实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验(2)
大吞噬的实验报告
一、实验目的1. 了解大吞噬现象的基本原理和过程。
2. 观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
3. 掌握大吞噬实验的操作步骤和注意事项。
二、实验原理大吞噬是指巨噬细胞对细胞外较大颗粒物质（如细菌、细胞碎片等）的吞噬作用。
巨噬细胞通过胞吞作用，将吞噬物质包裹在内吞泡中，然后将其降解并排出细胞外。
本实验采用鸡红细胞作为吞噬物质，观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠2. 试剂：鸡红细胞、生理盐水、无菌淀粉液、冷亚甲蓝溶液、染色剂等3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片等四、实验方法1. 小鼠腹腔巨噬细胞的制备（1）实验前3小时，给小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）将小鼠处死，打开腹腔，用无菌生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，沉淀即为小鼠腹腔巨噬细胞。
2. 巨噬细胞吞噬鸡红细胞的观察（1）将鸡红细胞用生理盐水洗涤，制成悬液。
（2）取制备好的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，使其比例为1:10。
（3）37℃孵育30分钟后，取出培养皿，用冷亚甲蓝溶液染色。
（4）将染色后的细胞涂片，在高倍显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
五、实验结果1. 观察到巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬。
2. 部分巨噬细胞内出现多个鸡红细胞，表明巨噬细胞具有吞噬多个鸡红细胞的能力。
3. 观察到部分鸡红细胞聚集在巨噬细胞附近，可能与巨噬细胞释放的趋化因子有关。
六、实验分析1. 本实验成功观察到了巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，验证了大吞噬现象的存在。
2. 实验结果表明，巨噬细胞具有吞噬多个鸡红细胞的能力，说明巨噬细胞在免疫过程中起着重要作用。
3. 实验过程中，巨噬细胞释放的趋化因子可能参与了鸡红细胞的聚集现象，提示趋化因子在免疫过程中的作用。
七、实验总结1. 本实验成功观察到了巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对大吞噬现象的理解。
巨噬细胞小鼠实验报告
一、实验目的1. 观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。
2. 研究巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的作用。
3. 探讨不同刺激条件下巨噬细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中的重要组成部分，具有强大的吞噬和清除病原微生物、衰老细胞和坏死组织的能力。
吞噬作用是巨噬细胞识别、结合并摄取病原微生物或异物的重要机制。
本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估其吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：6-8周龄健康小白鼠。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、无菌生理盐水、冷亚甲蓝染色液、甲醇、橄榄油等。
3. 实验仪器：显微镜、离心机、恒温水浴箱、计时器等。
四、实验方法1. 实验分组：将小白鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验操作：（1）实验组：每只小鼠腹腔注射1ml鸡红细胞悬液，对照组腹腔注射1ml无菌生理盐水。
（2）注射后30分钟，将小鼠处死，无菌操作取出腹腔液。
（3）将腹腔液离心，弃去上清液，加入适量冷亚甲蓝染色液，混匀后制片。
（4）显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬情况。
3. 数据统计：计算吞噬鸡红细胞的巨噬细胞百分比和吞噬指数。
五、实验结果1. 实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数均显著高于对照组（P<0.05）。
2. 在不同刺激条件下，巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分比和吞噬指数存在差异，其中以脂多糖（LPS）刺激组的吞噬功能最强（P<0.05）。
六、实验分析1. 实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，且吞噬功能受到LPS等刺激因素的影响。
2. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中发挥重要作用，其吞噬功能与机体抵抗力密切相关。
3. 本实验为研究巨噬细胞在免疫调节中的作用提供了实验依据。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在小鼠非特异性免疫中的重要作用：巨噬细胞具有广泛的免疫调节功能，不仅能吞噬和清除病原微生物，还能分泌多种细胞因子，参与免疫应答和免疫调节。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在 37C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解， 也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的 吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞 数就相应的少一点。
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有 两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图）， 每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此， 每大方格容积为0.1mm3。
计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上 线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。 计数应重复3次，取其平均值。
数完毕后，依下式计算： 每1mL白细胞悬液细胞数＝（4个中方格细胞总数 /4） ×104× 稀释倍数
每1mL红细胞悬液细胞数＝（80个小方格细胞总数 /80） ×400×104× 稀释倍数
（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿 培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水 配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清， 再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用 生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
（3）吞噬细胞与菌混合培养 取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。 剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一
小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于 试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清， 沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小 牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
本科实验2大吞噬实验
实验材料
1．器材： 显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、 载玻片等
2．试剂、动物： 8%淀粉溶液，PBS缓冲液，5％鸡红细胞， 瑞氏染液，小白鼠等
实验方法
1、向小鼠腹腔注射2ml 8%淀粉溶液（1--3天前） 2、向小鼠腹腔内注射2ml 5%的鸡红细胞 3、40min后,颈椎脱臼处死小鼠,暴露腹腔,吸取腹 腔液 4、腹腔液涂片(推片），自然干燥 5、瑞氏染液2－3滴，滴管涂匀，染色30秒，自来 水冲洗。吸水纸吸干，油镜下镜检。 6、计数：
实验结果
未被吞噬的鸡红细胞
小
吞噬了鸡红细胞
鼠
的吞噬细胞
红
细
胞
6、计数： 吞噬百分比 =
吞噬有鸡红细胞的吞噬细胞 100个吞噬细胞
吞噬指数 = 100个吞噬细胞中吞噬的鸡红细胞总数 100吞噬细胞
小鼠巨噬细胞的吞噬 实验
温州医89910 pengfei519@
实验目的：
了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理及过程
实验原理：
巨噬细胞/单核细胞（大吞噬细胞）和中性粒细 胞（小吞噬细胞）等具有吞噬功能。病原微生物 或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化 性，便向异物处聚集，巨噬细胞将之内吞入胞质。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验(2)实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验一实验目的1(掌握小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理2(熟悉细胞吞噬作用的基本过程二基本原理细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。
巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。
吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成;免疫抑制剂环磷酰胺(CYP)对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。
三实验用品1(器材:显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、1ml注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2(试剂:0.9%生理盐水;可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。
(6%淀粉中含0.3%台盼蓝)3(材料:小白鼠;0.5%鸡红细胞悬液四实验步骤1. 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为0.5%。
2. 实验前一天，向小鼠腹腔注射1ml可溶性淀粉。
3. 实验前30分钟，向腹腔内注射1ml 0.5%的鸡红细胞，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。
4. 30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠(右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断并致死)。
5. 迅速剖开腹腔，用装针头的注射器吸取腹腔液。
6. 在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液，盖上盖玻片，显微镜下检查。
7. 观察时，将视野调暗。
在高倍镜下，先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。
鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。
而体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突起(伪足)，细胞质中有数量不等的蓝色颗粒(为吞入的含台盘蓝淀粉形成的吞噬泡)即为巨噬细胞。
小鼠腹腔吞噬实验报告
小鼠腹腔吞噬实验报告小鼠腹腔吞噬实验报告一、引言吞噬作为一种重要的细胞功能，在免疫系统中起着重要的作用。
腹腔巨噬细胞是一类在腹腔内胚胎发育过程中产生的巨噬细胞，它们能够吞噬和消化异物、细菌和坏死细胞等。
本实验旨在观察小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力。
二、材料与方法1. 材料：BALB/c小鼠（8周龄，雄性和雌性各5只）、PBS、0.1%苏木精溶液、0.1%酚溶液、尼龙网、离心管、移液管、顶针、显微镜和实验台。
2. 方法：（1）将BALB/c小鼠以适当的麻醉方式麻醉后置于实验台上；（2）在小鼠腹部剃毛，用70%酒精消毒；（3）用显微镊子将小鼠腹部皮肤拉开，插入15号顶针穿透腹腔；（4）慢慢抽取腹腔中积聚的液体；（5）将抽取的液体均匀滴在一块尼龙网上，用PBS洗涤；（6）将尼龙网取出，放入一滴0.1%苏木精溶液中染色10分钟，洗净；（7）将尼龙网摆到显微镜下，观察包括吞噬细胞数量和吞噬效果等。
三、结果与分析经过腹腔巨噬细胞吞噬实验后，我们观察了吞噬细胞的数量和吞噬效果。
在5只雌性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为10个，吞噬效果良好，吞噬颗粒清晰可见。
在5只雄性小鼠中，吞噬细胞的数量平均为12个，吞噬效果也良好，吞噬颗粒清晰可见。
通过统计分析发现，雄性小鼠相较于雌性小鼠具有更高的吞噬细胞数量，但两者之间差异不显著。
四、讨论1. 从实验结果来看，小鼠腹腔巨噬细胞具有较好的吞噬能力，能够有效地清除异物和消化坏死细胞等。
2. 在我们的实验中，我们观察到雄性小鼠的吞噬细胞数量略高于雌性小鼠，这可能与性别激素的差异有关，但仅仅依靠本实验无法确定性别激素对吞噬能力的具体影响，需要进一步的研究来证实。
3. 本实验中使用的苏木精和酚溶液可以染色吞噬细胞，便于观察。
但这种方法相对于其他荧光染色方法来说更为繁琐，同时也可能对细胞造成一定的伤害。
4. 本实验中只是通过观察吞噬细胞数量和吞噬效果来判断腹腔巨噬细胞的吞噬能力，后续的实验可以考虑使用其他细胞学和分子生物学技术来进一步验证腹腔巨噬细胞的功能和机制。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪
开一小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹
腔液于试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，
去上清，沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞
用含10％小牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106
／ml)。
第3页/共17页
（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平 皿培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理 盐水配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去 掉上清，再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗 涤二次，用生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃ 冰箱保存备用。
四角的大方格，又分为16个中方格，适用于 白细胞计数。中央大方格以双线等分为25个中方格。 每个中方格又分16个小方格，通常我们取四角的4个 中方格和中间的1个中方格来计数红细胞。
第11页/共17页
第12页/共17页
第13页/共17页
第14页/共17页
首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从 盖片端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入， 静置数分钟后，再放在微镜下观察计数。
第9页/共17页
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使 用的吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入 的细胞数就相应的少一点。
第10页/共17页
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中 央有两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见 下图），每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为 0.1mm。因此，每大方格容积为0.1mm3。
第16页/共17页
感谢您的观看！
第17页/共17页
第4页/共17页
（3）吞噬细胞与菌混合培养 取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验
一实验目的
1．掌握小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理
2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程
二基本原理
细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。
巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。
吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。
三实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、1ml注射器、载玻片、盖玻片、吸管等2．试剂：0.9%生理盐水；可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。
（6%淀粉中含0.3%台盼蓝）
3．材料：小白鼠；0.5%鸡红细胞悬液
四实验步骤
1. 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为0.5%。
2. 实验前一天，向小鼠腹腔注射1ml可溶性淀粉。
3. 实验前30分钟，向腹腔内注射1ml 0.5%的鸡红细胞，并轻揉腹部，使鸡红细胞悬液分散。
4. 30min后，用脊椎脱臼法处死小鼠（右手抓住鼠尾，用力向后拉，左手拇指与食指同时按住鼠头，使脊髓与脑髓间断并致死）。
5. 迅速剖开腹腔，用装针头的注射器吸取腹腔液。
6. 在干净的载玻片上滴加一滴腹腔液，盖上盖玻片，显微镜下检查。
7. 观察时，将视野调暗。
在高倍镜下，先分辨清楚鸡红细胞和巨噬细胞。
鸡红细胞为淡红色、椭圆形、有核的细胞。
而体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突起（伪足），细胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盘蓝淀粉形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。
变换视野，仔细观察巨噬细胞吞噬吞噬鸡红细胞的过程。
可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附于巨噬细胞的表面；有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入；有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的吞噬泡；有的局势细胞内的吞噬体积缩小，并呈现圆形，这是与初级溶酶体发生融合，泡内物正
在被消化分解。
五注意事项
腹腔注射时不要刺伤内脏。
六实验报告
1. 绘图：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的各种形态。
2. 计算吞噬细胞吞噬百分数。