培养基的灭菌
培养基配置和灭菌的注意事项
培养基配置和灭菌的注意事项一、培养基配置1.选用适当的培养基组成：根据实验的需要选择适当的培养基成分，包括碳源、氮源、矿质盐、维生素等。
根据不同微生物的要求，可以选择不同的培养基，如富集培养基、选择性培养基等。
2.正确计量和混合培养基成分：根据实验需要和比例，精确地称取和混合培养基成分。
注意避免污染和交叉污染，使用干燥器、称重纸和清洁器具等进行操作。
3.正确调节培养基的pH值：根据不同微生物的偏好，调节培养基的pH值。
使用pH计和相应的酸碱溶液进行调节，确保培养基的pH值符合微生物的需求。
4.加热溶解和固化培养基：将培养基成分加入适量的蒸馏水中，加热搅拌溶解，然后分装到培养皿或试管中。
对于固化培养基，需要加入适量的琼脂或琼脂糖，在混合均匀后加热至溶解，然后分装到培养皿或试管中。
二、培养基灭菌1.选择合适的灭菌方法：有常见的三种灭菌方法，包括热处理（如蒸汽灭菌、热风灭菌）、化学灭菌和滤器灭菌。
根据实验需求和培养基的性质选择合适的灭菌方法。
2.准备合适的灭菌器具：根据实验需求和培养基的量，选择合适的灭菌器具，如蒸馏锅、高压灭菌器、紫外线灭菌箱等。
3.正确操作灭菌设备：根据灭菌设备的说明和操作指南，正确操作和调节灭菌设备。
4.合理选择灭菌时间和温度：根据不同培养基的特性和实验需求，合理选择灭菌时间和温度。
通常情况下，蒸汽灭菌的时间为15-30分钟，温度为121摄氏度；热风灭菌的时间为1-2小时，温度为160摄氏度。
5.注意灭菌后的处理：在灭菌后，及时关闭灭菌设备，避免灭菌后的污染。
将培养基冷却后，进行温度验证，然后保存在合适的温度和条件下。
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌一、目的掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤1、母液配制一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。
配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。
由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。
细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。
用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
4、培养基灭菌分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力0.105MPa，灭菌时间与培养基容量的关系如下表所示。
培养基体积与灭菌时间的关系三、结果与分析1、培养基的母液配制情况。
2、培养基配制时的注意事项。
四、提交实验报告附：MS培养基配方。
实验室对培养基灭菌的常用方法
实验室对培养基灭菌的常用方法常用的灭菌方法主要是湿热灭菌和过滤除菌。
1、湿热灭菌：
蒸汽在冷凝时释放出大量潜能，并且蒸汽具有强大穿透力，蒸汽的湿热破坏菌体蛋白质和核酸的化学键，使酶失活，微生物因代谢障碍而死亡。
湿热灭菌的效果，取决于致死温度和致死时间。
致死温度是杀灭微生物的极限温度。
致死时间是在致死温度下杀灭全部微生物所需时间。
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。
分装后应立即灭菌，应在当天内完成灭菌工作，不可过夜。
消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。
2、过滤除菌：
一些抗生素及有机物等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌，例如含抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基。
过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在凝固之前(50-60℃)加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告一、实验目的1、掌握培养基的配制方法和原理。
2、学习并掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法和操作要点。
3、了解灭菌在微生物实验中的重要性。
二、实验原理（一）培养基的配制培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此需要根据培养的微生物种类和实验目的来选择合适的培养基配方。
培养基通常包含碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等成分。
在配制培养基时，需要按照一定的比例准确称量各种成分，并将其溶解在水中，调节 pH 值至合适范围，最后定容至所需体积。
（二）灭菌灭菌是指杀灭或去除物体上所有微生物（包括芽孢和孢子）的方法。
在微生物实验中，为了防止杂菌污染，必须对培养基、实验器具等进行灭菌处理。
高压蒸汽灭菌是一种常用的灭菌方法，其原理是利用高温高压使微生物的蛋白质和核酸变性失活，从而达到灭菌的目的。
一般在 121℃、1034 kPa 的条件下灭菌 15 20 分钟，可以杀灭包括芽孢在内的所有微生物。
三、实验材料和仪器1、材料牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、NaOH 溶液、HCl 溶液、蒸馏水等。
2、仪器电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、量筒、pH 试纸、三角瓶、移液管、高压蒸汽灭菌锅、培养皿等。
四、实验步骤（一）培养基的配制1、计算根据培养基配方，计算所需各种成分的用量。
例如，配制 1000 mL 牛肉膏蛋白胨培养基，需要牛肉膏 3 g、蛋白胨 10 g、氯化钠 5 g、琼脂 15 20 g。
2、称量用电子天平准确称量各种成分。
先称取琼脂，放入三角瓶中，然后分别称取牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，放入另一个烧杯中。
3、溶解在烧杯中加入适量蒸馏水，用玻璃棒搅拌，使各种成分溶解。
将溶解后的溶液倒入三角瓶中，用少量蒸馏水冲洗烧杯，冲洗液也倒入三角瓶中。
4、调节 pH 值用 pH 试纸测定培养基的初始 pH 值，然后用 1 mol/L 的 NaOH 溶液或 1 mol/L 的 HCl 溶液调节 pH 值至 72 74。
培养基灭菌实验报告
培养基灭菌实验报告培养基灭菌实验报告一、实验目的本实验旨在探究培养基灭菌对实验结果的影响，以及培养基灭菌的方法和步骤。
二、实验原理培养基灭菌是实验室中常见的操作，其目的是消除培养基中的微生物污染，确保实验结果的准确性。
常用的培养基灭菌方法有高温灭菌和化学灭菌。
高温灭菌是将培养基装入培养皿或试管中，通过高温加热来杀灭其中的微生物。
常见的高温灭菌方法有干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是将培养皿或试管放入高温炉中，通常在160℃以上加热2小时以上。
湿热灭菌则是利用高压蒸汽，将培养皿或试管放入高压灭菌器中，在121℃下加热15-20分钟。
化学灭菌则是通过化学物质来杀灭微生物。
常用的化学灭菌方法有使用酒精、氯化物和过氧化氢等。
酒精灭菌是将培养皿或试管浸泡在70%的酒精中，使其达到灭菌效果。
氯化物灭菌是将培养皿或试管浸泡在含有氯化物的溶液中，如含有0.1%次氯酸钠的溶液。
过氧化氢灭菌则是将培养皿或试管浸泡在含有过氧化氢的溶液中，如含有3%过氧化氢的溶液。
三、实验步骤1. 准备培养基：按照实验要求配制培养基，并将其装入培养皿或试管中。
2. 高温灭菌：将装有培养基的培养皿或试管放入高温炉中，进行高温灭菌。
根据实验要求选择干热灭菌或湿热灭菌的方法和条件。
3. 化学灭菌：将装有培养基的培养皿或试管浸泡在相应的化学灭菌溶液中，如酒精、氯化物或过氧化氢溶液中，进行化学灭菌。
根据实验要求选择合适的化学灭菌方法和浸泡时间。
4. 培养基质量检验：将灭菌后的培养基进行质量检验，包括外观、pH值和无菌检测等。
四、实验结果与分析通过高温灭菌和化学灭菌的实验操作，成功灭菌了培养基。
灭菌后的培养基外观清晰透明，无任何杂质。
pH值符合实验要求，无菌检测结果显示无任何微生物生长。
高温灭菌是常用的培养基灭菌方法之一，通过高温加热杀灭微生物。
干热灭菌适用于耐高温的培养基，可以完全杀灭其中的微生物。
湿热灭菌则适用于不耐高温的培养基，通过高压蒸汽的作用来达到灭菌效果。
液体培养基灭菌方法
培养基的灭菌方法 1、高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。
培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。
灭菌时一般是在0。
105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。
消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。
将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。
灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。
暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。
含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。
2、过滤灭菌：一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。
细菌过滤器与滤膜（孔径0。
45微米）使用之前要先进行高压灭菌。
过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。
培养基配置和灭菌的注意事项
培养基配置和灭菌的注意事项
培养基是微生物学研究和实验室操作中常用的一种物质，而培养基的配制和灭菌是关键的步骤。
以下是培养基配置和灭菌的注意事项： 1. 培养基配制：在配制培养基时，应选用优质原料，精确称量，严格按照配方比例配制，避免过量或不足的添加。
同时要注意加热溶解固体成分时的温度和时间，以及液体成分的搅拌均匀程度。
2. 培养基灭菌：灭菌是为了保证培养基中没有外来微生物的存在，从而保证实验结果的准确性和可靠性。
传统的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和干热灭菌，但这些方法的使用需要设备和条件的支持。
常用的方法是使用过滤器将培养基过滤，去除其中的微生物。
过滤器的选择应根据微生物的大小和过滤效率来确定，同时要注意滤器的细胞毒性和耐温性。
3. 培养基贮存：培养基的贮存也很重要，应将其保存在干燥、
阴凉、避光的环境中，避免受潮、受热、受光等影响。
同时要注意不同类型的培养基的贮存条件和有效期限。
总之，培养基的配制和灭菌是微生物学研究和实验室操作中至关重要的一部分，需要严格按照操作规程和注意事项进行，以保证实验结果的准确性和可靠性。
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培养基配置和灭菌的注意事项
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培养基配置和灭菌的注意事项
1.培养基配置前，应确保使用的试剂和设备都是干净、无菌的。
2. 在配制培养基时，应按照标准配方和比例严格操作，避免出
现配方错误的情况。
3. 配制好的培养基应在无菌环境下进行灭菌处理，以避免培养
基被细菌污染。
4. 灭菌处理可采用高压蒸汽灭菌器、紫外线灭菌器、过滤器等
方式，但需确保灭菌条件严格符合标准。
5. 灭菌后的培养基应及时冷却并存储在干燥、无菌的环境中，
以避免二次污染。
6. 需要使用的培养基应在使用前进行无菌检测，以确保其无菌
状态。
7. 使用过的培养基应及时处理，避免污染环境。
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比较各种微生
物对热的抵抗 能力大小
营养细胞、芽孢、病毒或孢子
6、火焰灭菌法 二、培养基的灭菌
湿热灭菌原理
灭菌条件 灭菌不利方面
火焰 适用范围：接种针、玻璃棒、三角瓶口
酒精灯
由于蒸汽具有很强的穿透能力，而且在冷凝时 会放出大量的冷凝热，很容易使蛋白质凝固而 杀死各种微生物。
121℃， 30min。
同时也会破坏培养基中的营养成分，甚至会产 生不利于菌体生长的物质。因此，在工业培养过程
t 1 ln N 0 2.303 lg N 0 K Nt K Nt
从上述的微生物对数死亡规律和非对数死亡动力学模型方程式可知， 如果要达到彻底灭菌，即灭菌结束时残留的活微生物数等于0，则所 需的时间应为无限长，这在实际中是不可能的。灭菌
10
15
20
25
三、微生物的热死规律和影响灭菌的因素
说说优缺点？
受热时间如何确定？
1、 微生物的死亡速率：对数残留定律
微生物受热死亡的原因，主要是因高温使微生物体内的一些重要蛋白质，如酶等， 发生凝固、变性，从而导致微生物无法生存而死亡。微生物受热而丧失活力，但其物理 性质不变。
在一定温度下，微生物的受热死亡遵照分子反应速度理论。在灭菌过程中，活菌数 逐渐减少，其减少量随残留活菌数的减少而递减，即微生物的死亡速率与任一瞬时残存 的活菌数成正比，
• 3、杂菌会大量繁殖，会改变反应介质的PH值，从而使生 物反应发生异常变化；
• 4、杂菌可能会分解产物，从而使生产过程失败； • 5、发生噬菌体污染，微生物细胞被裂解，而使生产失败，
等等
问题2
1、为防止杂菌的污染，哪些需要灭菌？
培养基、发酵设备、空气、菌种制作
一、灭菌的原理和方法
消毒与灭菌在发酵工业中均有广泛应用。消毒是指用物
根据培养基状态不同，可将培养基分成： 固体、液体和半固体培养基
问题1
在发酵生产中，为什么要进行灭菌操作？ P69
• 1、由于杂菌的污染，使生物反应中的基质或产物因杂菌的 消耗而损失，造成生产能力的下降；
• 2、由于杂菌所产生的一些代谢产物，或在染菌后改变了培 养液的某些理化性质，使产物 的提取和分离变得困难，造 成收率降低或使产品的质量下降；
噬菌体或病毒
1 1-5 30 2 5-10
从表中可看出
芽孢或孢子的热阻要比生长期营养细胞的热阻大得多，这是由于芽孢或孢子内吡 啶二羧酸含量对热阻的增加有关。另外，芽孢子中蛋白质含水量较营养细胞低（特 别是游离水分少），也是芽孢耐热强的一个原因。图5-2和图5-3分别为大肠杆菌营养 细胞和FS7954芽孢杆菌的芽孢在不同温度下的死亡情况。
培养基的灭菌
内容
1、灭菌的原理和方法 2、培养基的灭菌 3、湿热灭菌原理和影响灭菌的因素 4、间歇灭菌 5、连续灭菌
1、培养基如何分类？ 在发酵生产中常用的固体还是液体培养基？
2、说说培养基的六大营养要素？
根据营养物质的来源不同，培养基可分为： 天然培养基、合成培养基和半合成培养基
根据培养基的用途不同，可将培养基分成： 增殖、选择和鉴别培养基
问题Biblioteka 说说芽孢或孢子的热阻要比营养细胞的热阻大的原因？
大肠杆菌在不同温度下的死亡曲线
N/ N0 1
10-1 54
10-2
10-3
56
10-4
58
60
0
2
4
6
8
10
t (min)
嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢在不同温度
N/
下的死亡曲线
N0 1
10-1
105 10-2
10-3
10-4 0
116 121
5
108 110
dN KN dt
微生物的死亡速率与任一瞬时残存的活菌数成正比，
式中，N—残存的活菌数；t—灭菌时间（s）；K—灭菌速度常数（s-1），也称反 应速度常数或比死亡速度常数，此常数的大小与微生物的种类与加热温度有关； dN/dt—活菌数瞬时变化速率，即死亡速率。 积分得：
Nt e kt N0
中，除了尽可能杀死培养基中的杂菌外，还要尽可能减少 培养基中营养成分的损失
衡量热灭菌指标
热死时间：即在规定温度下杀死一定比例的微生物所需要的时间。 致死温度：杀死微生物的极限温度。 致死时间：在此温度下，杀死全部微生物所需要的时间。P72 表5－3和5－4 问 热 阻：对热的抵抗力，指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致
消毒不一定能达到灭菌要求，而灭菌则可达到消毒的目 的
1、化学试剂灭菌法
化学试剂：甲醛、乙醇或新洁尔灭、高锰酸钾等 适用范围：环境空气、皮肤及器械的表面消毒
2、射线灭菌法 3、干热灭菌法 4、湿热灭菌法 5、过滤除菌法
电磁波、紫外线或放射性物质 适用范围：无菌室、接种箱
常用烘箱，灭菌条件为在160℃下保温1h 适用范围：金属或玻璃器皿
利用饱和蒸汽进行灭菌、条件为：121℃，30min 适用范围：广泛应用于生产设备及培养基的灭菌
例：高压灭菌锅
利用过滤方法阻留微生物 适用范围：制备无菌空气
灭菌方法连线题
接种针、试管口 环境空气、皮肤表面 无菌室、接种箱 培养基的灭菌 空气
过滤除菌法 火焰灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法 化学试剂灭菌法
死时间。 相对热阻：几种微生物对热的相对抵抗能力。指微生物在某一特定条件下的致死时间与
另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。
表5-5列出了某些微生物的相对热阻。
灭菌方式
干热灭菌 湿热灭菌 苯酚 甲醛 紫外线
大肠杆菌
1 1 1 1 1
霉菌孢子
2-10 2-10 1-2 2-10 5-100
细菌芽孢
1000 3×105 1×109 250 2-5
t 1 ln N 0 2.303 lg N 0 K Nt K Nt
上式是计算灭菌的基本公式，灭菌速度常数K是 判断微 生物受热死亡难易程度的基本依据。各种微生物在同样 的温度下K值是不同的，K值愈小，则此微 生物愈耐热
在121度，枯草杆菌FS5230的K为0.047s-1，梭状芽孢杆菌 PA3679的K值为0.03 s-1 ，请问哪一种微生物更耐热
消
理或化学方法杀死物料、容器、器具内外的病源微生物。
毒
一般只能杀死营养细胞而不能杀死细菌芽孢。例如，用于
与
消牛奶、啤酒和酿酒原汗等的巴氏消毒法，是将物料加热
灭
至60维持30min，以杀死不耐高温的物料中的微生物营养细
菌
胞。
的 区 别
灭菌是用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物， 包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。