2015版中国药典微生物项变化的应对策略-菌种
2015版中国药典微生物项变化的应对策略—菌种 1、 检验用菌种的选择 在药典第三次征订意见稿《9203 药品微生物实验室质量管理指导原则》的“菌种”项下有这么一句话“药品微生物检验用的试验菌应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业派生菌株”。这句话写明了中国药典对检验用菌种的挑选原则，感觉上可以使用CMCC（中国医学微生物菌种保藏管理中心）、ATCC（美国典型菌种保藏中心）、NCTC（英国典型菌种保藏中心）等等，最近还有供应商给我推荐CICC（中国工业微生物保藏中心）的菌种。但是我们作为遵循中国药典的企业来说，中国药典微生物限度及无菌检查项下的菌种是明确写明仅可使用CMCC的菌种，所以大家没有必要去挑战权威性，如果你使用ATCC的菌种，检查官到时候问你ATCC和CMCC的区别，我相信我们这种等级的肯定是说不清的，这个项目是中检所在做的研究，所以我们不去做这样的挑战，乖乖的选择符合我国国情的CMCC菌种即可，免去一系列无意义的解释。 当然有些企业的产品需要出口，要符合出口国的药典标准，国外相对来说就放宽很多，但是也有一部分国家不太承认我们的CMCC菌 种。在我的工作经历中，发现国内的审计官员对微生物方面了解的甚少，但是有次我们企业请了一名国外资深专家来我们公司全面审计的时候，他一看我们检出的环 境菌种就娓娓道来，让我很吃惊，我不知道是不是国外对于微生物这块的重视程度和我国还有一定差距还是什么，他们的药典中对于检验菌种的挑选也不止一种，认 可范围更加宽泛。现在迎审过程中，我们微生物实验室更多的是解释而非探讨，我们也希望国内的检查团队中能多一些对微生物了解的老师来给我们帮助和指导。 2、 检验用菌种的管理 我们实验室对于菌种的管理也历经了不少波折，现在的管理模式和使用下来的效果还是比较令人满意的，菌种其实最怕就是其活力消退或变异。有些外企的管理模式真的非常方便，使用定量菌株直接实验，可能现在还不太适用于我们大部分国内企业，因为他们使用的定量菌株是ATCC等授权的国外企业制造并供货的，确实非常精准，特别是M家的首席产品，我就不多说了以免有广告嫌疑，国内应运而生的定量菌株我个人还是保留意见。出去培训时还是会发现有很多国内企业对于菌种的管理方式特别是保藏方法存在一定问题，菌种死亡变异的事件还是时有发生。以下我就介绍下我们企业的菌种管理模式，并介绍2种比较方便的菌种保藏方法。 药 典的标准菌株大部分企业都会有以下七种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉，这些菌种我们是依据保 藏的效期，在每年的年末购买一次，购买的是次年要过保藏效期的标准储备菌株。这里大家可能就会有疑问了，为什么我们只有标准储备菌株，那是因为我们只购买CMCC标准菌株，即0代菌株，仅保藏使用0代复苏出来的1代标准储备菌株，使用的即是1代标准储备菌株复苏的2代菌株，这样的话最大程度上避免活力及变异事件的发生，因为实验室日常也没有精力去处理这些事情，所以在10版药典的时候，我们就把管理模式重新调整了一下，整个流程为菌株申购→菌株验收→菌株确认→菌株保藏→菌株领用→菌株使用→菌株销毁。 1） 菌株申购 购买检验用菌株，必须由检验用菌株的管理人员提出申请、阳性室负责人审核、部门经理批准后方可进行购买，公司的采购人员必须凭着被签批的单子才能够进行菌种的购买，因为这毕竟关系到生物安全问题，所以申购必须慎重。 2） 菌株验收 每支过来的0代安瓿必须经过确认，实验室至少要进行菌落形态和革兰氏染色的实验，有条件的话通过生化或其他方法确认到属种。该实验是确认菌株的纯度、活力和特性，我们是确认复苏后的1代标准储备菌株，即我们保藏的菌株，保证保藏的菌株的质量。 3） 菌株保藏 其实在确认同时我们即进行了保藏，若确认不合格，则销毁该批次保藏批的菌株，我们实验室的保藏方法很简单，也是借鉴08-09年我的领导去中检所培训带回来的保藏方法，即使用液体培养基复苏菌液，然后加入等量的20%甘油，制成含10%甘油的菌悬液，然后分装至1ml/支，可以保存2年，但是黑曲霉我们是保藏孢子悬液，贮存于-15℃以下，有效期是1年。 现在也有很多实验室使用磁珠法保藏也是觉得效果不错，其保藏后贮存在2-8℃，效期1年。 两 个方法各有利弊，甘油冷冻法每次实验使用一支，不会重复使用，避免重复冻融对菌株的挑战以及重复开管引入的污染；但是磁珠法因为是好几颗磁珠放在一管保存 液里，每次使用会从该管里夹取一粒复苏，可能重复操作引入污染，但是其优势在于对冰箱温度要求不高，一般实验室都有满足2-8℃的冰箱，而甘油冷冻管需要冷冻室进行保存，所以对没有—15℃以下温度保证的实验室来说，还需购买相应设备，这个就是各自实验室去评估选择了。 这里我还是不太建议使用斜面，一两个月就要转一次，日常事情较多且对于菌株的确认其实在传代过程中也需要进行实验确认，这样又带来附加实验，一支买来的商业派生菌株（一般在省所买来的最少也是2代了，基本都会是3代这种）管不了太久又需要买了，本来很多微生物实验室人手就不够，转种的多还要多配培养基，没必要把精力放在这些事情上，如果实验室没有冷冻冰箱，那可以考虑磁珠法，有的话可以考虑甘油冷冻法，这样可以把工作菌株的使用有效期延长到1-2年。 还有要提一下保藏培养基的问题，之前金葡、大肠、枯草、铜绿都是使用营养肉汤，生孢使用硫乙醇，白念使用马丁，黑曲霉使用TSA进行复苏，15版使用TSB、SDB、SDA了，我暂时不考虑更换细菌培养基，因为毕竟使用那么多年保藏效果比较理想，而且TSB有糖的问题，不过我还是觉得营养肉汤早晚会退出历史舞台，与其等到那时候束手无策，毕竟菌株保藏都是以年来计算的，到时候没得卖就完蛋了，还不如把事情做在前面，在保证菌株储备齐全的情况下，同步要挑战使用TSB保藏金葡、大肠、枯草、铜绿的实验（至少1年），生孢依旧硫乙醇，白念使用SDB，黑曲霉使用SDA。还有使用新的培养基复苏的菌浓问题，基本都比老的长的好，各个实验室可以先行试一下。 4） 菌株领用 我们保藏菌株的冰箱是双人双锁，2 把锁分别在阳性实验人员及阳性室负责人手上，日常取用菌株进行实验必须2人到场开冰箱取菌株，并在菌株领用台账上说明领用日期、原因、领用人等信息，保证菌株的流通可控。 5） 菌株使用 说到菌株使用我觉得我还是有些实验洁癖的，很多实验室是在生物安全柜内几个菌一起做，比如今天有3个菌的实验，都会安排在一起做。但是在我们实验室，我是严格要求在A菌和B菌之间必须清场，A菌实验使用的稀释液、枪头盒等必须撤离现场，消毒安全柜后开紫外灯30min以上，才可进行B菌株实验，并且B菌实验使用的肯定不能是A菌 实验使用余下的那些稀释液和枪头。因为实验时产生的气溶胶是我们肉眼看不见的，虽然在混匀菌液时候我们是盖紧试管盖的，但是在打开盖时我无法判断是否有带 菌气溶胶跑到空气中沾到哪里，我承认只要是无菌操作过关是不会交叉污染的，但是我不敢冒这个险，还是老老实实遵循着避免交叉污染的宗旨，就和生产清场的概 念一样。 还要提一下黑曲霉，其实国内有很多厂家还没有购买黑曲霉，当时他们问我的时候，我真的很奇怪他们怎么通过新版GMP审核的，这个暂且不论，反正我们实验对黑曲霉的处理倒是挺顺利的，当时10版药典和中检所SOP上 都写着用棉花放在管口防止孢子飞出什么的，我嫌麻烦，于是想了个法子，我们的试管是用胶质的试管塞的，斜面上黑曲霉长好后，用一次性注射器吸取稀释液从试 管塞与试管的缝隙中插进去，因为试管塞是有弹性的，那么细的针头是肯定能从其边缘插进去的，记得塞子始终保持紧闭，然后将液体打入管内直至覆盖所有黑曲霉 生长的范围，然后微微震荡将孢子洗脱出来，洗脱后，将塞子打开（因为所有菌体均以被液体覆盖故孢子飞散可能性降低很多）使用枪头或移液管吸取孢子悬液进行 稀释即可，当然取原液时候的动作应快速，减少其气溶胶与空气的接触时间，至少我们实验室没有发生过一次污染，而且黑曲霉的实验接入量控制的也很稳定。 对于菌株梯度稀释定量的问题，这里我就不多说了，这个只有多加练习了，而且每个人的梯度确实会有偏差，我们实验室是定好复苏后的培养时间，比如金葡培养24h， 那以后每次都是这个时间，这样的菌浓一般都差不多，比较好控制，这个就是勤练！当然你的计数培养基必须质量稳定，否则到时候因为计数培养基的质量问题而导 致你一直认为自己稀释的功夫不到家就没话说了。我们实验室实验都是当天直接稀释并接种的，菌量的成功率还是很高的，当然实验人员都是下了一定功夫的，特别 是那个比较无语的50-100cfu。 黑曲霉的孢子悬液、枯草的芽孢悬液和生孢的芽孢悬液都是可以经过验证增加贮存时间的，具体的方法可以去网上查文献，我觉得这个还是很有用的，使用起来很方便，关键减少工作量啊！！加个方法验证即可，恶心小段时间，舒服大段时间！ 6） 菌株销毁 这里的菌株除了保藏的标准储备菌株外，还有使用该菌株复苏出的菌液、梯度稀释的菌悬液以及菌株计数平皿，这些销毁都是要记录在案的，这个就是整个的流通过程，菌株的销毁也是要经过阳性室负责人批准后执行，并且销毁后还需要阳性室负责人复核确认。 3、 菌种实验室（生物安全实验室）的认证及安全管理 在新版GMP中对于阳性对照室有明确的规定，必须符合P2生物实验室级别，现在还是有很多药企的微生物实验室对P2这个概念有点模糊，这里解释一下，P2实验室即二级生物安全实验室，相当于BSL-2级病原微生物实验室，该级别实验室主要用于初级卫生服务、诊断和研究，其实验对象的危害等级为Ⅱ 级（中等个体危害，有限群体危害），具体定义为“能引起人类或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的病源体。实验室感 染
2015版中国药典微生物限度记录
培养基的配制
使用容器
配制培养基使用的容器应该是玻璃器皿或搪瓷器皿等。 禁用金属容器如：铁、铜、铝容器。
培养基制备方法
实验室指南
溶解培养基应当用水浴加热进行溶解。 测定pH值 矫正pH，配制培养基必须矫正pH,并进行验证。 培养基灭菌后冷却至室温（ 25 ℃）进行 pH 测试。培 养基pH范围不得超过规定的正负0.2。 <高压灭菌前的pH值应比最终pH值高0.2左右>
2015版药典微生物检查法修订内容——结果判断 微生物计数法和控制菌检查法结果判断
不再规定复试，通过实验室调查、回顾、分析结果 的准确性。
限度标准以指数方式表示：
10的一次方cfu：可接受的最大限度为20；
10 的二次方 cfu ，可接受的最大限度为 200 ；以此类 推。
2015版药典通则非无菌产品微生物限度标准增订内容
4.微生物限度标准
5.控制菌检查：保留部分生化试验 6. 修订后，控制指标更合理，计数方法及标准合理、 准确，反映真实污染情况
2015版药典微生物检查法修订内容——环境要求
目前我国药品微生物检测对环境的要求与国际标准 分级不一致。 国际要求：只要洁净环境分为 A 级、 B 级、 C 级、 D 级。 A （百级）、 B （千级）、 C （万级）、 D （十万级）。 协调案要求：试验在经过设计的可避免外来微生物 污染供试品的环境下进行。 我国修订后药品微生物限度检查对检测环境的要求： 无菌环境下符合微生物技术检验要求，单向流空气 区域内进行。
（二）2015版药典微生物检查法修订内容——环境要求
1. 强调了“微生物实验的各项工作应在专属的区域 进行，以降低交叉污染、假阳性结果和假阴性结 果的风险”。 2.无菌检查 修订前 万级（C级）下局部百级（A）或隔离器 修订后 B+A级或建议D级背景下隔离器 3.微生物限度检查 修订前 万级（C）下局部百级（A) 修订后 不低于D级背景下的B级单向流空气区域内 进行。
浅谈2015年版中国药典的重点变更-PDF (简)
2015 年版药典收载品种总数约为 5515 个，増幅达到 26.2%。
2010 版药
2015 年版药典
类别
典收载 总收载品种 新增品种 修订品种
中药
2165
化药
2139
药用辅料
132
生物制品
品种 通则、总论
131 10
小计
4567
通则(附录)
---
指导原则
---
2627 2617 约 271 145 14 约 5515 321 31
约 462 约 500
139 14 4 约 1201 29 15
约 400 149 132 62 8
约 751 145 8
不收载 品种
2 5 --6 --13 -----
4. 2015 年版药典的部份增加及修订的项目: 附录是药典的重要部份，药典的灵魂和水平均集中反映在附录中。本版是将三部 药典的附录合一，加强共性的系统化、完善化及规范化，新版 <中国药典> 的附 录调整为凡例、通则与方法、指导原则、药用辅料等单独成卷，为第四部。把以 往各部药典附录里相同的方法之间的归纳统一作为本版药典的工作重点，同时， 亦解决长期以来各部药典之间相同方法/通则要求不统一的问题。再且，附录对 药典以外的其他国家标准具同等法律效力。
4.6 二氧化硫残留的限制 通则里说明，除另有规定外，中药材及饮片(矿物类除外)的二氧化硫残留量不得 超过 150mg/kg (ppm)。
正文品种说明山药、牛膝、粉葛、天冬、天麻、天花粉、白及、白芍、白朮、党 参 10 味药材及其饮片二氧化硫残留量不得超过 400mg/kg(ppm)。
新版药典锐意加强科学监管，防止中药材加工过程中滥用或过度使用硫磺熏蒸，
2015年版中国药典微生物限度检查法
2. 薄膜过滤法
– 除另有规定外，按计数方法适用性试验确认 的方法进行供试液制备。取相当于1g、1ml 或10 cm²供试品的供试液，若供试品所含的 菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照 方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液 中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌 面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基或沙氏葡 萄糖琼脂培养基上培养。 – 培养和计数 培养条件和计数方法同平皿计数 法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜 选取平均菌落数小于100cfu 的稀释级，作为 菌数报告（取两位有效数字）的依据。取最 高的平均菌落数，计算1g、1ml 或10 cm² 供 试品中所含的微生物数。 – 如各稀释级的平皿均无菌落生长，或仅最低 稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小 于1 时，以﹤1 乘以最低稀释倍数的值报告菌 数。
1.1 总则：
• 如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供
试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认
其有效性及对微生物无毒性。 • 供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其
对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的
相容性。
1.2计数方法：
• 平皿法 • 薄膜过滤法 • 最可能数法（Most-Probable-Number Method， 简称MPN 法）。
沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培 养基，20～25℃，2～3 天 【10版：改良马丁（琼脂）培养基，23~28 ℃ ，24~48h】 沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂 培养基 ，20～25℃，5～7天 ，或直接获得 丰富孢子 【10版：改良马丁琼脂斜面培养基，23~28 ℃ ，5~7天】
新修订的《中国药典》对药品微生物检
2015版《中国药典》即将公布，新修订的《中国药典》对药品微生物检验和检定方法发生了重大变化，本次修订是对《中国药典》多年来固有的微生物检查系统进行根本性的调整，着重解决药品微生物相关检查方法及微生物限度标准与欧美等药典的协调统一问题。
宏观变化一：全面与国际接轨以无菌检查法为例从上述无菌检查法的比较中我们不难看出，新药典参考EP7.0、USP35、JPXV 标准，修订中国药典的微生物标准；参考欧美日药典标准修订菌数标准表达方式；以需氧菌总数替代细菌数、耐胆盐的格兰阴性菌替代大肠菌群等等，并增加新的概念：如含菌量较低的供试品细菌总数测定使用最大可能数法、分散均匀并非一定要溶解等等，同时新药典引入的偏差调查概念和内容更具体等等方面说明，微生物检验技术与国际标准要求接轨已成定势。
微观变化二：实验环境的修订2015年版药典中对无菌检查环境洁净度规定：无菌检查应在B 级背景下的A 级单向流洁净区域或D级背景下的隔离器中进行。
限度检查要求在受控洁净环境下的局部不低于B级单向流空气区域进行。
环境的提升，除了对药品检测设备硬件的要求提高，还有验证和维持环境要求的提高。
洁净或无菌室应配备独立的空气机组或空气净化系统，以满足相应的检验要求，包括温度和湿度的控制，压力、照度和噪声等都应符合工作要求。
空气过滤系统应定期维护和更换, 并保存相关记录。
微生物实验室应划分成相应的洁净区域和活菌操作区域，同时应根据实验目的，在时间或空间上有效分隔不相容的实验活动，将交叉污染的风险降低到最低。
活菌操作区应该配备生物安全柜，以避免危害性的生物因子对实验人员和实验环境造成的危害。
实验室环境监测要求提高，增加人员进出表面微生物的监测，以降低人员操作时带来的风险。
对微生物室使用的消毒剂和清洁剂进行验证，从而有效控制微生物，保证无菌环境达到要求。
微生物实验室需要加强人员在环境监测时的操作规范，保证环境监测数据的准确性。
而且实验人员应经过实验室生物安全方面的培训，保证自身安全，防止微生物在实验室内部污染。
2015版中国药典微生物限度解析
（MPN法） 1.3 计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用
性试验：菌种及菌液制备、培养基适用性检查 、计数方法适用性试验。 1.4 供试品检查：检验量、供试品检查 1.5 结果判断 1.6 稀释液、冲洗液及培养基
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温 细菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否 符合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检 验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有 规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
30～35 ℃ 不超过3天
20～25 ℃ 不超过5天
每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿；接种量50~100cfu ； 同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落 平均数的70 %，且菌落形态大小与对照培养基上的菌 落一致，判该培养基的适用性检查符合规定。
1.3 计数培养基适用性检查和供试品计 数方法适用性试验
• 供试品微生物计数中所使用的培养基应进 行适用性检查。
• 供试品的微生物计数方法应进行方法适用 性试验【10版：方法验证】， 以确认所 采用的方法适合于该产品的微生物计数。
• 若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时， 计数方法应重新进行适用性试 验。
1.3.3计数方法适用性试验
1. 供试液制备 2. 接种和稀释 3. 抗菌活性的去除与灭活 4. 供试品中微生物的回收
– 平皿法 – 薄膜过滤法 – 最可能数法（MPN 法）
5. 结果判断
1.4 供试品检查
• 1.4.1检验量
– 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml
2015年版中国药典微生物限度检查技术方法意见稿
附录×××非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。
除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。
本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方法。
微生物计数试验应在受控洁净环境环境洁净度10 000 级下的局部洁净度不低于B100 级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行监测。
如供试品有抗菌活性，应尽可能去除或中和。
供试品检查时, 若使用了中和剂或灭活剂，应确认其有效性及对微生物无毒性。
供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
计数方法计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-NumberMethod，简称MPN 法）。
MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN 法可能是更适合的方法。
供试品检查时, 应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，同时所选的方法的供试品用量必须具备检测充足样品量的能力，能够以保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。
所选方法的适用性须经确认。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，计数方法应重新进行适用性试验。
表 1 试验菌液的制备和使用试验菌株试验菌液的制备计数培养基适用性检查计数方法适用性试验需氧菌总数计数霉菌和酵母菌总数计数需氧菌总数计数霉菌和酵母菌总数计数金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26 003)〕胰酪大豆胨琼脂或胰酪大豆胨肉汤，培养温度30 ～35℃，培养时间18～24小时胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤，培养温度30 ～35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu胰酪大豆胨琼脂/ 胰酪大豆胨肉汤（MPN 法），培养温度30～35℃，培养时间不超过 3 天，接种量不大于100cfu铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）〔CMCC（B）10 104〕胰酪大豆胨琼脂或胰酪大豆胨肉汤，培养温度30 ～35℃，培养时间18～24小时胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉35℃，培养时间不超过3 天，接种量不大于100cfu胰酪大豆胨琼脂/ 胰酪大豆胨肉汤（MPN 法），培养温度30～35℃，培养时间不超过 3 天，接种量不大于100cfu枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)〔CMCC(B) 63 501〕胰酪大豆胨琼脂或胰酪大豆胨肉汤，培养温度30 ～胰酪大豆胨琼脂和胰酪大豆胨肉汤，培养温度30 ～胰酪大豆胨琼脂/ 胰酪大豆胨肉汤（MPN 法），培养温度注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基灵敏度检查，检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基。
中国药典2015年版抑菌效力检查法解读
中国药典2015年版抑菌效力检查法解读我国药典2015年版抑菌效力检查法解读1. 引言我国药典是我国用于规范药品质量标准的重要法律文件，其中关于抑菌效力检查法的规定对药品抑菌效力的检测至关重要。
本文将深入解读我国药典2015年版关于抑菌效力检查法的相关内容，旨在帮助读者全面理解抑菌效力的检测方法和标准。
2. 抑菌效力检查法的概述抑菌效力是指药品在规定条件下对微生物的抑制或杀灭作用，是评价药品杀菌能力的重要指标之一。
我国药典2015年版包含了对于抑菌效力的检查方法和标准，主要涉及了试验菌种的选择、培养基的配制、药品浓度的确定等方面的内容。
3. 抑菌效力检查法的步骤我国药典2015年版对抑菌效力的检查方法包括了以下几个关键步骤：（1）试验菌种的选择：根据药品的适用范围和目的，选择合适的试验菌种进行检测。
（2）培养基的配制：按照规定的配方和方法制备含有试验菌种的培养基。
（3）药品浓度的确定：确定药品的最小抑菌浓度，即在不同浓度下对试验菌种的抑菌效果。
（4）培养时间和条件：根据试验需要，在规定的时间和条件下进行培养。
（5）结果的判定：根据试验的结果判定药品的抑菌效力符合标准要求。
4. 抑菌效力检查法的标准我国药典2015年版对抑菌效力检查的标准包括了对于不同药品的抑菌效力的具体要求，主要从抑菌率、抑菌效力等方面进行了详细的规定。
这些标准不仅明确了药品的抑菌效力要求，也为药品质量的检测提供了具体的操作指南。
5. 个人观点和理解抑菌效力检查法是保障药品质量安全的重要环节，有效的抑菌效力检测有助于保障患者用药安全。
我国药典2015年版对于抑菌效力的检查方法和标准的详细规定，为药品生产企业和药品监管部门提供了具体的操作指南。
在实际操作中，需要严格按照药典要求进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性。
6. 总结我国药典2015年版关于抑菌效力检查法的相关内容对于药品抑菌效力的检测提供了明确的方法和标准，有助于规范药品质量标准，保障患者用药的安全。
2015版中国药典微生物限度
1.4.2供试品检查
• 按计数方法适用性试验确认的计数方法进行供试品 中需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的测定。
• 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定 需氧菌总数；
• 沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数 。
• 阴性对照试验 – 以稀释剂代替供试液进行阴性对照试验，阴性对 照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应 进行偏差调查。
– 若同稀释级两个平皿的菌落数平均值不小于15，则两 个平皿的菌落数不能相差1 倍或以上。
第23页，共59页。
菌数报告规则
– 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于 300cfu 的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均 菌落数小于100cfu 的稀释级，作为菌数报告（ 取两位有效数字）的依据。取最高的平均菌落 数，计算1g、1ml 或10 cm² 供试品中所含的微 生物数。
1.1 总则：
• 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细 菌和真菌的计数。
• 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符 合规定的微生物限度标准时，应按规定进行检验， 包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外 ，本法不适用于活菌制剂的检查。
• 本检查法可采用替代的微生物检查法，包括自动检 测方法，但必须证明替代方法等效于药典规定的检查方
菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2～
8℃，可在24小时内使用。稳定的黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃
，在验证过的贮存期内使用。
第12页，共59页。
1.3.2计数培养基适用性检查【10版】
细菌计数
霉菌及酵母 菌计数
金黄色葡萄球菌 营养琼脂培养基
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
2015版药典微生物增修概况_曹晓云
中国药典中国药典201520152015年版通则年版通则微生物内容的增修订概况20142014年年1212月北京月北京天津市药品检验所抗生素室曹晓云一、中国药典中国药典201520152015年版通则年版通则微生物内容的增修订概况二、中国药典中国药典201520152015年版通则年版通则年版通则--1101无菌检查法的增修订内容三、制药用水微生物检验方法与标准的修订一、中国药典中国药典201520152015年版通则年版通则微生物内容的增修订概况（一）药品微生物标准历史回顾19731973年年：19721972年起开展微生物限度检查年起开展微生物限度检查年起开展微生物限度检查，，国务院第国务院第121121121号文件号文件标志着我国药品微生物限度检查工作的正式启动19741974年年：首次颁布首次颁布《《卫生部药品卫生学检查法》（小黄本小黄本））是与药品微生物限度检查相关的检查方法19801980年年：《卫生部药品卫生学检查法》（小蓝本小蓝本））19841984、、19901990年先后修订此检查法年先后修订此检查法19951995年年：中国药典中国药典199519951995年版首次收载微生物限度检查法年版首次收载微生物限度检查法年版首次收载微生物限度检查法，，未收载限度标准20002000年版至年版至年版至201520152015年版先后收载了此检查法年版先后收载了此检查法年版先后收载了此检查法，，并进行了不同程度的修订和完善19531953年年：新中国第一部药典新中国第一部药典，，收载了无菌检查法收载了无菌检查法。
标准变化20002000年年：《中国药典中国药典》》20002000年版首次收载微生物限度标准年版首次收载微生物限度标准—在编制上延用部颁标准的做法在编制上延用部颁标准的做法，，按剂型制定限度标准标准，，按给药途径和剂型特点制定控制菌标准口服口服：：不得检出大肠杆菌外用外用：：不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌19781978年年：卫生部颁发了第一个卫生部颁发了第一个““药品卫生试行标准药品卫生试行标准””19861986年年：卫生部颁发了第一个卫生部颁发了第一个““药品卫生标准药品卫生标准””19951995年年：中国药典中国药典199519951995年版首次收载微生物限度检查法年版首次收载微生物限度检查法年版首次收载微生物限度检查法，，未收载限度标准未收载限度标准。
2015版药典菌种传代 中国药典2010年版二部及菌种使用说明书
2015版药典菌种传代中国药典2010年版二部及菌种使用说明书导读:就爱阅读网友为您分享以下“中国药典2010年版二部及菌种使用说明书”的资讯，希望对您有所帮助，感谢您对的支持!依据: 中国药典2010年版二部及菌种使用说明书1.标准菌的来源标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心(China Medical culture collection ,CMCC)提供的冷冻干燥菌种(0代)或由上级药检部门已接种好的菌种斜面(3代)。
黑曲霉的0代菌种为保存于含15%甘油的0.9%无菌氯化钠溶液中的孢子悬液冷存管。
中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌种的标签1CMCC(B)代表细菌(bacteria),CMCC(F)代表真菌(fungi)每种菌具有固定的代号。
2.标准菌的验收从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。
接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。
在相应的菌种接收记录上记上所有的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。
在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括:菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。
新购入的0代原始菌种储存于,20?，有效期为三年。
从上级药检部门购买的已接种好的菌种斜面(3代)应检查菌种管是否完好。
储存于2, 8 ?，有效期为3个月。
3. 标准菌的复苏、复壮及标准储备菌株的制备3.1物品及试剂:接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球3.2培养基2改良马丁琼脂培养基:用于黑曲霉复苏、复壮.液体硫乙醇酸盐培养基:用于生孢梭菌复苏、复壮.营养肉汤培养基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。
改良马丁培养基:用于白色念珠菌复苏、复壮.3.3操作步骤:a.打开洁净工作台。
b.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并让其自然风干。