1101无菌检查法 2020
《中国药典》1121抑菌效力检查法变化整理
《中国药典》1121抑菌效力检查法变化整理抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。
抑菌效力检查法系用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性，用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂种类和浓度的确定。
如果药物本身不具有充分的抗菌效力，那么应根据制剂特性（如水溶性制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常贮藏或使用过程中由于微生物污染和繁殖，使药物变质而对使用者造成危害，尤其是多剂量包装的制剂。
在药品生产过程中，抑菌剂不能用于替代药品生产的GMP管理，不能作为非无菌制剂降低微生物污染的唯一途径，也不能作为控制多剂量包装制剂灭菌前的生物负载的手段。
所有抑菌剂都具有一定的毒性，制剂中抑菌剂的量应为最低有效量。
同时，为保证用药安全，成品制剂中的抑菌剂有效浓度应低于对人体有害的浓度。
抑菌剂的抑菌效力在贮存过程中有可能因药物的成分或包装容器等因素影响而变化，因此，应验证成品制剂的抑菌效力在效期内不因贮藏条件而降低。
本试验方法和抑菌剂抑菌效力判断标准用于包装未启开的成品制剂。
培养基培养基的制备胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基照无菌检查法（通则1101）制备。
培养基的适用性检查抑菌效力测定用培养基包括成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基的适用性检查检查。
菌种试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
培养基适用性检查的菌种及新鲜培养物的制备见表1。
表1培养基适用性检查、方法适用性检查、抑菌效力测定用的试验菌及新鲜培养物制备试验菌株试验培养基培养温度培养时间金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基30～35℃18～24小时铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC(B)10104〕胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基30～35℃18～24小时大肠埃希菌* (Escherichiacoli)胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大30～35℃18～24小时〔CMCC(B)44102〕豆胨液体培养基白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)98001〕沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基20～25℃24～48小时黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003〕沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基20～25℃56～107天或直到获得丰富的孢子大肠埃希菌仅用于口服制剂的抑菌效力测定。
无菌检查法-中国药典-电子版
无菌检查法-2021版中国药典无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是否无菌的一种方法。
假设供试品符合无菌检查法的规定,仅说明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按?医药工业洁净室〔区〕悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法?的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2～25℃、避光的环境，假设保存于非密闭容器中，一般在3周内使用；假设保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基酪胨 (胰酶水解) 15.0g 酵母浸出粉 5.0g葡萄糖 5.0g 氯化钠 2.5gL-胱氨酸 0.5g 新配制的 0.1% 刃天青溶液 1.0ml硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.75g(或硫乙醇酸) 〔 0.3 ml) 纯化水 1000ml除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，参加葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH 值使灭菌后为7.1±0.2。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培2养基氧化层〔粉红色〕不超过培养基深度的1/2。
灭菌。
在供试品接种前，培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否那么，须经100℃水浴加热至粉红色消失〔不超过20 分钟〕，迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
培养基管理规程
培养基管理规程1目的建立培养基的管理规程，保证培养基的正常使用，从而保证试验数据的可靠性。
2范围适用于培养基的采购、接收入库、存储、配制、灭菌、技术性验收、使用及销毁。
3职责3.1微生物实验员负责培养基的申请、接收入库、配制、灭菌、储存、技术性验收、使用及销毁。
3.2组长负责对培养基技术性验收记录进行审核。
3.3主任负责定期对培养基在配制、灭菌、使用过程中的监督审核。
4内容4.1培养基的申请由微生物实验员根据培养基的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，注明培养基的名称、数量、规格等，交微生物部主任审核后由总经理批准。
之后采购人员按照《外部提供的产品和服务管理程序》向合格供应商采购。
4.2培养基的接收与入库购回时由库房管理员、采购员及实验人员负责接收登记，接收时应检查、核对培养基的名称与数量是否与申购的一致；培养基的包装是否完好。
若数量不对或外包装破损或培养基已经超过二分之一有效期的（如：血平板的有效期为2个月，申购回来的培养基的使用时间仅剩21天的），则拒绝签收。
经检查、核对无误后，由微生物实验人员作好记录，填写《培养基出入库登记表》。
4.3培养基的存储新到货的培养基按照培养基说明书上的要求妥善保存；超过有效期还未用完的培养基，应集中放置于一个地方，并标示清楚，此类培养基不可用于对外出具报告的试验，仅能用于科研；开瓶后的干粉培养基自开瓶之日起，有效期为一年，但不得超过供应商规定的有效期。
配制好的培养基，于2-25℃条件下存储，可保存三周。
制成琼脂平板的培养基，需放置于呼吸袋中，在呼吸袋上标记好培养基名称、配制时间及有效期，于2-8℃冰箱保存，可保存一周。
4.4培养基的配制4.4.1干粉培养基在领用时需填写《培养基出入库记录》。
在开瓶使用时，需贴上《微生物开启标签》，注明开启日期、有效期至、开启人、复核人，并且不得把原标签覆盖。
4.4.2配制培养基选用市售脱水培养基。
4.4.3器具耗材：天平、电磁炉、pH计、不锈钢锅、玻璃棒、烧杯、试管、三角瓶、试管架、硅胶塞、线绳/橡皮筋、牛皮纸、称量勺等。
2020版药典微生物变更细则
按本总论附录2方法测定每克制品中的活菌数，应符合规 定。多价制品应分别测定各单价活菌数。
4. 杂菌检查
方法和结果判断与半成品的“杂菌检查”项相同。
5. 安全试验（新版已删除）
附录2 微生态活菌制品活菌数测定法
• 无菌称取3.0g制品或菌粉（胶囊取内容物），加入27.0ml 稀释液中，充分摇匀，做10倍系列稀释（最终稀释度根据 不同的指标要求而定）。取最终稀释度的菌液100μl，滴 入选择性琼脂培养基平皿上，共做3个平皿，并以玻棒涂 布均匀，置适宜条件下培养，到期观察每个平皿菌落生长 情况，并计数。当平皿菌落数小于10或大于300时，应调 整最终稀释度，重新测定。
基本要求： 微生态活菌制品的制备方法、工艺应能保证
成品含有足够的活菌数量，保持其稳定性，同 时应防止外源因子的污染。生产和检定用设施、 原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡 例”的有关要求。
生产用菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌 毒种管理规程”的有关规定
• 名称及来源； • 种子批的建立：三级种子批应分别冻干，置适宜温度保存；种子批
微生物检测用菌来源： CMCC:中国医学细菌保藏管理中心 CICC:中国工业微生物菌种保藏管理中心 ATCC:美国微生物菌株保藏中心
• 生物制品生产用菌毒种应采用种子批系统 。每批主种子批和工作种子批均应按各论 要求保管、检定和使用。
• 菌毒种的传代及检定实验室应符合国家生 物安全的相关规定。
• 各生产单位质量管理部门对本单位的菌毒 种施行统一管理。
2020版药典
供试品平皿上若 有疑似菌落生 长，取菌落分 离、纯化后采用 氧化酶试验及适 宜的鉴定试验， 确证是否为制品 中的目的菌或铜 绿假单胞菌
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法
微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
学习：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
学习：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。
计数方法
……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
……
提示：后文增加了对于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因注意结合此处的要求。
计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验
……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……
学习：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。
培养基适用性检查
微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品。
无菌检查法-版中国药典-电子版
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是 否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污 染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进 行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的 测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的 洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养， 也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基 适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方 生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C 、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一 年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基葡萄糖新配制的%刃天青溶液 硫乙醇酸钠 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡 萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节 pH 值使灭菌后为土。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比 例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的 1/2。
灭菌。
在供试品接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的 1/5,否则，须经100C 水浴加热至粉红色消失（不超过 20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜 35C 培养。
酪胨（胰酶水解）酵母浸出粉（或硫乙醇酸）（ml ） 纯化水1000ml 氯化钠琼脂2. 胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨氯化钠大豆木瓜蛋白酶消化物磷酸氢二钾葡萄糖（一水合/无水）（）纯化水1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH值使灭菌后在25°C的pH值为土，加入葡萄糖，分装，灭菌。
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查
【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
学习：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。
微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。
学习：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。
计数方法……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
……提示：后文增加了对于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因注意结合此处的要求。
计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……学习：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。
培养基适用性检查微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
学习：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述更准确，下文还有，不再赘述。
……计数方法适用性试验1.供试液制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°C。
供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。
……学习：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。
无菌检查法(通则1101)培训试题及答案
依据：1、《中国药典》2015年版四部 无菌检查法（通则1101）2、《中国药典分析检测技术指南》（2017年7月第一版）无菌检查法（通则1101）无菌检查法（通则1101）培训试题及答案 2018.5姓名： 成绩： 一、单选题（每题4分，共20分）1、无菌检查应在 中进行。
（A ）A 、B 级背景下的A 级单向流洁净区域 B 、C 级背景下的A 级单向流洁净区域 C 、置于一般区的隔离系统D 、C 级洁净区域2、无菌检查中厌氧菌检查的首选培养基为： 。
（B ） A 、胰酪大豆胨液体培养基B 、硫乙醇酸盐流体培养基C 、胰酪大豆胨琼脂培养基D 、0.5%葡萄糖肉汤培养基3A ） A 、葡萄糖B 、胰酪胨C 、氯化钠D 、大豆木瓜蛋白水解物4、无菌检查法的培养体系不包括方法所规定的： 。
（A ） A 、培养箱品牌 B 、培养基 C 、培养温度D 、培养时间5A ）A 、阳性对照试验呈阳性，阴性对照试验呈阴性B 、阳性对照试验呈阳性C 、阴性对照试验呈阴性D 、阳性对照试验呈阴性，阴性对照试验呈阴性 二、多选题（每题4分，共20分）1、产品的无菌性不能仅依赖于最终的无菌检查，而取决于： 。
（ABCD ） A 、生产过程中采用良好的无菌保证体系B 、验证合格的灭菌工艺C 、严格的药品生产质量管理规范（GMP ）管理D 、严格执行产品在储存、运输、货架、使用等环节中的防污染措施2、2015年版药典无菌检查用培养基主要有__________________。
（ABCD ）A 、胰酪大豆胨液体培养基B 、硫乙醇酸盐流体培养基C 、中和或灭活用培养基D 、0.5%葡萄糖肉汤培养基3、滤膜的完整性及滤过性能检查包括： 。
（ABC ） A 、气泡法B 、水流量法C 、细菌截留试验法 D、气相色谱法4、培养基灵敏度检查试验用菌株包括： 。
（ABCD ）A 、金黄色葡萄球菌B 、铜绿假单胞菌C 、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌D 、生孢梭菌、黑曲霉A 、隔离系统B 、C 级背景下的A 级单向流洁净区域 C 、B 级背景下的A 级单向流洁净区域D 、C 级洁净区域三、判断题（每题 4分，共20 分）1、最终的无菌检查可确定该批产品是无菌的。
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1101无菌检查法 2020
1101无菌检查法是一种常用的无菌检验方法，用于确定药品、医疗器械、生物制品等是否符合无菌要求。
本文将介绍1101无菌检查法的原理、步骤以及其在实际应用中的意义。
一、原理
1101无菌检查法基于微生物在适宜的培养基上生长繁殖的原理，通过将待检样品接种于培养基上，观察一定时间后是否出现细菌和真菌的生长，从而判断样品是否无菌。
该方法的原理简单明了，操作方便，被广泛应用于无菌检验领域。
二、步骤
1. 准备培养基：根据样品的要求选择适宜的培养基，如营养琼脂平板、Sabouraud葡萄糖琼脂平板等。
2. 无菌操作：在无菌条件下，将待检样品转移到培养基上。
可以使用无菌针吸取样品后均匀涂布于培养基表面，或者直接将样品滴于培养基上。
3. 封口和标记：将培养基培养后，使用无菌胶带封口，并在培养基上标注样品的相关信息，如样品编号、日期等。
4. 培养：将封好的培养基置于恒温培养箱中，按照规定的温度和时间进行培养。
一般常温下培养24小时，37℃下培养48小时。
5. 观察结果：培养结束后，观察培养基上是否有细菌和真菌的生长。
如果培养基上有生长，说明样品含有细菌或真菌，不符合无菌要求；
如果培养基上无生长，说明样品无菌。
三、意义
1101无菌检查法在药品、医疗器械、生物制品等领域具有重要的应用价值和意义。
1. 保证产品质量：无菌产品对于保证病人的安全至关重要，通过1101无菌检查法可以确保产品的无菌性，防止患者因使用含有细菌或真菌的产品而感染。
2. 合规监管：根据相关法规和标准，药品、医疗器械、生物制品等生产企业需要对产品进行无菌检验，以确保产品符合国家和行业的要求。
3. 质量控制：无菌检验是生产企业质量控制的重要环节，通过对原料、中间产品和成品进行无菌检验，企业可以及时发现问题并采取相应的措施，确保产品质量。
4. 科学研究：1101无菌检查法也被广泛应用于科学研究领域，用于评估新药物、新材料等的无菌性，为科研人员提供可靠的数据支持。
1101无菌检查法是一种简单、有效的无菌检验方法，通过观察培养基上的生长情况，可以判断样品是否无菌。
该方法在药品、医疗器械、生物制品等领域具有重要的意义和应用价值，能够保证产品的质量和安全性。
在实际应用中，我们需要严格按照规定的步骤进行操作，并遵守相关的法规和标准，以确保检验结果的准确性和可靠
性。