LightScanner 高分辨溶解曲线分析系统参数
一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法为了促进斑马鱼的高通量的
一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法为了促进斑马鱼的高通量的基因分型，我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析（HRMA）区分野生、杂合、纯合突变。
这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。
此技术生成的熔解图的敏感性高，可以检测不明确的PCR产物。
我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基因分型，包括apc hu745（apc mcr）和p53zy7（p531166T ），小的缺失突变（bap28y75）及逆转录病毒的插入突变（wdr43hi821a）。
这种技术可对单个斑马鱼胚胎及个体进行基因分型并适用于其它类型的生物体。
Developmental Dynamics 238:3168-3174，2009©2009 Wiley-Liss，Inc。
关键词：熔解曲线斑马鱼基因分型 SNP 点突变插入突变简介斑马鱼作为有机体遗传模型正在成熟。
考虑到比较容易维持大量的突变线，且大量的鱼位于每个突变线，大规模的基因分型需要有效的高通量的基因分型技术。
突变的多种类型导致斑马鱼突变，增加了基因分型的复杂性。
ENU诱变剂——诱导斑马鱼突变的主要物质，经常导致单个碱基的突变，小的缺失插入也会发生。
第二种比较普遍的方式是插入诱变，用逆转录病毒插入或转座因子插入破坏基因。
因此，有效的基因分型这些突变类型的方法是必须的。
提供一种更快、有效、令人满意的基因分型方法，有100%的精确度。
寻找高通量的技术/方法，去除掉比较浪费时间的步骤。
随着扩增基因组DNA 的PCR技术的出现，典型的基因分型技术包括Southern印迹法和放射性方法（RFLP和SSCP）已经逐渐被淘汰。
一些基于PCR 的方法用于偶然产生或消除限制性内切点的突变。
大多数方法，除了测序方法之外，需要用PCR产物跑琼脂糖凝胶电泳。
当数百个或成千上万个样品需要基因分型时，这项工作就变得浪费时间且费用较高。
对于产生或消除一个特殊的限制性位点的突变而言，以PCR为基础的限制性片段长度多态性（RFLP）是一种有用的技术。
高分辨率溶解曲线简介资料
高分辨率溶解曲线简介(2011-09-01 11:30:50)转载▼标签：杂谈高分辨率熔解曲线分析技术（ High Resolution Melting ），简称 HRM ，是近年来兴起的一种检测基因突变、进行基因分型和SNP检测的新工具，可以迅速的检测出核酸片段中单碱基的突变。
HRM 技术因其速度快，操作简便，高通量，灵敏性特异性高，对样品无污染等优点而被迅速的应用在生命科学、医学、农学、畜牧业等领域的研究工作中。
其中，主要的研究方向集中在： 1 、基因未知突变以及 SNP 的扫描； 2、已知突变及 SNP 的基因分型； 3、动植物、微生物等物种的物种鉴定以及品种鉴定； 4 、法医鉴定、亲子鉴定； 5 、HLA 的配型； 6 、甲基化的研究等。
一、HRM技术的基本原理：HRM 技术主要是基于核酸分子物理性质的不同。
不同核酸分子的片段长短、 GC 含量、 GC 分布等是不同的，因此任何双链 DNA 分子在加热变性时都会有自己熔解曲线的形状和位置。
HRM 技术的基本原理就是根据熔解曲线的不同来对样品来进行区分。
以二倍体细胞为例，当纯和子样品通过 PCR 扩增，经过变性复性后，仍然是纯合子，如图一 A 。
而杂合子 PCR 扩增完，经过变性复性后，样品中会形成部分的含有非沃森 - 克里克配对的双链分子存在。
图一： A ：纯合子样品 B ：杂合子样品如图一 B 所示，杂合子样品扩增后，经变性复性，会有非配对碱基的形成，而纯合子样品没有。
这样，杂合子样品相对纯合子样品来说，双链不够稳定，表现在解链温度上就会有微小的差别。
如果采用高分辨率的仪器进行检测，并用专门的软件进行分析，微小的差别就会被检测出来，从而成功的筛选出纯合子与杂合子。
下图是杂合子样品熔解曲线的的示意图：图二：杂合子样品的熔解曲线为四种不同双链的熔解曲线的叠加的结果。
以二倍体细胞为例，杂合子扩增后通过变性复性会形成二种同源双链和两种异源双链的混合物，在熔解过程中四种链会形成一条独特的溶解曲线，从而与纯合子的熔解曲线区分出来。
高分辨气质联用仪招标技术参数
高分辨气质联用仪招标技术参数一、总则高分辨气质联用仪是一种新型的分析仪器，它结合了气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和质谱检测（MS）的功能，可以对复杂的混合物进行快速、高效的分析。
在化学、生物、环境等领域具有广泛的应用前景。
为了满足不同领域的需求，我们现在对高分辨气质联用仪进行招标，希望能够找到性能优异、价格合理的产品，为广大用户提供更好的分析工具。
二、技术要求1.分辨率：气相色谱和液相色谱的分辨率分别要求不低于5000和10000。
2.灵敏度：对于目标物质的检测灵敏度要求高，可以检测到ppb 级别的物质。
3.质谱检测范围：要求覆盖从50到1000 m/z的质谱检测范围。
4.色谱柱温控范围：气相色谱和液相色谱的色谱柱温控范围均要求在室温至400℃之间可调。
5.质谱解析力：要求不低于10000。
6.数据处理系统：配备先进的数据处理系统，能够对数据进行快速高效的处理和分析。
三、设备参数1.气相色谱部分（1）色谱柱：采用国际知名品牌，长度30m，直径0.25mm，膜厚0.25μm。
（2）色谱炉：能够在室温至400℃范围内稳定控制。
（3）检测器：具有高灵敏度、高分辨率和低噪声的质谱检测器。
（4）进样系统：自动进样，能够进行微量样品的进样。
2.液相色谱部分（1）采用双螺纹高压适配器，能够提供高压稳定的液相色谱系统。
（2）采用高灵敏度和高分辨率的质谱检测器。
（3）采用双波长紫外检测器，能够实现多组分定量检测。
3.质谱部分（1）质谱分辨率：要求不低于10000。
（2）检测范围：要求覆盖从50到1000 m/z的质谱检测范围。
（3）离子源：采用高效率和稳定性的离子源，能够提供高质量的质谱图谱。
四、其他要求1.设备应具有良好的稳定性和可靠性，能够实现长时间连续运行。
2.设备应具有良好的兼容性，能够与其他分析仪器和数据系统进行无缝连接。
3.设备应具有良好的用户界面和操作体验，能够方便用户进行操作和维护。
五、结束语以上是我们对高分辨气质联用仪招标的技术参数要求，希望能够吸引到优秀的产品和厂家。
HRM在水产领域中的应用共20页
•
大约需要30-60分钟
2005
LightScanner 96/384
•96/384 孔板 •~8 分钟/板
•~2-6 秒/样品 •温度均一性： 0.15oC •数据采集速度：大于100pts/秒 •升温速度： 0.1oC/秒
2010
LS32
• 32 样品转盘, 玻璃毛细管 •HRM 检测 • 60 分钟内完成定量 PCR 和 HRM 检测 • HRM检测升温速度可以在 0.05 ～ 0.90oC/秒之间调 节 •在升温速度小于≤0.3℃/秒时，温度均一性：±0.05oC • 数据采集速度：20pts/秒～400pts/秒（与升温速度有 关）
2. 品种鉴定
• HRM可以应用于微生物品种、物种快速 鉴定以及动植物品种鉴定。 McGlauflin M T.等利用高分辨率熔解曲线（HRM） 发现了11个新的鉴别虹鳟和切喉鳟的 SNPs。发现HRM能准确地识别DNA序 列的核苷酸变化。
McGlauflin M T., Smith M J., Wang J T., Young S F., Chen N., Lee Y C. High-resolution melting analysis for the discovery of novel single-nucleotide polymorphisms in rainbow and cutthroat trout for species identification. Transactions of the American Fisheries Society,2010,139(3):676-684.
拉曼光谱仪的工作参数介绍
拉曼光谱仪的工作参数介绍概述拉曼光谱仪是一种利用拉曼散射效应分析样品的仪器。
拉曼散射现象是指，当激光照射样品时，样品中的分子或晶体因振动而引起散射光，且散射光的频率比激光光源的频率稍微降低，这种现象被称为拉曼散射效应。
拉曼光谱可以用于物质的分析、组成分析、结构分析等。
拉曼光谱仪是一种非常重要的分析仪器，可以用于化学、材料、地质、生物等领域。
本文将对拉曼光谱仪的工作参数进行介绍。
光源拉曼光谱仪的光源通常是激光，激光的波长是固定的。
常见的激光波长有532nm、785nm、1064nm等。
不同波长的激光适用于不同类型的样品。
特别地，可见激光主要适用于有机物和有机高分子的分析。
而近红外激光则适用于无机化合物和矿物质的分析。
红光、绿光和蓝光的激光波长分别为650nm、532nm、488nm。
分光镜拉曼光谱仪利用分光镜分离散射光和激光，并将散射光投射到探测器上。
拉曼光谱分光镜一般有两种，低通滤光片和金属滤光片。
低通滤光片的作用是将激光衰减，以避免光谱的偏移和饱和。
金属滤光片通常用于在样品被激光照射之前消除自发荧光信号。
反射镜反射镜是拉曼光谱仪的重要组成部分，可将激光引导到样品上，使激光与样品产生相互作用，然后将样品的信号收集到探测器上。
反射镜分为两种：倾斜反射镜和平面反射镜。
平面反射镜是将激光与样品垂直以实现散射，而倾斜反射镜则在一定角度下将激光引向样品。
探测器探测器是测量拉曼光谱的关键组件。
常见的探测器有CCD探测器和光电倍增管探测器。
CCD探测器具有高分辨率、低背景噪声等优点，适用于高精度的测量。
而光电倍增管探测器则具有高速度、高灵敏度等优点，适用于大量样品快速测量。
其他参数除了上述参数外，拉曼光谱仪还有一些其他的参数需要注意：•分辨率：分辨率是指一个光谱测量中重心波数和半高峰宽度的示例差异。
分辨能力越好，就可以得到更加精确的光谱数据。
•精度：精度是指测量结果与真实值的偏差，精度越高，测量结果越可靠。
•灵敏度：灵敏度是指在低样品浓度下，还能够检测到样品中的信号强度。
利用Lightcanner进行高分辨率溶解曲线分析时一种转板器的制作及其使用方法
利用Lightcanner 进行高分辨率溶解曲线分析时一种转板器的制作及其使用方法声明：，本方法由Along 独立创制，如有雷同纯属巧合 导言出于节省试验成本需要对lightscanner 匹配的全裙边PCR 板进行反复利用时或者实验室缺乏匹配全裙边PCR 板PCR 仪的情况下，需要在PCR 扩增完后把普通PCR 板（或8/12连管）PCR 产物转移到全裙边板子上，如果用排枪（或单枪）吸取，如果是大规模筛选，个人觉得比较麻烦，而且会存在少量残留，如何快速高效转移呢？笔者找到了一个比较简便的方法，下面进行简单介绍。
配套材料要求普通PCR 板：管口要凸出，与板子齐平的不行。
匹配Lightscanner 的全裙边板：这种管口的可以这种管口的不行转板器制作及使用96孔微孔板的选择（微孔板也叫细胞培养板、酶标板等）选择特定类型的V底（U底也可接受）96孔微孔板（不是每种品牌都可以使用，不同品牌间在构造上略存差异，这些差异有可能导致不能改造成转板器），材料最好是PP(聚丙烯，就是普通PCR管的那种材质)，因为其比较柔软一些，易于打孔而不破裂（市面上的微孔板多是PS即聚苯乙烯材料的，本人没有试过，因其比较脆，恐不好打孔）。
本人验证Eppendorf的V底（U底也可接受）96孔微孔板（Eppendorf货号0030 601.300）与全裙边板非常匹配，只要微修打孔即可使用，下面就以此种微孔板为例介绍制作转板器的方法。
工具制作方法1、修支脚（目的是使管底直接搭在全裙边板上，而不是悬空）2、打孔（烫孔）用夹钳夹住尖底螺丝钉（越尖越好）在酒精灯上烧热后，从微孔板底部，对准管底中央尖端烫开一小孔，一次烧热可以烫三四个孔，所有孔烫完后用手抠掉那些粗糙的塑料结痂（不需要抠得多彻底）。
下图是修支脚及打孔之后的效果3、检验效果用小刀把图示部位的所有支撑横挡支脚全部去除，修到突出的平面齐平即可，不需要修到底部有可能由于孔不平滑使离心后液体有少部分残留，因此必须检查是否存在液体残留现象，按下面的使用方法，用少量纯水试验。
汉森溶解度参数
汉森溶解度参数
汉森溶解度参数是一种用于测量溶剂在一定条件下溶解物质的能力的参数。
它可以帮助我们评估溶剂的溶解性，并且可以在溶液系统中比较不同溶剂的溶解性。
汉森溶解度参数是由瑞士化学家廉·汉森创立的，它可以
用来衡量溶液中溶解物的溶解度，也可以用来衡量溶液的溶解度。
它是一种客观的参数，可以用来衡量溶解物的溶解度，从而使我们能够准确地评估溶解度，从而更好地控制溶液的性质。
汉森溶解度参数的计算公式为：溶解度参数=溶解物的溶
解量/溶剂的体积。
其中，溶解物的溶解量是指溶解物在某种
温度、压力和溶剂组成下，在单位体积溶剂中溶解的质量。
溶剂的体积就是指溶剂的容积。
汉森溶解度参数可以用来比较不同溶剂的溶解性，它可以帮助研究人员更好地控制溶液系统中的溶解物，有助于实现更高效的溶解性。
此外，汉森溶解度参数还可以用来比较不同温度、压力和溶剂组成下的溶解度，可以有效地控制溶液的溶解性，并且可以有效地改变溶液的物理性质，有利于改善溶液的性能，从而达到最佳的效果。
总之，汉森溶解度参数是一种重要的工具，它可以帮助我们更准确地评估溶解度，从而更好地控制溶液的性质。
此外，
它还可以用来比较不同温度、压力和溶剂组成下的溶解度，有助于改善溶液的性能，从而提高效率。
RocheLightCycler480
六．运行实验
实验程序和样本均设置完毕后，即可运行实验，具体操作：进入“New Experiment” 界面，点击左侧 按钮，如反应板已经放入仪器，仪器主机正面右侧的LED灯会由 桔黄色变为绿色，软件界面右下边的这时点击“Start Run”按钮，软件界面跳出一对 话框提示用户给该实验文件命名，以保存实验结果。一般建设用户以时间命名，以方 便日后查找实验结果，如20180816HBV-01，20180817XB-02等。命名后点击确认键， 仪器就开始运行了，在运行过程中可观察到温度和荧光信号的变化曲线。如进行多重 荧光PCR实验，可在荧光历史“Fluorescence History”界面内上的下拉菜单中切换不同 的检测通道，以分别观察其扩增情况。 在实验运行过程中，用户可以根据需要，点击“＋10 Cycles”按钮增加正在运行的 程序10个循环，也可以点击“End Program”按钮终止正在运行的子程序，直接进入 下一个子程序。
PART
2
软件操作
打开软件
仪器自检 样本设置
用户管理 建立实验程序 运行实验 报告生成 单点定标
数据分析
数据导出与导入
相对定量实验设计和分析
一．打开软件 打开电脑，Windows操作系统的用户名为LCservice，密码为LCservice（区分大小写）， 电脑操作系统启动完毕，检查电脑右下角是否有 图标。如果没有，点击桌面“Exor4 for XDMS_R”快捷方式文件。然后右键点击 图标，左键点击“Show”一栏，如最后一句话 显示“Exor 4 server is running”表示数据库加载成功。如果显示“Exor 4 failed to start”则表 示数据库没有加载上，关闭该窗口，右键点击 图标，选“Shutdown”一栏，退出数据库， 重新点击桌面“Exor4 for XDMS_T”文件，加载数据库。 然后点击桌面“LightCycler480II Software” 快捷方式文件，运行该软件。输入用户名 和密码。用户名默认为admin（管理者权限），密码为PCR123（区分大小写），如用户已经 建立新用户名，则可以按照新用户名登录。
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LightScanner 高分辨溶解曲线分析系统技术参数
一、功能描述：
1、*不带荧光定量的独立的高分辨溶解曲线分析仪
2、非标记探针法（LunaProbe）进行位点基因分型（Genotyping）
功能；小片段扩增+温度内标法（Small Amplicon）进行位点基因分型（Genotyping）功能
3、针对PCR产物的未知基因突变筛查功能
二、硬件配置：
1、*标准8行x 12列的96孔板模式，高精度96孔板半导体电
加热温控方式，而非空气热循环模式
2、自动侦测、载入样品板装置
3、122阵列光源
4、CCD检测系统
5、cGMP认证并严格按照cGMP标准生产，CE认证
三、技术参数：
1、需配备可PCR前加入的LC Green Plus高分辨溶解曲线分析
荧光染料
2、控温精度：±0.01℃，温度范围：室温-100 °C
3、高分辨溶解曲线分析要求的缓慢升温方式：0.1℃/秒，降温
速率：95°到60 °C (非线性)~ 180 秒（室温25 °C条件下）
4、数据采集密度：100个数据/℃
5、激发波长：470±20nm，发射波长：510 和600 nm
6、*非标记探针法（LunaProbe）进行位点基因分型（Genotyping）
功能，成本小于1.5元人民币/样本；小片段扩增+温度内标法（Small Amplicon）进行位点基因分型（Genotyping）功能。
7、DNA Genotype特异性99.5%（片段大小小于400bp）
8、反应体系5-100ul
9、分析时间：6分钟内完成96孔板（96个样品）的高分辨溶
解曲线分析
四、数据控制系统及软件：
1、*软件必须具有对PCR产物进行未知突变扫描和针对已知
SNP为点进行非标记探针（LUNA Probe）进行基因型鉴定的功能。
2、*软件必须具有进行低端和高端内标PCR产物进行校正的功
能，从而对小片段PCR扩增产物直接进行基因型鉴定（Genotyping）。
3、戴尔台式电脑，奔腾2.0G CPU，1G内存，80G硬盘，1280x1024
显卡，19英寸液晶显示器，10/100M网卡，4 USB 接口，USB 鼠标键盘，DVD光驱(CD RW)，XP专业版操作系统，已安装LightScanner控制及数据处理软件，兼容实验室仪器管理系统软件LIMS.
4、准确进行突变位点检测和基因分型的高分辨熔点分析软件，包括仪器控制、数据采集、数据处理、输出等功能。