基于流式细胞术的细胞周期分析
流式细胞术检测细胞周期的技术流程
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细胞周期的流式检测方式技巧
细胞周期的流式检测方法细胞周期（cell cycle）是指细胞从一次分裂完成开始到下一次分裂结束所经历的全过程，分为G0/G1期、S期、G2/M期。
在科研实践中，很多实验具有对细胞群体的周期分布进行检测的需求。
细胞群体周期测定的方法有很多种，最常用的是PI（碘化丙啶）渗入DNA进行染色，然后通过流式细胞仪检测PI从而测定细胞群体的周期分布。
因此，下面笔者主要通过BD（Becton＆Dickinson）公司生产的BD FACSCalibur流式细胞仪测定PI标记的细胞群体为例，对细胞周期的流式检测方法进行阐述。
一、PI染色步骤概略1、单细胞悬液离心，1500rpm , 5min，弃上清。
2、PBS 1ml离心，弃上清。
3、70%酒精2ml，4℃，30min，离心，弃上清液。
4、PBS 1ml离心，弃上清。
5、RNase A的PBS溶液(20ug/ml)，500ul，37℃，30min，离心弃上清。
6、PBS 1ml离心，弃上清。
7、PI的PBS溶液(50ug/ml)，500ul，室温避光孵育30min。
8、吹打混匀，300目筛网过滤至流式管中，4℃保存，待测。
二、Calibur仪器设置及数据收集1、依次打开Calibur机器电源、电脑开关和CellQuest Pro软件，按快捷键Command+B连机，按快捷键Command+1、2、3、4调出Detectors/Amps面板、Threshold面板、Compensation 面板和Status面板，软件的操作界面如图1所示。
图1. Cell Quest Pro软件操作界面2、建立实验模板，包括FSC/SSC散点图、FL2-W/FL2-A散点图和FL2-A直方图。
因为PI 在Calibur上是由488nm的激光器激发，530/30滤光片收集信号，所以选择FL2通道进行检测。
细胞周期是2N和4N的循环，所以FL2通道的Mode参数应设置为Lin模式，同时阈值（Threshold）的Primary Param参数设置为FL2-H，Four Color DDM Param参数设置为FL2，如图2、图3所示。
流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)
流式细胞仪应用——利用PI检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis) 本文主要讲述PI单染检测细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)PI（碘化丙啶）染色特点：一是能够与双链DNA/RNA螺旋的大沟部位结合，二是不能通过功能正常的完整细胞膜。
基于以上特性，目前主要有两大方面的应用，配方也不同：细胞周期和细胞凋亡(Apoptosis)一方面的应用是检测细胞周期，检测细胞周期时，为了保证所有的细胞都能染上PI，因此要将细胞用乙醇固定，并加入Triton X-100 ，以增加膜的通透性；同时由于DNA使细胞的粘附性增大，加入EDTA以降低细胞粘附性；为了消除RNA的干扰，要加RNAase。
由于要鉴定DNA含量，因此PI染料必须过饱和，所以PI终浓度很高，一般50ug/mL。
由于晚期凋亡细胞DNA断裂形成亚二倍体峰，因此可同时检测凋亡。
另一方面的应用是检测膜通透性（凋亡），由于PI不能进入完整的活细胞膜，因此一般认为PI染色阳性的细胞是死细胞。
Annexin V/PI 凋亡检测试剂盒中就是这种染液，它的作用是鉴定死细胞，从而与凋亡细胞区分开来。
它的配制就是将PI溶于PBS，终浓度较低，一般2.5ug/mL。
所需试剂：1、PI染液：用于检测细胞周期的PI配制如下：方法一：10×PI配制方法,用时用PBS稀释至工作液：5mg-----PI0.1ml---Triton X-1003.7mg--EDTA10ml----PBS2、RNaseA——2mg方法二,直接配制PI工作液：PI -----5mgRNaseA——2mg1.0%Trition X-100——0.25ml枸椽酸钠——100mg生理盐水——65ml调pH值至7.2-7.5加蒸馏水至100ml, 棕色瓶分装，保存在4℃操作步骤1.细胞培养铺细胞至6孔板或者35mm培养皿，约4－5*10e5 cells/well, 如果要加药物，在此时可以加以不同种或不同浓度的药物。
流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程
流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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流式细胞仪检测细胞周期原理和方法
流式细胞仪检测细胞周期原理和方法I流式细胞仪（FCM ）检测细胞周期的原理和方法高考和模拟试题中经常会出现流式细胞仪检测细胞周期图像，那么, 什么是流式细胞仪？如何检测细胞周期?流式细胞仪是一种在功能水平上对单细胞或其他生物粒子进行定量分析和分选的检测手段，它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检査相比，具有速度快、精度高.准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。
流式细胞仪，乂称荧光激活的细胞分选器，作为进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体力学、图像技术、细胞生物学、免疫学理论于一体，是一种非常先进的检测仪器,被誉为生物医学实验室的“CT"。
流式细胞术已经成为一种用途最广泛和最先进的细胞分析技术，在细胞生物学、血液学、肿瘤学、免疫学等基础和临床医学领域发挥着重要作用。
流式细胞讣的基本结构流犬细胞计主要山流动室与液流系统、激光源与光学系统、光电管与检测系统、计•算机与分析系统四部分组成（如典例分析 槽品»・正电荷偏 •分光的向第散射尤检测話 植満充Mi 信号•夕 ••負电（2015年北京高考试题）流式细胞仪可根据细胞中DNA 含量的不同对细胞分别计数。
硏究者用某抗癌药物处理体外培养的癌细胞，24小时后用流武细胞仪检测，结果如图。
对检测结果的分析错误的是【答案】C【解析】从题目图中我们不难看出有两个峰值细胞的数U 最多，分别 对应的DNA 含量为40和80。
可知40的应该是处于分裂间期的G1期细胞，G1期时间比较长。
而80的细胞应该是属于G2期和分裂期的细胞，DNA 含量已经加倍。
因此A 选项中b 峰中细胞的DNA 含量是a 峰中的2倍是正确的。
B 选项中a 峰和b 峰之间应该是细胞周 期中的S 期，正在进行DNA 分子复制。
C 选项中，处于分裂期的细胞DNA 含量处于加倍状态，应该i|•数在b 峰中。
D 选项通过看右侧图可知b 峰明显下降，可知应该是抑制了 DNA 分子的复制，DNA加倍的细胞明显减少，所以D 选项正确。
流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程
流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程哎呀，这可是个不简单的活儿啊！今天我们就要聊聊流式细胞术检测细胞周期的原理及技术流程。
话说这个方法可是科学家们研究细胞生长和分裂的重要工具呢，那咱们就好好聊聊吧！咱们得明白什么是细胞周期。
简单来说，就是细胞从一个生命周期阶段到另一个阶段的过程。
就像人一样，从出生到长大再到老去，每个阶段都有不同的特点和任务。
而细胞也是这样，它们也有自己的生命周期，从分裂开始，到分化成不同的细胞类型，再到死亡或修复损伤。
如何知道这些细胞在什么时候开始分裂、什么时候结束呢？这就需要用到流式细胞术了。
流式细胞术的原理其实很简单，就是通过激光或其他光源对细胞进行照射，然后利用特殊的摄像头捕捉不同颜色的荧光染料标记的细胞。
这些荧光染料会因为细胞内部的某些分子而发光，所以我们可以通过观察荧光的颜色和强度来判断细胞的状态和位置。
咱们就来看看流式细胞术的技术流程吧。
第一步，准备工作。
先要把待检测的细胞样本准备好，然后把它们稀释到一定浓度，这样可以让更多的地方都能看到荧光信号。
接着，要把样品放到流式细胞仪上，这里有一个小技巧：要尽量让样品均匀分布，这样才能保证检测结果的准确性哦！第二步，激光照射。
这时候要用到激光器或者其他光源对样品进行照射。
记住啊，这个过程一定要快，否则荧光信号可能会减弱或者消失。
不过不用担心，现在的流式细胞仪都设计得很聪明，能够自动调整激光功率和时间长度，以获得最佳的检测效果。
第三步，数据采集。
照射完成后，流式细胞仪就会自动记录下每个荧光信号的位置、强度和持续时间等信息。
这些数据会被传输到电脑上进行分析和处理。
别看这步骤听起来简单，实际上需要非常高的精度和速度才能做到哦！第四步，数据分析。
这一步主要是通过软件对收集到的数据进行分析和比对，找出其中的规律和异常情况。
比如说，我们可以通过观察不同细胞的荧光信号强度来判断它们的生命周期阶段；也可以通过比较不同样品之间的荧光信号差异来寻找潜在的疾病标志物等等。
流式细胞术系列之-用ModFit软件分析DNA倍体和细胞周期
【临床意义 临床意义】 临床意义
• 发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断 发现癌前病变， • 在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用 在肿瘤的诊断、 • 在指导肿瘤化疗中的作用
乳腺癌DNA异倍体患者生存率
乳腺癌肿瘤细胞异倍 体患者长期生存率显 著下降
【临床病例】 临床病例】
AL 骨髓
Diploid: 46.75 % Dip G1: 97.54 % at 46.06 Dip G2: 0.58 % at 92.12 Dip S: 1.88 % G2/G1: 2.00 %CV: 2.26 Aneuploid 1: 47.55 % An1 G1: 93.05 % at 49.83 An1 G2: 0.00 % at 99.67 An1 S: 6.95 % G2/G1: 2.00 %CV: 2.13 DI: 1.08 Aneuploid 2: 5.70 % An2 G1: 94.97 % at 55.72 An2 G2: 5.03 % at 103.44 An2 S: 0.00 % G2/G1: 1.86 %CV: 4.52 DI: 1.21
• 倍体（Ploidy）： 倍体（ ）：原指染色体数目。流式中用来描述总的 ）： DNA含量。 • 二倍体细胞有正常细胞的DNA含量但不除外染色体异常。 • DI为1.9-2.1 的细胞为四倍体（CV为5%时）。在二倍体和四 倍体区域之外的统称异倍体。
结果分析
• CellQuest、WinMDI等软件均可以进行分析，但需要手 工进行参数统计和计算； • 推荐使用ModFit分析软件（分析如下：） • 1、打开软件； • 2、在FL2-W/FL2-A散点图中设定单个细胞门（R1）， 去除聚集细胞，必要时可以设两个门。 • 3、在FL2-A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图 • 注：该软件可以自动分析，也可手动分析；可以分析 凋亡、异倍体、各期比例等；结果均自动计算。
流式检测细胞周期和凋亡实验步骤
流式检测细胞周期和凋亡实验步骤流式细胞技术检测细胞周期分布1) 已转染miRNA mimics的细胞培养达到85％融合时，用胰酶消化细胞。
1000 rpm，离心5min，收集细胞沉淀；2) 已消毒的PBS重悬细胞，1000 rpm/min，离心5 min，收集细胞。
重复此步骤2次，以除去胰酶；3) 加入预冷的70%乙醇固定细胞过夜；4) 第二天1000rpm，离心5 min，收集细胞沉淀，PBS重悬两次，以除去乙醇；5) 离心后加入500ul PBS重悬细胞，加入碘化丙锭(PI)染色液(含50mg/L PI，1g/L Triton X-100，100g/L RNase)混匀，4℃避光孵育30min。
6）流式细胞仪FACStar (美国BD公司) 检测。
接收的信号经Cellquest软件处理，对检测细胞的荧光强度进行分析。
实验重复3次。
2.11流式细胞技术检测细胞凋亡水平1) 已转染BART6-3p mimics的细胞培养达到85％融合时，将上清培养液收集至离心管内；常常2）PBS清洗贴壁细胞3次，用胰酶消化细胞（注意：消化时不可过度），收集于第一步的离心管内；3) 1000 rpm离心5min，弃上清收集细胞，PBS轻轻重悬后，加入195 ulAnnexin V-FITC结合液，吹打混匀，重悬细胞，加入5ul Annexin V，轻轻混匀。
避光室温孵育15min；4) 加入10 ul PI染色液，轻轻混匀，避光孵育；空白：Annexin V—FITC结合液200ul双染：185ul结合液+5 ulAnnexin V—FITC+10ul PI单染：195ul结合液+5ul Annexin V—FITC190ul结合液+10PI5) 进行流式细胞仪检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，PI为红色荧光。
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基于流式细胞术的细胞周期分析
细胞周期是生命科学中一个非常重要的概念。
细胞周期指的是细胞在生命周期
中的一次分裂过程的全过程，包括从细胞生长、DNA复制到细胞分裂等一系列过程。
细胞周期的控制与细胞的增殖和分化、肿瘤的发生和发展密切相关。
因此，研究细胞周期对于我们深入了解生命活动、疾病发生机制以及治疗等方面都有着重要意义。
细胞周期的研究手段有很多，其中流式细胞术技术是一种经典且重要的方法。
流式细胞术是一种将细胞悬浮液通过装置推进以获得细胞个体某些特征的技术，它可以同时获得大量的细胞特征信息，包括细胞的大小、形态、DNA含量等参数，
并且可以对这些参数进行统计分析。
在细胞周期研究中，通过采用流式细胞术对细胞进行染色分析，可以准确测定细胞周期的各个阶段，对细胞周期的研究提供了非常有力的工具。
细胞周期可以分为四个主要阶段：G1期、S期、G2期和M期。
G1期为生长期，细胞的体积增大，蛋白质合成增加，准备进行DNA复制。
S期为DNA合成期，细胞的DNA复制分为前期和后期两部分，复制完成后，细胞核内将有两套完全相
同的DNA序列。
G2期为后生长期，细胞生长和检查DNA复制的准确性。
M期为
分裂期，包括前期、中期和后期三个分阶段。
其中中期时细胞染色体粘附到纺锤体纤维上并完成分离，后期时新核膜形成，染色体解缠并核质分划，两个新的细胞膜形成。
在细胞周期分析中，可以通过多种方法染色来区分不同时期的细胞。
例如，DNA染色剂如荧光素-二乙酸盐（PI）染色，可以区分G1期、S期和G2期细胞；
利用蛋白质抗体标记技术可以检测细胞的分裂状态，还可以用流式细胞术探测特定分子（如细胞周期蛋白等）的表达量来分析细胞周期进程。
通过不同的染色方式，我们可以精准地区分不同的细胞周期阶段，实现对细胞周期的深入研究。
细胞周期研究的应用范围非常广泛。
在肿瘤学领域，流式细胞术被广泛应用于
分析肿瘤细胞的分裂、生长特性和药物处理后的变化。
通过对细胞周期阶段特异性化合物的筛选，可以发现对某些恶性肿瘤的治疗非常有效的药物。
此外，在生殖和发育领域，研究细胞周期也有着重要的意义。
例如，在分析人类精子发生的过程中，通过对精子中细胞核DNA染色发现异常率，可以探究不为人知的多发细胞核精子
的发生机制。
在其它生命过程研究中，细胞周期也有着重要的应用，如干细胞采集、微生物繁殖等。
总的来说，流式细胞术是分析和研究细胞周期的一种经典且实用的技术。
在目
前的生命科学研究中，细胞周期的研究已经成为热门的前沿课题之一，随着技术的不断发展和进步，我们相信细胞周期的研究将会为我们揭示更多神奇的生命活动奥秘。