卡莫氟在Caco_2细胞模型中的吸收和转运特性
内吞抑制剂阻止PAMAM Dendrimer 内化和渗透进Caco-2细胞内
讨论
布雷菲德菌素A诱导二次管状内体和溶酶体，这降低了细胞内运输 小泡的微管交换。这种抗生素容易受到GTP酶激活的干扰，可促进运输 囊泡的形成，因此抑制可以穿梭于内体和高尔基体蛋白质的运输。同样， 秋水仙碱通过捆绑微管蛋白亚基干涉微管交换。我们熟知非律平通过结 合糖脂类微小区域和小窝的重要组成部分----胆固醇来抑制小窝介导的 内吞作用。这个相互作用扰乱了小窝的结构和功能。高浓度蔗糖的高渗 条件的产生主要阻碍了膜的内化和经由包括有被形成的有被小窝通路的 网格蛋白循环。出现这种情况通过可逆抑制低密度脂蛋白（LDL）的内 化，这会导致LDL受体细胞膜上的随机分散，从而减少了为网格蛋白装 配的可用有被小窝 数量。 的
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实验结果---细胞细胞毒性的测定
实验部分---Caco-2细胞对G4NH2的摄取
80000cells/ml24孔细胞培养板上
1. 4天后，用HBSS洗两次并用0.5ml的HBSS培养20min 2. 随后用200μ L 的[3H]-核黄素(0-60nM)或200μ L 的[3H]-G4NH2 (0-8μ M)培养20min。 3. 在培养的最后，用冰冷的HBSS缓冲液洗两次细胞。 4. 然后细胞用250μ L 1%的TritonX-100溶解。用液体闪烁计数仪 测量连接放射性物质的细胞。 5. 用BCA蛋白质试剂盒测总蛋白量作为摄取数据。 6. 为了研究内吞抑制剂对核黄素和G4NH2的影响，在37℃用500μ L 的抑制剂溶液20ml培养细胞20min，然后用200μ L的[3H]-核黄 素（0-60nM）或[3H]-G4NH2（0-8μ M）也包含同样浓度内吞抑 制剂培养20min：5μ M的布雷菲德菌素A；10μ M的秋水仙碱； 1μ g/ml的非律平；200mM的蔗糖。
《二氧化碳捕集吸收研究报告》
《二氧化碳捕集吸收研究报告》一、二氧化碳捕集吸收技术现状（一）主流捕集技术1. 胺类吸收技术胺类吸收技术是目前可用于低浓度烟气最为成熟的燃烧后捕获技术。
该技术使用氨水或有机胺吸收 CO2，发生化学反应生成盐类。
例如，以一乙醇胺 MEA 作为吸收剂具有吸收效果好、成本低、吸收剂可循环使用并且产品纯度较高的特点，其脱碳效率可超过 90%。
目前 MEA 吸收剂被广泛用于中试和工业示范性装置中，但也存在运行能耗太高、吸收剂损耗过大等问题。
混合胺结合了不同单一胺类的优点，能较好满足高吸收速率、高吸收容量和低能耗的要求，如混合胺型吸收剂更为成熟，短期内进行工业化应用更具优势。
2. 低温蒸馏技术低温蒸馏技术是将混合气体经加压和冷却后，通过蒸馏分离出其中的 CO2。
该技术适用于高浓度烟气，通常和胺法搭配使用。
它在较高的操作压力下进行，不适用于尾气中 CO2 的分离。
溶剂的再生通过降压实现，所需再生能量相对较少。
典型物理吸收法包含冷法和热法两种技术，热法以聚乙二醇二甲醚溶剂吸收法为代表。
3. 整体煤气化联合循环（IGCC）和富氧燃烧技术（OEC）整体煤气化联合循环（IGCC）和富氧燃烧技术（OEC）分别为燃烧前和燃烧中的捕获技术。
燃烧前捕集主要运用于 IGCC 系统中，将煤高压富氧气化变成煤气，再经过水煤气变换后将产生 CO2 和氢气，气体压力和 CO2 浓度都很高，将很容易对 CO2 进行捕集。
富氧燃烧采用传统燃煤电站的技术流程，但通过制氧技术，将空气中大比例的氮气脱除，直接采用高浓度的氧气与抽回的部分烟气的混合气体来替代空气，这样得到的烟气中有高浓度的 CO2 气体，可以直接进行处理和封存。
然而，这两种技术需对既有生产装置和系统进行大幅改造，成本投入巨大，一般适用于新建工厂。
（二）二氧化碳捕集技术分类1. 吸收捕集技术吸收捕集技术是利用特定溶剂从混合气流中分离出二氧化碳，包括饱和吸收和后处理吸收。
饱和吸收是将气体通入无水的吸收剂中，在达到饱和后继续通过吸收剂将其中的二氧化碳捕集和集中。
光催化还原CO2_的机理与MgO_在吸附转化方面的应用
第53卷第3期 辽 宁 化 工 Vol.53，No. 3 2024年3月 Liaoning Chemical Industry March，2024基金项目： 国家自然科学青年基金项目（项目编号：21908052）；华北理工大学大学生创新创业训练计划项目（项目编号：T2022068）。
收稿日期： 2023-02-19光催化还原CO 2的机理 与MgO 在吸附转化方面的应用李婷，张若涵，郭红霞（华北理工大学 化学工程学院，唐山 河北 063210）摘 要： 由于CO 2的过量排放而引发的温室效应已成为当今世界面临的重要环境问题，将CO 2还原转化为高附加值化学品和燃料是解决这一问题的有效途径。
其步骤包括吸收入射光子；电子-空穴对的产生、分离和转移；CO 2分子在表面上的吸附、活化和转化。
基于MgO 可增强CO 2在表面的吸附进而促进后续的光催化还原，介绍了光催化还原CO 2的机理以及MgO 在CO 2还原与吸附等方面的应用研究。
MgO 表面化学吸附的CO 2分子变得不稳定，其反应活性高于线性CO 2分子，因此显著提高CO 2的转化效率，可见其在CO 2吸附与转化等方面具有良好的发展前景。
关 键 词：光催化；MgO ；吸附CO 2；还原CO 2中图分类号：TQ426.1 文献标识码： A 文章编号： 1004-0935（2024）03-0399-05二氧化碳的过量排放极大地影响了自然界碳循环的平衡，导致了严重的环境问题，特别是温室效应[1-3]。
由于太阳能在理论上是一种无限的能源，利用阳光光催化还原CO 2提供了一种以化学燃料形式直接储存太阳能的有效方法[4]。
太阳能将CO 2转化为化学物质和燃料，如甲酸、甲醇和一氧化碳等基本化学物质，不仅对减少CO 2的排放非常重要，而且对有效利用CO 2以实现碳能源循环也非常重 要[5]。
因此其被认为是解决全球变暖和能源危机问题的有前途的方法[6]。
CO 2是最稳定与化学活性最低的分子之一，具有线性几何结构，C =O 键的断裂需要大量的能量输入。
CaCo-2 Permeability Assays
Permeability across differentiated monolayers of CaCo-2 cells measured to estimate human intestinal permeability. Principle of the assay:●CaCo-2 cells are grown to confluence and allowed todifferentiate on filters. Test agent is added to one side of the monolayer, and permeability is assessed using HPLC or LC/MS .Cells:●CaCO-2 human colon adenocarcinoma cells are grown toconfluence and differentiated for 3 weeks on filters.Sample Requirements:●20 µL of a 10 mM DMSO solution, based on a testconcentration of 50 µM.Assay Modes:●Screening: Test agent is incubated for 2 hr on either side ofthe monolayer (apical and basolateral), and permeability is estimated by HPLC or LC/MS. High permeability predicts good oral bioavailablity. High Asymmetry Index indicates possible PGP substrate.●PGP Inhibition:Test agent is incubated for 2 hr on either sideof the monolayer in the presence and absence of the PGP inhibitor verapamil, and permeability is estimated by HPLC or LC/MS.Follow-on Studies:●In vivo pharmacokinetics: In collaboration with our partner, thecompound is administered to rodents, and plasma samples are analyzed at different times to determine the concentration of test agent.●Customization is easily possible, please contact us to discussyour requirements.For more information please contact:Gentronix Ltd T +44 161 606 7266F +44 161 606 7337info@CaCo-2 Permeability AssaysA thorough understanding of intestinal epithelial transport is crucial for evaluating the potential for oral dosing of drug candidates. In vitro studies with CaCo-2 cell monolayers have proven to be a valuable tool for predicting in vivo intestinal permeability 1.1. Balimane,PV. AAPS J. 8:1 (2006); Wessel,MD. J Chem Inf Comput Sci 38:726 (1998)Prediction of Fraction Absorbed byCaCO-2 Permeability0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%100%0.1110100CaCo-2 P app ( 10-6 cm/s)F r a c t i o n A b s o r b e d (%)Figure 1. Prediction of human bioavailability from CaCo-2 permeability. Bioavailability (Fractionabsorbed) from Ref 1. Permeability from Ref 1 (Blue ) or Apredica (Red ).In partnership with:Literature1ApredicaApredica50%Low 1.2Atenolol100%High 30Caffeine12%Pgp substrate 0.7Sulfasalazine 90%High 60Propranolol Bio-availability Permeabi lity class P app (10-6cm/sec)compoundTable 1. In vitro CaCo-2 permeability of reference compounds .。
caco2细胞上下室中akp比值标准
caco2细胞上下室中akp比值标准在细胞培养中，尤其是涉及碳酸钙沉淀的研究中，上下室中的AKP（碱性磷酸酶）比值是一个重要的指标。
然而，关于Caco-2细胞上下室中AKP比值的“标准”或“正常范围”并没有一个明确的定义，这主要是因为AKP比值会受到多种因素的影响，如细胞培养条件、细胞密度、培养时间等。
Caco-2细胞是一种常用于研究肠道吸收和分泌过程的细胞模型，这种细胞在适当的培养条件下可以形成类似于肠道上皮的紧密连接，从而允许进行一些模拟肠道生理学的实验。
在这些实验中，AKP的比值通常被用作反映细胞功能状态的一个指标。
一般来说，AKP比值在Caco-2细胞上下室中升高或降低可能意味着一些重要的变化。
例如，AKP比值的升高可能表明细胞的分化和成熟程度提高，或者钙化过程正在进行。
相反，AKP比值的降低可能意味着细胞的健康状况出现问题，或者细胞正在经历一些不正常的变化。
然而，由于AKP比值是如此容易受到各种因素的影响，因此不能简单地将一个“正常范围”应用于所有情况。
在研究过程中，通常需要对实验条件进行严格的控制，并对数据进行仔细的分析，以得出有意义的结果。
为了确定Caco-2细胞上下室中AKP比值的“标准”，需要进行更多关于这种细胞模型在各种条件下的行为的研究。
这将需要一个详尽的数据库，包括在不同条件下的AKP比值数据，以及对这些数据背后的生物学过程的深入理解。
总的来说，虽然AKP比值是一个有用的生物标志物，但它并不能简单地应用于Caco-2细胞培养中作为一个“标准”。
对于任何涉及Caco-2细胞和AKP比值的研究，都需要对实验条件进行严格的控制，并对数据进行深入的分析和理解。
在未来，随着我们对Caco-2细胞培养和AKP比值的理解加深，我们可能会看到一个更加精确的“正常范围”被定义出来。
这将需要对这种细胞模型进行更深入的研究，包括对AKP比值在各种条件下的变化进行更全面的了解。
蛋清肽螯合钙的结构表征及其促钙吸收途径的研究
摘要钙是维持人体骨骼健康的重要矿物质。
骨钙流失已被证明与钙吸收有关，会导致佝偻病、骨质疏松症等相关疾病。
相关研究表明，人体对钙的吸收利用量取决于十二指肠和空肠近端中可溶性钙的含量。
由于肠道中的钙离子会与膳食成分如纤维素、植酸盐和草酸盐产生沉淀，降低了肠道中钙的可溶性，从而抑制钙的有效吸收。
膳食成分（特别是肽）对钙的可溶性和促钙吸收方面的研究备受关注。
肽可以结合钙离子以防止钙在胃肠道消化过程中产生沉淀，从而改善机体对钙的吸收效果。
本课题以蛋清肽（Asp-His-Thr-Lys-Glu，DHTKE）为原料制备蛋清肽钙螯合物（DHTKE-calcium），并对DHTKE及DHTKE-calcium进行结构表征。
采用Caco-2细胞，在单细胞水平上，通过Leica SP 8型激光共聚焦显微镜实时监测单个细胞内荧光强度，研究DHTKE-calcium经Caco-2细胞刷状缘膜的促钙吸收作用。
在群细胞水平上，借助于Caco-2细胞单层模型，研究了DHTKE-calcium及其消化物的促钙吸收特性。
最后，使用不同通路促进剂或抑制剂处理Caco-2细胞单层膜，研究DHTKE-calcium的高效促钙吸收途径。
为潜在的钙补充剂的表征、吸收特性及吸收途径提供理论依据。
研究结果如下：1. 蛋清肽及蛋清肽钙螯合物的结构表征应用光谱学，波谱学以及热力学等手段，探讨DHTKE与Ca2+的结合模式。
结果表明，DHTKE与Ca2+发生结合，DHTKE中的钙结合位点主要是天冬氨酸（Asp）、谷氨酸（Glu）上的羧基氧原子、氨基氮原子和组氨酸（His）上的咪唑基团氮原子。
DHTKE 与Ca2+的结合比例为1:1。
因此，DHTKE有较高的钙结合活性。
2. Caco-2细胞单层模型的建立与完整性评价Caco-2细胞单层模型建立过程中，采用跨膜电阻的变化、Caco-2细胞单层膜激光共聚焦显微成像、细胞单层膜的分化极性来评价单层膜的完整性。
熊猫豆提取物抑制肿瘤活性及诱导结肠癌细胞Caco-2凋亡机制研究
熊猫豆提取物抑制肿瘤活性及诱导结肠癌细胞Caco-2凋亡机制研究胡冬梅;彭吕杨;薛照辉【摘要】为了探究熊猫豆的抑制肿瘤活性及其诱导Caco-2凋亡的机制,采用80％丙酮浸提法制备熊猫豆粗提物,通过MTT法测定其对人结肠癌细胞Caco-2增殖的抑制效果,琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、酶联免疫分析等技术与方法检测细胞周期、DNA及凋亡相关蛋白相对表达量的变化.结果发现,与空白对照组相比,0.1～1.0 mg/mL熊猫豆丙酮提取物对Caco-2细胞增殖有明显的抑制作用,且呈现剂量效应关系,IC50为0.72 mg/mL.0.4、0.6、0.8 mg/mL熊猫豆丙酮提取物处理72 h后的Caco-2细胞,可以观察到典型的凋亡细胞的梯状DNA条带,细胞周期G1期延长,CytC、caspase-9、caspase-3蛋白的相对表达量均有显著上升.熊猫豆丙酮能够抑制结肠癌细胞Caco-2增殖,这种抑制作用是通过阻滞细胞周期和诱导线粒体通路介导的细胞凋亡实现的.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2015(030)004【总页数】5页(P6-10)【关键词】熊猫豆;人结肠癌细胞Caco-2;细胞凋亡;线粒体通路【作者】胡冬梅;彭吕杨;薛照辉【作者单位】天津大学化工学院食品科学系,天津300072;天津大学化工学院食品科学系,天津300072;天津大学化工学院食品科学系,天津300072【正文语种】中文【中图分类】R735.3结肠癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，全球每年新发病例约800万人，占所有恶性肿瘤的10%～15%，死亡率仅次于肺癌和肝癌［1］。
目前，结肠癌的治疗方法仍以手术治疗、放射治疗和化学治疗为主，但手术创伤性大、恢复时间长，在很大程度上限制其应用；放射治疗和化学治疗具有非特异性的细胞毒素作用，在杀伤肿瘤细胞的同时对机体正常组织器官也会造成一定程度的损伤，在应用方面仍存在争议。
食物治疗因其成本低廉、方便无毒害等优点，日益成为防癌抗癌的研究热点。
小檗碱对内毒素刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用
小檗碱对内毒素刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用李鑫;王洪岩;迟程;徐有青【摘要】Objective The aims of this study is to determine whether berberine(BBR) has a protective effect on lipopolysaccharide(LPS)-induced intercellular high permeability in Caco-2 cells in vitro. Methods Caco-2 cells was incubated and divided into four groups,e.g. control (cultured in Dulbecco's modified eagle medium),LPS (co-incubated with medium and 2 μg/ml of LPS,BBR (co-incubated with medium and 10μM BBR) andBBR/LPS group (co-incubated with medium,2μg/ml of LPS and 10μM BBR). The morphological features of cell growth were observed under inverted microscope. Paracellular permeability was assessed by measuring transepithelial fluorescein permeability. Tight junction protein occludin and Toll-like receptors-4(TLR4) were detected by Western blotting. The expression of downstream signal molecule,MyD88,was detected by immunofluorescence. Results We observed that the intercellular junction were long and thin in control and BBR group, while a saw tooth fracture in intercellular junctions was found in LPS group and a coarse margin but without interruption was observed in BBR/LPS group;there were no significantly differences between control and BBR group as respect to fluorescein permeability (683.3 ±98.9 μg/ml vs. 849.0±89.7μg/ml,respectively),and the expression of occludin,TLR4 and MyD88 (P>0.05);the fluorescein penetrating concentration (1886±176.0 μg/ml) was much higher,TLR4 expression increased,occludin expressiondecreased,and enhanced MyD88 fluorescence signal in cytoplasm was observed in LPS group as compared with in control group(P<0.05);the fluorescein penetrating concentration(1071.0±65.9 μg/ml) and TLR4 expression decreased,occludin expression increased, and weakenedMyD88 fluorescence signal in cytoplasm was observed in BBR/LPS groupas compared with LPS group (P<0.05). Conclusion Our findings suggest that BBR alleviates LPS-induced intercellular high permeability by weakening TLR4/MyD88 activity and increasing the expression of occludin.%目的探讨小檗碱(BBR)对脂多糖(LPS)刺激致Caco-2细胞间高通透性的保护作用.方法体外培养肠上皮细胞Caco-2,分为四组:①对照组(培养基);②LPS组(培养基+LPS 2μg/ml);③BBR组(培养基+BBR 10μM);④BBR/LPS组(培养基+LPS2μg/ml+BBR 10μM).在倒置显微镜下直接观察细胞生长形态,采用荧光黄透过率检测细胞间通透性,采用Western-blot法检测细胞间紧密连接主要结构蛋白occludin、细胞膜Toll样受体-4(TLR4)表达,采用免疫荧光法检测细胞TLR4下游分子MyD88表达.结果在倒置显微镜下可见对照组和BBR组细胞连接完整,LPS组细胞间出现锯齿样断裂,但在BBR/LPS组细胞间连接毛糙,但无明显片状中断;对照组和BBR组荧光黄透过浓度分别为(683.3±98.9)μg/ml和(849.0±89.7)μg/ml)以及细胞occludin、TLR4和MyD88蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05);与对照组比,LPS组透过荧光黄浓度(1886±176.0μg/ml)显著增加,TLR4蛋白表达增加,occludin表达减少,胞浆MyD88荧光信号增强;与LPS组比,BBR/LPS组透过荧光黄浓度(1071.0±65.9μg/ml)显著下降,TLR4蛋白表达减弱,occludin表达增加,胞浆MyD88荧光信号减弱.结论 BBR通过减弱TLR4/MyD88活性,增加occludin 表达,进而减轻LPS刺激致Caco-2细胞间高通透性.【期刊名称】《实用肝脏病杂志》【年(卷),期】2018(021)001【总页数】4页(P34-37)【关键词】Caco-2细胞;小檗碱;内毒素;紧密连接【作者】李鑫;王洪岩;迟程;徐有青【作者单位】100050 北京市首都医科大学附属北京天坛医院消化内科;哈尔滨医科大学附属第二医院体检中心;100050 北京市首都医科大学附属北京天坛医院消化内科;100050 北京市首都医科大学附属北京天坛医院消化内科【正文语种】中文肠源性内毒素血症在酒精性肝病发生和进展中的重要作用已被证实。
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中国药学杂志2009年11月第44卷第21期 Chin Pharm J，2009 November，Vol. 44 No. 21 ·1637·
基金项目：辽宁省自然科学基金资助项目（20082103） 作者简介：孟胜男，女，副教授 研究方向：生物药剂学 Tel/Fax：（024）23256666-5467 E-mail：shengnanmeng@yahoo.com.cn
卡莫氟在Caco-2细胞模型中的吸收和转运特性 孟胜男1,2，张懋王番1，王欣1，赵妍1，李明如1，李煦颖1，何仲贵2（1. 中国医科大学药学院药剂学教研室，沈阳 110001；
2. 沈阳药科大学药学院药剂教研室，沈阳 110016）
摘要：目的 应用Caco-2细胞模型对卡莫氟（carmofur，1-hexylcarbamoyl-5-fluorouracil，HCFU）的吸收、转运特性及其机制进行研究。方法 分别考察时间、pH、浓度及抑制剂对HCFU吸收的影响；测定药物在不同时间双向转运的速度，计算HCFU的表观渗透系数，研究不同药物浓度对其转运的影响。结果 Caco-2细胞对HCFU的吸收在20 min内呈线性，药物摄取时间定为10 min；pH对HCFU的吸收没有显著影响，浓度依赖性结果显示，HCFU的吸收由一个饱和成分和一个非饱和成分组成；P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）抑制剂维拉帕米对HCFU的吸收基本没有影响，而耐药相关性蛋白（MRP）抑制剂MK571的存在可显著增加对HCFU的吸收（P<0.05）。双向转运的表观渗透性存在方向性差异，且受浓度的影响。结论 HCFU在Caco-2细胞中以主动和被动2种形式吸收，其吸收存在外排机制，MRP2可能对HCFU的吸收有外排作用。 关键词：卡莫氟；Caco-2细胞模型；吸收；转运 中图分类号：R333.3；R966 文献标识码：A 文章编号：1001-2494(2009)21-1637-06
Uptake and Transport Characteristics of Carmofur in Caco-2 Cells Model MENG Sheng-nan1,2，ZHANG Mao-fan1，WANG Xin1，ZHAO Yan1，LI Ming-ru1，LI Xu-ying1，HE Zhong-gui2 (1. Department of Pharmaceutic， Pharmacy School of China Medical University， Shenyang 110001，China；2. Department of Pharmaceutics, School of Shengyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China)
ABSTRACT：OBJECTIVE To investigate the uptake， transepithelial transport characteristics and the cellular uptake mechanism of carmofur，1-hexylcarbamoyl-5-fluorouracil(HCFU) in the Caco-2 cells model. METHODS The uptake studies of HCFU were investigated through the time(1， 2， 5， 10， 20 min)， pH (6.5, 7.4) and concentration(0~300 μmol·L-1) dependence assays. The cellular uptake mechanism of HCFU was determined with the P-gp inhibitor of verapamil and the MRP inhibitor of MK571. The transepithelial transport was measured using Caco-2 cell monolayers grown in Transwell chambers at different time(30， 60， 90， 120 min) and concentrations(25, 100 μmol·L-1)， and the permeability was calculated. RESULTS The uptake of HCFU in Caco-2 cells
showed a linear range in 20 min and the uptake time was fixed at 10 min. No significant pH-dependent influnce was observed in Caco-2 cells. The concentration-dependent uptake of HCFU consisted of one saturable and one nonsaturable component. Verapamil(100 μmol·L-1) almost had no effect on the uptake of HCFU, and MK571(50 μmol·L-1) increased the uptake significantly(P<0.05). The
permeability showed directional different(P<0.05), Papp(BL→AP)/Papp(AP→BL) was 1.7 and the Papp(BL→AP) decreased significantly(P<0.05) with increasing concentration. CONCLUSION The absorption of HCFU in Caco-2 cells model included active and passitive manner， involved in efflux transport， and MRP2 maybe play an important role in the efflux of HCFU in Caco-2 cells. KEY WORDS：carmofur; Caco-2 cells model; uptake; transport
卡莫氟（carmofur，1-hexylcarbamoyl-5-fluorouracil，HCFD）为氟尿嘧啶的衍生物，能干扰或阻断DNA、
RNA及蛋白质合成而发挥抗肿瘤作用。其毒副作用比氟尿嘧啶小，药动学研究显示，HCFD口服后，能在体内经多种途径代谢，逐渐释放出氟尿嘧啶，并能较长时间维持氟尿嘧啶于有效的血药浓度范围内，临床上已广泛用于消化道癌、肺癌及乳腺癌的治疗[1-2]。 由于HCFD目前的临床应用只有口服给药途径，探索其吸收和转运特性可改善药物的基本性质、降低药物不良反应和避免多药耐药发生等，使其更能安全、高效地在临床应用。Mancolon carcinoma cell lines(Caco-2)细胞模型来源于人类结
肠癌细胞，可在体外培养条件下自发进行上皮样分化且可形成紧密连接，分化出绒毛面(apicalside，
AP，肠腔侧，顶端) 和基底面(basolateralside，BL，
肠壁侧，底端)，其结构和生化特性类似于人小肠上皮细胞，具有相同的细胞极性和紧密连接，同时能表达小肠上皮细胞中的各种转运体和代谢酶[3-4]，已
作为国内外公认的药物摄取、代谢、外排和跨膜转 Chin Pharm J，2009 November，Vol. 44 No. 21 中国药学杂志2009年11月第44卷第21期 ·1638·
运等吸收机制研究的有效工具，且能预测药物体内吸收、代谢和药物相互作用，帮助设计有更好吸收和更高生物利用度的口服药物或制剂并评价它们的安全性等。本实验用Caco-2细胞单层模型研究卡莫氟的吸收和转运特性，考察时间、pH、药物浓度以及转运蛋白抑制剂对卡莫氟吸收和转运的影响，为其临床应用提供理论和实验依据。 1 材 料 1.1 细胞 Caco-2细胞株购自美国ATCC（American Type Culture Collection）。 1.2 药品与试剂 DMEM培养基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium，Gibco公司)；胎牛血清(fetal bovine serum， FBS，Equitech-Bio Inc.公司)；非必需氨基酸(non essential amino acids，NEAA，Hyclone公司)；谷氨酰胺(L-glutamine Hyclone公司)；胰蛋白酶(Trypsin，Sigma公司)；HCFU(济南制药厂，纯度＞99.4%)；维拉帕米（verapamil）、MK571（Sigma公司）；荧光黄(lucifer yellow，Sigma公司)；甲醇均为色谱纯；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 1.3 仪器与材料 二氧化碳培养箱(Hearous and Lishen，中国)；CKX31倒置显微镜(Olympus公司，美国)；高效液相色谱仪(600E/Waters公司，美国)；Millicell-ERS跨膜电阻仪(Millipore公司，美国)。Transwell细胞培养板(Corning Costar公司，美国)。 2 方 法 2.1 细胞培养 Caco-2细胞培养于DMEM培养液中，含FBS 10%，非必需氨基酸1%，谷氨酰胺1%，青霉素(100 u·mL-1)和链霉素(100 mg·L-1)双抗液，在37 ℃的5%CO2恒温培养箱中培养。隔天换1次培养液，每5～7 d用胰蛋白酶消化传代。 2.1.1 药物摄取实验细胞的种植 将细胞制备成细胞悬液种植在6孔板中，种植密度为每孔2.0×105细胞，每2 d更换培养液，待生长13~14 d用于实验。 2.1.2 药物转运实验的细胞种植 将Caco-2细胞混悬液种植于Transwell培养板上的Insert（Pole size 3.0 μm，Area 1.12 cm2）中，细胞种植密度为1×105细胞·cm-2，接种后每2 d换液1次，1周后每日换液，单层细胞于19～21 d左右分化形成，用跨膜电阻仪检测跨膜电阻(transepithelial electrical resistance，TEER)，各孔跨膜电阻值均大于600