的种属。
免疫学方法
利用特异性抗体对细菌进行抗原检测，通过免疫反应的阳性 或阴性结果判断细菌种类。
分子鉴定技术
16S rRNA基因测序
通过对细菌16S rRNA基因进行测序，与数据库中的序列进行比对，确定细菌的种属和种内亚型。
分子生物学分类
总结词
基于铜绿假单胞菌的基因组序列进行分类。
详细描述
通过分析细菌的基因组序列，可以揭示不同铜绿假单胞菌之间的遗传差异，从而 进行分类。
血清学分型
总结词
利用特异性抗体检测铜绿假单胞菌表 面抗原进行分类。
详细描述
通过检测细菌表面抗原与特异性抗体 结合的反应，可以确定不同血清型铜 绿假单胞菌之间的差异，从而进行分 类。
感染治疗与预防
感染治疗
铜绿假单胞菌感染的治疗主要依赖于抗生素，常用的抗生素包括青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类等。针对不 同感染部位和病情严重程度，选择合适的抗生素进行治疗。
预防措施
预防铜绿假单胞菌感染的措施包括加强环境卫生、提高免疫力、避免接触感染源等。对于易感人群和高危人群， 应定期进行健康检查和监测，及时发现并治疗感染。
API细菌鉴定系统ppt课件
API 系统
- 构成: 试条由特別选择的生化反应小管 API试条有多种类 各有相应的数据库 所有生化结果以同时间一并阅读
API 套件
API 试剂盒及其配套试剂
石腊油(容量: 125ml) 覆盖在指定小孔上
悬浮液 (容量: 5ml) 用於调菌液
安培架
附加试条 加进指定的生化孔内
革兰氏阴性杆菌 氧化酶 + 乳糖发酵 + 氧化酶 乳糖发酵 -
非发酵菌鉴定
API 20NE
肠道杆菌鉴定 API 20E
API 20E 及 API 20NE
革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000)
革兰氏阴性弧菌例子 (x 1000)
革兰氏阳性杆菌分类
革兰氏阳性杆菌
触酶 +
触酶 -
细小不透光菌落
容许於平板(包括血平板)上作直接检测
- 玻片法
- 直接在平板上测试
ID COLOR CATALASE 接触酶试剂
步骤 :
– 玻片法 : 或 – 直接平板测试 : 落
将待检菌落乳化於一滴试剂中
将一滴试剂直接滴於平板上的菌
即时产生气泡 (5 秒内) 代表阳性结果。
鉴定用接触酶显色剂
接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱 阳性结果，这个试验没有得到充分应用。
步骤 3 :
利用接种针挑单个菌落,穿刺到OF培养基(深度约1 cm.)
把其中一个已接种好的安培(OF.F),用石爉油覆盖1 cm. 把两个安培盖上朔料帽,培养35-37° C , 24 – 48 小时.
步骤 4 :
OF培养基
结果阅读:
oil
O+
常用细菌生化反应试验
不发酵的V-P试验
总结词
详细描述
不发酵的V-P试验表示细菌不能发酵葡萄糖， 不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
有些细菌不能发酵葡萄糖，因此不产生乙酰 甲基甲醇属、不动杆菌 属等。不发酵的V-P试验有助于鉴别非发酵 菌与肠杆菌科细菌。
临床意义
非发酵菌为医院感染的重要病原菌，可引起 呼吸道、泌尿道、伤口等感染。
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检测细菌对酸性环境的 适应能力，用于鉴别肠
道菌属。
试验原理
糖发酵试验
氧化酶试验
不同细菌含有不同的酶系，能够分解糖类 产生酸性或碱性产物，通过指示剂变色反 应判断细菌对糖类的代谢能力。
氧化酶催化过氧化氢分解为水和氧气，过 氧化氢在铁离子存在下形成棕色沉淀，通 过观察沉淀判断氧化酶活性。
触酶试验
甲基红试验
V-P试验阴性
总结词
V-P试验阴性表示细菌不能利用葡萄糖，不产生乙酰甲基甲醇，在试验中表现为无色。
详细描述
当细菌不能利用葡萄糖或不产生乙酰甲基甲醇时，V-P试验呈阴性。这通常表明该细菌 不属于肠杆菌科，因为肠杆菌科细菌通常能够发酵葡萄糖并产生乙酰甲基甲醇。V-P试
验阴性有助于排除某些肠道细菌感染的可能性。
过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和氧 气，氧气在硫酸中形成白色沉淀，通过观 察沉淀判断过氧化氢酶活性。
肠道菌属能够代谢糖类产生酸性产物，使 培养基pH降低，加入甲基红指示剂后呈红 色，通过观察颜色变化判断肠道菌属。
02 糖发酵试验
葡萄糖发酵试验
总结词
葡萄糖发酵试验是细菌生化反应试验中的一种，用于鉴别细菌对葡萄糖的代谢 能力。
04 Voges-Proskauer试验
细菌鉴定中常用的生理生化反应
细菌鉴定中常用的生理生化反应1、实验原理（1）细菌生化试验各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物或多或少地各有区别，可供鉴别细菌之用。
用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生化反应。
（2）糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同。
其产生的代谢产物亦不相同，如有的产酸产气，有的产酸不产气。
酸的产生可利用指示剂来判定。
在配制培养基时预先加入溟甲酚紫［P HS . 2 （黄色）一6 . 8 （紫色）] ，当发酵产酸时，可使培养基由紫色变为黄色。
气体产生可由发酵管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。
（3）甲基红（Methylred ）试验（该试验简称MR 试验）很多细菌，如大肠杆菌等分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH 降低到4 . 2 以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。
因甲基红指示剂变色范围是pH4 . 4 （红色）一pH6 . 2 （黄色）。
若某些细菌如产气杆菌，分解葡萄糖产生丙酮酸，但很快将丙酮酸脱梭，转化成醇等物，则培养基的pH 仍在6 . 2 以上，故此时加入甲基红指示剂，呈现黄色。
（4）大分子物质代谢实验．靛基质（口引睬）试验某些细菌，如大肠杆菌，能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质（叫睬），靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质（红色化合物）。
硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁。
为硫化氢试验阳性，可借以鉴别细菌。
明胶液化实验某些细菌具有胶原酶，使明胶被分解，失去凝固能力，呈现液体状态，是为阳性。
淀粉水解试验（在紫外诱变中做，本实验不做）细菌对大分子的淀粉不能直接利用，须靠产生的胞外酶（淀粉酶）将淀粉水解为小分子糊精或进一步水解为葡萄糖（或麦芽糖），再被细菌吸收利用，细菌水解淀粉的过程可通过底物的变化来证明，即用碘测定不再产生蓝色。
细菌的生化反应
同学们大家好，欢迎大家来到微生物检验课堂。
今天我们一起来学习细菌的生化反应。
不同的细菌具有各自独特的酶系统，因而对底物的分解能力各异，其代谢的产物也不同。
这些代谢产物又各具有不同的生物化学特性，可利用生物化学的方法测定这些代谢产物以鉴定细菌。
在临床细菌检验工作中，除根据细菌的形态，染色，培养特性进行初步鉴定外，对绝大多数分离的未知菌的属、种鉴定无论是应用手工鉴定还是自动化仪器鉴定，都需要通过这些生化反应来实现，掌握各种生化反应的原理和应用，是细菌鉴定的基础。
根据代谢产物的不同可以将生化反应分为五种，分别是碳水化合物的代谢实验、蛋白质和氨基酸的代谢实验、碳源和氮源利用实验、各种酶类实验以及抑菌实验。
今天这堂课我们主要学习碳水化合物的代谢实验。
1.糖（醇、苷）类发酵实验（1）原理：由于各种细菌含有发酵不同糖类的酶，故分解糖类的能力各不相同。
细菌分解糖类后的终末产物亦不一致，有的产酸产气，有的仅产酸，故可利用此特点以鉴别细菌。
细菌将多糖分解成单糖后继续分解为丙酮酸，丙酮酸最终被分解，可获得酸性产物，使培养基PH值下降，使指示剂呈酸性变红(2)培养基：在培养基中加入0.5％-1％的糖类(单糖、双糖或多糖)、醇类(甘露醇、肌醇等)、苷类(水杨苷、菊糖等).指示剂酚红、溴甲酚紫等(3)方法：将细菌接种到糖发酵培养基中，培养数小时后，观察结果(4)结果：分解糖产酸，呈酸性反应（变色），若产气可出现气泡或培养基内有裂隙等现象;若不分解，除有细菌生长外，无任何变化(5)应用：是鉴定细菌最主要的试验，特别对肠杆菌科细菌的鉴定尤为重要，（二）葡萄糖氧化/发酵（O/F）试验(1)原理：细菌分解葡萄糖过程中，根据对O2需求的不同，分为氧化型（只在有氧环境中分解葡萄糖）发酵型（有氧、无氧都能分解葡萄糖）产碱型（不能分解葡萄糖）(2)方法：将待检菌同时接种两支培养基，一支滴加无菌液体石蜡，高度不少于1cm。
将培养基于35 ℃培养48h或更长。
细菌的生化反应
1. 葡萄糖酸盐试验1)原理：某些细菌可氧化葡萄糖酸钾，生成α-酮基葡萄糖酸。
α-酮基葡萄糖酸是一种还原性物质，可与班氏试剂起反应，出现棕色或砖红色的氧化亚铜沉淀。
(2)方法：将待检菌接种于葡萄糖酸盐培养基中(1ml)，置35℃孵育48h,加入班氏试剂1ml，于水浴中煮沸10min并迅速冷却，观察结果。
(3)结果：出现黄到砖红色沉淀为阳性。
不变或仍为蓝色为阴性。
(4)应用：主要用于假单胞菌的鉴定和肠杆菌科菌分群。
帮助属间鉴别、种间鉴别和沙雷菌属菌种的鉴定。
取待检菌大量接种培养基，35 ℃培养24-48h ，加斑氏试剂1ml，充分混匀，隔水加热煮沸10min ，观察结果。
产生黄-橙色沉淀为阳性，蓝色沉淀为阴性（5）质量控制肺炎克雷伯菌A TCC 27236阳性；大肠埃希菌A TCC 25922 阴性2 粘液酸利用试验培养基用于无动力不产气不发酵乳糖的大肠埃希菌与志贺菌属的鉴别。
前者多数为阳性，后者均为阴性取试验菌株18-24h 肉汤培养物1 环接种培养基。
35 ℃孵育1-2 周，每天观察结果。
培养基呈黄色为阳性表明细菌能利用粘液酸盐；若培养基不变色则为阴性[质量控制]大肠埃希菌A TCC 25922 阳性；痢疾志贺I 型A TCC 13313阴性3. 醋酸钠利用试验(1)原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源，同时，利用醋酸盐作为唯一碳源时，可在醋酸盐培养上生长，分解醋酸盐生成碳酸钠，使培养基变为碱性。
（2)方法：将被检菌接种于醋酸盐培养基中，置35℃孵育2~7d，逐日观察结果。
(3)结果：培养基上有细菌生长，并变为蓝色为阳性。
（4）应用：主要用于大肠埃希菌和志贺菌属的鉴别，前者为阳性，而后者为阴性。
4. 葡葡糖铵培养基（1）成分：氯化钠5g硫酸镁（MgSO4•7H2O）0.2g磷酸二氢铵1g 磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水1000ml0.2%溴麝香草酚蓝溶液40ml pH6.8（2）制法：先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。