实验九卵磷脂的提取和鉴定
卵磷脂的提取
卵磷脂的来源
卵磷脂主要来源于蛋黄、大豆、动物 肝脏等天然食材，其中蛋黄是卵磷脂 最丰富的来源之一。
此外，大豆、动物肝脏等也是卵磷脂 的来源，但含量相对较低。
卵磷脂的生理功能
卵磷脂具有降低胆固醇、预防心血管疾病的作用，能够改善血液循环、保护肝脏 、抗疲劳等。
卵磷脂还具有抗氧化、抗衰老的作用，能够提高免疫力、促进神经系统发育和修 复细胞膜结构等。
设备维护
定期对设备进行维护和保养，确保设备的正常运行和使用寿命。
环境保护与废物处理
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减少废物
优化提取工艺，减少废物 的产生。
废物分类
将废物进行分类处理，以 便于后续的回收和再利用 。
废物处理
对于无法回收的废物，应 按照相关规定进行安全处 理，防止对环境造成污染 。
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分离纯化设备
分离纯化设备用于进一步提纯卵磷脂，去除其中的杂质和溶剂。
常见的分离纯化设备有过滤器、蒸馏塔、吸附塔等，可根据卵磷脂的性质和纯度要求选择适合的设备 。
其他辅助设备
• 其他辅助设备包括温度控制设备、压力控制设备、流量计等， 用于控制提取过程中的温度、压力和流量等参数，保证提取过 程的稳定和安全。
。
超临界流体萃取法
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原理
利用超临界流体（如二氧化碳）作为萃取剂，在高压条件下将卵磷脂从 原料中萃取出来，再通过调节压力和温度等方法将卵磷脂与超临界流体 分离。
优点
使用超临界流体作为萃取剂，避免了使用有机溶剂的污染和毒性问题， 且提取效率高。
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缺点
需要使用高压设备，操作复杂，成本较高。
酶法提取
卵磷脂的提取
目 录
鉴定卵磷脂的方法
鉴定卵磷脂的方法
鉴定卵磷脂的方法根据具体目的和应用可以有不同的方法，以下是几种常用的方法：
1. 二维薄层色谱法：将卵磷脂样品在二维薄层色谱上分离出单个成分，并通过化学反应或物理测量对其进行定量和鉴定。
2. 毛细管电泳法：通过毛细管电泳技术将卵磷脂成分分离，并用检测方法对其进行鉴定和定量。
3. 液相色谱法：使用高效液相色谱技术对卵磷脂进行分离和纯化，然后对纯化的卵磷脂进行质量鉴定和定量。
4. 胶体金标记法：使用胶体金或其他金属标记技术对卵磷脂样品进行标记，然后用光学或电化学技术进行检测和鉴定。
5. 质谱法：使用质谱技术对卵磷脂进行鉴定和定量，可以通过质量分析或其他分析手段对卵磷脂进行结构和组成分析。
综上所述，鉴定卵磷脂的方法需要根据具体需求选择，常用的方法包括二维薄层色谱法、毛细管电泳法、液相色谱法、胶体金标记法和质谱法。
[工作]实验五、蛋黄中卵磷脂的提取、纯化与鉴定
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实验五：蛋黄中卵磷脂的提取、纯化与鉴定一、实验目的⏹掌握从鲜鸡蛋中提取卵磷脂的方法与原理。
⏹卵磷脂鉴定的方法与原理。
⏹加深了解磷脂类物质的结构和性质。
二、实验内容磷脂是一类含有磷酸的脂类，机体中主要含有两大类磷脂，由甘油构成的磷脂称为甘油磷脂（phosphoglyceride）；由神经鞘氨醇构成的磷脂，称为鞘磷脂（sphingolipid）。
其结构具有由磷酸相连的取代基团（含氨碱或醇类）构成的亲水头（hydrophilic head）和由脂肪酸链构成的疏水尾（hydrophobic tail）。
在生物膜中磷脂的亲水头位于膜表面，而疏水尾位于膜内侧。
磷脂是重要的两亲物质，它们是生物膜的重要组分、乳化剂和表面活性剂。
磷脂依照氨基醇的不同可分：（1）磷脂酰胆碱（卵磷脂）（PC），分布：植物主要有大豆等，动物主要有脑、精液、肾上腺、红细胞，蛋卵黄（8-10%）。
其主要作用是控制肝脂代谢，防止脂肪肝的形成；（2）、磷脂酰乙醇胺（脑磷脂）（PE），参与血液凝结；（3）、磷脂酰丝氨酸（PS）；（4）、磷脂酰肌醇（PI）；（5）、磷脂酰甘油（PG）；（6）、二磷脂酰甘油（心磷脂）。
蛋黄磷脂属动物胚胎磷脂，含有大量的胆固醇和甘油三酯及许多人体不可缺少的营养物质和微量元素。
卵磷脂是生命的基础物质，人类生命自始至终都离不开它的滋养和保护。
卵磷脂存在于每个细胞之中，更多的是集中在脑及神经系统、血液循环系统、免疫系统以及肝、心、肾等重要器官。
卵磷脂也被誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。
蛋黄卵磷脂可将胆固醇乳化为极细的颗粒，这种微细的乳化胆固醇颗粒可透过血管壁被组织利用，而不会使血浆中的胆固醇增加。
三、实验原理、方法和手段原理一：卵磷脂是生物体组织细胞的重要成分，主要存在于大豆等植物组织以及动物的肝、脑、脾、心、卵等组织中，尤其在蛋黄中含量较多(10%左右)。
卵磷脂和脑磷脂均溶于乙醚而不溶于丙酮，利用此性质可将其与中性脂肪分离开；卵磷脂能溶于乙醇而脑磷脂不溶，利用此性质又可将卵磷脂和脑磷脂分离。
实验3卵磷脂的提取和鉴定
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从组织或细胞中提取卵磷脂。
在提取过程中，卵磷脂会从组织 或细胞中释放出来，并溶解在有
机溶剂中。
通过离心和过滤等操作，去除杂 质和其他磷脂成分，得到纯度较
高的卵磷脂。
卵磷脂的鉴定方法
薄层色谱法
将提取的卵磷脂点样在薄层板上，用 适宜的展开剂展开，然后通过显色反 应（如喷洒硫酸氢钠、高锰酸钾等） 进行鉴定。
了解卵磷脂的生理功能和作用
生理功能
卵磷脂是生物膜的主要成分，具有保 护细胞膜、促进脂质代谢、降低血脂 等作用，对维持人体正常生理功能至 关重要。
作用
卵磷脂在人体内具有重要的生理作用 ，如促进大脑发育、提高记忆力和智 力水平、抗疲劳等，同时还有抗氧化 、抗衰老的作用。
探究不同提取条件对卵磷脂提取效果的影响
步骤6
通过显微镜观察卵磷脂的形态和结构，并使用色谱柱进 行进一步分析。
04 实验结果与分析
卵磷脂提取效果的测定
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卵磷脂含量
通过测定提取液中卵磷脂 的含量，可以评估卵磷脂 的提取效果。
提取率
提取率是卵磷脂实际提取 量与理论提取量的比值， 反映了提取效率。
纯度
通过色谱分析等方法测定 卵磷脂中的杂质含量，以 评估卵磷脂的纯度。
结果分析与讨论
提取效率分析
实验结果显示，使用离心分离技术能 够有效地去除杂质，提高卵磷脂的纯 度。但提取效率较低，可能是由于有 机溶剂用量较大或提取时间较长所致。
鉴定方法比较
红外光谱和质谱分析均能准确鉴定卵 磷脂的主要成分，但质谱分析具有更 高的灵敏度和特异性，能够更准确地 鉴定卵磷脂中的微量成分。
卵磷脂的提取
卵磷脂的提取卵磷脂的提取一、实验原理卵磷脂为两性分子，既具有脂溶性，又具有亲水性，其等电点为6.7。
纯净的卵磷脂为淡黄色，液态，有清淡柔和的风味和香味。
卵磷脂溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂中，也能溶于水中成为胶体状态，但不溶于丙酮，且不同的磷脂在有机溶剂中的溶解度不同，故可用这些有机溶剂来提取分离卵磷脂。
卵磷脂的提取方法有有机溶剂法;无机盐复合沉淀法；乙酸乙酯纯化法；超临界Co2萃取法；色谱法和酶法等。
有机溶剂法：根据蛋黄中各组分在溶剂中的溶解度不同而进行分离的，该方法提取卵磷脂具有分离效率高，生产周期短，易实现自动化等优点，但所得卵磷脂纯度不高。
本实验采取有机溶剂法对卵磷脂进行粗提取，再进一步纯化。
二、试验材料的依据三、操作步骤1、原蛋液处理原料蛋去壳，蛋内容物搅拌、过滤，取培养皿称量原蛋液2g于50~55℃的真空干燥器中烘干，磨成粉末。
2、原料粉浸泡用乙醇和甲醇1：1的混合液浸泡，混合液的用量为原料粉的2倍，浸泡时醇液以高出粉面30~35cm为原则：先将混合醇液倒入烧杯中，然后边搅拌边加入原料粉，持续搅拌到醇浸液为金黄色，用倾泻法（即将沉淀上澄清液沿玻棒小心倾入漏斗,尽可能使沉淀留在杯中。
少量是为防止洗涤后溶液太多,多次是为是清洗的更干净）吸取金黄色醇浸液，沉淀物倒入细纱布中，压出余下的浸泡液，移至前浸液中。
3、蒸馏浓缩甲醇的沸点为66.78℃，乙醇的沸点为78.4℃，故将醇浸液加热至78~80℃时醇变成气体，由分馏柱进入冷凝管;再变成液体而积存于接受瓶中。
当蒸馏出2/3的醇液时，便可升高蒸馏温度达80~85℃，继续蒸馏至烧瓶中残液已呈浊厚油状物，而冷凝管中已不再滴下回收醇液时，即可停止蒸馏，准备进行沉淀净化。
沉淀净化是用丙酮进行。
方法是将平底（或圆底）大烧杯中残余的油状物倒出，加入油状物2倍量的丙酮，以便净化沉淀。
加丙酮时应用玻璃棒搅拌，静置，待其沉淀分层。
将上层浑浊的丙酮洗液倾出，加入同量的丙酮搅拌洗净，放入已干燥、称重且标记了的离心管中，4000r/min离心10min，这样重复两三次。
蛋黄卵磷脂的提取
六、注意事项
提高提取温度有利于提高产率，但是也 不宜过高。 使用丙酮、乙醚，室内应严格避免明火 且有良好的通风条件。
蛋黄卵磷脂的提取
一、实验目的
学习蛋黄卵磷脂的提取方法 学习搅拌器的使用
二、实验原理
卵磷脂是自然界中广泛分布的和所有细胞中存 在的甘油磷脂和神经鞘脂类的统称。 蛋黄的组成是51%水分，14.8%蛋白质； 34.6%的卵磷脂 使用溶剂提取卵磷脂时要注意，蛋黄是一种相 当稳定的乳状液，其中乳化剂是磷脂与蛋白质 结合的脂蛋白复合物。要充分把磷脂提取出 来，所用溶剂必须能破坏这种复合。
三、实验装置
四、试剂与仪器
试剂：氯仿，乙醇，乙醚，氯化钠溶液 （10％），无水硫酸钠，丙酮，鸡蛋 仪器：三口烧瓶，烧杯，分液漏斗，机 械搅拌器，水减压蒸馏装置。
五、实验操作
新鲜鸡蛋一个，煮熟完整取出蛋黄，置于装 有搅拌器、回流冷凝管、温度计的100ml三口 烧瓶中。加入20ml混合溶剂（氯仿：乙醇 =1:3),控制温度为35～40℃，搅拌30min。 抽滤，滤饼在同样条件下再提取一次。滤液 转入分液漏斗，以5ml氯仿淌洗抽滤瓶后一并 倒入分液漏斗，加入40ml10％氯化钠溶液洗 涤，分出氯仿层，用无水硫酸钠干燥。
干燥后氯仿层用水减压蒸馏近干（水浴加热， 温度小于40℃）。加入10ml丙酮，搅拌，冰水 冷却后分离沉淀物。倾去上层丙酮层（尽量倒 净）。用尽可能少的乙醚溶解沉淀，转入烧 杯，另用1ml乙醚淌洗圆底烧瓶后也转入烧 杯。 搅拌下缓缓加入10ml丙酮，冰水冷却后倾去丙 酮层，在真空干燥箱中使固体产物挥发掉残留 溶剂后称量，得到白色或蛋黄色蜡状卵磷脂产 品。
掌握卵磷脂的组成鉴定
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卵磷脂的提取及其组成鉴定
一、实验目的
1. 掌握卵磷脂的提取方法。 2. 掌握卵磷脂的组成鉴定。 3. 掌握蒸馏、抽滤等基本操作。
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二、实验原理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
• 卵磷脂具有乳化分解油脂的作用，可增进血液的循环，清除过氧化物，使血 液中的胆固醇及中性脂肪含量降低，可预防和治疗动脉硬化。同时，卵磷脂 还具有改善记忆，健脑作用，在肝脏保护、心脏健康、婴儿神经发育和糖尿 病治疗等方面也具有积极的作用。 卵磷脂存在于动物的各种组织细胞中，蛋黄中卵磷脂的含量较高，约8%。可 根据它溶于乙醇、二氯甲烷而不溶于丙酮的性质，从蛋黄中分离得到。 卵磷脂可在碱性溶液中加热水解，水解后的产物为甘油、高级脂肪酸、磷酸 和胆碱，可从水解液中检出这些组分。 卵磷脂的结构通式为：
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三、实验步骤
卵磷脂的提取
取熟鸡蛋蛋黄一个，于研钵中研细。将20mL95%乙醇分两次加 入研钵中研磨。减压过滤，布氏漏斗上的滤渣经充分挤压滤干后，移 入研钵中。再加10mL 95%乙醇研磨，减压过滤，滤干后，合并两次 滤液。如浑浊可再过滤一次，将澄清滤液移入圆底烧瓶中。 搭建蒸馏装置，将上述提取液蒸馏除去乙醇，当圆底烧瓶内出现 泡沫时，移去火焰，稍冷后，残余物加入5mL无水乙醇，振摇后继续 蒸馏，当圆底烧瓶内再次出现泡沫时，停止蒸馏，得到黄色油状物。 冷却后，加入5mL二氯甲烷，搅拌使油状物完全溶解。在搅拌下慢慢 加入15mL丙酮，即有卵磷脂析出，搅拌使其析出完全（溶液倒入回 收瓶内）。
四、实验装置
蒸馏装置
卵磷脂组成鉴定
• （1）水解：在上述圆底烧瓶内加入5mL20%NaOH，摇匀后放入沸水浴中加热 10分钟，并用玻璃棒加以搅拌，促使卵磷脂水解。冷却后，在漏斗中用棉花 过滤，滤液供下面鉴定用。 （2）脂肪酸的鉴定：取棉花上沉淀少许，加1滴20%NaOH与5mL蒸馏水，用 玻璃棒搅拌使其溶解。在漏斗中用棉花过滤，得澄清液。以浓HNO3酸化后， 加入10%乙酸铅2滴，观察溶液的变化. （3）甘油的鉴定：取试管一支，加入1mL 1%CuSO4、2滴20%NaOH，振摇， 有Cu(OH)2沉淀生成。加入1mL水解液振摇，观察现象。 （4）胆碱的鉴定：取水解液1mL，滴加浓H2SO4使其酸化（以石蕊试纸检验） ，再加入1滴碘化铋钾溶液，观察现象。 （5）磷酸的鉴定：取试管一支，加10滴水解液，滴加浓H2SO4使其酸化后， 再加5滴5%钼酸铵试剂，20滴氨基萘酚磺酸溶液，振摇后加热，观察颜色的 变化。
卵磷脂的提取
实验流程
卵磷脂的鉴定
• 原理
卵磷脂可在碱性溶液中 加热水解，得到甘油、 脂肪酸、磷酸和胆碱， 可从水解液中检查出 这些组分。
• 1.水解：取干燥试管—>加卵磷脂—> 加5ml20%NaoH—>沸水浴加热10分 钟—>冷却—>抽滤机抽滤—>抽滤纸上 有白色沉淀。 • 2.脂肪酸检测 （1）取滤纸上的沉淀于试管中， ( 2 )加1滴20%NaoH与5ml水用玻棒使 其溶解，
卵磷脂的提取方案——乙醇溶解法
• 提取原理
卵磷脂存在于动物的各种 组织细胞中，蛋黄中含量 较高，约8％。可根据它 溶于乙醇、氯仿而不溶于 丙酮的性质，从蛋黄中分 离得到。
• 实验准备
熟鸡蛋一个 烧杯 玻璃棒 研钵 胶头滴管 蒸发皿 离心管 抽滤机 布氏漏 斗 试管夹 离心机 95% 乙醇 量杯 氯仿溶液 丙 酮溶液 电炉
化 妆 品
卵磷脂不仅提高了食品的质量，延长了货架保鲜期，还增加了食品的营养成 分，并为开发营养保健新产品提供了优质资源。在医药工业中的开发应用， 也是磷脂开发应用的重要方面。
由此我们可以看出，卵磷脂在医疗营养保健品有很大的应用价值，随着使用 的行业或者人群越来越多，将会为卵磷脂带来广阔的市场前景。卵磷脂将会 在21世纪为人体健康做出新的贡献。
卵磷脂的作用
1.人体营养需要
人体所需的外源性胆碱90%是 由卵磷脂提供。卵磷脂提供胆 碱有两大益处：其一，不像游 离胆碱会因肠道中微生物作用 而降解成为甲胺；其次，是在 肝以及其他纤维组织中由脑磷 脂（PE)的连续甲基化获得胆碱， 且这一合成过程需要一定时间， 故当膳食胆碱不足时，体内尚 存卵磷脂（PC）的内源资源即 可补充人体需要。
（3）用抽滤机过滤得到澄清液， （4）用硝酸酸化， （5）用胶头滴管加入2滴10%醋酸观察 清液变浑浊。
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实验九卵磷脂的提取和鉴定
实验目的：熟悉卵磷脂的提取方法和常见的鉴定方法。
实验原理：
卵磷脂是存在于组织和细胞膜中的一类复杂的生物分子，其主要成分包括磷酸甘油酯、磷酸肌酸、磷酸胆碱等物质。
卵磷脂在生物体内扮演着极为重要的生理功能，在维持生物体的正常生理代谢过程中发挥着重要作用。
卵磷脂的提取方法：
材料：鸡蛋黄、乙醇、正己烷、醋酸乙酯。
1.取足够多的鸡蛋黄，用纯净水洗净后晾干备用。
2.将洗净干燥的鸡蛋黄取出，剥去蛋壳并取出蛋黄，用刀将其
压成泥状。
3.将压成泥状的鸡蛋黄放入烧杯中，加入适量的乙醇，不断搅拌，使其混合均匀。
4.待混合好的鸡蛋黄和乙醇彻底混合均匀后，将其倒入滤布中，将滤液与滤涤液分离开来。
5.将滤液中酒精分离鸡蛋黄接着加入等量的正己烷，用250ml
分液漏斗进行振荡后，取出下层酒精分离液。
6.将酒精中的卵磷脂析出，将析出卵磷脂加入等量的醋酸乙酯
中溶解，即可得到卵磷脂。
卵磷脂的鉴定：
1.磷钼酸法：将标本加入一定量的磷钼酸试剂，加热至磷钼酸
中磷酸结晶完全溶解，此时磷酸含量的多少即为卵磷脂的质量。
其原理是卵磷脂中的磷酸和磷钼酸反应，生成黄色的磷钼酸沉淀。
2.碱水解法：将标本与氢氧化钠混合，使卵磷脂水解产生酰基
胆碱。
然后加入硫酸和琼脂，沉淀下来的物质即为卵磷脂。
3.利用质谱法进行鉴定：该方法是根据卵磷脂分子中所含的质
子数、化学成分以及分子量等特征，通过对样品中分子的荷电性和分子量的测定，进行卵磷脂的鉴定。
实验步骤：
1.取少量卵磷脂样品溶于水中。
2.将卵磷脂样品反复洗涤至清洁，然后加入磷钼酸试剂。
3.待磷钼酸在样品中完全溶解后，使用分光光度计测定溶液中
吸收光谱，从而得出样品中卵磷脂的质量。
实验结论：通过卵磷脂的提取方法和鉴定方法，我们可以成功地得到卵磷脂，并确定了样品中卵磷脂的数量和质量。
这为我们进一步研究卵磷脂的生理功能以及用途奠定了基础。