鉴定转基因是否成功的方法
转基因植物的筛选与鉴定
转基因植物的筛选与鉴定随着植物转基因技术的不断进步，它对于分子遗传学研究和植物改良都具有特别重要的意义。
转基因植株的筛选在转基因技术中起着关键性的作用。
将含有35S启动子的基因载体PMDC150经农杆菌介导，利用农杆菌侵染拟南芥花序的方法转入拟南芥后得到T1代种子。
文章通过组织培养来筛选含有Kan抗性的转基因植株。
标签：拟南芥；转基因植物；筛选1 文献综述1.1 转基因植物的研究进展植物的遗传转化是指利用重组DNA，细胞组织培养等方法，将外源基因导入到植物的组织或细胞中，获得转基因植物的技术[1]。
从转基因植株成功之后，转基因技术飞速发展，如今，植物在抗病、抗虫和抗药等方面都有了转基因植株。
这种技术对改进农作物品质、提高产量等方面都有非常大的帮助。
1.2 基因转化技术随着人们对基因转化技术不断地深入研究和探索，现已发现多种基因转化的方法，例如农杆菌介导的基因转化、花粉管通道法等。
相比较其他植物基因的转化方法，农杆菌介导法有着减少成本、容易操作等优点，但对宿主细胞有着严格的要求。
每种方法都有其优缺点，所以根据植物的不同种类，我们要选择合理的转化方法，达到理想的转化效果。
1.3 本论文的目的和意义植物的转基因技术日新月异迅速发展，已经成为许多国家重点发展的新目标新领域，它所产生的巨大的社会和经济效益促使各个国家对其进行更加深入的研究，由其产生的巨大的生产潜能一定会推动社会的进步，改善人类现有的生产、生活质量以及健康水平。
本文以拟南芥为主要研究对象，通过转化后的农杆菌侵染拟南芥花序的方法及组织培养的方法进行了轉基因植物的筛选。
借由本次实验研究，可深入了解基因工程等相关领域的理论，可熟练掌握相关技术例如无菌操作技术、植物转基因技术、植物组织培养技术等等。
2 转基因植物的筛选与鉴定2.1 实验材料2.1.1 植物材料拟南芥2.1.2 载体与菌株重组表达载体PMDC150-35S（由实验室提供）、农杆菌菌株GV31012.1.3 主要试剂75%酒精、84消毒液、侵染缓冲液、限制性内切酶、卡那霉素、壮观霉素（重组表达载体含有的抗性）、利福平2.1.4 培养基LB培养基：5g/L酵母提取物，10g/L蛋白胨，10g/L NaCl，15g/L琼脂（只固体培养基添加）1/2MS培养基2.2 实验方法2.2.1 拟南芥种植：将种子放在浸过水的滤纸上，放在4℃的冰箱中，不见光培养24小时，然后取出种子种在营养土里，在光照强度8000Lux，温度25℃的培养箱中经过光照16小时/黑暗8小时培养[2]。
转基因植物的安全性评价与风险控制
转基因植物的安全性评价与风险控制近年来，随着科技的发展，人们在生物技术领域上取得了巨大的进展，转基因技术因其快速、高效、可控等特点在农业生产中得以广泛应用。
然而，一些人对转基因植物存在质疑，主要是担心其对人体健康和环境安全产生不利影响。
因此，对转基因植物的安全性评价和风险控制是至关重要的。
一、转基因植物的安全性评价1.基因鉴定安全性评价的第一步是基因鉴定。
通过PCR等分子生物学方法，鉴定转基因植物是否包含目标外源基因。
对于基因鉴定阶段未通过的转基因植物，应立即终止相关试验或生产活动。
2.物质成分分析除了基因鉴定，还需要对转基因植物的物质成分进行分析，以了解其可能对人体和环境产生的影响。
物质成分分析应包括转基因植物中的外源蛋白、碳水化合物、脂质、维生素、矿物质以及天然成分等。
只有对转基因植物进行全面、系统的分析，才能对其安全性进行充分评价。
3.毒性研究尽管转基因技术已经广泛应用于食品和种子的生产，但人类和动物食用转基因植物可能产生潜在的毒性反应。
因此，在转基因植物的评估过程中必须进行毒性研究，以评估其对健康的风险。
毒性研究常用的方法包括急性毒性研究、亚急性毒性研究、长期毒性研究等。
4.过敏原评估转基因植物可能导致对一些人的过敏反应。
因此，在进行安全性评价时，需要对过敏原进行评估，以确定转基因植物是否含有可能引起过敏反应的组分，如过敏原基质、过敏性氨基酸序列等。
二、风险控制1.基础法规建设应制定相关法规，例如食品安全法、农业遗传资源保护法等，以保证转基因植物与传统农产品具有相同的食用安全等级。
此外，监管机构需要对转基因植物的生产、使用、销售等环节实施全方位监管，保障安全管理。
2.严格的分类管理对于不同种类和用途的转基因植物，需要采取不同的管理方法。
例如，一些转基因植物是用于医学等非食品领域，应该采取更为严格的管理措施，确保其对人体和环境安全。
另外，对于用于食品的转基因植物，应进行严格分类管理，确保其对人们的安全无任何威胁。
转基因小鼠的鉴定
转基因小鼠的鉴定一、剪鼠尾1.剪鼠尾的时间当新生的小鼠年龄达到两到三周耳朵已经长开时剪鼠尾较好,此时鼠尾剪起来比较容易且小鼠的生命力比较强;2.分辨小鼠的年龄a当小鼠整个身体较红且腹部无奶时,此小鼠当天出生或前一晚出生；b当小鼠腹部有奶腹部有一小团白色物质,此小鼠出生2~3天；c当小鼠背部长出皮毛时,此小鼠出生3~4天；d当小鼠毛长全,但眼未开时,此小鼠出生10天左右；e当小鼠眼刚开,耳未开时,此小鼠出生12天左右；f当小鼠耳刚开时,此小鼠出生14天左右;3.剪鼠尾后对小鼠的标记：打耳孔法二、从鼠尾中提取DNA采用鼠尾基因组DNA提取试剂盒康为世纪：cw2094提取DNA,操作如下：1.剪取小鼠长度为的尾巴,放入灭菌后的离心管中,加入180μL Buffer GTT;震荡混匀;2.加入20μL proteinase K,涡旋震荡,彻底混匀;3.置于56℃水浴,直到组织溶液完全清澈,一般需消化6-8h,赋予过程中涡旋震荡,使样品均匀分离;注意：1 如果赋予和涡旋震荡后仍然有胶状物质,必要时过夜消化再加入20μl proteinaseK消化,不会影响后续操作;2 如需去除RNA,可在上述步骤完成后,加入4μl浓度为100mg/μl的RNase A溶液,震荡混匀,室温放置5-10min;4.14000rpm 离心 1min,以消除未消化的类似于鼠毛等组织,将上清转移到一个新的灭过菌的离心管中;5.加入200μl Buffer GL,涡旋震荡,充分混匀,加入200μl 无水乙醇,涡旋振荡,充分混匀,短暂离心,使管壁上的溶液收集到管底;注意：1加入Buffer GL 和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀;2 如果多个样品一起操作,Buffer GL 和无水乙醇可以等比例混匀后一起加入样品;3加入Buffer GL 和无水乙醇后可能会产生白色沉淀,不会影响后续操作;6.将步骤5中所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中,若以此不能加完溶液,可分多次转入;10000rpm 离心1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;7.向吸附柱中加入500μl Buffer GW1使用前检查是否已加无水乙醇,10000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;8.向吸附柱中加入500μl Buffer GW2使用前检查是否已加无水乙醇,10000 rpm 离心 1min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中;如需进一步提高DNA纯度,可重复步骤8;9.12000rpm 离心 2min,倒掉收集管中的废液,将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干;注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应酶切,PCR等;10.将吸附柱置于一个新的灭过菌的离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水,室温放置2-5min,10000rpm 离心 1min,收集DNA溶液,-20℃保存DNA;注意：1如果下游实验对PH值或EDTA敏感,可以用灭菌水洗脱,洗脱液的PH值对洗脱效率有很大影响,若用水作洗脱液应保证其PH值在直接,PH值低于时洗脱效率不高;2离心前室温孵育5min可增加产量;3用另外的50-200μL Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量;4如果需要提高DNA的终浓度,可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上,重复步骤10；若洗脱体积小于200μL,可以增加DNA的终浓度,但可能会减少总产量;三、PCRPCR程序设定：1＝ 94.0℃ for 5:00 2＝ 94.0℃ for 1:00 3＝ 59.0℃ for 0:50 4＝ 72.0℃ for 1:00 5＝ Goto 2 2times6＝ 94℃ for0:507＝ 58℃ for 0:508＝72℃ for 1:009＝Goto 6 2times10＝ 94.0℃ for 0:50 11＝56.0℃ for 0:50 12＝ 72.0℃ for 1:00 13＝ Goto10 32times 14＝ 72.0℃ for 10:00 15＝ 4.0℃ for 5:00 16＝END目前实验室的双转基因小鼠AD体系采用：PCR反应的体系12μl：APPPrimer APP-1 μlPrimer APP-2 μlO 2μlddH2mixCW0682 6μlDNA 1μlPCR反应的体系12μl：PS1Primer PS1-1 μlPrimer PS1-2 μl内参-1 1μl内参-2 1μlmixCW06826μlDNA 1μl先在的EP管中加入总的体系再平均分装入各个PCR管中一般多加两小管的量,将移液器调到总量的1/3到1/2体积在EP管中缓慢抽吸若干次尽量避免产生气泡以便Taq酶混合均匀,最后再在各PCR管中依次加入DNA样品;引物处理方法：引物在安基生物有限公司合成后,EP管上会有标记,一般为x nmol,使用O,涡旋振动混匀,微型离心机离心,即可得前先用12000rpm 离心 1min,加入10x μl ddH2O稀释10倍,即加入90μl,混匀后即可得到到100μM的母液,取10μl 的母液,用ddH210μM的引物工作液;四、电泳1．配胶：鉴定用的胶板有大、中、小3种,分别用的梳子为50、25、11齿;分别用的TBE的量为90ml、45ml、25ml;用%的琼脂糖凝胶;2．点样：12μl的DNA,Marker加5μl;点样时注意逐个点样,不要点错,最好把中间的那个孔留着点Marker,这样可避免点样的出错;Marker的选择依基因片段大小而定;3．跑电泳：打开电源,150v电压,30min左右即可;4．照胶：看是否有目的条带,即可判断对应小鼠是阳性、阴性或是杂合子;5．保存;。
生物工程专业实验
生物工程专业实验[标题：利用基因工程技术鉴定植物转基因]1.引言生物工程是一门研究利用生物技术改造生物体功能的学科，广泛应用于医药、农业、环境等多个领域。
本实验旨在通过基因工程技术鉴定植物是否被转基因，以加深对转基因食品安全性的认识和理解。
2.实验目的-了解基因工程技术在农业领域的应用；-掌握鉴定植物是否为转基因的方法和步骤；-增强对转基因食品安全性的认识。
3.实验材料和方法3.1材料-植物样本：包括转基因植物和非转基因植物样本；-基因提取试剂盒：包括蛋白酶K、乙醇等试剂；-调制PCR反应体系：包括DNA模板、引物、酶等。
3.2方法（1）样本处理-将实验室提供的转基因植物样本和非转基因植物样本分别取少量叶片；-进行细胞破碎，使用基因提取试剂盒提取基因。
（2）PCR扩增-在PCR反应管中配制PCR反应混合液，包括DNA模板、引物、酶等；-将PCR反应管放入PCR仪中进行扩增。
（3）电泳分析-取PCR产物，进行电泳分析；-观察PCR产物在凝胶上的迁移情况，通过比对分析样本是否为转基因。
4.实验结果与数据分析将实验数据进行统计和分组，记录转基因样本和非转基因样本的PCR扩增结果。
5.讨论与分析-根据实验结果，分析转基因样本和非转基因样本的PCR扩增结果差异；-探讨转基因植物的提取基因是否存在显著不同；6.结论通过实验，我们成功应用基因工程技术鉴定了转基因植物和非转基因植物。
鉴定结果表明，转基因样本的PCR扩增产物与非转基因样本有明显差异，验证了转基因植物的存在。
7.结语本实验通过基因工程技术鉴定植物转基因的方法，加深了对转基因技术在农业领域的理解。
同时，也增强了我们对于转基因食品安全性的认识，为生物工程技术的发展和应用提供了宝贵的实践经验。
注：以上文档篇幅约为470字，还需补充实验结果、讨论与分析、总结等内容达到1500字以上。
转基因技术的主要操作流程
转基因技术的主要操作流程
内容:
转基因技术的主要操作流程通常包括以下几个步骤:
1. 选择目的基因。
根据转基因的目的,从供体中选择想要的目的基因,这通常是编码某种有用蛋白质的基因。
2. 构建载体。
将选定的目的基因插入到载体分子中,例如质粒或病毒载体。
载体可以帮助目的基因进入目标生物的细胞。
3. 将重组载体导入宿主细胞。
使用微注射、电穿孔、基因枪等方法,将含有目的基因的重组载体导入目标生物的细胞中。
4. 筛选转基因细胞。
通过抗性筛选、荧光筛选等方法,从导入重组载体的细胞中筛选出真正导入了目的基因的转基因细胞。
5. 转基因细胞培养。
对转基因细胞进行培养、繁殖,获得足够数量的转基因细胞。
6. 转基因植株再生。
通过组织培养等手段,从转基因细胞中再生出完整的转基因植株。
7. 鉴定转基因植株。
通过、杂交等手段对转基因植株进行鉴定。
8. 转基因植株评价。
对转基因植株的表型进行评价,确定是否达到了转基因的预期目的。
这就是转基因技术的主要操作流程。
不同的转基因目的和对象,具体操作可能会有所调整。
转基因鉴定与安全性评估
1. 利用选择性基因
•☆ 筛选植物转化细胞或转化植株常用的选择剂： 抗生素类有卡那霉素、潮霉素B等；除草剂类有草 甘膦、双丙氨膦、绿黄隆等。
•浸种培养至破胸时, 分放在装有不同浓度G418溶液的培养皿中,
•浸泡种子 培养皿底覆盖有两层滤纸。将培养皿置于光照培养箱内(光强为
10,000 μmol/m2/s, 光照时间为12 h/d, 温度为29℃), 观察种子发 芽情况, 7 d后统计其发芽率和白化死亡率。
•2.退火（25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合， 形成局部双链。
•3.延伸（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以 dNTP为原料，从引物的5′端→3′ 端延伸，合成与模板互补的DNA链。
•现在有些PCR因为扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的 时间内复制完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60℃-65℃ 间进行，以减少一次升降温过程，提高了反应速度
七、洗膜与检测 SSC和SDS
转基因鉴定与安全性评估
•利用Southern Blot检测目的基因拷贝 数
•NP •MIP2OE-1 •MIP2OE-3 •MIP2OE-5 •NP •MIP2OE-8 •MIP2OE-9
转基因鉴定与安全性评估
•（2）RNA转录水平
转基因鉴定与安全性评估
•RT-PCR 和 Q-PCR检测
于-20℃或者-70℃下保存备用。
转基因鉴定与安全性评估
SDS方法提取gDNA
•研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白 和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。
•1、取幼嫩的组织材料1-2g, ，加入液氮研磨至粉末状，加500μL提取液的离心 管中,轻轻混匀。 2 向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断 裂 ，65℃保温10min，并不时摇动。 3 加入150μL 5mol/L KAc，混匀，置冰上20-30 min。 4 4℃,15 000rpm离心15min,转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混 匀，-20℃沉淀30 min 。 5 12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或 TE溶解DNA。 6 加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。 7 氯仿抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min 。12 000rpm离心10min回收基因 组DNA沉淀。 8 用400μL 70%乙醇洗一次后，吹干，加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。
小鼠转基因实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景随着生物技术的飞速发展，转基因技术在医学、农业等领域发挥着越来越重要的作用。
小鼠作为生物医学研究中常用的实验动物，其基因编辑技术的应用为疾病模型构建、药物筛选和基因功能研究提供了有力工具。
本实验旨在通过基因编辑技术构建转基因小鼠模型，研究特定基因在小鼠体内的表达和功能。
二、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雄性，8周龄。
2. 基因构建材料：目的基因（GFP基因）、启动子（CMV启动子）、荧光素酶报告基因（Luc基因）、pEGFP-C1质粒载体、pGL3-Basic质粒载体。
3. 实验试剂：限制性内切酶、DNA连接酶、T4 DNA连接酶、DNA聚合酶、PCR引物、Trizol试剂、RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒、细胞培养试剂等。
4. 仪器设备：PCR仪、凝胶成像系统、实时荧光定量PCR仪、细胞培养箱、显微镜等。
三、实验方法1. 目的基因构建：将GFP基因和Luc基因分别插入到pEGFP-C1和pGL3-Basic质粒载体中，构建重组质粒。
2. 重组质粒转染：将构建好的重组质粒通过脂质体转染法转染C57BL/6小鼠胚胎干细胞（ES细胞）。
3. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。
4. 胚胎细胞传代培养：将阳性细胞克隆进行传代培养，筛选出稳定表达的细胞系。
5. 胚胎细胞冻存：将稳定表达的细胞系进行冻存，以备后续实验使用。
6. 胚胎移植：将冻存后的胚胎细胞进行移植，获得转基因小鼠。
7. 转基因小鼠表型鉴定：通过GFP荧光显微镜观察转基因小鼠体内GFP表达情况，并通过实时荧光定量PCR检测GFP基因在转基因小鼠体内的表达水平。
四、实验结果1. 重组质粒构建：成功构建了含有GFP基因和Luc基因的重组质粒。
2. 转基因小鼠胚胎细胞筛选：通过GFP荧光筛选，得到阳性细胞克隆。
3. 胚胎细胞传代培养：成功传代培养出稳定表达的细胞系。
4. 胚胎移植：成功获得转基因小鼠。
转基因食品鉴别识
转基因食品鉴别识————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：转基因食品鉴别知识资料来源：新浪博客一、转基因蔬菜一般具备的特征1、没有传统蔬菜参差不齐的外形，普遍个头均匀，型大体长，色泽光艳，质地鲜嫩，如黄瓜、茄子、丝瓜、洋葱等；2、非传统原始地道的味道，无论是烹调前或烹调后的气味还是滋味具备与传统蔬菜明显的区别，如甜椒等；3、非当地时令菜蔬，各类蔬菜的一大特性就是均具备很强的季节性和地域性，有部分非当地时令菜蔬并非依靠外地长时间保鲜和运输而来，而是靠转置耐寒或耐高温基因所得。
二、转基因食品鉴别知识1、看产地：尽量避开那些转基因比较“泛滥”的地区。
如东北地区转基因大豆种植面积比较大。
2、看外包装标识：看是否有转基因提示或标识。
这一点，在一些食用油产品上有相关标识，但在非食用油产品中，还比较少见。
3、看产品品种：如一种俗称为“先玉335”的玉米，就是一种典型的转基因玉米。
4、看检测报告：现在像大豆、玉米等产品，是否为转基因是能够通过检测来鉴定的。
尤其需要注意的是，现在市面上的某些产品，如玉米，即便声明为非转基因，也未必不含转基因成分，更不用说未说明是否含转基因的产品了。
如我们曾对一份所谓非转基因的玉米进行了转基因检测。
检测结果表明，该产品中含有CAMV35S启动子，转基因抗虫玉米MON810成分。
其检测结果为阳性(即含有转基因成分)。
选择有机食品：因为有机食品除了要求不打农药，不施化肥，无激素、抗生素等外，还有一个重要的条件，就是非转基因。
5、其他鉴别方法可以留意一下进口水果的标签。
一般来说，在标签的最下方一般印有出口国的名称，中间的英文字母标明水果的名称，最上方的英文字母标识的是出口企业的名称。
在每个标签的中间一般有4位阿拉伯数字：3字开头的表示是喷过农药。
4字开头的表示是转基因水果；5字开头的表示是杂交水果。
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鉴定转基因是否成功的方法
随着生物技术的发展，转基因技术逐渐成为一种有效的方法，应用在农业、医药、生物制药等领域。
转基因技术通过人工改变生物基因，进而创造出新品种或个体。
在转基因工程中，鉴定转基因是否成功是极其重要的。
本文将从多种角度介绍鉴定转基因是否成功的方法。
一、利用PCR技术确认转基因是否成功
PCR反应是鉴定转基因是否成功最为简便和经济的方法之一，这种技术是利用酶切扩增DNA的特点，在反应中对改造的基因进行检测，在特定的条件下扩增目的基因片段，并与未转基因进行比较。
如果扩增所得的基因片段与转基因所期望的片段大小一致，说明转基因已经成功。
二、Southern blotting 鉴定转基因
Southern blotting是一种DNA测定技术，通过将RNA 转换为DNA并进行胶体电泳将目标DNA片段从细胞中分离并检测目标片段。
Southern blotting 可以检测到基因定位，基因拷贝和突变，改变DNA构型和次级结构。
Southern blotting的结果可以表明：在细胞内是否存在谷氨酸脱羧酶基因等转基因相关的基因组位置。
三、利用生物学筛选法进行鉴定
利用生物学筛选法可以鉴定出转基因是否成功，它们往往是通过化学诱变法，以及处理基因的特殊性质，来筛
选目标基因。
例如可以利用抗草甘膦，病毒耐受性，抗虫淀粉酶等性质来鉴定。
只要观察到相应的特性，就可以证明此转基因已经成功。
四、荧光成像鉴定转基因
Fluorescent Proteins如GFP和RFP等，诞生于最近十几年之间。
通过构筑转基因生物，来融入荧光基因，从而使生物体内部发亮。
并且，荧光标记的转基因生物能使生物学家们观察到某些细胞活动的细微变化以及动物生命体系资源的流入流出等现象。
五、PCR约束消化鉴定转基因
PCR约束消化也被广泛用于检测转基因。
将PCR扩增的产物，用细菌中相应的酶切割，然后进行胶溶电泳，这么做可从大小上直观鉴定出目的基因片段是否已被插入基因位点，以及是否是单一拷贝。
总结：
转基因技术在现代农业和生物制药领域具有重要的作用，而鉴定转基因是否成功也变得尤为重要。
鉴定转基因的方法有很多种，每一种鉴定方法都有其优缺点，可以根据实际情况选择合适的方法进行。
这些方法不仅有助于判断基因修饰是否成功，同时有助于监测转基因的安全性，以保护消费者的权益。