DB34T 817-2008 饲料中己烯雌酚的测定-酶联免疫吸附法.pdf
DB34T 821-2008 动物组织中氯霉素的残留测定 酶联免疫吸附法.pdf
ICSDB34备案号：安徽省质量技术监督局发布前 言本标准由安徽省畜牧兽医局提出。
本标准由安徽省质量技术监督局批准。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。
本标准起草人：许世富、汤春莲、明文庆、张莉。
本标准于2008年8月1日首次发布。
动物组织中氯霉素的残留测定——酶联免疫吸附法1 范围本标准规定了动物肌肉、肝脏、肾脏中氯霉素检验的制样和酶联免疫吸附测定方法。
本标准适用于动物肌肉、肝脏、肾脏中氯霉素的残留快速测定。
本方法在动物肌肉、肝脏、肾脏中的检测限为0.1μg/kg，线性范围：0.0025ng～0.2025ng。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 试样制备动物肌肉、肝脏、肾脏，去筋后切成小块，制成肉糜后，于－18℃以下温度冷冻保存。
4 原理动物组织中残留的氯霉素经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂后用于酶联免疫测定。
本测定方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：吸附在孔内的氯霉素与标准或样品中的氯霉素竞争性地与氯霉素抗体相结合，与标准品或样品相结合的氯霉素抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的第二抗体相结合，酶底物在酶作用下产生发色物，在一定浓度范围内吸光度的高低与样品中氯霉素的含量成反比。
5 试剂和溶液5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。
5.2 竞争酶标免疫法氯霉素试剂盒，2℃～8℃冰箱中保存。
5.2.1 微孔板：包被有氯霉素抗体。
5.2.2 氯霉素标准溶液：浓度范围0.05μg/L～4.05μg/L。
己烯雌酚酶联免疫反应检测试剂盒有效性的测定
己烯雌酚酶联免疫反应检测试剂盒有效性的测定
董艳峰
【期刊名称】《养殖技术顾问》
【年(卷),期】2011(000)008
【摘要】1 材料与方法 1．1 试验材料试剂盒（批号为2149、2150、2151），酶标仪，离心机，超纯水净化器，微量移液器（单道50、100、200微升，多道300微升），己烯雌酚对照品（购自中国兽药监察所）含量为99．5％。
1．2 试验方法 1．2．1 己烯雌酚储备液的制备准确称取己烯雌酚对照品1．005克，置于25毫升棕色容量瓶中，用水溶解并定容至刻度。
【总页数】1页(P225-225)
【作者】董艳峰
【作者单位】哈尔滨市兽药饲料监察所,哈尔滨市150070
【正文语种】中文
【中图分类】S858.31
【相关文献】
1.酶联免疫法测定肉及肉制品中己烯雌酚残留量 [J], 孙俐;高晓敏
2.酶联免疫反应加速仪在酶联免疫反应的实验评价 [J], 陆奎英;包广宇;姚颖;张敏
3.酶联免疫法:水产品中己烯雌酚检测新招 [J], 廖敏;钱莉
4.酶联免疫法检测饲料中己烯雌酚的探讨 [J], 贾涛
5.酶联免疫法测定水产品中己烯雌酚残留量 [J], 张瑞凌;许亦真;刘建萍;李福伟;张
冲
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己烯雌酚
照高效液相色谱法（通则0512）测定。 供试品溶液：取本品适量，精密称定，加乙醇-水（1:1）溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.1mg的溶液。 对照品溶液：取己烯雌酚对照品适量，精密称定，加乙醇-水（1:1）溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.1mg 的溶液。 系统适用性溶液、色谱条件与系统适用性要求：见有关物质项下。 测定法：精密量取供试品溶液与对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以己烯雌酚顺式 体峰面积的1.26倍与己烯雌酚反式体峰面积的和计算。
1、取本品约10mg，加硫酸1mL溶解后，溶液显橙黄色（己烷雌酚为淡黄色），加水10mL稀释后，橙黄色即消 失。
2、在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液两主峰的保留时间应与对照品溶液相应两主峰的保留时间一 致。
3、本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集28图）一致。
酸碱度 取本品0.10g，加70%乙醇5.0mL溶解后，溶液遇石蕊试纸应显中性反应。 有关物质 照高效液相色谱法（通则0512）测定。 供试品溶液：取本品适量，加乙醇-水（1:1）溶解并稀释制成每1mL中约含0.5mg的溶液。 对照溶液：精密量取供试品溶液1mL，置50mL量瓶中，用乙醇水（1:1）稀释至刻度，摇匀。 系统适用性溶液：取己烯雌酚对照品约10mg，加三氯甲烷50mL使溶解，在暗处放置不少于5小时，量取5.0mL， 挥干三氯甲烷，残渣（己烯雌酚的顺式体和反式体）加乙醇-水（1:1）25mL使溶解。 色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水（80:20）为流动相，检测波长为254nm，进样体积 10µL。 系统适用性要求：系统适用性溶液色谱图中，出峰顺序依次为己烯雌酚反式体峰与已烯雌酚顺式体峰，理论 板数按己烯雌酚反式体峰计算应不低于1000，己烯雌酚反式体峰与顺式体峰之间的分离度应大于5.0。
畜禽肉中己烯雌酚的测定
畜禽肉中己烯雌酚的测定食品安全检验手册129页1. 原理试样匀浆后，经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。
于波长230nm处测定吸光度，同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，试样与工作曲线比较定量。
2. 试剂(1) 甲醇(2) 0.01mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO4.2H2O）取1 g 磷酸二氢钠溶于水成 500mL。
(3) 磷酸(4) 己烯雌酚（DES）标准溶液：精密称取100mg 己烯雌酚（DES）溶于甲醇，移入100mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES 1.0 mg，贮于冰箱中。
(5) 己烯雌酚（DES）标准使用液：吸取10.00 mL DES贮备液，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES 100μg。
3. 仪器(1) 高效液相色谱仪：具紫外检测器。
(2) 小型绞肉机。
(3) 小型粉碎机。
(4) 离心机4. 分析步骤(1) 提取及净化称取5 g （±0.1g）绞碎（小于5mm）肉试样，放入50mL具塞离心管中，加10.0mL甲醇，充分搅拌，振荡20min，于3000r/min离心10min，将上清液移出，残渣中再加10.0mL甲醇，混匀后振荡20min，于3000r/min离心10min，合并上清液，此时若出现混浊，需再离心10min，取上清液过0.5μmFH滤膜，备用。
(2)色谱条件①色谱柱：Grace Smart C18（5µm）4.6mm × 250mm。
② 流动相：甲醇+0.01mol/L磷酸二氢钠（70+30），用磷酸调pH = 5（其中NaH2PO4.2H2O 水溶液需0.45μm滤膜）。
③流速：1mL/min。
④进样量：20μL。
⑤柱温：室温⑥紫外检测器：检测波长230nm。
(3) 标准曲线绘制 称取5份（每份5.0g）绞碎的肉试样，放入50mL具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液（6.0，12.0，18.0，24.0μg/mL）各1.0mL，同时做空白。
酶联免疫法检测饲料中己烯雌酚的探讨
酶联免疫法检测饲料中己烯雌酚的探讨
贾涛
【期刊名称】《饲料广角》
【年(卷),期】2010(000)005
【摘要】己烯雌酚酶联免疫反应测试盒是用于饲料中己烯和其他相关的类固醇残留物如二氢己烯雌(hexestrol)的定量检测.在家禽或鱼类中过量残留会对消费者造成危害,为此己烯雌酚已经被禁止在食品生产中使用.肉类食品中的过量残留,主要是由于被饲喂动物的饲料中含有高含量的己烯雌酚,动物缓慢蓄集所致,所以要想对食品中己烯雌酚得到有效控制,对饲料中的己烯雌酚进行监测至关重要.经实验,酶联免疫法具有操作简单、灵敏度高、时间短、检测成本低廉等优点,检测平均回收率
≥98.3%,相关系数(r值)≥0.9992,离散系数(CV值)≤3.4%.
【总页数】4页(P38-40,43)
【作者】贾涛
【作者单位】京市饲料监察所
【正文语种】中文
【相关文献】
1.酶联免疫法:水产品中己烯雌酚检测新招 [J], 廖敏;钱莉
2.酶联免疫法：水产品中己烯雌酚检测新招 [J], 廖敏;钱莉
3.一种新的酶联免疫法检测水产品中的己烯雌酚 [J], 马亚洲;谢海平;钱莉;陈成桐;马伟成;郭素卿
4.酶联免疫法检测中华鳖肌肉中己烯雌酚 [J], 胡鲲;杨先乐;张菊
5.酶联免疫法检测饲料中氯霉素的探讨(续) [J], 贾涛
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已烯雌酚在动物食品中残留检测方法简述
已烯雌酚在动物食品中残留检测方法简述
沈川;吕晓东
【期刊名称】《中国兽药杂志》
【年(卷),期】2000(034)006
【摘要】已烯雌酚为一种具有酚羟基结构的人工合成雌激素，欧美等许多国家禁止将其用于动物饲料中，因此已烯雌酚在动物性食品中的残留普遍受到各国的高度重视。
本文就已烯雌酚在动物性食品中的残留检测方法作了综述，着重介绍了放射免疫法，气相色谱法以及液相色法等检测方法。
【总页数】3页(P47-49)
【作者】沈川;吕晓东
【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京;中国农业出版社,北京
【正文语种】中文
【中图分类】S859.84
【相关文献】
1.食品中残留已烯雌酚人工抗原的制备、分析与鉴定 [J], 彭池方;胥传来;金征宇
2.米非司配伍卡孕栓与利凡诺配伍已烯雌酚中孕引产120例比较分析 [J], 肖冬连;李艳春
3.高效液相色谱法检测鲈鱼中已烯雌酚含量 [J], 张振霖
4.鸡肉中已烯雌酚含量调查与分析 [J], 陈杏琴;任永红;刘俊荣;王占表;张伯兰;孙改儒
5.生鲜肉品中已烯雌酚残留的检测方法比较研究 [J], 陈眷华;徐在品;王文博;毛以智;卢占军
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饲料中乙烯雌酚含量的检测方法研究
检测认证饲料中乙烯雌酚含量的检测方法研究■ 李 东 单晓丽 周 峰（安丘市检验检测中心有限公司）摘 要：本研究旨在开发一种高效、经济的方法，利用高效能液相层析仪（HPLC）配合光二极管侦测器（PDA），对饲料中乙烯雌酚含量进行分析。
为了避免在低浓度情况下的误判，同时采用高效液相层析质谱仪（HPLC/MS）进行了再确认。
在实验中，饲料样品以甲醇为萃取液，经过振荡、离心、浓缩上清液，残渣用70%甲醇溶解，通过Oasis®HLB卡匣去除干扰物质，最后用甲醇进行冲提，冲提液经高效液相层析仪检测。
实验结果表明，对于饲料添加0.5、1、3、5 ppm的情况，回收率在80.8%到107.5%。
仅采用光二极管侦测器检测时，最低检测限为0.03 ppm；而采用质谱侦测器检测时，最低检测限可达0.005 ppm。
研究结果表明，所开发的高效液相层析仪饲料中乙烯雌酚检测方法具有便捷、经济、可行的特点，可作为饲料中乙烯雌酚检验的一种有效方法。
关键词：乙烯雌酚，高效能液相层析仪（HPLC），光二极管侦测器（PDA），饲料分析，液相层析质谱仪（LC/MS）DOI编码：10.3969/j.issn.1002-5944.2024.10.034Study on the Detection Method of Diethylstilbestrol Content in FeedLI Dong SHAN Xiao-li ZHOU Feng（Anqiu Inspection and Testing Center Co., Ltd.）Abstract:This study aims to develop an effi cient and economical method to analyze the content of diethylstilbestrol in feed using high-performance liquid chromatography (HPLC) and photodiode detector (PDA). In order to avoid misjudgment at low concentrations, high-performance liquid chromatography mass spectrometry (HPLC/MS) was also used for re-confirmation. In the experiment, the feed samples were extracted with methanol. After shaking, centrifugation, and concentration of the supernatant, the residue was dissolved in 70% methanol, and interfering substances were removed through the Oasis®HLB cassette. Finally, it was rinsed with methanol, and detected with high performance liquid chromatography. Experimental results show that when 0.5 ppm, 1 ppm, 3 ppm, and 5 ppm are added to feed, the recovery rate is between 80.8% and 107.5%. When using only a photodiode detector, the minimum detection limit is 0.03 ppm; when using a mass spectrometer detector, the minimum detection limit can reach 0.005 ppm. The research results show that the developed high-performance liquid chromatography method for detecting diethylstilbestrol in feed is convenient, economical, and feasible, and can be used as an effective method for detecting diethylstilbestrol in feed.Keywords: diethylstilbestrol, high performance liquid chromatography (HPLC), photodiode detector (PDA), feed analysis, liquid chromatography mass spectrometer (LC/MS)0 引 言乙烯雌酚是由英国内科医师查尔斯多兹（CharlesDodds等）于1938年开发的一种合成雌激素。
己烯雌酚.pdf
辣根过氧化物酶反应的化学动力学分析陈海明 李通化3 陈 开(同济大学化学系,上海200092)摘 要 用辣根过氧化物酶来处理废水中的苯酚和氯酚为许多人所关注。
采用停流快速混合技术,利用快速扫描紫外可见分光光度计得到辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化苯酚聚合过程的瞬态光谱数据。
对此测量数据矩阵用正交投影及遗传算法解析后,确定体系中产生紫外吸收的物种数,及辣根过氧化物酶中间体形式的纯光谱信息,进而解出反应过程中各组分的动力学曲线。
关键词 辣根过氧化物酶,中间体化合物,化学计量学,正交投影 2001207212收稿;2001212230接受本文系国家自然科学基金资助项目(N o.29975019)1 引 言从60年代至今,与辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase ,HRP )有关的分析方法的理论和应用研究一直是最活跃的分析化学研究方向之一。
HRP 被广泛应用于环境化学、临床化学等多个领域。
自从80年代初K libanov 1等人首次将HRP 用于处理废水中酚类和芳香胺类化合物以来,已有很多人在此方面做了大量的研究工作,并证实用HRP 处理工业废水中的酚类污染物具有高效、反应条件温和等独特优点,是一种很有潜力的水处理方法。
这一新兴的酶处理技术受到越来越多人的关注2,3。
我们采用停流快速混合技术,利用快速扫描紫外可见分光光度计分别得到HRP 催化过氧化氢氧化苯酚聚合过程以及HRP 与过氧化氢以不同浓度比反应生成不同的HRP 中间体实验的瞬态光谱数据。
对所得测量数据矩阵用正交投影(OP )4及遗传算法(GA )5解析后,最终得到HRP 中间体形式的光谱信息及反应过程中各组分的动力学曲线。
2 理论部分在反应过程中,每隔一段时间对紫外2可见光谱区域内的m 个波长进行检测,则可得测量数据矩阵Y,Y 可表示为:Y mn =s 1c 1+s 2c 2+…s k c k =S mk C kn (1)式中S 是纯物质的吸收光谱矩阵,C 是动力学矩阵,k 是组分数,n 是检测次数。
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ICS
DB34备案号：
安徽省质量技术监督局发布
前 言
本标准由安徽省畜牧兽医局提出。
本标准由安徽省质量技术监督局批准。
本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所、安徽省畜产品质量安全检测中心。
本标准起草人：许世富、汤春莲、刘发全、钱志平。
本标准于2008年8月1日首次发布。
饲料中己烯雌酚的测定
——酶联免疫吸附法
1 范围
本标准规定了饲料中己烯雌酚检验的制样和酶联免疫吸附测定方法。
本标准适用于饲料中己烯雌酚的含量快速测定。
本方法在配合饲料中的检测限为10μg/kg，在预混/浓缩饲料中的检测限为20μg/kg，线性范围：0.005ng～0.405ng。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1 饲料 采样
3 试样制备
配合料、浓缩料、预混料等饲料产品，按GB/T14699.1规定，选取有代表性样品200 g～500g，用四分法缩至100g，粉碎通过0.45mm孔径筛，充分混匀，贮于磨口瓶中备用。
4 原理
饲料中己烯雌酚经乙腈提取，氮气吹干，用氯仿溶解后用于酶联免疫测定。
测定方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：吸附在孔内的己烯雌酚与标准或样品中的己烯雌酚竞争性地与己烯雌酚抗体相结合，与标准品或样品相结合的己烯雌酚抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的第二抗体相结合，酶底物在酶作用下产生发色物，在一定浓度范围内吸光度的高低与样品中己烯雌酚的含量成反比。
5 试剂和溶液
5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。
5.2 竞争酶标免疫法己烯雌酚试剂盒，2℃～8℃冰箱中保存。
5.2.1 微孔板：包被有己烯雌酚抗体。
5.2.2 己烯雌酚标准溶液：浓度范围0.01μg/L～8.1μg/L。
5.2.3 酶标记物。
5.2.4 己烯雌酚抗体浓缩液。
5.2.5 底物A。
5.2.6 底物B。
5.2.7 终止液。
5.2.8 浓缩洗涤液。
5.2.9 浓缩复溶液。
5.3 洗涤液：用水20倍稀释厂商提供的浓缩洗涤液。
5.4 复溶液：用水2倍稀释厂商提供的浓缩复溶液。
5.5 乙腈。
5.6 氯仿。
5.7 氢氧化钠。
5.8 磷酸。
5.9 氢氧化钠溶液（1.0mol/L）：称取4.0g 氢氧化钠加水溶解后稀释到100mL。
5.10 磷酸溶液：量取磷酸100mL 加水150mL，混匀。
6 仪器设备
6.1 酶标仪（带450nm 滤光片）。
6.2 振荡器。
6.3 冷冻离心机。
6.4 样品粉碎机。
6.5 氮吹仪。
6.6 分析天平：感量0.01g。
6.7
微量加样器及配套吸头：（单道20μL，50μL，100μL。
多道50μL～300μL）。
7 测定步骤
7.1 样品处理
7.1.1 称取2±0.1g 粉碎后的饲料样品，加8mL 乙腈，振摇10min，4℃条件下3000g 离心5min。
取2mL 上清液，60℃氮气吹干。
加0.5mL 氯仿，涡动20s，加2mL 氢氧化钠溶液（5.9），涡动30s，4℃条件下3000g 离心5min。
取1mL 上清液，加入100μL 磷酸溶液（5.10），涡动5s。
7.1.2 按如下方法稀释进行检测：配合料：取50μL，加入950μL 稀释后的复溶液，涡动混匀，取50μL 进行检测，总稀释倍数为100倍；浓缩、预混料：取25μL，加入975μL 稀释后的复溶液，涡动混匀，取50mL 进行检测，总稀释倍数为200倍。
7.2 测试程序
7.2.1 测定在室温20℃～25℃条件下操作，测定之前将试剂盒以及所有试剂在室温（20℃～25℃）下放置1h～2h。
7.2.2 将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。
7.2.3 分别在各孔中加50µL 的标准品溶液或样品溶液，再加50µL 抗体，轻轻晃动反应板，37℃反应30min。
7.2.4 倾出微孔中的液体，在所有微孔中加洗涤液250µL，轻轻晃动反应板，倾出微孔中的洗涤液，在吸水纸上拍打，彻底清除微孔中的残留液和气泡，重复洗板4遍。
7.2.5 每孔加100µL 酶标记物，37℃反应30min。
7.2.6 倾出微孔中的液体，加250µL 洗涤液，轻轻晃动反应板，倾出微孔中的洗涤液，在吸水纸上拍打，彻底清除微孔中的残留液和气泡，重复洗板4遍。
7.2.7 每孔加50µL 底物A，再加50µL 底物B，轻轻晃动反应板，37℃避光反应15min。
7.2.8 每孔加50µL 终止液，轻轻晃动反应板，30min 内在450nm 下检测吸光度。
8 结果判定和表述
按下式计算百分吸光度值：
百分吸光度值=
B B
×100％ (1)
式中：
B ——为标准溶液或供试样品的平均吸光度值；
Bo——为零标准的标准溶液平均吸光度值。
用专业计算机软件求出供试样品中己烯雌酚的浓度，乘以稀释系数即得检测结果。
或计算出的标准相对吸光度值绘成为一个对应浓度（ng/L）的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在100ng/L～8100ng/L 范围内应当成为线性。
相对应每一个样品的浓度（ng/L）可以从校正曲线上读出。
9 检测方法灵敏度、准确度、精密度
9.1 灵敏度
本方法在配合饲料中的检测限为10μg/kg，在预混、浓缩饲料中的检测限为20μg/kg。
9.2 准确度
本方法在配合饲料中20μg/kg（预混、浓缩饲料中40μg/kg）添加浓度水平上的回收率为80％～120％。
9.3 精密度
本方法的批内变异系数CV％≤10％，批间变异系数CV％≤15％。
10 其他
10.1 配合饲料稀释系数为100，浓缩料/预混料稀释系数为200。
10.2 本方法为快速测定法，检测结果配合饲料检测结果小于10μg/kg时可判为未检出，大于10μg/kg 时需用液相色谱法（HPLC）确认，预混/浓缩饲料检测结果小于20μg/kg时可判为未检出，大于20μg/kg 时需用液相色谱法（HPLC）确认。
10.3 B0吸光值应该不低于0.8。
10.4 试剂盒可能存在交叉反应，不同品牌的试剂盒，其操作步骤可能略有差别，具体操作步骤可根据试剂盒使用说明书略作调整。