癌胚抗原_CEA_胶体金检测试纸条的研制

3.4 血清样本检测。用胶体金试纸条与 ELISA 试剂同时对
（BIODOT）；自动切条机（上海金标）。
省肿瘤医院提供的 165 份血清样本进行检测。结果：在 ELISA
1.2 主要试剂。CEA 标准品（中国药品生物制品检定所）； 法检测出的 56 例含量大于 5ng/ml 的样本中，胶体金法检测出阳
1.1 仪器。加热磁力搅拌器（RCT B S25 型，IKA 公司）；分
3.3 稳定性。将试纸条于 37℃存放 2 周，用标准品检测，与
析天平（ALC-210.4，赛多利斯）；进口紫外分光光度计（GBC Cin- 4℃条件下试纸条检测结果无明显差异。
tra6，澳大利亚）；台高速冷冻离心机（Biofuge stratos）；点膜仪
4 讨论
适抗体标记量；取一定胶体金用 0.1M K2CO3 溶液调其 pH 为
正常情况下，CEA 经胃肠道代谢，而肿瘤状态时的 CEA 则
8.2；加入 1/10 体积 PB（5mM pH8.2）后加入适量标记抗体，振荡 进入血和淋巴循环，引起血清 CEA 异常增高，使结肠癌、肺癌、
反应 20min；加入 10%BSA，使 BSA 终浓度为 0.5%，振荡反应 乳腺癌、胃癌等肿瘤患者的血清 CEA 均有增高。而肿瘤的诊断
的胃肠管、胰腺和肝脏，出生后组织内含量很低 [1]，正常人 CEA
含量≤5.0ng/ml。在消化道肿瘤患者可检测到 CEA 异常增高，
结直肠癌时 CEA 升高最显著[2]；在乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤
患者的血清中也有升高。目前，国内最常见的检测方法是化学
发光法和 ELISA 法。由于这些方法需要一定的仪器和设备，且
稀释好的免疫金用点膜仪按照 2.3ul/cm 的浓度喷涂在结合垫上， 定 165 份血清样本，两者的总符合率达 99.1％；其最小检出量达
37℃烘干 0.5 小时备用。
5ng ／ ml，表明该试剂具有较高的特异性和敏感性。结果表明，
2.4 样品垫制备。将玻纤膜裁成 2cm×30cm 规格，经处理液 本试剂盒的准确性、精密度等均符合质量控制要求，适用于临床
华
癌胚抗原（CEA）胶体金检测试纸条的研制
章
张东霞，卢 丽，翟 琼
（哈尔滨天地仁医药科技有限公司，黑龙江 哈尔滨 150028）
Magnificent Writing
[摘 要] 目的：研制一种简便、快速、灵敏的检测血清中癌胚抗原（CEA）的试剂。方法：采用胶体金免疫层析法，用 胶体金标记 CEA 单克隆抗体，用另一株 CEA 单克隆抗体包被硝酸纤维素膜，应用双抗体夹心的原理，制成胶体金检测试 纸条。结果：用国家标准品进行检测，该试剂灵敏度达到 5ng/ml；对 165 份临床病人血清进行检测，结果与 ELISA 法相比 总符合率为 99.1％。结论：癌胚抗原（CEA）胶体金检测试纸条简便快速，结果准确，能满足急诊检验的需要，具有临床推 广应用价值。
纸组装在 PVC 板上，以 3mm/条切条。
[4]AFP 及 CEA８２
2.7 试纸条检测。样本加样量 75ul/条，15min 内观察结果。 康医学，2009.21.
作者简介：张东霞，卢 丽，翟 琼，哈尔滨天地仁医药科技有限公司。
2.6 试纸条制备。分别将上述样品垫、结合垫、NC 膜、吸水
Internal Medicine of China，2010，Vol.5，No.3. [2]付敏，付善书．消化系统恶性肿瘤患者血清癌胚抗原和癌抗原～
199 联合检测的临床意义[J].国际检验医学杂志，2006.27. [3]孔宪涛．肿瘤标志物应用进展与评价[J]．实用肿瘤杂志，2002.17.
合检测，不但提高了肝脏癌变的早期诊断率，对于判断原发性肝
2.3 结合垫制备。将玻纤膜裁成 1cm×30cm 规格，经处理液 癌亦具有显著意义，为临床及时制订治疗方案提供指导意义[4]。
（含蔗糖、海藻糖等的 PB 溶液）处理后于 37℃条件下干燥，把已 本文研制的 CEA 胶体金快速检测试纸条，经与 ELISA 法比较测
CEA 两株单克隆抗体（Medix）；兔抗鼠 IgG 多克隆抗体（上海领 性结果为 55 例，符合率为 98.2%；在 ELISA 法检测出的 54 例含
朝）；CEA ELISA 试剂盒（瑞典康乃格）；氯金酸(Sigma）、柠檬酸 量小于 5ng/ml 的正常血清样本中，胶体金法检测出阴性结果为
三钠（北京莱博）等均为分析纯；牛血清白蛋白(BSA（) Sigma）。 54 例，符合率为 100%；总符合率为 99.1%。可见，胶体金法与
1.3 材料。硝酸纤维素膜(NC 膜（) Millipore）；玻璃纤维膜和 ELISA 法检测结果一致。结果见表 1。
PVC 板（上海捷宁）。血清样本由黑龙江省肿瘤医院提供。
2、方法
2.1 胶体金制备。利用加热磁力搅拌器，采用已经过优化的
制备工艺，制备 40nm 胶体金，经紫外检测后进行标记。
2.2 免疫金制备。采用稳定胶体金最小蛋白量实验确定最
二 （含 BSA、Tween-20 等的 PB 溶液）处理后于 37℃条件下干燥备 检测和科研应用。
○ 一
用。
一
2.5 NC 膜包被。用 5mmol/lPB(PH8.2)将包被抗体及兔抗鼠
【参考文献】 [1]高兴华，江萍.血清肿瘤标记物检测在诊断肺癌中的研究现状[J]．
年 第 六 期
IgG 多抗稀释至一定浓度，均按照 1ul/cm 的喷量，用点膜仪包被 与 NC 膜上，作为检测线和质控线，37℃烘干 20min 备用。
[关键词] 癌胚抗原；胶体金；单克隆抗体 [中图分类号] R730 [文献标识码] A [文章编号] 1009-5489（2011）06-0282-01
癌胚抗原（CEA）最初发现于成人结肠癌组织中，是一种具 阳性：C 区、T 区各出现一条红色色带；阴性：仅 C 区出现一条红
有人类胚胎抗原决定族的酸性糖蛋白，胚胎期主要存在于胎儿 色色带；无效：无色带或只在 T 区出现单条色带。见图 1。
20min；12000r/min、4℃条件下离心 30min，吸弃上清；用 0.5% 手段除影像学技术外，血清学检测亦是极为有效的诊断方法，尤
BSA 悬浮，同条件离心 30min，吸弃上清；根据紫外检测后 OD 其是多种肿瘤标志物联检已受到临床重视[3]。如 AFP、CEA 的联
值，用稀释液稀释至适宜的浓度，4℃贮存备用。
3、结果
检测时间长，适合于设备齐全的实验室中大量标本的检测。为
3.1 灵敏度检测。用胶体金试纸条检测 CEA 标准品，其灵
此，我们研制了癌胚抗原胶体金检测试纸条，以方便临床急诊的 敏度达到 5ng/ml。
测定。
3.2 精密性检测。用胶体金试纸条检测 CEA 标准品，精密
1、仪器、试剂和材料
性检测结果的符合率为 100%。