TGF-β通路和上皮-间质转化那点儿套路
上皮细胞间质化与间质细胞上皮化相互转化机制-细胞生物学论文-生物学论文
上皮细胞间质化与间质细胞上皮化相互转化机制-细胞生物学论文-生物学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——上皮细胞间质化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是上皮细胞通过特定程序从黏附细胞形态向具有间质表型游离细胞形态转化，并获得侵入细胞外基质能力的一系列转化过程。
这种后天获得运动能力的细胞在移行过程中可再次向上皮细胞或其他细胞类型转变，即间质细胞上皮化（mes-enchymal-epithelial transition,MET）。
EMT与MET的相互转化与肿瘤的发生、发展、转移关系密切[1-2].目前，EMT与肿瘤关系及其临床应用已成为研究热点。
1 EMT在生理过程中的作用1.1上皮细胞和间质细胞的特点根据上皮细胞和间质细胞在形态和功能上的不同，参与EMT 过程的这两种类型细胞有以下特点：（1）上皮细胞由单层/多层立方细胞或柱状细胞有规律的排列，它们由细胞间黏附复合体紧密黏附在一起，其基底膜具有使上皮细胞与其他组织分离的特性，显示出顶端-基底极性。
（2）间质细胞由于缺乏细胞间连接和极化作用，以个体细胞的形式存在于基质中[3].1.2 EMT的功能分型EMT过程根据不同的功能影响分为3种类型Ⅰ型EMT与胚胎形成、器官发育相关，包括在胚胎发育时期原始的上皮细胞向移行的间充质细胞转变的过程。
着床后第1次EMT发生在胚层分化清楚后的原肠胚，初级EMT分化产生不同的细胞类型，中胚层细胞沿着胚胎中轴线压缩形成不同的细胞。
除脊索以外，所有来源于早期中胚层的胚胎结构都将通过连续的EMT和MET改变最后形成不同的器官和组织[1,4].Ⅰ型EMT 与创伤修复，组织再生和器官纤维化有关[5-6].在创伤和炎症损伤刺激下，组织中成熟上皮或内皮细胞转化形成成纤维细胞及其他相关细胞，导致组织重构，这种EMT过程在刺激消失后终止[2,7].Ⅰ型EMT与肿瘤形成及转移相关，发生转化的上皮癌细胞在基因（特别是与克隆产物相关的基因）和表观遗传学方面与正常上皮细胞不同，在局部肿瘤的发展过程中起重要作用：癌细胞向间质细胞表现转化而具有侵袭性并向肿瘤发展[5].成人生理的EMT 是一个形态学过程，特征是从上皮表型到间质特性的转变，细胞凋亡和替换比率与组织功能保持着平衡，从而维持内环境的稳态。
TGF-β超家族成员介导的信号转导通路和对肿瘤发生的影响
抑制转录因子 ｐ ３ ６ 功能的发挥 ， 并借助于 Ｔ Ｆ Ｂ促进上皮 细 Ｇ— 胞 向间质细胞转换 （ ＭＴ 、 Ｅ ）侵入和代谢 。因此 ｐ ３突变引起 ５ 的细胞癌变需要 由 Ｔ Ｆ Ｂ介导的细胞代谢 的参与ｌ。 Ｇ— １ １ １ 除 了 ｐ ３之 外 ， Ａ — Ａ — Ｐ ５ Ｒ Ｓ Ｒ Ｆ ＭＡ Ｋ信 号 通 路 也 可 能 在
期 ）Ｇ 、 ２期 和有丝分裂 期 （ Ｍ期 ） 而细胞不 同时期 之间 的转 ，
换要依 赖一系列 的细胞周期蛋 白及细胞周 期蛋 白依赖性激 酶 （ ｄ ） Ｔ Ｆ １对细胞命运 的调控 主要是通过对 Ｃ ｋ 分 Ｃｋ 。 Ｇ 一 ３ ｄ、 化 因子 和肿 瘤抑制 因子 的表 达等来调 控细 胞增 殖和 分化 。
Ｔ Ｆ Ｂ的角色转换 中起重要作用Ｉ． Ｇ— ｌ ２ １
另外 ， 某些表观遗传现象的发生同样可以促使 Ｔ Ｆ Ｂ的 Ｇ— 角色转换 。Ｐ Ｄ １基因的低 水平甲基化 能够使 Ｔ Ｆ Ｂ在胶 Ｇ Ｆ ３ Ｇ—
质瘤细胞 中促进癌细胞的增殖【。 １ 在头 、 ３ １ 颈和外阴的扁平细胞
２ Ｇ — 信号转导通路对肿瘤发生的影响 Ｔ Ｆ Ｄ
Ｔ Ｆ ｐ超家族在哺乳 动物 中有超 过 ３ 的细胞 因子 ， Ｇ— ０种
在胚胎 细胞生长发育 的早期就 已经开始参 与细胞 的分化调
癌细胞 中， 具有 信号转导功能 的磷蛋 白 Ｄ Ｂ Ａ ２表观遗传水平 的下调 ， Ａ ２的下调使 Ｔ Ｆ Ｄ Ｂ Ｇ ｂ能促进细胞迁移和增殖 。 Ａ ２ Ｄ Ｂ 表达水平 的下调 能够使 Ｔ Ｆ １促进细胞迁 移和增殖 ，而 当 Ｇ一 ３
控 ；调节动物胚轴 的图示形成等 。 但近年来 由 Ｔ Ｆ Ｂ超家 Ｇ— 族成员介 导的信号转 导对卵泡 的生 长发育及 成熟过 程 以及
Rho信号通路抑制剂Y27632抑制TGF-β诱导的MCF-7细胞上皮间质转化
２ ０ １ ５年 １ ２月
ＤＯ Ｉ ： １ ０ ． １ ３ ３ ６ ４ ￣ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ － ６ ５ １ ０ ． ２ ０ １ ５ ０ ０ ０ ５
Ｒ ｈ ｏ 信号通路抑制剂 Ｙ ２ ７ ６ ３ ２ 抑制 Ｔ Ｇ Ｆ － ￣诱导的
ＭＣ Ｆ ． ７细胞 上皮 间质转化
王 楠 ，庄 春雨 ，宋铁 峰 ，袁 颖 ，张 蕊验室 ，天津市工业微生物重点实验室 ，天津科技大学生物工程学 院 ，天津 ３ ０ ０ ４ ５ ７ ）
摘
要 ：许 多研 究表 明在乳腺癌 的发 生过程 中上皮间质转化 （ ｅ ｐ ｉ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ １ ． ｔ ｏ ． ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ， Ｅ ＭＴ ） 起到十分 重要
第３ ０卷
第 ６期
天 津科技大 学学报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｔｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ＆Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
、 ｂ１ ． ３ ０ ＮＯ ． ６ Ｄｅ ｃ ． ２ ０ １ ５
Ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｉ ｎ ｇ Ｍ ＣＦ － － ７ Ｃｅ ｌ ｌ Ｅｐ ｉ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ － － ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｃ ｈ ｙ ｍａ ｌ Ｔｒ ａ ｎ ｓ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ
ｂ ｙ ＴＧＦ － ｐ ｗｉ ｔ ｈ Ｒｈ ｏ Ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｉ ｎ ｇ Ｐ ａ ｔ ｈ ｗａ ｙ Ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ Ｙ２ ７ ６ ３ ２
Ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｙ， ｇ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｂｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ＆Ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｙ， ｇ Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ３ ０ ０ ４ ５ ７ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
肝脏细胞上皮间质转化 - 生命的化学-官方网站
文章编号: 1000-1336(2012)06-0496-06收稿日期：2012-02-15作者简介：冯娜(1988-)，女，硕士生，E-mail: nancy_f n @163.c o m ；苏娟(1973-)，女，博士，副教授，E -m a i l : juansu6@ ；田沛(1990-)，男，本科生，E-mail: tianpei-03@ ；朱海英(1969-)，女，博士，教授，E-ma il: zinnia69@ ；胡以平(1954-)，男，博士，教授，通讯作者，E-mail: yphu@肝脏细胞上皮间质转化冯 娜 苏 娟 田 沛 朱海英 胡以平第二军医大学细胞生物学教研室，上海 200433摘要：上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是指上皮细胞通过特定的程序转化为间质细胞表型的可逆的生物学过程。
目前认为，EMT 参与肝脏在胚胎早期的发育，而且是成体肝脏受损后一种可能的修复机制。
同时也发现，EMT 可以参与肝肿瘤的侵袭和转移过程，是决定肿瘤侵袭和转移能力的关键因素之一。
对肝脏中EMT 现象的认识，将可能为肝脏疾病的研究和防治提供新的思路。
关键词：上皮间质转化；肝脏发育；肝再生；肝肿瘤中图分类号：Q28上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)是指上皮细胞在特定的生理和病理情况下向间质细胞转化的现象[1]。
1968年，Elizabeth Hay 在鸡胚原条形成模型中首次提出了“上皮间质转变(epithelial-mesenchymal transformation)”这一概念。
随后“transition(转化)” 逐渐替代“transformation(转变)”而得到广泛应用，这是因为它能更加准确地反映EMT 过程的可逆性及其不同于恶性转化的事实。
2003年，国际EMT 学会(the EMT International Association, TEMTIA)第一次会议则将上皮间质转变(epithelial-mesenchymal transformation)和上皮间质转分化(epithelial-mesenchymal transdifferentiation)统称为“上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)”。
TGF-beta_smad信号通路的传导
抑制型SMAD蛋白（I-smad）
包括smad6、smad7； 功能：阻止受体对R-smad的磷酸化，从而阻 断信号传导； 原因：I-smad与R-smad结构相似，更有效的 结合Ⅰ型受体，从而阻止R-smad与Ⅰ型受体 结合。 在TGF-β信号通路中，主要是smad7起作用。
TGF-β/smad信号通路在糖尿病肾病 中的作用
TGF-β/smad信号通路的传导
信号通路在传导中的3个主要步骤
1、TGF-β与细胞表面受体结合，形成异源三聚体
2、异源三聚体通过激活R-smad蛋白，将信号传导至胞浆内
3、R-smad与Co-smad结合后，转移至细胞核，与靶基因结 合，调节蛋白合成
TGF-β的分子结构和生物特性
TGF-β-------(transforming growth factor beta,转化生长因子-beta)是一种 多向性、多效性的细胞因子，以自分泌或旁分泌的方式通过细胞表面的受 体信号转导途径调节细胞的增殖、分化、凋亡，对细胞外基质的合成、创 伤的修复、免疫功能等有重要的调节作用。 成熟的TGF-β是通过二硫键连接而成的分子量为25×10³ 的同质二聚体。
转化生长因子超家族
TGF-β
活化素
骨形成蛋白
TGF-β有三种同分异构体
TGF-β1 -----在肾脏的表达最多，分布于肾小 球、肾小管，活性最强。 TGF-β2 -----只表达与肾小球旁器。
TGF-β3 -----分布于TGF-β1相似，但数量较 少。
TGF-β的储存及激活
新合成的TGF-β以非共价键与潜活性相关蛋 白（LAP）形成没有活性的休眠复合体，储 存在血小板的α颗粒中。 在强酸、强碱、高温、纤溶酶、组织蛋白酶 作用下，TGF-β脱去LAP而活化,与靶细胞膜 上的受体结合，从而发挥生物效应。
TGF-β1对人子宫颈腺癌 Hela 细胞上皮间质转化的影响
TGF-β1对人子宫颈腺癌 Hela 细胞上皮间质转化的影响杨成万;高霞;周铁军;张强【摘要】目的：研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对宫颈腺癌 Hela 细胞上皮间质转化的影响。
方法体外培养人宫颈腺癌Hela 细胞。
对照组：用不含 TGF-β1的无血清培养基培养 Hela 细胞。
试验组：用不同浓度 TGF-β1(0.01、0.10、1.00、10.00 ng/mL)刺激 Hela 细胞。
在刺激后不同时间点用倒置显微镜观察其形态变化,并用半定量 RT-PCR 法和细胞免疫组织化学方法分别检测细胞中上皮间质转化相关标记物 E-cadherin、Vimentin 的 mRNA 和蛋白表达水平。
结果与对照组相比,不同浓度TGF-β1刺激 Hela 细胞48 h 时开始出现形态变化,刺激72 h 后变化更明显,大部分细胞呈现明显的间质细胞形态；半定量 RT-PCR 检测结果显示,TGF-β1刺激后,Hela 细胞的上皮标记物 E-cadherin mRNA 表达下调,间质标记物Vimentin mRNA 表达上调且均呈浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P <0.05)；细胞免疫组织化学结果显示,TGF-β1刺激后,随着 TGF-β1浓度的增加 E-cadherin 蛋白的表达逐渐降低,Vimentin 蛋白的表达则逐渐升高,与对照组相比差异有统计学意义(P <0.05)。
结论TGF-β1可诱导宫颈腺癌 Hela 细胞发生上皮间质转化。
%Objective To investigate the effect of TGF-β1 on epithelial mesenchymal transition in Hela cells of human cervi-cal cancer.Methods Hela cells of Human cervical cancer cultured in vitro were divided into the experimental group and control group.In the control group,Hela cells were cultured in serum-free medium without TGF-β1.In the experimental group,Hela cells were treated with different concentrations of TGF-β1 (0.01,0.10,1.00,10.00 ng/mL).The morphological changes of Hela cells of human cervical cancer were stimulated by TGF-β1 at different time pointsobserved under an inverted microscope,while the expres-sions of mRNA and protein of E-cadherin and Vimentin in Hela cells were detected by semi-quantitative RT-PCR assay and cellular immunohistochemistry respectively.Results Comparing with the control group,Hela cells stimulated by TGF-β1 for 48 h began to have morpholog icalchanges.Mesenchymal morphology changes were observed obviously after 72 h.RT-PCR analysis showed that the expression of epithelial marker E-cadherin mRNA was down regulated,while the expression of mesenchymal marker Vimentin mRNA was increased and showed a concentration dependence after the stimulation of TGF-β1,Comparing with the control group, the difference was statistically significant (P < 0.05 ).After stimulation of TGF-β1 in Hela cells,cellular immunohistochemistry showed that the concentration of TGF-β1 increased,the expression of E-cadherin protein gradually decreased,and the expression of Vimentin protein gradually increased at the same paring with the control group,the difference was statistically significant (P <0.05).Conclusion TGF-β1 may induce epithelial mesenchymal transformation in Hela cells of human cervical cancer.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2015(000)022【总页数】4页(P3030-3033)【关键词】宫颈肿瘤;转化生长因子β1;上皮间质转化【作者】杨成万;高霞;周铁军;张强【作者单位】泸州医学院附属医院病理教研室，四川泸州 646000;泸州医学院附属医院病理教研室，四川泸州 646000;泸州医学院附属医院病理教研室，四川泸州 646000;泸州医学院附属医院病理教研室，四川泸州 646000【正文语种】中文【中图分类】R737.3子宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，组织学类型以鳞状细胞癌居多，近20年来宫颈腺癌的发病率成倍增长且趋于年轻化[1]。
上皮-间质转化及其在肺纤维化中的作用
上皮-间质转化及其在肺纤维化中的作用摘要】上皮-间质转化（EMT）是指上皮细胞向间充质细胞转化的生物学过程。
在肺纤维化中，肺上皮细胞经EMT转化为成纤维细胞和肌成纤维细胞，促进病程的发展。
【关键词】上皮-间质转化转化生长因子-β肺纤维化【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）17-0372-01EMT是指上皮细胞向间充质细胞发生转化的现象。
其主要特点包括：1）细胞间紧密连接消失；2）上皮细胞标志蛋白缺失，间充质细胞标志蛋白的获得；3）细胞功能的改变[1]。
1 EMT的分类近年来，随着对EMT的深入研究，人们将EMT分为3种类型：在胚胎形成早起和器官发育阶段，上胚层细胞发生EMT，促进器官形成，这种EMT被称为I型EMT；在器官纤维化过程中，巨噬细胞释放大量的细胞因子，促进上皮细胞发生EMT，最终导致器官纤维化，和I型EMT相比，这种EMT发生在器官纤维化过程中，称为II型EMT；而III型EMT主要发生在肿瘤的形成和转移过程中，恶性肿瘤细胞通过EMT获得迁移和侵袭的能力，进而进入血管和淋巴管进行转移[2]。
2 EMT的发生机制TGF-β是EMT发生的重要诱导因子之一，TGF-β信号转导通路是一个非常复杂的网络，主要包括：Smads依赖通路和非Smads依赖通路。
2.1 Smads依赖通路TGF-β首先与TGF-β II型受体（TβRII）结合形成复合物，导致后者构型发生改变，被TGF-β I型受体（TβRI）识别并结合，形成三聚体。
被TβRII磷酸化的TβRI启动细胞内信号转导，调节EMT相关转录因子的表达。
文献报道，阻断TβRI能够阻断TGF-β诱导EMT的发生[3]。
表明TGF-β/Smads通路在EMT中发挥重要的调节作用。
2.2 非Smads依赖通路在EMT中，TGF-β与其受体结合后，可活化PI3K/Akt通路和MAPKs通路，调节转录因子Snail的表达，导致E-钙粘素的缺失，由于该过程的发生不通过Smads，因此被称为非Smads依赖性途径。
PPAR-γ激动剂对TGF-β诱导的肺泡上皮间质转化的影响的开题报告
PPAR-γ激动剂对TGF-β诱导的肺泡上皮间质转化
的影响的开题报告
背景介绍：
肺泡上皮间质转化 (epithelial-mesenchymal transition, EMT) 是指肺泡上皮细胞向肺泡间质细胞转化的一种生理过程。
在某些疾病，如肺纤维化和肺癌中，EMT 过程可导致肺泡结构受损并且肺功能下降。
过去的研究发现，细胞因子TGF-β可能是诱导肺泡上皮细胞进行 EMT 的关键。
因此，寻找针对 TGF-β的药物是治疗肺泡损伤的一个发展趋势。
研究问题：
PPAR-γ激动剂是否能够逆转 TGF-β诱导的肺泡上皮间质转化，从而保护肺泡结构和功能？
研究方法：
使用肺泡上皮细胞株，将其暴露于 TGF-β处理以诱导 EMT，同时添加 PPAR-γ激动剂，观察其对肺泡上皮细胞形态的影响，并通过 qPCR，Western blot，细胞迁移和侵袭实验检测其分子改变和功能变化。
同时，使用动物模型进一步验证 PPAR-γ激动剂对 TGF-β诱导的 EMT 是否可逆转，并评估其保护作用。
预期结果：
PPAR-γ激动剂数量的增加可以逆转 TGF-β诱导的 EMT 过程，从而保护肺泡结构和功能。
我们预期通过实验研究，可以发现 PPAR-γ激动剂在治疗肺泡损伤中的作用，并为其临床应用提供理论和实验基础。
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TGF-β通路和上皮-间质转化那点儿套路
作者：米粒儿
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肝癌是全球第三位癌症杀手，其治疗方法以手术治疗为最佳。
但是即使早起切除，5年内复发转移的比例仍超过50%。
因此从根本上揭示肝癌转移复发的机理对肝癌治疗是十分重要的。
上皮-间质转化（EMT）是肿瘤细胞获得侵袭和转移能力的最重要途径，而转化因子TGF-β是已知诱导肿瘤细胞发生EMT的关键因子。
通过TGF-β诱导EMT是研究癌细胞转移的重要手段，也是多数论文的主要选择之一。
今天跟大家分享一篇论文，以miRNA主要研究对象，探讨miRNA如何影响TGF-β诱导的EMT的效应。
题目：MicroRNA-199b-5p attenuates TGF-β1-induced epithelial–mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma（回复20170622可下载文献）
这篇文章以N-cadherin为起始研究分子，探讨N-cadherin的临床意义，分别在病人癌、癌旁组织，HCC细胞系检测N-cadherin表达，并以DFS和OS为评价指标，确定N-cadherin表达与预后关系。
之后，作者通过数据库筛选和实验验证方找寻到与N-cadherin表达相关的miRNA-miR-199b-5p。
同时通过临床数据揭示miR-199b-5p具有明显的临床意义，且在
HCC组织样本中miR-199b-5p和N-cadherin表达呈现明显的负相关性。
接下来，文章以miR-199b-5p为核心分子，分别从表型，机制和动物实验3方面揭示在HCC细胞和癌组织中，miR-199b-5p抑制TGF-β诱导的EMT的效应。
下边为大家仔细批讲这篇论文的主要数据。
1.N-cadherin在HCC组织中高表达且和不良预后相关
采用免疫组化方法检测了100个HCC病人癌、癌旁组织中N-cadherin的表达。
结果如Figure 1A，1B所示，癌组织中N-cadherin 表达量明显升高。
采用Western blot方法在系列HCC细胞系中检测N-cadherin的表达（Figure 1C），与正常肝细胞系HL7702相比，HCC细胞系中N-cadherin的表达升高。
进一步研究N-cadherin表达与HCC病人预后的关系（Figure 1D），发现N-cadherin高表达的HCC病人无病生存期DFS和总体生存率OS都较短。
此外，还研究了N-cadherin表达与HCC病人临床病理特征的关系，N-cadherin过表达与肿瘤分化程度，肿瘤多灶性和血管侵袭能力呈现明显相关性。
2.在HCC细胞中，N-cadherin是miR-199b-5p的靶标
为了探讨miRNAs是否参与N-cadherin表达调节，作者通过数据库筛选出8个可能靶向N-cadherin的miRNA，分别是hsa-miR-26a, hsa-miR-26b, hsa-miR-199-5p, hsa-miR-190, has-miR-204, hsa-miR-211, hsa-miR-218 and hsa-miR-369-3p（Figure 2A）。
将以上8个miRNA mimics转染进入HepG2细胞，作者采用Western blot检测N-cadherin表达，结果显示与其他7个相比，miR-199b-5p mimics转染后，N-cadherin表达量下降最多（Figure 2B）。
miR-199b-5p和N-cadherin 3’-UTR 的碱基配对如图Figure 2C所示。
为了进一步确定miR-199b-5p是否可调节N-cadherin表达，在HepG2和Huh7细胞中分别加入不同浓度的miR-199b-5p mimics和inhibitor后，检测N-cadherin表达。
在miR-199b-5p高表达的HepG2中，N-cadherin的蛋白和mRNA表达水平降低，而在miR-199b-5p表达较低的Huh7细胞中，
N-cadherin的蛋白和mRNA表达水平升高（Figure 2D）。
而在HepG2中加入miR-199b-5p inhibitor或者Huh7细胞中加入miR-199b-5p后，N-cadherin的蛋白和mRNA表达水平与上述结果相反（Figure 2E）。
3.miR-199b-5p在HCC组织和细胞系中低表达
分析100个病人癌和癌旁组织中，miR-199b-5p在大部分HCC 组织中表达降低。
并且miR-199b-5p和N-cadherin的表达呈现明显的负相关（Figure 3A，3B）。
进一步研究miR-199b-5p表达与HCC病人预后的关系（Figure 1D），发现miR-199b-5p低表达的HCC病人无病生存期DFS和总体生存率OS都较短（Figure 3C，3D）。
在HCC细胞系中，miR-199b-5p表达降低，且其表达和N-cadherin表达负相关（Figure 3E，3F）。
4.miR-199b-5p过表达促进细胞凝集，抑制细胞侵袭转移，N-cadherin表达能逆转该效应
在确定miR-199b-5p和N-cadherin的相互作用之后，作者开启表型实验研究，这里供选择3个表型：细胞凝集，细胞侵袭和细胞转移。
在miR-199b-5p过表达的细胞株中，细胞凝聚效应增强，细胞侵袭转移能力下降（Figure 4C，D，E，F）。
而N-cadherin表达可以部分逆转以上表型（Figure 4I-L）。
5.miR-199b-5p缓解TGF-β1引起的EMT
在表型实验中作者发现miR-199b-5p可抑制细胞侵袭转移能力，而EMT是侵袭转移能力的重要指标之一。
接下来的实验中作者在HCC 细胞中加入TGF-β1诱导细胞EMT。
之后分别分析，miR-199b-5p和N-cadherin对TGF-β1引起的EMT的影响。
结果表明miR-199b-5p 过表达可缓解TGF-β1引起的EMT。
同样的结果在体内实验中也得到了验证。
参考文献：MicroRNA-199b-5p attenuates TGF-β1-induced epithelial–mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma。