超声—微波协同萃取法提取甘草黄酮的研究

检测分析　２００６
．
ＶｏＬ２７．Ｎｏ．８　／２７

一　

超声一微波协同萃取法提取甘草黄酮的研究　
罗锋’，汪河滨’，杨玲　，周忠波’　
（１．新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护与利用重点实验室，新疆阿拉尔８４３３００；　
２．塔里木大学文理学院，新疆阿拉尔８４３３００）　

摘要：采用超声一微波协同萃取法，从甘草中提取黄酮，用分光光度法测定黄酮含量。结果：用超声一微波协同萃取　
法提取，测得甘草中黄酮的含量为２．０４％，平均回收率为９７．６４％ｆｎ＝６）。结论：甘草黄酮的提取可优选超声一微波协同　
萃取法。　
关键词：甘草黄酮；超声一微波协同萃取；含量测定　

Ｓ　Ｉ　ＵＤＹｌ　Ｇ【Ｊ　Ｕ　ｒＪ｛ＡＳ【ＪＮＩＣ－ＭｌＣＲ【ＪＷＡＶＥ　ＳＹＮＥＲＧＩＳ’ｒＩＣ　ＥＸ’ｒＪ　ＡＣ’ｒＩ【ＪＮ　ＦＬＡＶ【Ｊ　【ＪＩＤＳ　０Ｆ　ＧＬＹＣＹＲＲＨｌＺＡ　
ＬＵＯ　Ｆｅｎｇ。，ＷＡＮＧ　Ｈｅ—ｂｉｎ。，ＹＡＮＧ　Ｌｉｎｇ￣，ＺＨＯＵ　Ｚｈｏｎｇ—ｂｏ。　
（１．Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ＆Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　Ｃｏｒｐｓ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　
Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｉｎ　Ｔａｒｉｍ　Ｂａｓｉｎ，Ａｌａｒ　８４３３００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｒｔ　ａｎｄ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｒｉｍ　
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｌａｒ　８４３　３００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ）　
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ—ｍｉ—　
ｃｒｏｗａｖｅ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｉｎ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　
ｗｉｔｈ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ．Ｕｓｉｎｇ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ—ｍｉｃｒｏｗａｖｅ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｈｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｉｓ　
２．０４％，ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒａｔｅ　ｉｓ　９７．６４％，ＲＳＤ＝Ｉ．１９％（ｎ＝６）．Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ－ｍｉｃｒｏｗａｖｅ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ａｐ—　
ｐｌｉｅｄ　ｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｉｓ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｈａｎ　ｒｅｇｕｌａｒ　ｍｅｔｈｏｄ．　
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｇｌｙｃｙｒｒｈｉｚａ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ—ｍｉｃｒｏｗａｖｅ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　

甘草是豆科（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）甘草属（Ｇ　ｙｒｒｉｈｉｚａ　Ｌ．）　植物＿ｌｌ，具有清热解毒、止渴祛痰、补脾和胃、调和诸药　等功效［２１。中医处方离不开甘草，俗称“十方九草”，自　古至今，广为药用，兼有“药之国老、众药之王”的尊　号，是临床最常用的中草药品种［３１，其主要有效成分为　甘草酸和甘草黄酮。据报道，甘草黄酮是一类生物活　性较强的物质，有抗溃疡、抗菌、抗炎、解痉、降血脂、　镇痛等作用　，１９８６年以来还发现甘草黄酮具有防治　艾滋病的功效。对甘草黄酮的研究越来越引起人们的　注意和重视。本研究利用超声一微波协同萃取法提取　甘草中的黄酮并测定其含量。　１材料与方法　１．１材料与试剂　材料：乌拉尔甘草（塔里木盆地人工载培）　试剂：芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），乙醇　基金项目：塔里木大学校长重点基金项目（２００４—６）　作者简介：罗锋（１９７１－），男（汉），讲师，硕士，研究方向：天然产物化学。　（天津市化学试剂二厂）；硝酸铝（北京化工厂）；氢氧化　
钠（北京化工厂）；亚硝酸钠（北京化工厂）均为分析纯。　
１．２仪器　
Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ电子天平（北京赛多利斯天平有限公　
司）；　
超声一微波协同萃取仪（上海新拓微波溶样测试　
有限公司）；　
Ｔ６一紫外可见分光光度计（北京普析通用有限公　
司）等。　
１－３方法　、　
１．３．１对照品溶液的制备　
精密称取１２０　ｏＣ干燥至恒温的芦丁对照品　
２５．Ｏ０　ｍｇ，加适量７０％乙醇在水浴微热溶解，放冷后　
转移至２５０　ｍＬ容量瓶中，加７０％乙醇稀释至刻度，摇　
匀，配成浓度为０．１　ｍｇ／ｍＬ的标准品溶液，备用。　
１．３．２供试液的制备　
取ｌ＿００　ｇ甘草粉末，精密称定，加７０％乙醇５０ｍＬ，　
称重，超声一微波协同萃取２次，每次３０　ｍｉｎ，称重，补　

维普资讯 http://www.cqvip.com
・　
１２８　２０Ｄ６．　２７．～０．８　＿　检测分析　
足损失重量，过滤，收集滤液，即得。　
１．３．３最大吸收峰的确定　
精确吸取芦丁对照品溶液２　ｍＬ，加７０％的乙醇至　
５　ｍＬ，然后加入５％的ＮａＮＯ　溶液１　ｍＬ，室温放置６　ｍｉｎ，再加入１０％的ＡＩ（ＮＯ　）　１　ｍＬ，混匀，室温放置　６　ｍｉｎ，加入４％的ＮａＯＨ　１０　ｍＬ，用水稀释至２５　ｍＬ，　混匀，放置１５　ｍｉｎ，在分光光度计上扫描波长从　４００　ｎｍ～６００　ｎｍ之间的吸收度，结果在５１０　ｎｍ波长　处有最大吸收值。　１．３．４标准曲线的绘制　精确吸取芦丁对照品溶液０，１，２，３，４　ｍＬ，分别加　７０％的乙醇至５　ｍＬ，然后加入５％的ＮａＮＯ　溶液１　ｍＬ，室温放置６　ｍｉｎ，再加入１０％的ＡＩ（ＮＯ３）　１　ｍＬ，混　匀，室温放置６　ｍｉｎ，加入４％的ＮａＯＨ　１０　ｍＬ，用水稀　释至２５　ｍＬ，混匀，放置１５　ｒａｉｎ，以不加样品的溶液为　参比液，在５１０　ｎｍ处测定其吸光度值。测定结果计算　得直线方程：　Ａ＝０．０１７　７Ｃ＋０．０００　２，ｒ＝０．９９９　６　２结果与分析　２．１样品含量测定　２．１．１常规方法　取１．００　ｇ甘草粉末，精密称定，加７０％乙醇５０ｍＬ，　称重，索氏提取两次，每次６０　ｍｉｎ，称重，补足损失重　量，过滤，合并收集滤液，按标准曲线同样的方法测定　其吸光度值，计算黄酮的含量。结果见表１。　２．１．２超声一微波协同萃取法　取１．Ｏ０　ｇ甘草粉末，精密称定，加７０％乙醇５０ｍＬ，　称重，超声一微波协同萃取２次，每次３０　ｍｉｎ，称重，补　足损失重量，过滤，合并收集滤液，按上述方法测定其　吸光度值，计算黄酮的含量。结果见表１。　表１甘草中黄酮的含量　２．２重复性试验　取６份甘草粉末，精密称定。分别加入７０％的乙　醇５０ｍＬ，称重，超声一微波协同萃取２次，每次３０ｍｉｎ，　称重，补足损失的重量，过滤，收集滤液。各取上述样品　溶液１　ｍＬ，分别加７０％的乙醇至５　ｍＬ，然后加入５％　的ＮａＮＯ　溶液１　ｍＬ，室温放置６　ｒａｉｎ，再加入１０％的　ＡＩ（ＮＯ　）　１　ｍＬ，混匀，室温放置６　ｍｉｎ，加入４％的ＮａＯＨ　１０　ｍＬ，用水稀释至２５　ｍＬ，混匀，放置１５　ｍｉｎ，在５１０ＲＥ　处测定其吸光度值。试样中黄酮百分含量的　
ＲＳＤ＝Ｉ．５０％（ｎ＝６）。测定结果见表２。　
表２重复性试验结果　

试样号　１　２　３　４　５　６　
百分含量（％）　２．（）０　２．０５　２．０２　２．ｏ３　２．ｏ４　２．０９　

２．３稳定性试验　
精密吸取标准品溶液１　ｍＬ，样品溶液１　ｍＬ，同标　
准曲线和样品测定的操作，在１５、３０、４５、６０　ｍｉｎ测定吸　
光度。结果表明，标准品和样品溶液在６０　ｒａｉｎ内都基　
本稳定。　
２．４回收率试验　
取已知黄酮含量的供试品溶液１　ｍＬ于２５　ｍＬ容　
量瓶中，再加入不同量的标准品溶液，依法测定，结果平　
均回收率为９７．６４％，ＲＳＤ＝Ｉ．１９％ｆｎ：６）。结果见表３。　

表３回收率试验结果　

３讨论　
３．１超声一微波协同萃取法使样品介质内各点受到　
的作用一致，降低目标物与样品基体的结合力，加速目　
标物从固相进入溶剂的过程；经超声一微波协同萃取　
法提取甘草中总黄酮的含量为２．０４％，较常规法高出　
近０．３％。　
３．２超声一微波协同萃取法在甘草黄酮类成分的提　
取中已经显示出明显的优势，具有省时、节能、提出率　
高等优点。所以甘草黄酮的提取可优选超声一微波协　
同萃取法。　

参考文献：　
［１］中国植物志［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９８，２４（２）：１６７￣１７５．　
［２］中华人民共和国药典．（一部）『Ｍ】　匕京．人民卫生出版　ｌ９９０：７１～７２．　
［３］金宏．浅谈甘草药理作用ＩＪｌ＿时珍国医国药，２０００，ｌ１（１）：７８～７９．　
［４］国家医药管理局中草药情报中心站．植物学有效成分分册ＩＭ］．北　
京：人民卫生出版社，１９８６：４６５～４６５．　
收稿日期：２００６—０５—０９　

维普资讯 http://www.cqvip.com