复方丹参注射液对人羊膜上皮细胞水通道蛋白3表达的影响_张译文
经红花保存的羊膜对创面愈合过程中TGF-β表达的影响
Ｔ Ｇ Ｆ － ８ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ａ ｎ ｍｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｅ ｓ ａ ｖ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ａ ｌｏ ｆ ｗｅ ｒ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｗ ｏ ｕ ｎ ｄ ｈ ｅ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ ｗａ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｃ ｏ ｍ ｐ ｕ ｔ ｅ ｒ ｉ ｍａ ｇ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍ．
中 图分类号 ：号 ：１ ６ ７ ４ ． ７ ８ ６ ０（ ２ ０ １ ３ ）１ ０ ． ０ ０ １ １ ． ０ ２
证型 ：Ｉ Ｂ Ｄ
【 摘 要 １ 目的：研究红花 注射 液保存人胎 羊膜对 大 鼠皮肤切创愈合 中 Ｔ Ｇ Ｆ 表 达的影 响。方 法：建立 大鼠皮肤切创模型 ， 应 用免 疫组 织化 学技 术 ， 通 过计算机 图像分析 系统检 测红花 注射 液保存人 胎羊膜 对大 鼠皮肤组织 中 Ｔ Ｇ Ｆ － ｌ表达 的影 响。结果：切 ｆ
创缘周 围 Ｔ Ｇ Ｆ － ｌ的表达；促进创 口的愈合 、减 少瘢 痕形成。 ｆ 【 关键词 】 人胎 羊膜 ；红花 注射 液；切创愈合 ；转化 生长因子．
［ Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ： Ｔ ｏ ｉ ｎ ｖ ｅ ｓ ｔ ｉ ｇ ａ ｔ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ Ｔ Ｇ Ｆ － ｌ ｆ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｎ ａ ｍｎ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｍｅ ｍ ｂ ｒ ａ ｎ ｅ ｓ ａ ｖ ｅ ｄ ｂ ｙ ｓ ａ ｆ 丑 ｏ ｗｅ ｒ ｄ ｕ ｒ ｉ ｎ ｇ ｗ ｏ ｕ ｎ ｄ
白蛋白对肾小管上皮细胞中NLRP3炎性体表达的影响
1. 肾活检组织病理学检查：调取肾活检组织 蜡块切片（厚 2～3 μm），进行常规 PAS 及 Masson 染色，显微镜（日本 Olympus，BX41）下观察肾小管 间质损伤情况，每例切片随机选取 10 个互不重叠 的肾间质视野进行肾脏损伤评分。评分内容包 括 ：肾 小 管 萎 缩 或 扩 张 、小 管 间 质 增 宽 或 间 质 纤 维 化 、蛋 白 管 型 形 成 、间 质 炎 性 细 胞 浸 润 等 。 小 管间质损伤评分标准：0 分：正常；1 分：损伤＜25% 皮质范围；2 分：25%～50%；3 分：＞50%[4]。
对象与方法
一、研究对象 1. 对象：选择 30 例 2012 年至 2013 年东南大 学 附 属 中 大 医 院 肾 内 科 的 住 院 患 者 ，经 临 床 和 肾 穿刺活检确定诊断为 MsPGN，排除 IgA、IgM、C3 和 C1q 等沉积引起的 MsPGN 及糖尿病、系统性红斑 狼 疮 、过 敏 性 紫 癜 等 继 发 性 肾 损 害 。 所 有 患 者 在 肾穿刺活检前均未开始接受肾上腺皮质激素和 （或）免疫抑制剂治疗。按 24 h 尿蛋白定量水平 分为 3 组：低蛋白尿组（＜1 g/24 h）、中蛋白尿组 （1～3.5 g/24 h）和 高 蛋 白 尿 组（＞3.5 g/24 h），每 组各 10 例。调取患者住院期间的病历资料及肾 活检组织蜡块以供实验所用。 2. 细 胞 来 源 ：HK⁃2 细 胞 株 为 人 近 端 肾 小 管 上 皮 细 胞 的 永 生 系 ，其 保 持 了 人 近 端 肾 小 管 上 皮 细胞生物学特性，购自武汉大学细胞保藏中心。 二、研究方法
丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3的影响
丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3的影响朱燕珍;何才姑;江澍;黄玉梅;钱长晖;蒋艺燕;郑雪花【期刊名称】《福建中医药》【年(卷),期】2015(046)005【摘要】目的观察丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3蛋白表达的影响. 方法制备丹参滴注液含药血清,以含药血清干预原代培养缺氧海马神经元,MTT法检测神经元增殖活力,免疫荧光法检测神经元Caspase 3蛋白的表达. 结果缺氧组海马神经元增殖活力低于正常组(P＜0.05),神经元Caspase 3蛋白表达高于正常组(P＜0.05),丹参滴注液含药血清能减少缺氧组海马神经元Caspase 3蛋白表达,改善细胞增殖活力(P＜0.05). 结论丹参滴注液含药血清能明显抑制缺氧海马神经元Caspase 3表达,促进缺氧神经元增殖,起到神经保护作用.【总页数】3页(P45-47)【作者】朱燕珍;何才姑;江澍;黄玉梅;钱长晖;蒋艺燕;郑雪花【作者单位】福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350122;福建中医药大学中西医结合学院,福建福州350122【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.Bcl-2抑制剂对黄芪注射液降低缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响 [J], 董雅洁;高维娟;钱涛;卢锴锋;朱炎杰;谢亚芹2.脑通汤含药血清对缺氧/复氧大鼠海马神经元抗氧化应激相关指标的影响 [J], 何筑;况时祥;张树森;邹家莉;杨燕;崔冬冰3.脑通汤对缺氧／复氧大鼠海马神经元Bcl－2、Bax和Caspase－3表达的影响[J], 何筑;况时祥;张树森;邹家莉;杨燕;崔冬冰4.黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元caspase-3表达的影响 [J], 闫凤霞;高维娟;钱涛;叶冬青;张雅丽;侯志平;任立群;梅立新5.乌司他丁对兔缺血缺氧性海马损伤神经元nNOS和Caspase-3表达的影响 [J], 梁亚统;刘冰冰;周代伟;张超城;舒海华;肖晓山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
滋肾醒脑汤对阿尔茨海默病模型大鼠行为学及海马组织中Caspase-3、Caspase-9表达的影响
世界中医药 ２０２２年 ７月第 １７卷第 １３期
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精神、经济和生活负担。本病发病机制众说纷纭，如 乙酰胆碱水平低、β淀粉样蛋白（βａｍｙｌｏｉｄＰｅｐｔｉｄｅ， Ａβ）沉 积、Ｔａｕ蛋 白 异 常 磷 酸 化 聚 集、氧 化 应 激 等［２］，然而具体机制尚不明确，目前临床所用药物只 能缓解症 状，难 以 有 效 延 缓 疾 病 进 展。 因 此，防 治 ＡＤ成为当今老年疾病研究领域最重要的前沿课题 之一。
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＺｉｓｈｅｎＸｉｎｇｎａｏＤｅｃｏｃｔｉｏｎｏｎｔｈｅｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｍｅｍｏｒｙａｂｉｌｉｔｙｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ （ＡＤ）ｒａｔｓａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｓｐａｓｅ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ９ｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｉｎｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，βａｍｙｌｏｉｄ（Ａβ２５３５）ｗａｓ ｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｌａｔｅｒａｌｖｅｎｔｒｉｃｌｅｔｏｉｎｄｕｃｅＡＤ ｉｎｒａｔｓａｎｄｔｈｅＺｉｓｈｅｎＪｉａｎｎａｏＤｅｃｏｃｔｉｏｎｗａｓｕｓｅｄｆｏｒｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ．Ｍｏｒｒｉｓｗａｔｅｒ ｍａｚｅｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄｔｏｔｅｓｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＺｉｓｈｅｎＸｉｎｇｎａｏＤｅｃｏｃｔｉｏｎｏｎｔｈｅｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｍｅｍｏｒｙａｂｉｌｉｔｙａｎｄｓｐａｃｅｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎａｂｉｌｉｔｙ ｏｆＡＤｒａｔｓ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｓｐａｓｅ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ９ｉｎｔｈｅＣＡ１ａｒｅａｏｆｒａｔｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏ ｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＩｎｔｈｅＭｏｒｒｉｓｗａｔｅｒｍａｚｅｔｅｓｔ，ｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｓｈｏｗｅｄｌｏｗｅｒｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｍｅｍｏｒｙａｂｉｌｉｔｙｔｈａｎｔｈｅｓｈａｍ ｏｐｅｒａｔｉｏｎｇｒｏｕｐ（Ｐ＜００５）．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｏｓｉｎ（ＨＥ）ｓｔａｉｎｉｎｇｒｅｓｕｌｔ，ｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｈａｄｓｅｖｅｒｅｉｎｊｕｒｙｏｆ ｎｅｕｒｏｎａｌｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ，ｗｈｉｌｅｔｈｅｉｎｊｕｒｙｗａｓｍｉｌｄｅｒｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｔｈａｎｉｎ ｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｓｐａｓｅ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ９ｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００５）ａｎｄｔｈａｔ ｉｎｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｇｒｏｕｐｄｅｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＺｉｓｈｅｎＸｉｎｇｎａｏＤｅｃｏｃｔｉｏｎｃａｎａｌｌｅｖｉａｔｅｔｈｅｄａｍａｇｅｏｆｈｉｐｐ ｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｌｅａｒｎｉｎｇａｎｄｍｅｍｏｒｙａｂｉｌｉｔｙｏｆＡＤｒａｔｓ．Ｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｉｓｔｈｅｌｉｋｅｌｉｈｏｏｄｔｈａｔｉｔｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｓｐａｓｅ３ａｎｄＣａｓｐａｓｅ９ｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ＺｉｓｈｅｎＸｉｎｇｎａｏＤｅｃｏｃｔｉｏｎ；Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ′ｓｄｉｓｅａｓｅ；Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；Ｃａｓｐａｓｅ３；Ｃａｓｐａｓｅ９ 中图分类号：Ｒ２７７７ 文献标识码：Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－７２０２．２０２２．１３．０１５
丹参酮的药理作用研究进展
,
亡 的保护方 面有 一定价值
,
、
。
最 近研 究 发现 丹 参 还 能抑制 和 清
, , ,
,
。
除 白细 胞 与细静脉 内皮细胞 的 猫附 改善血 管 通透 性 扩 张微 动脉 加快血 液流速 增加流量 从而调节微循环 障碍
2 2 . 。
。
降血 脂 抗动脉粥 样硬 化作 用
有显 著差异 认为丹参酮 l A 可 能通 过诱导调 亡 而 抑制肝 癌细 胞 的生长 体外实验证 明 丹参酮 n A 处理 人 卵巢癌细胞 株
。 ,
。
抗肿瘤作用 1. 1 对肿摘细 胞的杀伤作用
罗 厚蔚等1研 究 证 实丹 参酮对细 胞毒性作用的基 础是 它的
.2 g L , 浓度 下 不 同的丹 参 酮 成分对 小 研 究 了在 0 5 . 鼠类淋巴 细胞 白血 病细胞 P3 8 作用 结果 显示 丹 参酮 有相当
s o d a
问
强 的细胞杀伤作用
失常 (D S
一 0 2
,
保 护 心 肌 等功 能
) 1 ,
。
王 蓉报 道 l N
,
丹参 酮 n A 磺 酸钠
部血 管病理 损伤和血 管机 能异 常随着 体内血 脂升 高 粥样 硬 化
斑 块形 成 使体 内 自由基 产生 与 消除失去 平 衡 使 自由基 清除
, ,
,
P C )缩小心 肌 梗死面 积和 不 仅能增强 缺血 预 适应组 (I
, 。
,
高脂 血 症是指血 浆总胆 固醇 (T C )和 / 或甘油三 酷 (TG )异
常升高 长期 的高脂血 症时 脂质在动脉内膜 中沉积 引起 巨噬
细胞及平滑肌细胞吞噬 反应 纤 维化 粥样斑 块形成 最 终致管 壁增 厚变硬 管腔狭窄 发生 动脉 粥样硬化 (A s ) 大量的研究 A S 证 明丹参酮具有 降血 脂抗 作用 炎症反 应 过程 中 丹 参酮
基于网络药理学探讨丹参饮治疗心力衰竭的作用机制
基于网络药理学探讨丹参饮治疗心力衰竭的作用机制刘文锐,瞿惠燕,杨天舒,唐巧林,周华摘要目的:运用网络药理学方法探讨丹参饮治疗心力衰竭的作用机制㊂方法:通过TCMSP数据库和UniProt数据库校正筛选出丹参㊁砂仁和檀香的有效活性成分;运用GeneCards数据库㊁NCBI基因数据库及OMIM数据库获取心力衰竭的疾病靶点,通过STRING数据库对交集靶点构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络图,运用拓扑分析和MCODE聚类分析获得核心作用靶点,并对核心作用靶点进行基因本体(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析㊂结果:从丹参饮3味中药中筛选出78个化合物㊁264个靶点,心力衰竭靶点2273个,交集靶点86个,关键靶点36个㊂GO功能富集分析生物学过程共1900条,KEGG 筛选出通路165条㊂结论:丹参饮通过多靶点㊁多途径㊁多通路干预心力衰竭,可能涉及的靶点包括蛋白激酶B(AKT1)㊁白细胞介素-6 (IL6)㊁表皮生长因子受体(EGFR)㊁胱天蛋白酶3(CASP3)㊁热休克蛋白90α家族A类成员1(HSP90AA1)㊁低聚果糖(FOS)等,涉及的信号通路包括白细胞介素-17(IL17)㊁晚期糖基化终末产物-糖基化终产物受体(AGE-RAGE)㊁松弛素㊁缺氧诱导因子-1(HIF-1)㊁磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)等,为进一步研究丹参饮治疗心力衰竭的作用机制提供了新思路㊂关键词心力衰竭;丹参饮;网络药理学;作用机制d o i:10.12102/j.i s s n.1672-1349.2023.04.002The Mechanism of Danshen Decoction in the Treatment of Heart Failure Based on Network PharmacologyLIU Wenrui,QU Huiyan,YANG Tianshu,TANG Qiaolin,ZHOU HuaShuguang Hospital Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai201203,China Corresponding Author ZHOU Hua,E-mail:********************Abstract Objective:To explore the mechanism of Danshen Decoction in the treatment of heart failure based on network pharmacology.Methods:The effective active components of Salvia miltiorrhiza,Amomum villosum,and sandalwood were screened through TCMSP database and UniProt database.The disease targets of heart failure were obtained by GeneCards database,NCBI gene database,and OMIM database.The protein-protein interaction(PPI)network diagram was constructed for the intersection targets by STRING platform,and the core targets were obtained by topology analysis and MCODE cluster analysis.Gene ontology(GO) functional enrichment analysis and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)pathway enrichment analysis were carried out for its core target.Results:Seventy-eight compounds,264targets,2273targets for heart failure,86intersection targets,and36key targets were screened from the three traditional Chinese medicines of Danshen Decoction.A total of1900biological processes were analyzed by GO enrichment analysis,and165pathways were screened by KEGG enrichment analysis.Conclusion:Danshen Decoction could intervene heart failure through multiple-targets,and multiple-pathways,which provided new ideas for further study of the mechanism of Danshen Decoction in the treatment of heart failure.The possible targets included protein kinase B(AKT1),interleukin-6 (IL6),epidermal growth factor receptor(EGFR),cystatin protease3(CASP3),heat shock protein90αfamily class A member1 (HSP90AA1),oligofructose(FOS).The signaling pathways involved interleukin-17(IL17),advanced glycosylation end product-glycosylation end product receptor(AGE-RAGE),relaxin,hypoxia-inducible factor-1(HIF-1),phosphatidylinositol3-kinase/protein kinase B(PI3K-Akt).Keywords heart failure;Danshen Decoction;network pharmacology;mechanism of action心力衰竭是指在多种因素作用下心脏结构和(或)基金项目国家自然科学基金面上项目(No.81673753);上海申康医院发展中心促进市级医院临床技能与临床创新三年行动计划(2020年 2022年)项目(No.SHDC2020CR1053B)作者单位上海中医药大学附属曙光医院(上海201203)通讯作者周华,E-mail:********************引用信息刘文锐,瞿惠燕,杨天舒,等.基于网络药理学探讨丹参饮治疗心力衰竭的作用机制[J].中西医结合心脑血管病杂志,2023,21(4): 581-591.功能发生异常改变,引起心脏收缩和(或)舒张功能障碍的一组临床综合征,是心血管疾病的 最后主战场 [1]㊂‘中国心血管健康与疾病报告2020“指出,我国心血管病患病率处于持续上升趋势,推算现患病人数达3.3亿例,其中心力衰竭约890万例[2]㊂目前针对心力衰竭尚无特异性的西药,且西药作用靶点常以某个单一靶点为主,中药复方可缓解心力衰竭临床症状,从多途径㊁多靶点㊁多通路干预心室重构,具有广阔的应用前景[3]㊂丹参饮首载于陈修园之‘时方歌括“卷下,原方由丹参㊁砂仁㊁檀香3味中药组成,主治心腹诸痛,具有行气活血㊁化瘀止痛之功效㊂丹参饮广泛应用于治疗冠心病㊁心绞痛㊁心肌缺血等心血管疾病和慢性萎缩性胃炎㊁消化性溃疡等胃肠道疾病[4]㊂现代研究表明,丹参饮具有减轻心肌细胞缺血再灌注损伤[5]㊁抗冠状动脉粥样硬化[6]㊁保护内皮细胞[7]㊁抗心肌纤维化[8]㊁抑制心肌细胞凋亡[9]等作用㊂网络药理学利用大数据平台将生物网络与其他学科交叉融合,从整体阐述药物与疾病之间的有机联系,体现了中医整体观念的思想,为研究中药复方提供了一种方法[10]㊂本研究采用网络药理学方法探讨丹参饮治疗心力衰竭的潜在作用机制,为今后丹参饮的研究提供了思路㊂1资料与方法1.1丹参饮活性化合物及靶点筛选通过TCMSP数据库(https:///tcmsp.php)检索丹参㊁砂仁和檀香的活性成分㊂筛选条件为口服生物利用度(OB)ȡ30%㊁类药性(DL)ȡ0.18㊂将纳入的活性化合物通过TCMSP数据库进行成分的靶点预测,所有靶点经UniProt数据库(https:///)校正,去掉非人类靶点㊂1.2心力衰竭靶点基因的筛选以 heart failure 为关键词,在GeneCards数据库(https://www. /)㊁NCBI基因数据库(https://www.ncbi. /)及OMIM数据库(https:///)进行人类基因检索㊂其中,GeneCards数据库获得的靶点将得分进行中位值筛选以获得相关的靶点㊂利用韦恩图制作软件Venny2.1得到丹参饮活性成分与心力衰竭的共有靶点㊂1.3丹参饮 中药-成分-靶点 蛋白-蛋白互作(PPI)网络构建将药物疾病共有靶点输入STRING数据库(https:///cgi/input.pl)进行PPI网络的构建,将生物种类设定为 Homo sapiens ,得到PPI网络㊂将PPI网络导入Cystoscape3.8.0中,运用NetworkAnalyzer工具进行拓扑分析,通过度值(Degree)排序,选取分值大于平均分的基因作为关键靶点㊂打开MCODE模块进行基因簇的分析以及核心靶点的筛选㊂1.4治疗靶点的基因本体(GO)功能富集分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析将药物疾病共有靶点进行GO的生物过程(biological process,BP)㊁分子功能(molecular function,MF)㊁细胞组分(cell component,CC)富集分析和KEGG通路富集分析,引用STRING数据库,将校正P值<0.05的项目进行筛选㊂最后将成分-疾病-通路-靶点网络文件导入Cytoscape3.8.0进行通路网络图的绘制,直观展示中药活性成分在治疗心力衰竭过程中的多成分㊁多靶点的作用特点㊂2结果2.1丹参饮有效活性化合物通过TCMSP数据库筛选活性化合物,筛选条件为OBȡ30%㊁DLȡ0.18,共得到78个活性化合物,其中丹参65个㊁砂仁10个㊁檀香3个,活性化合物相应靶点264个㊂其中丹参活性化合物包括1,2,5,6-四氢丹参酮㊁茯苓甾醇㊁多孔司特-5-烯-3β-醇㊁脱氢蒽酮ⅡA㊁黄芩苷㊁木犀草素等;檀香活性化合物包括异鼠李素㊁木犀草素㊁异牡荆黄素;砂仁活性化合物包括24-乙基胆甾醇-4-烯-3-酮㊁多孔司特-5-烯-3β-醇㊁谷甾醇醋酸酯㊁β谷甾醇㊁豆甾醇㊁维生素E等㊂丹参饮主要活性成分基本信息见表1㊂表1丹参饮的主要活性成分中药编号活性成分OB(%)DL 丹参MOL0016011,2,5,6-tetrahydrotanshinone38.7453870.35791丹参MOL001659poriferasterol43.8298520.75596丹参MOL001771poriferast-5-en-3beta-ol36.9139060.75034丹参MOL001942isoimperatorin45.4642470.22524丹参MOL002222sugiol36.1135350.27648丹参MOL002651dehydrotanshinoneⅡA43.7622860.40019丹参MOL002776baicalin40.1236100.75264丹参MOL000569digallate61.8486180.25635丹参MOL000006luteolin36.1626290.24552丹参MOL006824α-amyrin39.5120900.76221丹参MOL0070365,6-dihydroxy-7-isopropyl-1,1-dimethyl-2,3-dihydrophenanthren-4-one33.7652520.28585丹参MOL0070412-isopropyl-8-methylphenanthrene-3,4-dione40.8601540.22897(续表)中药编号活性成分OB(%)DL 丹参MOL0070453α-hydroxytanshinoneⅡa44.9293360.44272丹参MOL007048(E)-3-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-hydroxy-benzofuran-4-yl]acrylic acid48.2436320.31229丹参MOL0070494-methylenemiltirone34.3486760.22726丹参MOL0070502-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-5-(3-hydroxypropyl)-7-methoxy-3-benzofurancarboxaldehyde62.7841470.39628丹参MOL0070516-o-syringyl-8-o-acetyl shanzhiside methyl ester46.6906590.71145丹参MOL007058formyltanshinone73.4446220.41736丹参MOL0070593-beta-Hydroxymethyllenetanshiquinone32.1610340.40894丹参MOL007061methylenetanshinquinone37.0731940.36017丹参MOL007063przewalskin a37.1065010.64901丹参MOL007064przewalskin b110.3240000.43809丹参MOL007068przewaquinone B62.2400600.41374丹参MOL007069przewaquinone c55.7416730.40408丹参MOL007070(6S,7R)-6,7-dihydroxy-1,6-dimethyl-8,9-dihydro-7H-naphtho[8,7-g]benzofuran-10,11-dione41.3104570.45300丹参MOL007071przewaquinone f40.3078840.45925丹参MOL007077sclareol43.6706850.20580丹参MOL007079tanshinaldehyde52.4747040.45196丹参MOL007081danshenol B57.9508750.55764丹参MOL007082danshenol A56.9652490.52172丹参MOL007085salvilenone30.3836540.37639丹参MOL007088cryptotanshinone52.3419620.39555丹参MOL007093dan-shexinkum d38.8830210.55453丹参MOL007094danshenspiroketallactone50.4312810.30670丹参MOL007098deoxyneocryptotanshinone49.4003470.28555丹参MOL007100dihydrotanshinlactone38.6847680.32227丹参MOL007101dihydrotanshinoneⅠ45.0432790.36015丹参MOL007105epidanshenspiroketallactone68.2731590.30549丹参MOL007107C0909236.0694900.24740丹参MOL007108isocryptotanshi-none54.9819320.39449丹参MOL007111isotanshinoneⅡ49.9160260.39674丹参MOL007115manool45.0443160.20208丹参MOL007118microstegiol39.6122950.27734丹参MOL007119miltiononeⅠ49.6843940.32125丹参MOL007120miltiononeⅡ71.0297030.43711丹参MOL007121miltipolone36.5561120.36803丹参MOL007122miltirone38.7569860.25418丹参MOL007123miltironeⅡ44.9510660.23537丹参MOL007124neocryptotanshinoneⅡ39.4629910.23157丹参MOL007125neocryptotanshinone52.4879970.32306丹参MOL0071271-methyl-8,9-dihydro-7H-naphtho[5,6-g]benzofuran-6,10,11-trione34.7208220.36634丹参MOL007130prolithospermic acid64.3709620.31017丹参MOL007132(2R)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-[(Z)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)acryloyl]oxy-propionic acid109.3805200.35119丹参MOL007140(Z)-3-[2-[(E)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)vinyl]-3,4-dihydroxy-phenyl]acrylic acid88.5360210.25869丹参MOL007141salvianolic acid g45.5648560.60602丹参MOL007142salvianolic acid j43.3760500.72497丹参MOL007143salvilenoneⅠ32.4347090.22895丹参MOL007145salviolone31.7241500.23568丹参MOL007149NSC12242134.4929230.27645丹参MOL007150(6S)-6-hydroxy-1-methyl-6-methylol-8,9-dihydro-7H-naphtho[8,7-g]benzofuran-10,11-quinone75.3858780.45510(续表)中药 编号活性成分OB (%)DL 丹参MOL007151tanshindiol B 42.6658100.45303丹参MOL007152przewaquinone E42.8548520.45301丹参MOL007154tanshinone Ⅱa 49.8873000.39781丹参MOL007155(6S)-6-(hydroxymethyl)-1,6-dimethyl -8,9-dihydro -7H -naphtho [8,7-g ]benzofuran -10,11-dione 65.2589380.44871丹参MOL007156tanshinone Ⅵ45.6373060.29549砂仁MOL00175524-ethylcholest -4-en -3-one 36.0836120.75703砂仁MOL001771poriferast -5-en -3beta -ol 36.9139060.75034砂仁MOL001973sitosteryl acetate 40.3896420.85102砂仁MOL000358beta -sitosterol 36.9139060.75123砂仁MOL003975icosa -11,14,17-trienoic acid methyl ester 44.8136170.23355砂仁MOL000449stigmasterol 43.8298520.75665砂仁MOL007180vitamin -E 32.2864280.69563砂仁MOL007514methyl icosa -11,14-dienoate 39.6670590.22908砂仁MOL007535(5S,8S,9S,10R,13R,14S,17R)-17-[(1R,4R)-4-ethyl -1,5-dimethylhexyl ]-10,13-dimethyl -2,4,5,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro -1H -cyclopenta [a ]phenanthrene -3,6-dione 33.1154000.78802砂仁MOL007536stigmasta -5,22-dien -3-beta -yl acetate 46.4419020.85691檀香MOL000354isorhamnetin 49.6043770.30600檀香MOL000006luteolin 36.1626290.24552檀香MOL002322isovitexin31.2946430.718382.2 丹参饮治疗心力衰竭的潜在作用靶点 通过GeneCards 数据库㊁NCBI 基因数据库及OMIM 数据库获取心力衰竭靶点,其中,GeneCards 数据库获得1495个相关靶点,NCBI 数据库获得1296个相关靶点,OMIM 数据库获得143个相关靶点㊂将这3个数据库的基因合并删除之后,得到2273个心力衰竭相关基因㊂将筛选出的丹参饮活性化合物靶点与心力衰竭靶点输入韦恩图制作软件Venny 2.1,得到86个共有靶点㊂详见图1㊂图1 丹参饮治疗心力衰竭潜在靶点的韦恩图2.3 丹参饮有效成分-心力衰竭-关键靶点 PPI 网络构建与分析结果 将药物-疾病共有靶点输入STRING 数据库,得到PPI 网络,该网络中有86个节点㊁1002条边,平均度值为23.3㊂详见图2㊁图3㊂图3中的节点颜色和大小根据度值调整,节点越大,颜色越红,度值越大,线粗到细表示边介数(edge betweenness )从大到小㊂基于PPI 网络进行拓扑分析,共筛选出36个关键靶点蛋白,其中,居前20位关键靶点蛋白为蛋白激酶B (AKT1)㊁白细胞介素-6(IL6)㊁表皮生长因子受体(EGFR )㊁胱天蛋白酶3(CASP3)㊁热休克蛋白90α家族A 类成员1(HSP90AA1)㊁低聚果糖(FOS )㊁过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARG )㊁环氧合酶2(PTGS2)㊁雌激素受体α(ESR1)㊁c -Jun 氨基末端激酶(JUN )㊁重组人信号转导与转录激活因子3(STAT3)㊁基质金属蛋白酶9(MMP9)㊁MYC ㊁酪氨酸激酶受体2(ERBB2)㊁人内皮型一氧化氮合酶(NOS3)㊁细胞周期素D1重组蛋白(CCND1)㊁核因子κB 抑制蛋白α重组蛋白(NFKBIA )㊁胱天蛋白酶8(CASP8)㊁糖原合成酶激酶-3(GSK3B )㊁白细胞介素-10(IL10),详见图4㊂通过MCODE 模块进行基因簇分析和核心靶点的筛选,共得到3个基因簇和3个核心基因,核心基因为DRD2㊁PTPN1㊁IL10,详见表2和图5㊂图2丹参饮治疗心力衰竭潜在靶点的PPI网络图(STRING网站)图3丹参饮治疗心力衰竭潜在靶点的PPI网络图(Cytoscape软件)图4PPI网络拓扑分析靶点排序(居前20位)表2MCODE聚类分析详细信息聚类节点(个)其他(个)关键靶点蛋白135514MAPK1,HMOX1,NFKBIA,MMP2,TGFB1,IL2,CCND1,IFNG,MAPK14,STAT3,ICAM1,MMP1,CASP9,HSP90AA1,CASP8,JUN,MMP9,APP,GSK3B,CDKN1A,FOS,ESR1,IL10,AKT1,MYC,PTGS2,CASP3,IL6,EGFR,NOS3,IL4,NR3C1,MDM2,ERBB2,PPARG233SLC2A4,PTPN1,DPP4333DRD1,DRD2,SLC6A2图5MCODE聚类分析核心基因簇2.4GO功能富集分析和KEGG通路富集分析GO 功能富集分析共富集到1900条生物过程㊁106项分子功能㊁54项细胞组分㊂涉及的主要生物过程包括血液循环调节㊁血管直径调节㊁血管收缩调节㊁上皮细胞增殖调控㊁活性氧代谢过程㊁凋亡信号调控㊁DNA结合转录因子活性的调控㊁肾上腺素能受体信号通路㊁平滑肌细胞增殖的调控;涉及的主要细胞组分包括膜㊁膜筏㊁突触前膜㊁突触后膜㊁线粒体外膜㊁囊泡㊁蛋白激酶复合物等;涉及的分子功能包括G蛋白偶联胺受体活性㊁泛素样蛋白连接酶结合㊁核受体活性㊁配体激活转录因子活性㊁细胞因子受体结合㊁DNA转录因子结合㊁类固醇激素受体㊁生长因子受体结合㊁肾上腺素能受体结合㊁核转录因子(NF)-κB结合等㊂详见图6㊁图7㊂图6丹参饮治疗心力衰竭潜在核心靶点的GO富集分析柱状图图7丹参饮治疗心力衰竭潜在核心靶点的GO富集分析气泡图对KEGG通路富集分析,依据校正P值<0.05,共富集到165条丹参饮治疗心力衰竭的信号通路,将其中富集显著的20条信号通路绘制成柱状图和气泡图㊂20条信号通路包括脂质与动脉粥样硬化㊁内分泌抵抗㊁乙型肝炎㊁化学致癌-受体激活㊁人巨细胞病毒感染㊁大肠癌㊁IL17信号通路㊁前列腺癌㊁卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染㊁糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-糖基化终产物受体(AGE-RAGE)信号通路㊁癌症中的蛋白多糖㊁膀胱癌㊁松弛素信号通路㊁缺氧诱导因子-1 (HIF-1)信号通路㊁弓形虫病㊁非小细胞肺癌㊁利什曼病㊁爱泼斯坦-巴尔病毒感染㊁恰加斯病㊁PI3K-Akt等信号通路㊂详见图8㊁图9㊂图8丹参饮治疗心力衰竭潜在核心靶点的KEGG 通路分析柱状图图9丹参饮治疗心力衰竭潜在核心靶点的KEGG通路分析气泡图2.5丹参饮活性成分-心力衰竭-通路-靶点网络图构建运用Cytoscape3.8.0进行通路网络图的绘制,直观展示中药活性成分在治疗心力衰竭过程中的多成分㊁多靶点的作用特点㊂详见图10㊂图10丹参饮活性成分-心力衰竭-通路-靶点网络图(蓝色为丹参饮活性化合物,黄色为丹参饮活性化合物作用于心力衰竭的靶点,绿色为最显著的前20条通路,红色为疾病即心力衰竭,紫色为中药)3讨论心力衰竭归属于中医学 心水病 范畴,为本虚标实之证,主要病机为气虚血瘀[11]㊂丹参饮为临床治疗气虚血瘀证的常用方剂,丹参饮中丹参活血而补血,‘名医别录“记载: 丹参养血,去心腹痼疾结气 ,故有丹参一味功同四物之说;砂仁醒脾开胃,中州健运则气血生化有源;檀香行气活血,祛瘀生新,瘀血不去则新血不生㊂临床研究表明,丹参饮联合常规西药治疗慢性肺源性心脏病心力衰竭能提高病人心功能,改善生活质量[12]㊂目前丹参饮作用于心力衰竭的靶点和通路尚不明确,因此本研究通过网络药理学探讨丹参饮治疗心力衰竭的作用机制,将为今后的研究奠定基础㊂PPI网络拓扑分析显示,丹参饮治疗心力衰竭的核心靶点有20个,居前5位度值最高分别是AKT1㊁IL6㊁EGFR㊁CASP3㊁HSP90AA1㊂AKT信号可促进细胞生长㊁增殖和生存[13]㊂AKT1信号的持续激活将诱发广泛的心脏肥大,导致心脏严重的收缩功能障碍,进而加重心力衰竭发生和发展[14]㊂IL6作为一种炎性细胞因子,可促进心肌细胞增殖,进而刺激心肌细胞外基质的合成,并通过增强炎症信号通路传导,加重心室重构程度[15]㊂EGFR是位于细胞膜表面且有酪氨酸激酶活性的糖蛋白受体,具有调节细胞增殖㊁抗炎㊁抗氧化信号传导的功能[16]㊂有研究显示,血管紧张素Ⅱ通过EGFR活化促进体内心脏肥大发展[17]㊂CASP3参与细胞凋亡途径,可促使心肌细胞中肌钙蛋白的降解,心肌细胞发生凋亡,导致心脏收缩功能逐渐丧失[18-19]㊂GO功能富集分析可知丹参饮治疗心力衰竭主要与血管的调节㊁细胞凋亡㊁细胞增殖㊁能量代谢等生物过程有关㊂细胞组分主要以膜结构为主,推测丹参饮发挥治疗作用的关键机制为干预人体神经-体液机制㊂KEGG通路富集结果显示,丹参饮治疗心力衰竭的相关通路包括IL17㊁AGE-RAGE㊁松弛素㊁HIF-1㊁PI3K-Akt 等㊂IL17是一种亲炎细胞因子,由T辅助细胞㊁巨噬细胞㊁树突状细胞㊁自然杀伤细胞等合成,可促进诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达,进而引起心肌细胞凋亡,同时激活基质金属蛋白酶,致使心肌细胞外基质合成增加,导致心肌纤维化发生[20-21],在心力衰竭中发挥着重要作用,IL17水平随着心功能的恶化而升高[22]㊂AGE-RAGE信号通路是导致糖尿病心肌病的常见信号通路,有研究表明,AGEs/RAGE水平与心肌纤维化呈正相关[23-24],AGE-RAGE可刺激人体肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)激活㊁NF-κB炎性因子㊁转化生长因子β1(TGF-β1)致纤维化因子的产生,加速心肌纤维化进程,从而加重心力衰竭[25-26]㊂松弛素是一种肽类激素,具有扩张血管㊁保护心脏细胞的作用,通过激活多个信号转导通路,抑制炎症和肌纤维细胞激活,发挥抗纤维化的作用[27-29]㊂有研究发现,松弛素家族胰岛素样肽6(INSL6)抑制血管紧张素Ⅱ导致的心脏收缩功能障碍和心脏纤维化,延缓心力衰竭发生[30]㊂HIF-1是调控缺氧反应的重要转录因子,HIF-1α是HIF-1的调节和功能亚基,通过调节血管新生㊁调控氧代谢和糖代谢,从而达到抗心肌缺氧及改善心肌代谢的目的[31-32]㊂射血分数正常的心力衰竭病人病情严重程度和不良预后与血清HIF-1α水平呈正相关[33]㊂PI3K-Akt信号通路是调节心肌肥厚的重要靶点通路,通过调节血管形成㊁细胞凋亡㊁氧化应激等过程参与心室重构[34]㊂有研究发现,PI3K-Akt信号通路的磷酸化可影响相关凋亡蛋白表达,从而降低心肌细胞凋亡,改善心功能[35-36]㊂综上所述,本研究通过网络药理学方法对丹参饮治疗心力衰竭的靶点和通路进行了初步探讨,证实了丹参饮多途径㊁多靶点治疗心力衰竭的特点,为丹参饮治疗心力衰竭提供了理论依据,同时为今后的研究指明了方向,但仍需动物实验进一步验证结果㊂参考文献:[1]PONIKOWSKI P,VOORS A A,ANKER S D,et al.2016ESCguidelines for the diagnosis and treatment of acute and chronicheart failure.The task force for the diagnosis and treatment ofacute and 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NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的细胞焦亡对哮喘大鼠炎症水平的调控作用
NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的细胞焦亡对哮喘大鼠炎症水平的调控作用王丽萍;王恩光;张俣【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2024(53)4【摘要】目的:探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在哮喘中炎症水平的调控作用机制。
方法:从GSE40732和GSE69683数据集中分析哮喘组和对照组之间的差异表达基因(DEGs),并鉴定程序性细胞死亡在哮喘中的水平。
在NLRP3敲降大鼠中建立哮喘大鼠模型,通过HE染色和Tunel染色分析肺组织的病理变化和凋亡水平,通过免疫组化检测肺组织中NLRP3的表达,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测NLRP3介导细胞焦亡相关mRNA 和蛋白表达的改变。
结果:哮喘组和对照组之间鉴定了926个差异表达基因(DEGs),细胞焦亡在哮喘中的水平显著高于对照组。
哮喘模型中的炎症、凋亡和NLRP3水平明显高于对照组,而在NLRP3敲降后,哮喘大鼠中的炎症和凋亡水平降低。
与对照组比较,NLRP3、Gasdermin D蛋白(GSDMD)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)和Caspase-8在哮喘大鼠模型中的表达升高,高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达降低(均P<0.05),这些异常表达在NLRP3敲降后得到了显著的改善(P<0.05)。
结论:NLRP3通过细胞焦亡信号可能在哮喘中发挥促炎促凋亡作用,阻断该通路可能是改善哮喘炎症的潜在治疗策略。
【总页数】6页(P449-454)【作者】王丽萍;王恩光;张俣【作者单位】新疆医科大学第五附属医院【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.间充质干细胞中血红素加氧酶⁃1的过表达抑制NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3炎症小体活化改善大鼠急性肺损伤2.NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3对哮喘小鼠气道炎症反应及细胞焦亡的调控作用3.微RNA-223-3p调控NOD样受体热蛋白结构域3/胱天氨酸蛋白酶-1/白细胞介素-1β信号通路抗小鼠肝纤维化的作用及机制4.中药活血清解汤对重症急性胰腺炎大鼠血红素加氧酶及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的细胞焦亡的调控作用5.基于NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3介导的辅助T型17细胞/调节性T细胞及IL-10/IL-17轴探究右美托咪定对大鼠肺癌术后免疫功能的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Sema3A通过调控上皮-间质转化/基质金属蛋白酶-2参与上皮性卵巢癌转移
《中国癌症杂志》2020年第30卷第6期 CHINA ONCOLOGY 2020 Vol.30 No.6428·论 著·欢迎关注本刊公众号基金项目：复旦大学附属上海市第五人民医院院内科研课题孵育项目（2018WYFY04）；国家自然科学基金（81602259）。
通信作者：张丽文 E-mail: 133********@Sema3A通过调控上皮-间质转化/基质金属蛋白酶-2参与上皮性卵巢癌转移王晓琴，傅鑫蕾，马如越，杨丽娜，陈亚萍，张丽文复旦大学附属上海市第五人民医院妇产科，上海 200240［摘要］ 背景与目的：Semaphorin 3A （Sema3A ）最初被认为在神经轴突导向中起重要作用，近期也被认为是一种候选的肿瘤抑制因子，参与肿瘤发生。
探讨Sema3A 与上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer ，EOC ）转移的关系及其潜在机制。
方法：选取2018年3月—12月于复旦大学附属上海市第五人民医院妇产科住院初治的20例腹腔转移的EOC 患者（转移组）和20例无腹腔转移的EOC 患者（非转移组）的卵巢组织蜡块标本，采用免疫组织化学法检测两组EOC 患者卵巢组织标本中Sema3A 的表达，并分析Sema3A 与各组临床病理学特征的关系。
蛋白质印迹法（Western blot ）和实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ，RTFQ-PCR ）检测5种卵巢癌细胞系中Sema3A 的表达水平；构建Sema3A 过表达和沉默细胞株；transwell 法和划痕实验检测Sema3A 对细胞侵袭和迁移能力的影响；Western blot 检测细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition ，EMT ）相关标志物和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase ，MMP ）-2蛋白的表达情况。
脱细胞人胎羊膜在促进大鼠皮肤全层切口愈合中的作用机制
脱细胞人胎羊膜在促进大鼠皮肤全层切口愈合中的作用机制陈帆;南燕;段予新;申素芳;张洁【期刊名称】《新乡医学院学报》【年(卷),期】2013(030)012【摘要】目的研究脱细胞人胎羊膜(HAM)对大鼠皮肤全层切口愈合过程中转化生长因子β(TGF-β)及凝血酶敏感蛋白l(TSP-1)表达的影响,探讨其促进全层切口愈合及无瘢痕愈合的发生机制.方法建立Sprague-Dawley大鼠全层皮肤缺损模型,然后将大鼠分为对照组和HAM组,每组15只.对照组大鼠切口用生理盐水冲洗后纱布包裹,HAM组大鼠切口外敷HAM并用纱布包裹.应用免疫组织化学技术分析切创后不同时相大鼠皮肤组织中TGF-β及TSP-1的表达.结果切口处理后第3天对照组大鼠皮肤组织TGF-β及TSP-1表达高于HAM组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HAM可减少大鼠皮肤全层切口早期愈合过程中TGF-β及TSP-1的表达,促进切口愈合,减少瘢痕增生.【总页数】3页(P945-947)【作者】陈帆;南燕;段予新;申素芳;张洁【作者单位】新乡医学院第三附属医院妇产科,河南新乡453003;新乡医学院第三附属医院妇产科,河南新乡453003;新乡医学院第三附属医院妇产科,河南新乡453003;新乡医学院第三附属医院妇产科,河南新乡453003;新乡医学院病理学教研室,河南新乡453003【正文语种】中文【中图分类】R965【相关文献】1.小肠黏膜下层与脱细胞羊膜促进大鼠损伤皮肤修复及血管形成的作用 [J], 王飞;魏红芳;胡成栋;张恩录;高爱芹;王瑞;李东风2.人胎羊膜对大鼠皮肤切创愈合中相关因素的研究 [J], 华彩红;申素芳3.人胎羊膜在促进切口愈合过程中的作用机制 [J], 罗秋燕;申素芳4.红花注射液保存人胎羊膜对大鼠皮肤切创愈合中MMP-2，MMP-9影响的研究* [J], 王君;罗秋燕;边文玲;申素芳5.重组人血小板源性生长因子增加细胞外信号调节激酶磷酸化促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面愈合(英文) [J], 程飚;刘宏伟;付小兵;盛志勇;孙同柱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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中国中西医结合杂志２０１３年１月第３３卷第１期ＣＪＩＴＷＭ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１３，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．１
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基金项目：浙江省中医药管理局重点项目（Ｎｏ．２０１０ＺＺ００９）；温州市对外合作交流科技计划项目（Ｎｏ．Ｈ２０１０００６７）
作者单位：浙江省温州医学院附属第二医院妇产科（浙江温州３２５０２７
）
通讯作者：朱雪琼，Ｔｅｌ：０５７７－８８００２５６０，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｊｗｚｚｘｑ＠１６３．ｃｏｍ
复方丹参注射液对人羊膜上皮细胞水通道蛋白３表达的影响
张译文 马小燕 丁盛娣 谢爱兰 朱雪琼摘要 目的 研究复方丹参注射液对人羊膜上皮细胞（ｈｕｍａｎ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ，ｈＡＥＣｓ）
水通道蛋白
３（ａｑｕａｐｏｒｉｎ ３，ＡＱＰ３）表达的影响，探讨复方丹参注射液治疗羊水量过少的机制。方法 选取无并发症的８例羊水过少和８名羊水量正常的足月产妇的ｈＡＥＣｓ进行原代培养，采用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ技术，检测复方丹参注射液不同浓度（０．０００、０．００１、０．０１０、０．０２０、０．０６０、０．１００ｍｇ／ｍＬ）、不同作用时间（０、６、１２、２４、４８
ｈ）作用前后，两组ｈＡＥＣｓ中ＡＱＰ３ｍＲＮＡ和蛋白的表达。结果 （１）羊水过少组ｈＡＥＣｓ中ＡＱＰ３的表达较羊水正常组下调（Ｐ＜０．０５）。（２）复方丹参注射液浓度为０．０１０ｍｇ／ｍＬ时，两组ｈＡＥＣｓ中ＡＱＰ３的表达均达到峰值，与其他浓度作用结果比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。（３）０．０１０ｍｇ／ｍＬ浓度的复方丹参注射液作用１２
ｈ，两组ｈＡＥＣｓ中ＡＱＰ３的表达均达到峰值，与其他作用时间比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。（４）０．０１０ｍｇ
／
ｍＬ浓度的复方丹参注射液作用１２ｈ后，两组ｈＡＥＣｓ中ＡＱＰ３的表达均上调，但羊水过少组中ＡＱＰ３的表达上调较羊水正常组明显（Ｐ＜０．０５）。结论 复方丹参注射液可调节ｈＡＥＣｓ中ＡＱＰ３的表达，羊水过少时复方丹参注射液对ｈＡＥＣｓ中ＡＱＰ３表达的调节作用更加明显。关键词
水通道蛋白
３
；羊水过少；人羊膜上皮细胞；复方丹参注射液
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｎ Ａｑｕａｐｏｒｉｎ ３Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ａｍｎｉｏｔｉｃ ＥｐｉｔｈｅｌｉａｌＣｅｌｌｓ ＺＨＡＮＧ Ｙｉ－ｗｅｎ，ＭＡ Ｘｉａｏ－ｙａｎ，ＤＩＮＧ Ｓｈｅｎｇ－ｄｉ，ＸＩＥ Ａｉ－ｌａｎ，ａｎｄ ＺＨＵ Ｘｕｅ－ｑｉｏｎｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ
Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ ａｎｄ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｗｅｎｚｈｏｕ（３２５０２７），ＣｈｉｎａＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ（ＣＳＩ）ｏｎ ａｑｕａｐｏｒｉｎ ３（ＡＱＰ３）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ（ｈＡＥＣｓ），ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｆｏｒ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｏｌｉｇｏｈｙｄｒａｍｎｉｏｓ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｈＡＥＣｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ８ ｈｕｍａｎ ｔｅｒｍ ｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ ｗｉｔｈ ｏｌｉｇｏｈｙｄｒａｍｎｉｏｓ ａｎｄ ｎｏ ｏｔｈｅｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（ａｓ ｔｈｅ ｔｅｓｔｇｒｏｕｐ）ａｎｄ ８ ｈｕｍａｎ ｔｅｒｍ ｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ ｗｉｔｈ ｎｏｒｍａｌ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｆｌｕｉｄ ｖｏｌｕｍｅ（ａｓ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ）ｗｅｒｅ ｐｒｉｍａｒｉｌｙ
ｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅ
ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＡＱＰ３ ｉｎ ｈＡＥＣｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＣＳＩ（０．０００，０．００１，０．０１０，０．０２０，０．０６０，ａｎｄ０．１００ ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）ａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ（０，６，１２，２４，ａｎｄ４８ ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ （１）Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ＡＱＰ３ ｅｘ－
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．（２）Ｔｈｅ ＡＱＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｐｅａｋｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＳＩ ｗａｓ ０．０１０ ｍｇ／ｍＬ，ｓｈｏｗｉｎｇ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗｈｅｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（Ｐ＜０．０５）．（３）Ｔｈｅ ＡＱＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｒｅａｃｈｅｄ ｔｈｅ ｐｅａｋ ｗｈｅｎ０．０１０ ｍｇ／ｍＬ ＣＳＩ ａｃｔｅｄ ｆｏｒ １２ ｈ，ｓｈｏｗｉｎｇ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｃｅ ｗｈｅｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（Ｐ＜０．０５）．（４）Ｔｈｅ ＡＱＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓｗｈｅｎ０．０１０ ｍｇ／ｍＬ ＣＳＩ ａｃｔｅｄ ｆｏｒ １２ ｈ．Ｂｕｔ ｔｈｅ ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ＡＱＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｇｒｏｕｐ ｔｈａｎ ｉｎ ｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＣＳＩ ｃｏｕｌｄ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ＡＱＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈＡＥＣｓ．ＣＳＩ ｓｈｏｗｅｄ ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ＡＱＰ３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈＡＥＣｓ ｏｆ ｏｌｉｇｏｈｙｄｒａｍｎｉｏｓ ｈｕｍａｎ ｔｅｒｍ ｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ．ＫＥＹＷＯＲＤＳ ａｑｕａｐｏｒｉｎ ３；ｏｌｉｇｏｈｙｄｒａｍｎｉｏｓ；ｈｕｍａｎ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ；Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｉｎ－
ｊｅｃｔｉｏｎ·５２ ·中国中西医结合杂志２０１３年１月第３３卷第１期ＣＪＩＴＷＭ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１３，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．１
羊水过少是一种常见的妊娠并发症，发病率为８％～３８％，使围产儿发病率和死亡率明显升高［１］。研究表明水通道蛋白３（ａｑｕａｐｏｒｉｎ ３，ＡＱＰ３）在人羊膜和胎盘中有表达［２，３］。无并发症的羊水过少产妇ＡＱＰ３在羊膜、绒毛膜上表达的减少，而在胎盘上的表达增加［３］。认为ＡＱＰ３在羊膜上的表达所发生的变化是一种生理性代偿反应，目的是调节母体和胎儿之间的液体以及溶质的运输，从而维持羊水量的平衡。在我国，复方丹参注射液常用来治疗羊水过少，是一种无创并且有效的治疗方法［４］，但只对部分患者有效，其具体作用机制尚不清楚。有文献报道，在缺血再灌注损伤诱导的急性肾衰小鼠模型中，小鼠肾脏髓质的ＡＱＰ２表达下调，而复方丹参注射液可以使其下调趋势得以恢复［５］。由此推测复方丹参注射液可能是通过调节胎膜ＡＱＰｓ的转录、表达而达到治疗羊水过少的目的。本研究采用ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ技术，分别从ｍＲＮＡ和蛋白质水平，检测不同浓度、不同作用时间复方丹参注射液对羊水过少以及羊水正常产妇羊膜上皮细胞（ｈｕｍａｎ ａｍｎｉｏｔｉｃ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ，ｈＡＥＣｓ）中ＡＱＰ３的表达变化，探讨其治疗羊水过少的分子机制。资料与方法１ 诊断标准 参照《妇产科学》第７版中羊水过少的诊断标准［６］，产前Ｂ超监测羊水指数（ａｍｎｉｏｔｉｅｆｌｕｉｄ ｉｎｄｅｘ，ＡＦＩ）：ＡＦＩ ８～１８ｃｍ为羊水量正常，ＡＦＩ≤５ｃｍ为羊水过少。剖宫产术时进一步核实羊水量［３］，实际羊水总量３００～２ ０００ｍＬ为羊水正常，实际羊水总量＜３００ｍＬ为羊水过少。２ 纳入及排除标准 （１）纳入标准：年龄２３～３２岁，原因不明的羊水过少和羊水量正常而行选择性剖宫产产妇；术中实际羊水总量与术前ＡＦＩ诊断相符；均签署知情同意书。（２）排除标准：有其他妊娠合并症和并发症，如糖尿病、高血压、心血管疾病、过期妊娠、胎儿畸形、胎儿生长受限、胎儿窘迫、胎膜早破、自身免疫疾病等；有催产素引产史；有药物服用史。３ 一般资料 选择２０１０年１１月―２０１２年３月温州医学院附属第二医院产科８例羊水过少的产妇，平均年龄（２８．１７±２．３２）岁，平均体重（７１．０３±４．４６）ｋｇ，孕周（３８．７５±０．８８）周，羊水指数为３．６±０．５。同时选择８名羊水量正常的产妇作对照，平均年龄（２７．６５±１．７８）岁，平均体重（７０．８１±５．６４）ｋｇ，孕周（３９．２６±１．３２）周。所有产妇均系初产妇、足月单胎。两组年龄、体重和孕周等一般资料比较，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。４
方法
４．１ 试剂与药物 兔抗人ＡＱＰ３多克隆抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ公司，美国），鼠抗人细胞角蛋白１８单克
隆抗体（武汉博士德生物技术有限公司），Ｔｕｂｕｌｉｎ抗体、辣根过氧化物酶（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＨＲＰ）
标
记山羊抗兔ＩｇＧ
、ＨＲＰ标记山羊抗小鼠ＩｇＧ（碧云天生
物技术有限公司），ＤＭＥＭ、胰酶、ＥＤＴＡ（ＧＩＢＣＯ公司，美国），胎牛血清（杭州四季青生物工程有限公司），逆转录试剂盒（ＭＢＩ公司，美国），免疫组化ＳＰ试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司），复方丹参注射液
（上海新亚药业高邮有限公司，生产批号：１０１２２７－３，规格：每支２ｍＬ
）。
４．２ ｈＡＥＣｓ原代培养
剖宫产术时取胎盘组
织，将羊膜与绒毛层钝性分离后置于无菌培养皿中，无菌的ＰＢＳ液冲洗３次，无血清培养基冲洗３次，放入含双抗的无血清培养基中灭菌２０ｍｉｎ
，用眼科剪将其
剪为１ｍｍ×１ｍｍ碎块放入无菌离心管中，加０．２５％
的胰蛋白酶消化液在３７℃的孵育箱中消化６０ｍｉｎ