梅毒螺旋体抗体使用说明
梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程
1、检验申请单独检验项目申请：梅毒螺旋体抗体（缩写TP ELISA）测定。
临床医生根据需要提出检验申请。
2、标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。
也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。
离心必须达到3000rpm 15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。
2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。
避免反复冻融。
不可使用热灭活的标本。
2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。
2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。
3．方法原理本试剂盒用梅毒螺旋体抗原包被反应板，用梅毒螺旋体抗原标记辣根过氧化物酶，应用双抗原夹心法原理，检测人血清或血浆样本中的梅毒螺旋体抗体。
4．试剂及其他用品4.1试剂：梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒，由上海科华生物技术有限公司出品，试剂盒药品批准文号：国药准字S2*******(96人份)。
未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。
微孔反应板打开包装后，应立即将未试用的板条装入有干燥剂的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。
梅毒螺旋体抗体-TP
梅毒螺旋体抗体（Anti-TP）检测1. 实验原理：本试剂盒为双抗原夹心ELISA方法，用于检测血清或血浆样本中的，梅毒螺旋抗体，试剂盒中所用包被抗原和酶标记抗原均为精致的基因工程表达的梅毒螺旋体特异性抗原，显色剂为（TMB）。
本试剂盒可用于献血员筛选，婚检和临床诊断梅毒螺旋体感染。
2.标本收集和处理：2.1.抽取患者静脉血3ml于不抗凝或抗凝的带盖的一次性试管内，密闭，尽快送达免疫室。
2.2.待血块收缩后，尽快离心分离血清，抗凝血可立即离心分离血浆，当日不检测的样本（已分离的血清或血浆），置2～8℃冰箱保存；1周内不检测的的标本（已分离的血清或血浆），－20℃冷冻保存。
2.3.避免反复冻融标本。
2.4.其他部门使用过的标本，应予拒收。
3.试剂：3.1 生产厂家：英科新创（厦门）科技技术有限公司3.2. 产品批准文号:国药准字 S2*******3.3.组成:3.3.1.酶联反应条：12孔×83.3.2 酶标试剂：12.0ml×1瓶3.3.3.阳性对照：0.5ml×1瓶3.3.4.阴性对照：0.5ml×1瓶3.3.5.洗涤液（用前以蒸馏水稀释20倍）：50ml×1瓶3.3.6.显色液A：6.0ml×1瓶3.3.7.显色液B：6.0ml×1瓶3.3.8.终止液：6.0 ml×1瓶3.3.9.封片：2片3.4.试剂储存条件：2-8℃。
4.仪器：4.1.洗板机：PW-960（产地：中国）4.2.酶标比色仪：安图2010（产地：中国）5.操作程序：5.1 配液：将50ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml后备用。
5.2 编号：.根据当日样本量准备好检测用反应微孔板条，然后将酶标板条固定于板架上，按顺序编号，每板设阴性、阳性及空白对照各1孔（空白对照不加样品及酶标试剂）。
5.3 加酶：每孔加100ul酶标试剂。
梅毒螺旋体抗体参考值
梅毒螺旋体抗体参考值
梅毒螺旋体抗体的参考值范围是在0到0.99之间。
只要数值是在正常的范围之内，就表明没有感染梅毒。
梅毒螺旋体抗体是其是否感染梅毒的标志。
检测梅毒螺旋体特异性抗体，一般分为阴性或阳性两种。
有些化验单上还会显示参考的数值，如化学发光法的参考值为每毫升1Pg，只要小于每毫升1Pg结果就会显示为阴性，大于每毫升1Pg结果则显示为阳性。
呈阴性则说明血液中没有梅毒螺旋体特异性抗体，如果呈阳性则说明血液中有梅毒螺旋体特异性抗体。
如果检测抗体呈阳性，则可诊断为梅毒。
如果检测呈阴性，则表明没有梅毒，建议及时治疗梅毒。
青霉素类药物可用于治疗，具有一定疗效。
如果没有感染梅毒，必须注意多休息，保证良好的睡眠。
同时，还需要加强体育锻炼，提高身体素质，避免疾病。
梅毒螺旋体抗体TP检测
梅毒螺旋体抗体TP检测一、检验原理:梅毒螺旋体抗体检测试剂（乳胶法）采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上测试区（T）的梅毒重组抗原和包被在聚酯膜上的梅毒重组抗原乳胶颗粒。
测试时，样本滴入试剂加样处与预包被的乳胶颗粒结合的梅毒重组抗原反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，如果是阳性，乳胶-梅毒重组抗原在层析过程中先与标本中的梅毒抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的梅毒重组抗原结合，在测试区内（T）会出现一条红色条带。
这条带是梅毒重组抗原-梅毒抗体-梅毒重组抗原乳胶颗粒的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T）将没有红色条带。
无论梅毒抗体是否存在于标本血样中，乳胶-生物素在层析过程中都会被固定在膜质控区内上的链霉亲和素结合，在质控区内（C）会出现一条红色条带。
质控区内（C）所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
二、样本要求:1、梅毒螺旋体抗体检测试剂（乳胶法）可用于检测全血、血清和血浆样本。
2、检测用的全血、血清和血浆标本必须收集在一个干净、干燥的容器中。
3、为保证样本组分定，可以采用素、EDTA-，柠酸三销作为抗凝剂。
4、干扰物质为抗坏血酸、血色素、胆红素、草酸、人血清白蛋白、甘油三脂。
5、检测时只能使用未溶血的标本，严重溶血的标本重新采集血样。
6、样本收集后应尽可能马上使用，不能在室温下长时间有放。
指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免溶血；血清或血浆标本可在2-8℃冷藏存放3天，长期保存需冷冻于冻于-20℃。
冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温升充分混匀，样本切忌反复冻融。
全血标本不能冷冻保存。
三、检验方法:标本收集全血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免溶血。
血清/血浆标本的收集：血清-血浆标本优静脉采血后离心获得，标本再2-8℃可保存3天。
梅毒检测操作规程
梅毒螺旋体抗体检测（乳胶法）作业指导书1.检测目的定性检测人血清或血浆样本中梅毒螺旋体抗体（TP）,可作为梅毒感染的辅助诊断。
2.测定原理采用高度特异性的抗体抗原反应原理及乳胶标记免疫层级分析技术，试剂含有预先固定于膜上检测区（T）的梅毒重组抗原盒包被在聚酯膜上的梅毒重组抗原乳胶颗粒。
3.标本要求1试剂适用于检测血清或血浆样本，检测时应使用未溶血的样本。
2.样本应收集于清洁、干燥的容器中，可采用肝素、EDTA或柠檬酸三钠作为抗凝剂。
3.样本收集后应尽可能马上使用，不可再室温长时间存放。
血清血浆样本可在2-8°C冷藏存放一周，长期保存需冷冻于-20℃。
冷藏或冷冻样本应在检测前恢复到室温并充分混均，样本禁止反更冻融。
4.试剂艾博生物医药（杭州）有限公司5.操作步骤5.1使用前将试剂板和血清/血浆标本恢复至室温。
从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在扣开铝箔前应先恢复至室温），在1小时内应尽快地使用。
5.2将试剂置于干净平坦的台面上，用吸管吸取血清血浆标本，垂直加入1滴（约25UI）试剂板的加样孔（S）中，然后加入2滴缓冲液。
5.3加样后立刻开始计时等待红色条带的出现，在15分钟时读取测试结果。
20分钟后读取的结果无效。
6.结果判定6.1阳性（+）：两条紫红色条带出现。
一条位于检测区（T）内，另一条位于质控区（C）。
6.2阴性（-）：近质控区（C）出现一条紫红色条带，在检测区（T）内务紫红色条带出现。
6.3无效（X）：质控区（C）未出现紫红色条带，标本不正确操作过程或试剂已变质损坏。
1湎血清/血桨∖υC2滴缓冲液—阳性阴性无效7.质量控制7.1请控制判读时间，测试结果应在测定开始后15-20分钟左右读取，20分钟后读判定无效。
7.2质控区内（C区）一条红色条带的出现是试验结果可靠的前提。
质控内（C）所显现的红色条带是判定标本是否足够，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
8.注意事项8.1加样过多或过少可能导致结果出现偏差。
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：TPPA；组合项目申请：RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.8下列标本为不合格标本2.1.8.1标本量不足。
2.1.8.2严重溶血、严重浑浊的标本。
2.1.8.3无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.8.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2标本保存2.2.1标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内。
2.2.2已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。
3、方法原理凝集法。
将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。
4、试剂及其他用品准备溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子(冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，未致敏粒子 (冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，阳性对照血清 (液状) 0.6ml/瓶×5。
5 质控品与室内质控规则5.1 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。
5.2 质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。
5.3质控规则：阴性和阳性对照符合即可。
5.4如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。
6操作步骤6.1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至最后一孔各滴入1滴（25ul）。
tpha法检测梅毒螺旋体抗体试剂操作说明
TPHA法检测梅毒螺旋体抗体试剂操作说明一、概述:梅毒螺旋体存在于病人的血液或脑脊液内,而不能在热工培育基或组织培育中生长.当病人感染梅毒螺旋体后3~4周,可在血液中检出针对梅毒螺旋体特异性抗体,并在医治后相当长时间内仍然可检出.可在病人血清中检出二种抗体,一种是针对非螺旋体抗原的抗体(即针对牛心肌磷脂的抗体,如RPR及国内一些EIA和金标法均是检测此非特异抗体),这种抗体在疾病活动期可检出,但在医治后或疾病转入慢性期后会很快下降,而另一种是针对螺旋体抗原的特异性抗体,在治疗后仍可在相当长的时间内检车.在疾病慢性期也维持高滴度反映.OMEGA TPHA 实验是一种检测针对螺旋体抗体的特异的、灵敏的被动血凝实验。
OMEGA TPHA试剂盒的质量标准已经我果药品生物制品检定所核定。
经我国药品生物制品检定所应用国家标准血清检定，OMEGA TPHA诊断试剂的特异性为100%（20/20）灵敏度100%（10/10）。
应用574份临床血清标本，进行的临床实验结果为；特异性100%（447/447，其中包括34份胶原性病人血样和12份麻疯病人血样，二期梅毒病人血样和未分期梅毒病人血样）。
二、实验原理实验血球为用螺旋体特异性抗原包被通过醛化和鞣化的鸡红细胞，对照血球为没有效上述抗原包被的经过醛化和鞣化的鸡红细胞，若是是阳性标本，当和致敏的鸡红细胞混合后，抗体和抗原的结合会引发致敏血球的凝集，在血凝板底部形成凝集块，如为阴性标本，则血细胞在孔底形成致密的沉淀。
三、试剂盒组成实验细胞悬液阳性对照血清2ml 稀释液20ml对照细胞悬液阴性对照血清2ml 细胞滴管2支以上所有试剂均为工作浓度。
试剂盒中的阴阳对照血清已经1：20稀释，阳性对照的效价为1：2560左右。
直接实验没必要稀释。
细胞滴管的滴量为每滴75ul，其中红色滴管用于致敏血细胞，白色滴管用于对照血细胞。
待验标本：应用血清标本，脑脊液标本。
血清标本可贮于-20℃保留，但保留不该超过4至6礼拜。
梅毒特异性试验( TPPA )标准操作程序SOP文件
（4）“D”非致敏颗粒（冻干）：用前30分钟按规定量加“A”液溶解混匀
（5）“E”阳性质控血清
[试剂的稳定性与贮存]
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。
[标本的收集与处理]
标本为无溶血血清。
[操作步骤]
孔号1 2 3 4
血清最终滴度1：40 1：80
置微型振荡器振荡30秒，放在湿盒里，室温2小时后观察结果。
[结果判断]
颗粒凝集覆盖于整个孔底，可呈多边形膜状，边缘粗糙......阳性2+--4+
颗粒凝集呈多边形粗糙大环状......阳性1+
颗粒浓集呈边缘光滑的小环状......可疑+-
颗粒聚集在孔中央,光亮,边缘光滑......阴性-
（3）离心2000rpmX 5分钟,吸取上清液50ul加入孔3.
（4）自孔4--孔10各加血清稀释液"B"25ul.
（5）自孔3吸25ul至孔4,混匀后吸入25ul至孔5......如此稀释至孔10,弃去25ul.
（6）按定量试验法加入"D"和"C",振荡30秒,置有盖湿盒室温2小时,观察结果.
[质量控制]
ABCD医院
免疫实验室
文件编号：
ABCD-SOP-01-21
梅毒特异性试验( TPPA )
版序：ABCD
页码：第2页，共2页
[吸收试验]
孔内标本与非致敏和致敏颗粒均产生凝集者,标本需作下列重吸收试验
（1）加0.95ml非致敏颗粒溶液于小试管内.
（2）加入50ul血清,充分混匀,置室温吸收30分钟以上.
血清稀释液“B”（ul）100 25 25 25
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梅毒螺旋体抗体诊断试剂（凝集法）使用说明书
一、检验方法：
如果利用自动分析测定装置来使用本试剂时，请按照仪器的使用说明书进行操作。
以下所述是手工操作方法，请连贯地进行操作。
试剂的调制。
A：溶解液（液状）按照测定操作规则使用。
B：血清稀释液（液状）按照测定操作规则使用。
C：致敏粒子（冷冻干燥）加入一定量的溶解液进行调制。
请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。
D：未致敏颗粒（冷冻干燥）加入一定量的溶解液进行调制。
请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。
E：阳性对照血清（液状）按照测定操作规则使用。
1.方法1
（1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第一孔中，共计4滴（100μl），从第二孔至第四孔各滴1滴（25μl）。
（2）用微量移液管取样品25μl至第一孔中。
然后用微量加样器或微量移液管以2m的方式从第一空稀释至第四孔。
（3）用试剂盒中提供的滴管在第三孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，在第四孔中滴入
1滴（25μl）致敏粒子。
（4）用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15~30℃）下水平静置。
2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。
另外，即使静置至次日也不影响判定结果。
在方法1中判定为阳性的样品，请再用具有确定意义的方法2进行检测。
2.方法2
（1）用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第一孔中，共计4滴(100μl)，从第二孔至最后一孔各滴入1滴（25μl）。
（2）用微量移液管取样品25μl至第一孔中。
然后用微量加样器或微量移液管以2m的方式从第一孔稀释至最后一孔。
（3））用试剂盒中提供的滴管在第三孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，从第四孔至最后一孔各滴入1滴（25μl）致敏粒子。
（4）用平板混合器以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15~30℃）下水平静置。
2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，或者利用免疫稀释判定装置进行测定。
另外，即使静置至次日也不影响判定结果。
3.对照试验
（1）能够确认每例样品未致敏粒子的反应（最终稀释倍数1:40）均是（-）。
（2）能够确认每次检查中血清稀释液和致敏粒子以及未致敏粒子的反应均是（-）。
（3）每个试剂盒中的阳性对照血清要与样品永相同的测定方法进行试验。
阳性对照血清都要与样品永相同的测定方法进行试验。
阳性对照血清调制成抗体效价为1:320（做终稀释倍数）
4.吸收操作
对于未致敏粒子和致敏粒子均显示（+-）以上凝集的样品，要按照下列顺序在完成吸收操作的基础上进行再试验。
（1）取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小管中。
（2）加入样品50μL混合，于室温（15~30℃）下放置20分钟以上。
（3）离心分离（2000rpm 5分钟），然后分取上清液（吸收完毕的稀释样品1:20）50μL至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。
（4）从第四孔以后，要预先个滴入25μL血清稀释液，从第3孔至最后一孔用微量加样器或微量移液管以2的n次方进行稀释。
（5）以后就与（检验方法）’2~3以后同样的操作进行判定，通常情况可以用上述的吸收完全。
但如果吸收不净时，请使用其他的检查方法。
结果的判定方法
1. 反应图像的判定
在判定用观测板上静置微量反应板，观察粒子的反应图像。
将反应图像与介质对照的图像进行比较，并参照表3进行判断。
表3
反应图像判定粒子形成纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形（-）粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形（+ -）粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱的凝集在周围（+）产生均一的凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展（+ +）2.判定基准
阳性：未至敏粒子（最终稀释倍数1;40）的反应图像判定为（-），致敏粒子（最终稀释倍数1：80以上）的反应图像判定为（+）时，最终判定为阳性，进行方法二的测定时，将显示出反应图像为（+）时的最终稀释倍数作为抗体效价。
阴性：无论未致敏粒子呈现何种反应图像，只要致敏粒子（最终稀释倍数1：80）的反应图像显示为（-）时，最终判定即为阴性
保留：
未致敏粒子（最终稀释倍数1:40）的反应图像判定为（-）且致敏粒子（最终稀释倍数1:80）的反应图像判定为（+ -）时，最终判定为保留。
注）：通过本试剂判定为抗体阳性或保留时，经过一段时间在进行检查要进行经时检查并与其他检查结果和临床症状结合起来加以综合判断。
检验方法的局限性
1. 由于抗原，抗体反应的血清学试验方法的检测灵敏度具有一定的局限性，所以本试剂检测结果只能提示血清或血浆中有无TP抗体存在，而不能作为临床诊断的唯一标准。
2. 抗体检测阴性的样品并不能排除梅毒感染的可能。
产品性能指标
1.特异性试验
自存标准样品按规定进行试验室，阳性标准的抗体效价相对于标准值在+ -1管以内，阴性标准样品在1：80（最终稀释倍数）下不会显示凝集图像。
2.灵敏度试验
试剂盒中带有的阳性对照血清按规定进行试验室抗体效价相对于标准值（最终稀释倍数1:320）在+ -1管以内。
3. 重复性试验
对同一样品（最终稀释倍数1:160以上）重复进行五次测定，各抗体效价最大频数在+ -1管以内。
4. 相关性
取样品391例研究他们和对照品（间接红细胞凝集反应）的一致率，结果如下所示。
样品例数 n =391例
+ -1管以内一致率 100﹪。